專利名稱:一種利用酶法拆分混旋硒-甲基硒代半胱氨酸制備光學(xué)純硒-甲基硒代半胱氨酸的方法
一種利用酶法拆分混旋硒-曱基硒代半胱氨酸制備 光學(xué)純硒-曱基硒代半胱氨酸的方法技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種利用酶法拆分混旋硒-曱基硒代半胱氨酸制備光學(xué)純硒-曱 基硒代半胱氨酸的方法。
技術(shù)背景L型硒-曱基硒代半胱氨酸是一種廣泛存在于大蒜、洋蔥和椰菜等植物以及 富硒酵母中的天然含硒氨基酸，是第21種氨基酸-硒代半胱氨酸的衍生物。它 具有抗癌、抗氧化、抗衰老，提高免疫力，治療心腦血管疾病，解重金屬毒， 預(yù)防和治療克山病、大骨節(jié)病等作用，可作為一種高效、安全的硒微量元素補(bǔ) 充劑。D型硒-甲基硒代半胱氨酸是一種非天然氨基酸，是L型硒-曱基硒代半胱 氨酸的光學(xué)異構(gòu)體，兩者的物理、化學(xué)性質(zhì)在一般條件下幾乎沒有差異，因此 對兩者進(jìn)行分離十分困難。目前，關(guān)于混旋硒-曱基硒代半胱氨酸的拆分研究還沒有報道。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種操作方便、成本較低、適合工業(yè)化生產(chǎn)的利用 酶法拆分混旋硒-甲基硒代半胱氨酸制備光學(xué)純硒-曱基硒代半胱氨酸的方法。本發(fā)明通過以下步驟實(shí)現(xiàn)(1) N-乙酰-硒-甲基竭代半胱氨酸的制備在氫氧化鈉水溶液中，將混旋硒 -曱基硒代半胱氨酸用乙酸酐乙?；?，然后用鹽酸或硫酸酸化得混旋N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸；(2) 混4tN-乙酰-硒-甲^S代半胱氨酸的拆分采用豬腎?；覆鸱?，即 將混旋N-乙酰-硒-曱基硒代半胱氨酸溶于水，控制溶液的pH值、溫度、酶用量、 底物濃度和鈷離子濃度等條件，酶解完畢后，將溶液用強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂 分離，氨水洗脫得光學(xué)純L-硒-曱基硒代半胱氨酸和N-乙酰-D-硒-曱基硒代半胱 氨酸；(3) N-乙酰-D-硒-曱基曬代半胱氨酸的水解將N-乙酰-D-硒-曱基硒代半胱 氨酸溶于鹽酸或^i酸中，加熱水解完全，然后用氨水或氨氣或三乙胺中和得光 學(xué)純D-硒-曱基硒代半胱氨酸。其中，步驟(1)所述混旋硒-甲基硒代半胱氨酸的乙?；磻?yīng)是在氫氧化 鈉水溶液中，溫度為0-60。C的條件下進(jìn)行的，乙?；噭橐宜狒a(chǎn)物為 N-乙酰-硒-曱基硒代半胱氨酸。步驟(2)所述混旋N-乙酰-硒-曱基硒代半胱氨酸的拆分反應(yīng)采用的酶是 豬腎?；窱 (EC Number: 3,5.1.14, CAS Number: 9012-37-7)，拆分反應(yīng)
是在pH4-10、溫度為15-60。C、底物濃度為0.01-lmol/L 、 0)3+為0-0.01mol/L、 底物與酶質(zhì)量比為10-1000的條件下進(jìn)行的，產(chǎn)物為光學(xué)純L-硒-曱基硒代半 胱氨酸和N-乙酰-D-硒-曱基硒代半胱氨酸。步驟(3)所述N-乙酰-D-硒-曱基硒代半胱氨酸的水解反應(yīng)是在(1+1)鹽 酸中、60-100。C加熱的條件下進(jìn)行的，產(chǎn)物為光學(xué)純D-硒-曱基硒代半胱氨酸。申請人在此之前申請的兩個專利(申請?zhí)?200610124942.6，公開號 CN1948282A;申請?zhí)?00710051362.3 )中描述了硒-甲基硒代半胱氨酸的合成 方法，得到了混旋硒-曱基硒代半胱氨酸和混旋N-乙酰-硒-曱基硒代半胱氨酸。 在此基礎(chǔ)上，申請人又研制出 一種以混旋硒-曱基竭代半胱氨酸或混旋N-乙酰-硒-曱基硒代半胱氨酸為原料， 利用酶法拆分制備光學(xué)純L型和D型硒-曱基硒 代半胱氨酸的方法。本發(fā)明具有操作方便、成本較低等優(yōu)點(diǎn)，是一種適合工業(yè) 化生產(chǎn)光學(xué)純硒-曱基硒代半胱氨酸的方法。