微生物菌劑及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種微生物菌劑及其制備方法和應(yīng)用；更確切地說，涉及一種微生物 菌劑及其制備方法，還涉及所述生物菌劑在蔬菜育苗中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著世界農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，農(nóng)業(yè)種植結(jié)構(gòu)也經(jīng)歷著相應(yīng)的調(diào)整，由傳統(tǒng)農(nóng)業(yè)逐漸 向現(xiàn)代化農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)變，蔬菜的種植面積也逐年增加，而育苗則是蔬菜栽培中的一項非常重要 的技術(shù)環(huán)節(jié)，蔬菜育苗不但能使蔬菜提早上市，還能夠提高蔬菜產(chǎn)量和改進(jìn)品質(zhì)。
[0003] 目前蔬菜育苗存在的問題是蔬菜育苗土傳病害嚴(yán)重，有害菌大量繁殖，嚴(yán)重影響 蔬菜育苗成活率；同時現(xiàn)代農(nóng)業(yè)設(shè)施栽培導(dǎo)致蔬菜連作障害越來越嚴(yán)重，而且土壤易板結(jié)， 透氣性差，土壤墑情差，從而影響蔬菜產(chǎn)量、品質(zhì)；因此，迫切需要開發(fā)出能夠提高植株壯苗 指數(shù)的育苗相關(guān)技術(shù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于克服目前蔬菜育苗過程中存在的植株壯苗指數(shù)低的問題，提供 一種能夠提高植株壯苗指數(shù)的微生物菌劑及其制備方法和應(yīng)用。
[0005] 為了實(shí)現(xiàn)第一個發(fā)明目的，本發(fā)明提供了一種微生物菌劑，該微生物菌劑包括培 養(yǎng)基和菌體，其中，所述菌體包括枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis)、解淀粉芽孢桿菌 (Bacillus amyloliquefaciens)和沙福芽抱桿菌（Bacillus safensis)〇
[0006] 為了實(shí)現(xiàn)第二個發(fā)明目的，本發(fā)明還提供了一種微生物菌劑的制備方法，其 中，該方法包括：該方法包括：將枯草芽孢桿菌（Baci Ilus subtil is)、解淀粉芽孢桿菌 (Bacillus amyloliquefaciens)和沙福芽抱桿菌（Bacillus safensis)接種于培養(yǎng)基中進(jìn) 行培養(yǎng)。
[0007] 本發(fā)明還提供了所述的微生物菌劑在所述的微生物菌劑在蔬菜育苗中的應(yīng)用。
[0008] 本發(fā)明提供的的微生物菌劑能夠提高蔬菜育苗成活率，例如，實(shí)施例5-8中檢 測的結(jié)果可以看出，雖然苗期出苗率各處理與對照沒有明顯差異；但壯苗指數(shù)A3最高為 0. 325,對照最差為0. 077,各處理與對照之間達(dá)差異極顯著水平，各處理間A2、A3、A4與Al 達(dá)顯著水平，A2、A3、A4之間沒有差異；發(fā)病率對照最高達(dá)5%，各處理沒有發(fā)??；西瓜幼苗定 植到大田后，開花期最早是A2,為8月1日，其次是A1、A2,最晚是對照，為8月10日，說明 使用微生物菌劑育苗能夠提高開花結(jié)果；總產(chǎn)量A3最高為1441公斤，最低為對照，1092公 斤，各處理與對照達(dá)顯著水平，處理間沒有差異；西瓜品質(zhì)來看，糖度最高為A3和A4,最低 為對照；西瓜后期發(fā)病率最高為對照，達(dá)13. 33%，最低為A3和A4,發(fā)病主要病害為枯萎??； 從以上綜合可以看出，使用本發(fā)明微生物菌劑能夠獲得良好的植株壯苗指數(shù)，從而使最終 的產(chǎn)量和品質(zhì)等方面都明顯優(yōu)于對照，在蔬菜育苗領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。此外，由于使 用本發(fā)明提供的微生物菌劑能夠改善植株根際微生物環(huán)境，有益菌增多從而抑制有害菌的 生長，從而還能夠提高植株的抗病性。
【具體實(shí)施方式】
[0009] 本發(fā)明提供了一種微生物菌劑，該微生物菌劑包括培養(yǎng)基和菌體，其中， 所述菌體包括枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis)、解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens)和沙福芽抱桿菌（Bacillus safensis)。
[0010] 所述微生物菌劑中含有的菌體的量可以在很大范圍內(nèi)改變，優(yōu)選情況下，每克所 述微生物菌劑所含的總活菌數(shù)可以為2-10X IO7個。
