細胞密度依賴性生長抑制檢測裝置及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種細胞增殖調(diào)控檢測裝置及應(yīng)用，尤其涉及一種細胞密度依賴性生長抑制檢測裝置及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]細胞在生長過程中達到相互接觸時有停止分裂的現(xiàn)象。由于培養(yǎng)基中的生長因子耗盡時也會產(chǎn)生生長抑制，所以正常細胞因相互接觸而抑制分裂的現(xiàn)象也稱為密度依賴性的生長抑制(density-dependent inhibit1n of growth)。在相同條件下培養(yǎng)的惡性細胞(malignant cells)對密度依賴性生長抑制失去敏感性，因而不會在形成單層時停止生長，而是相互堆積形成多層生長的聚集體，這種現(xiàn)象也說明惡性細胞的生長和分裂已經(jīng)失去了控制，調(diào)節(jié)細胞正常生長和分裂的信號對于惡性細胞不再起作用。因此，利用專一的檢測裝置對細胞生長的性質(zhì)和類型以動態(tài)形式進行鑒定，對正確認識和鑒別正常細胞和惡性細胞(癌細胞)，進一步了解細胞的癌變過程，即癌癥的發(fā)生機理，進而深入研宄探索治療癌癥的方法具有十分重要的意義。
[0003]目前，在細胞實驗中指導學生認識癌細胞還只是停留在切片和靜態(tài)的細胞形態(tài)觀察上，老師給學生灌輸較為先進的理論只能口頭或以模式圖或圖片進行，無法以動態(tài)形式展現(xiàn)出來，對于利用檢測裝置，尤其是利用專一的器皿對細胞密度依賴性生長抑制或關(guān)于正常細胞與惡性腫瘤細胞的區(qū)別進行直觀地展示的裝置還未見報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明要解決的問題是提供一種細胞密度依賴性生長抑制檢測裝置及應(yīng)用。
[0005]本發(fā)明所述細胞密度依賴性生長抑制檢測裝置，由培養(yǎng)皿和透明塑料材質(zhì)的積木塊組成；其特征在于:所述積木塊形狀似扇形體，由6?10塊組成，其共同組合后的形狀似圓柱體，且用明膠被固定于培養(yǎng)皿中央?yún)^(qū)域，培養(yǎng)皿中似圓柱體所占面積以外的區(qū)域為細胞培養(yǎng)觀察區(qū)；其中，所述似圓柱體的底面面積為培養(yǎng)皿底面面積的1/2?2/3，高度為培養(yǎng)皿高度的2/3?4/5，所述組成似圓柱體的積木塊有1/2為能解除固定的扇形體，有1/2設(shè)置有自上表面外緣到培養(yǎng)皿底面的斜面，斜面的上表面外緣與培養(yǎng)皿底面有0.5?