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明，但應(yīng)理解本發(fā)明的范圍非僅 限于這些實(shí)施例的范圍。 實(shí)施例1:(1) N-乙酰-硒-曱基硒代半胱氨酸的制備取18.2克混旋硒-曱基硒代半胱氨酸置于帶有冷凝回流管、溫度計(jì)和攪拌器 的250毫升三口燒瓶中，將10克NaOH溶于100毫升水中，冷卻后加到燒瓶中， 攪拌使硒-甲基硒代半胱氨酸完全溶解，再緩慢滴加乙酸肝14毫升，控制反應(yīng) 溫度在0。C。加完后再攪拌約30小時，用茚三酮檢測至無氨基酸反應(yīng)。用鹽酸 調(diào)節(jié)pH至l-2，然后用乙酸乙酯萃取，將有機(jī)相合并后減壓蒸干溶劑，得固體， 用甲醇溶解，過濾除去不溶物，將曱醇溶液放置，析出白色固體，曱醇重結(jié)晶， 得混旋N-乙酰-硒-曱基硒代半胱氨酸20.44克，產(chǎn)率91.25%。(2) 混旋N-乙酰-硒-曱基硒代半胱氨酸的拆分將22.4克混旋N-乙酰-硒曱基硒代半胱氨酸溶于500毫升水中，用(1+1 ) 氨水調(diào)pH至7,力口入豬腎?；窱 ( Aminoacylase I from porcine kidney, EC Number: 3.5.1.14， CAS Number: 9012-37-7) 0.224克，控制溫度37。C,反應(yīng) 每隔1小時取樣用HPLC測定溶液中L-硒-曱基硒代半胱氨酸含量，監(jiān)控酶解 進(jìn)度，反應(yīng)約4小時后完成。然后將溶液于卯。C加熱使酶變性沉淀，抽濾，用 732型陽離子交換樹脂分離，用水和5。/。氨水洗脫。將水洗脫液減壓蒸干后， 用甲醇溶解，放置析出N-乙酰-D-硒-曱基硒代半胱氨酸12.82克。將5%氨水 洗脫液減壓蒸干后，用水-甲醇混合溶劑溶解，放置析出L-硒-甲基硒代半胱氨 酸6.96克，光學(xué)純度95.70%。(3) N-乙酰-D-硒-曱基竭代半胱氨酸的水解將22.4克N-乙酰-D-竭-曱基硒代半胱氨酸溶于200毫升(1+1 )鹽酸中， 于95。C回流3小時至N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸水解完全(薄層色譜檢 測)。減壓蒸干溶劑，除去未反應(yīng)的鹽酸，得固體，用曱醇溶解。在曱醇溶液
中通氨氣至pH約為10，再減壓蒸干溶劑，除去剩余氨氣，得固體，用甲醇溶 解，將不溶物濾掉，濾液^L置，析出白色固體，用水-曱醇重結(jié)晶，得D-硒-甲基竭代半胱氨酸15.00克，產(chǎn)率82.42%。 實(shí)施例2:(1) N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸的制備取18.2克混旋硒-曱基竭代半胱氨酸置于帶有冷凝回流管、溫度計(jì)和攪拌器 的250毫升三口燒瓶中，將10克NaOH溶于100毫升水中，冷卻后加到燒瓶中， 攪拌使硒-曱基硒代半胱氨酸完全溶解，再緩慢滴加乙酸酐14毫升，控制反應(yīng) 溫度在30。C。加完后再攪拌約24小時，用茚三酮檢測至無氨基酸反應(yīng)。用鹽酸 調(diào)節(jié)pH至l-2，然后用乙酸乙酯萃取，將有機(jī)相合并后減壓蒸干溶劑，得固體， 用曱醇溶解，過濾除去不溶物，將曱醇溶液放置，析出白色固體，曱醇重結(jié)晶， 得混旋N-乙酰-硒-曱基硒代半胱氨酸體21.35克，產(chǎn)率95.31%。(2) 混旋N-乙酰-硒-曱基硒代半胱氨酸的拆分將22.4克混旋N-乙酰-硒曱基硒代半胱氨酸溶于0.001mol/L氯化鈷水溶液 IOO毫升中，用(1+1 )氨水調(diào)pH至7，加入豬腎?；窱 ( Aminoacylase I from porcine kidney, EC Number: 3.5.1.14, CAS Number: 9012-37-7) 0.224克，控 制溫度37。C,反應(yīng)每隔l小時取樣用HPLC測定溶液中L-硒-甲基硒代半胱氨酸 含量，監(jiān)控酶解進(jìn)度，反應(yīng)約2小時后完成。然后將溶液于90。C加熱使酶變性 沉淀，抽濾，用732型陽離子交換樹脂分離，用水和5%氨水洗脫。