[0011] 優(yōu)選地，所述微生物菌劑中，以所述微生物菌劑中的總活菌數(shù)為基準(zhǔn)，枯草芽孢桿 菌（Bacillus subtilis)的活菌數(shù)可以為總活菌數(shù)的10-50%、解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens)的活菌數(shù)可以為總活菌數(shù)的10-50%、沙福芽孢桿菌（Bacillus safensis)的活菌數(shù)可以為總活菌數(shù)的10-50%。
[0012] 更優(yōu)選地，以所述微生物菌劑中的總活菌數(shù)為基準(zhǔn)，枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis)的活菌數(shù)可以為總活菌數(shù)的40-50 %、解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens)的活菌數(shù)可以為總活菌數(shù)的15-35%、沙福芽孢桿菌（Bacillus safensis)的活菌數(shù)可以為總活菌數(shù)的15-35%。
[0013] 根據(jù)本發(fā)明，所述培養(yǎng)基的種類可以在很大范圍內(nèi)改變，可以為各種能夠用于培 養(yǎng)枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、沙福芽孢桿菌的培養(yǎng)基，例如，可以為 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、肉湯培養(yǎng)基、LB培養(yǎng)基等常用培養(yǎng)基作為種子培養(yǎng)基，用于菌種的 保存；而發(fā)酵的培養(yǎng)基一般用于生產(chǎn)，這些培養(yǎng)基的種類也為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知。上 述培養(yǎng)基能夠商購得到或者根據(jù)"微生物培養(yǎng)基手冊"（Microbiology Culture Media Manual)的記載制備得到。例如，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化鈉5g, 瓊脂15-20g，蒸餾水1000ml，PH值7. 0-7. 2, 121°C滅菌20min ;發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖15g，淀 粉lg，豆餅粉25g，硫酸錳lg，磷酸二氫鉀I. 5g，硫酸鎂0. 5g，酵母膏0. 2g，氯化鐵0. lg，碳 酸鈣 0· lg，PH 值 7. 0-7. 2, 121°C滅菌 20min。
[0014] 本發(fā)明還提供了所述微生物菌劑的制備方法，其中，該方法包括：將枯草芽孢桿菌 (Bacillus subtilis)、解淀粉芽抱桿菌（Bacillus amyloliquefaciens)和沙福芽抱桿菌 (Bacillus safensis)接種于培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。
[0015] 根據(jù)本發(fā)明，所述培養(yǎng)的方法包括：在各自獨(dú)立的培養(yǎng)體系中分別培養(yǎng)枯草芽孢 桿菌（Bacillus subtilis)、解淀粉芽抱桿菌（Bacillus amyloliquefaciens)和沙福芽抱 桿菌（Bacillus safensis),并將分別培養(yǎng)得到的微生物按照比例混合。優(yōu)選情況下，通過 在各自獨(dú)立的培養(yǎng)體系中的培養(yǎng)及培養(yǎng)后的混合，使得到的每克微生物菌劑的總活菌數(shù)為 2-10X10 7 個。
[0016] 在一種優(yōu)選實(shí)施方式中，通過在各自獨(dú)立的培養(yǎng)體系中的培養(yǎng)及培養(yǎng)后按照比例 的混合，所述混合的條件沒有特別的限制，只要能夠使得到的微生物菌劑滿足以下條件即 可：以使所述微生物菌劑中的總活菌數(shù)為基準(zhǔn)，枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis)的活菌 數(shù)為總活菌數(shù)的10-50%、解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens)的活菌數(shù)為總 活菌數(shù)的10-50%、沙福芽孢桿菌（Bacillus safensis)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-50% ;優(yōu) 選地，以所述微生物菌劑中的總活菌數(shù)為基準(zhǔn)，枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis)的活菌 數(shù)為總活菌數(shù)的40-50%、解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens)的活菌數(shù)為總 活菌數(shù)的15-35%、沙福芽孢桿菌（Bacillus safensis)的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的15-35%。
