鈣0. lg，PH7. 0-7. 2)中接種5重量份 的沙福芽孢桿菌（CCTCCAB205598)，37°C培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計(jì) 數(shù)法進(jìn)行觀察，直至沙福芽孢桿菌的活菌數(shù)為2 X IO7個(gè)/克的培養(yǎng)基。
[0028] (4)將步驟（1)至（3)中分別得到的枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis)、、解淀粉 芽抱桿菌（Bacillus amyloliquefaciens)、沙福芽抱桿菌（Bacillus safensis)按照比例 進(jìn)行混合，使得到的微生物菌劑中，枯草芽孢桿菌（Baci I lus subti I is )的活菌數(shù)為總活菌 數(shù)的20%、解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的40%、 沙福芽孢桿菌（Bacillus safensis)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的40%，得到微生物菌劑Al。
[0029] 實(shí)施例2
[0030] (1)在100重量份的培養(yǎng)基(葡萄糖5g，豆柏30g，蛋白胨2g，蒸餾水1000ml， PH7. 0-7. 2)中接種4重量份的枯草芽孢桿菌（ACCCOl266)，37°C培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中進(jìn)行取 樣并通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行觀察，直至枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)為8 X IO7個(gè)/克的培養(yǎng) 基。
[0031] (2)在100重量份的培養(yǎng)基(豆餅粉50g，蔗糖20g，硫酸銨5g，檸檬酸三鈉2. 5g，磷 酸二氫鉀0. 3g，硫酸鎂0. 5g，硫酸亞鐵0. 05g，PH7. 0-7. 2)中接種3重量份的解淀粉芽孢桿 菌(ACCC1855)，37°C培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行觀察，直至 解淀粉芽孢桿菌的活菌數(shù)為8 X IO7個(gè)/克的培養(yǎng)基。
[0032] (3)在100重量份的培養(yǎng)基(葡萄糖15g，淀粉lg，豆餅粉25g，硫酸錳lg，磷酸二氫 鉀I. 5g，硫酸鎂0. 5g，酵母膏0. 2g，氯化鐵0. lg，碳酸鈣0. lg，PH7. 0-7. 2)中接種4重量份 的沙福芽孢桿菌（CCTCCAB205598)，37°C培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計(jì) 數(shù)法進(jìn)行觀察，直至沙福芽孢桿菌的活菌數(shù)為8 X IO7個(gè)/克的培養(yǎng)基。
[0033] (4)將步驟（1)至（3)中分別得到的枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis)、、解淀粉 芽抱桿菌（Bacillus amyloliquefaciens)、沙福芽抱桿菌（Bacillus safensis)按照比例 進(jìn)行混合，使得到的微生物菌劑中，枯草芽孢桿菌（Baci I lus subti I is )的活菌數(shù)為總活菌 數(shù)的35%、解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的35%、 沙福芽孢桿菌（Bacillus safensis)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的30%，得到微生物菌劑A2。
[0034] 實(shí)施例3
[0035] (1)在100重量份的培養(yǎng)基(葡萄糖5g，豆柏30g，蛋白胨2g，蒸餾水1000ml， PH7. 0-7. 2)中接種3重量份的枯草芽孢桿菌（ACCCOl266)，37°C培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中進(jìn)行取 樣并通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行觀察，直至枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)為5 X IO7個(gè)/克的培養(yǎng) 基。
[0036] (2)在100重量份的培養(yǎng)基(豆餅粉50g，蔗糖20g，硫酸銨5g，檸檬酸三鈉2. 5g，磷 酸二氫鉀0. 3g，硫酸鎂0. 5g，硫酸亞鐵0. 05g，PH7. 0-7. 2)中接種2重量份的解淀粉芽孢桿 菌(ACCC1855)，37°C培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行觀察，直至 解淀粉芽孢桿菌的活菌數(shù)為5 X IO7個(gè)/克的培養(yǎng)基。
[0037] (3)在100重量份的培養(yǎng)基(葡萄糖15g，淀粉lg，豆餅粉25g，硫酸錳lg，磷酸二氫 鉀I. 5g，硫酸鎂0. 5g，酵母膏0. 2g，氯化鐵0. lg，碳酸鈣0. lg，PH7. 0-7. 2)中接種2重量份 的沙福芽孢桿菌（CCTCCAB205598)，37°C培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計(jì) 數(shù)法進(jìn)行觀察，直至沙福芽孢桿菌的活菌數(shù)為5 X IO7個(gè)/克的培養(yǎng)基。
[0038] (4)將步驟（1)至（3)中分別得到的枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis)、、解淀粉 芽抱桿菌（Bacillus amyloliquefaciens)、沙福芽抱桿菌（Bacillus safensis)按照比例 進(jìn)行混合，使得到的微生物菌劑中，枯草芽孢桿菌（Baci I lus subti I is )的活菌數(shù)為總活菌 數(shù)的40%、解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的30%、 沙福芽孢桿菌（Bacillus safensis)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的30%，得到微生物菌劑A3。
[0039] 實(shí)施例4
[0040] 根據(jù)與實(shí)施例3相同的方法制備微生物菌劑A4,不同在于，將步驟（1)至 (4)中分別得到的枯草芽孢桿菌（Baci Ilus subtil is)、、解淀粉芽孢桿菌（Baci Ilus amy 1 〇 I i quef ac i ens )、沙福芽孢桿菌（Bac i 11us saf ens i s )按照比例進(jìn)行混合，使得到的微 生物菌劑中，枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的50%、解淀粉芽孢 桿菌（Bacillus amyloliquefaciens)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的25%、沙福芽孢桿菌（Bacillus safensis)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的25%，得到微生物菌劑A4。