1.5mm的距離，且斜面的底面與自體上表面外緣連線形成的夾角為15?42度。
[0006]上述的細胞密度依賴性生長抑制檢測裝置中:所述組成似圓柱體的積木塊優(yōu)選有1/2為能解除固定的扇形體，有1/2設(shè)置有自上表面外緣到培養(yǎng)皿底面的斜面，且其兩種積木塊間隔排列。(如圖1所示)。
[0007]上述的細胞密度依賴性生長抑制檢測裝置中:所述積木塊優(yōu)選由8塊組成，其共同組合后的形狀似圓柱體，且用明膠被固定于培養(yǎng)皿中央?yún)^(qū)域，；其中，有4塊為能解除固定的扇形體，有4塊設(shè)置有自上表面外緣到培養(yǎng)皿底面的斜面，且其兩種積木塊間隔排列，所述4塊有斜面的積木塊分別命名為A、B、C、D，其斜面的底面與自體上表面外緣連線形成的夾角分別為15度、25度、32度、42度。(如圖2所示)。
[0008]本發(fā)明所述的細胞密度依賴性生長抑制檢測裝置在以動態(tài)形式直接觀察待檢實驗細胞是否存在生長接觸抑制現(xiàn)象中應(yīng)用。
[0009]本發(fā)明所述的細胞密度依賴性生長抑制檢測裝置在鑒別正常細胞與惡性腫瘤細胞中應(yīng)用。
[0010]取貼壁生長的對數(shù)生長期實驗細胞(血管內(nèi)皮細胞、肝癌細胞、胃癌細胞或胚肺成纖維細胞)，消化后制成單細胞懸液，并調(diào)整細胞濃度為17?10 8個/ml，以恰好覆蓋底面量將其加入檢測裝置中的細胞培養(yǎng)觀察區(qū)，將上述檢測裝置蓋好，置于5% C02，37°C，100%相對濕度的培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)至細胞貼壁，然后再向培養(yǎng)皿中加入培養(yǎng)液，使培養(yǎng)液量為檢測裝置中似圓柱體高度的2/3，繼續(xù)培養(yǎng)并定時觀察細胞培養(yǎng)觀察區(qū)內(nèi)的細胞生長，以檢測實驗細胞是否有接觸抑制的情況。
[0011]觀察時，若實驗細胞生長達到匯合狀態(tài)且與皿或圓柱體壁密切接觸后停止生長，即可初步判定為接觸抑制，再繼續(xù)培養(yǎng)并經(jīng)過2?5個細胞周期，實驗細胞仍停止分裂，即確定為實驗細胞出現(xiàn)接觸抑制；反之，在繼續(xù)培養(yǎng)后，實驗細胞仍能進行分裂，且呈現(xiàn)堆積生長，并能出現(xiàn)跨越有斜面的積木塊斜面上表面外緣并沿斜面生長現(xiàn)象，則為非接觸抑制。
[0012]是否出現(xiàn)非接觸抑制可以間接用于鑒別正常細胞與惡性腫瘤細胞。本發(fā)明的細胞密度依賴性生長抑制檢測裝置中設(shè)置夾角分別為15度、25度、32度、42度的斜面還可進一步用于判定惡性腫瘤細胞及轉(zhuǎn)化細胞的增殖強弱。
[0013]上述實驗中對于證實已出現(xiàn)接觸抑制的實驗細胞，還可以通過依次分別拆除固定于培養(yǎng)皿中央?yún)^(qū)域的無斜面的扇形體積木塊，增加其培養(yǎng)觀察區(qū)的面積，進一步進行所述實驗細胞接觸抑制釋放現(xiàn)象的觀察。
[0014]本發(fā)明在現(xiàn)有實理論基礎(chǔ)和實驗基礎(chǔ)上，利用機械原理與細胞學、生理學實驗技術(shù)相結(jié)合的方法，研制了“細胞密度依賴性生長抑制檢測裝置”，應(yīng)用本專利所述細胞密度依賴性生長抑制檢測裝置，可使學生在進行離體細胞培養(yǎng)實驗時，極為方便地以動態(tài)形式直接觀察到待檢的實驗細胞生長接觸抑制的存在與否、細胞接觸抑制釋放現(xiàn)象、以及鑒別腫瘤細胞與正常細胞的生長增殖狀態(tài)，達到區(qū)分正常細胞與轉(zhuǎn)化或癌變細胞的目的。本裝置特別適合于動態(tài)觀察各種因素、藥物對離體細胞的影響，能極大地提升學生的動手和觀察能力，為實驗教學提供了一種直觀、方便、靈活、準確檢測細胞接觸抑制的工具。
【附圖說明】
[0015]圖1:本發(fā)明所述細胞密度依賴性生長抑制檢測裝置立體效果圖
[0016]其中:A、B、C、D分別為4塊有斜面的積木塊，其斜面的底面與自體上表面外緣連線形成的夾角分別為15度、25度、32度、42度。
[0017]圖2:為圖1中在1-1和2-2方向的縱切剖面圖，圖中分別顯示了 A、B、C、D 4塊有斜面的積