[0017] 根據(jù)本發(fā)明，所述枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis)、解淀粉芽孢桿菌 (Bacillus amyloliquefaciens)、沙福芽抱桿菌（Bacillus safensis)的菌種可以通過商 購得到，例如，中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心保藏的枯草芽孢桿菌（ACCC01266)、解淀粉芽 孢桿菌（ACCC1855)、北京北納創(chuàng)聯(lián)生物技術(shù)研究院的沙福芽孢桿菌（CCTCCAB205598)。
[0018] 根據(jù)本發(fā)明，所述枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis)的培養(yǎng)方法沒有特別的限 制為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知，例如，可以在100重量份的培養(yǎng)基(葡萄糖5g，豆柏30g，蛋白 胨2g，蒸饋水1000ml，PH7. 0-7. 2)中接種2-5重量份的枯草芽孢桿菌（BaciIlus subtilis) 的菌株，37°C培養(yǎng)，直至枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis)的活菌數(shù)為2-10 XlO7個/克 的培養(yǎng)基。
[0019] 所述解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens)的培養(yǎng)方法沒有特別的限 制，例如，可以在100重量份培養(yǎng)基(豆餅粉50g，蔗糖20g，硫酸銨5g，檸檬酸三鈉2. 5g，磷 酸二氫鉀0. 3g，硫酸鎂0. 5g，硫酸亞鐵0. 05g，PH7. 0-7. 2)中接種2-5重量份的解淀粉芽 孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens)的菌株，37°C培養(yǎng)，直至解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens)的活菌數(shù)為2-10 X IO7個/克的培養(yǎng)基。
[0020] 所述沙福芽孢桿菌（Bacillus safensis)的培養(yǎng)方法沒有特別的限制，例如，可以 在100重量份的培養(yǎng)基(葡萄糖15g，淀粉lg，豆餅粉25g，硫酸錳lg，磷酸二氫鉀I. 5g，硫酸 鎂〇. 5g，酵母膏0. 2g，氯化鐵0. lg，碳酸鈣0. lg，PH7. 0-7. 2)中接種2-5重量份的沙福芽 抱桿菌（Bacillus safensis)的菌株，37°C培養(yǎng)，直至沙福芽抱桿菌（Bacillus safensis) 的活菌數(shù)為2-10 X IO7個/克的培養(yǎng)基。
[0021] 本發(fā)明還提供了所述的微生物菌劑在蔬菜育苗中的應(yīng)用。
[0022] 所述蔬菜可以為西瓜、甜瓜、黃瓜、番茄、辣椒、茄子等等，優(yōu)選為西瓜、甜瓜、黃瓜 等蔬菜經(jīng)濟(jì)作物上。
[0023] 下面通過具體的實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行更進(jìn)一步的說明。
[0024] 實(shí)施例1
[0025] (1)在100重量份的培養(yǎng)基(葡萄糖5g，豆柏30g，蛋白胨2g，蒸餾水1000ml， PH7. 0-7. 2)中接種5重量份的枯草芽孢桿菌（ACCCOl266)，37°C培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中進(jìn)行取 樣并通過顯微鏡直接計數(shù)法進(jìn)行觀察，直至枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)為2 X IO7個/克的培養(yǎng) 基。
[0026] (2)在100重量份的培養(yǎng)基(豆餅粉50g，蔗糖20g，硫酸銨5g，檸檬酸三鈉2. 5g，磷 酸二氫鉀0. 3g，硫酸鎂0. 5g，硫酸亞鐵0. 05g，PH7. 0-7. 2)接種4重量份的解淀粉芽孢桿菌 (ACCC1855)，37°C培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計數(shù)法進(jìn)行觀察，直至解 淀粉芽孢桿菌的活菌數(shù)為2 X IO7個/克的培養(yǎng)基。
[0027] (3)在100重量份的培養(yǎng)基(葡萄糖15g，淀粉lg，豆餅粉25g，硫酸錳lg，磷酸二氫 鉀I. 5g，硫酸鎂0. 5g，酵母膏0. 2g，氯化鐵0. lg，碳酸