[0041] 實(shí)施例5-8
[0042] 分別使用實(shí)施例1-4中制得的微生物菌劑A1-A4進(jìn)行蔬菜育苗，具體步驟如下： (1)試驗(yàn)材料①試驗(yàn)作物西瓜、黃瓜、番茄、萬壽菊②試驗(yàn)微生物營養(yǎng)基制備：分別把微生物 菌劑A1-A4按照配方比例拌入營養(yǎng)基原料中混勻，然后填入營養(yǎng)基液壓設(shè)備中，壓制成一 體化育苗營養(yǎng)基。（2)試驗(yàn)處理。試驗(yàn)設(shè)5個(gè)處理(包括1個(gè)對照)，每個(gè)處理3次重復(fù)，每 個(gè)重復(fù)50株。調(diào)查項(xiàng)目：苗期(壯苗指數(shù)、出苗率、發(fā)病率)，定植后（開花期、產(chǎn)量、品質(zhì)、發(fā) 病率）（3)試驗(yàn)方法。把制備好的微生物營養(yǎng)基隨機(jī)區(qū)組排列，擺放到苗床內(nèi)，澆水膨脹，把 催芽種子播入營養(yǎng)基中，蓋上覆蓋土。（4)結(jié)果分析。結(jié)果如下表1所示。
[0043] 對比例1
[0044] 根據(jù)與實(shí)施例5-8相同的方法進(jìn)行蔬菜育苗，不同在于在育苗過程中沒有使用微 生物菌劑，結(jié)果如下表1所示。
[0045] 表1西瓜各項(xiàng)指標(biāo)統(tǒng)計(jì)分析
[0046]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種微生物菌劑，該微生物菌劑包括培養(yǎng)基和菌體，其特征在于，所述菌體包括枯草 芽抱桿菌（Bacillus subtilis)、解淀粉芽抱桿菌（Bacillus amyloliquefaciens)和沙福 芽抱桿菌（Bacillus safensis)〇
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物菌劑，其中，每克所述微生物菌劑所含的總活菌數(shù)為 2-10X107 個(gè)。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的微生物菌劑，其中，以所述微生物菌劑中的總活菌數(shù)為基 準(zhǔn)，枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-50%、解淀粉芽孢桿菌 (Bacillus amyloliquefaciens)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-50%、沙福芽孢桿菌（Bacillus safensis)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-50%。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的微生物菌劑，其中，以所述微生物菌劑中的總活菌數(shù)為基 準(zhǔn)，枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的40-50%、解淀粉芽孢桿菌 (Bacillus amyloliquefaciens)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的15-35%、沙福芽孢桿菌（Bacillus safensis)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的15-35%。
5. 權(quán)利要求1所述的微生物菌劑的制備方法，其特征在于，該方法包括：將枯草芽孢桿 菌（Bacillus subtilis)、解淀粉芽抱桿菌（Bacillus amyloliquefaciens)和沙福芽抱桿 菌（Bacillus safensis)接種于培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其中，所述接種于培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)的方法包括： 在各自獨(dú)立的培養(yǎng)體系中分別培養(yǎng)枯草芽孢桿菌（BaciIlus subtiIis)、解淀粉芽孢桿菌 (Bacillus amyloliquefaciens)和沙福芽抱桿菌（Bacillus safensis)，并將分別培養(yǎng)得 到的微生物按照比例混合。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其中，通過在各自獨(dú)立的培養(yǎng)體系中的培養(yǎng)及 培養(yǎng)后的混合，使得到的每克微生物菌劑的總活菌數(shù)為2-10X IO7個(gè)，其中，枯草芽孢桿 菌（Bacillus subtilis)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-50 %、解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-50%、沙福芽孢桿菌（Bacillus safensis) 的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-50%。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其中，以所述微生物菌劑中的總活菌數(shù)為基準(zhǔn)， 枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的40-50%、解淀粉芽孢桿菌 (Bacillus amyloliquefaciens)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的15-35%、沙福芽孢桿菌（Bacillus safensis)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的15-35%。
9. 權(quán)利要求1-4中的任意一項(xiàng)所述的微生物菌劑在蔬菜育苗中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種微生物菌劑，該微生物菌劑包括培養(yǎng)基和菌體，其中，所述菌體包括枯草芽孢桿菌（Bacillus？subtilis）、解淀粉芽孢桿菌（Bacillus？amyloliquefaciens）和沙福芽孢桿菌（Bacillus？safensis）。本發(fā)明提供的微生物菌劑能夠獲得良好的植株壯苗指數(shù)，從而能夠提高蔬菜的產(chǎn)量和品質(zhì)，在蔬菜育苗領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。此外，由于使用本發(fā)明提供的微生物菌劑能夠改善植株根際微生物環(huán)境，有益菌增多從而抑制有害菌的生長，從而還能夠提高植株的抗病性。
【IPC分類】A01P3-00, A01N63-00, C12N1-20, C12R1-125, C12R1-07
【公開號(hào)】CN104560769
【申請?zhí)枴緾N201310516573
【發(fā)明人】高紅春, 朱昌雄, 顧金剛, 周艷麗
【申請人】北京中農(nóng)賽世農(nóng)業(yè)科技有限公司
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2013年10月28日