將水洗脫液 減壓蒸干，用曱醇溶解，放置析出N-乙酰-D-硒-曱基硒代半胱氨酸10.62克。將 5%氨水洗脫液減壓蒸干，用水-曱醇混合溶劑溶解，放置析出L-硒-曱基硒代半 胱氨酸8.82克，光學(xué)純度96.10%。(3) N-乙酰-D-硒-曱基硒代半胱氨酸的水解將22.4克N-乙酰-D-硒-甲基竭代半胱氨酸溶于200毫升(1+1 )鹽酸中， 于60。C回流約6小時至N-乙酰-D-硒-曱基硒代半胱氨酸水解完全(薄層色譜檢 測)。減壓蒸干溶劑，除去未反應(yīng)的鹽酸，得固體，用甲醇溶解。將曱醇溶液 用氨水調(diào)pH約為10,再減壓蒸干溶劑，得固體，用曱醇溶解，將不溶物濾掉， 濾液放置，析出白色固體，用水-曱醇重結(jié)晶，得D-硒-曱基硒代半胱氨酸14.4 克，產(chǎn)率79.12%。 實(shí)施例3:(1) N-乙酰-硒-曱基竭代半胱氨酸的制備取l 8.2克混旋硒-曱基硒代半胱氨酸置于帶有冷凝回流管、溫度計(jì)和攪拌器 的250毫升三口燒瓶中，將10克NaOH溶于100毫升水中，冷卻后加到燒瓶中， 攪拌使硒-甲基硒代半胱氨酸完全溶解，再緩慢滴加乙酸酐14毫升，控制反應(yīng) 溫度在60。C。加完后再攪拌約20小時，用茚三酮檢測至無氨基酸反應(yīng)。用鹽酸 調(diào)節(jié)pH至l-2，然后用乙酸乙酯萃取，將有機(jī)相合并后減壓蒸干溶劑，得固體， 用曱醇溶解，過濾除去不溶物，將曱醇溶液放置，析出白色固體，曱醇重結(jié)晶， 得混旋N-乙酰-硒-曱基硒代半胱氨酸體21.20克，產(chǎn)率94.64%。 (2) 混旋N-乙酰-硒-曱基硒代半胱氨酸的拆分將22.4克混旋N-乙酰-硒曱基硒代半胱氨酸溶于0.001 mol/L氯化鈷水溶液 500毫升中，用(1+1 )氨水調(diào)pH至7，加入豬腎?；窱 ( Ami腿cylase I from porcine kidney, EC Number: 3.5.1.14, CAS Number: 9012-37-7) 0.224克，控 制溫度60°C ,反應(yīng)每隔1小時取樣用HPLC測定溶液中L-硒-曱基硒代半胱氨酸 含量，監(jiān)控酶解進(jìn)度，反應(yīng)約l小時后完成。然后將溶液于卯。C加熱使酶變性 沉淀，抽濾，用732型陽離子交換樹脂分離，用水和5%氨水洗脫。將水洗脫液 減壓蒸干，用曱醇溶解，放置析出N-乙酰-D-硒-曱基硒代半胱氨酸16.94克。將 5%氨水洗脫液減壓蒸干，用水-曱醇混合溶劑溶解，放置析出L-硒-曱基硒代半 胱氨酸3.62克，光學(xué)純度96.72%。(3) N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸的水解將22.4克N-乙酰-D-硒-曱基硒代半胱氨酸溶于200亳升(1+1 )鹽酸中， 于100。C回流約3小時至N-乙酰-D-硒-曱基硒代半胱氨酸水解完全(薄層色譜 檢測)。減壓蒸千溶劑，除去未反應(yīng)的鹽酸，得固體，用甲醇溶解。將曱醇溶 液用氨水調(diào)pH約為10，再減壓蒸干溶劑，得固體，用曱醇溶解，將不溶物濾 掉，濾液放置，析出白色固體，用水-曱醇重結(jié)晶，得D-硒-曱基硒代半胱氨酸 14.09克，產(chǎn)率77.42%。 實(shí)施例4:(1) N-乙酰-硒-曱基硒代半胱氨酸的制備取18.2克混旋硒-曱基硒代半胱氨酸置于帶有冷凝回流管、溫度計(jì)和攪拌器 的250毫升三口燒瓶中，將10克NaOH溶于100毫升水中，冷卻后加到燒瓶中， 攪拌使硒-曱基硒代半胱氨酸完全溶解，再緩慢滴加乙酸酐14毫升，控制反應(yīng) 溫度在30。C。加完后再攪拌約24小時，用茚三酮檢測至無氨基g復(fù)反應(yīng)。用硫酸 調(diào)節(jié)pH至l-2，然后用乙酸乙酯萃取，將有機(jī)相合并后減壓蒸干溶劑，得固體， 用曱醇溶解，過濾除去不溶物，將曱醇溶液放置，析出白色固體，曱醇重結(jié)晶， 得混旋N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸體21.35克，產(chǎn)率95.31%。(2) 混旋N-乙酰-硒-曱基竭代半胱氨酸的拆分將2.24克混旋N-乙酰-硒曱基硒代半胱氨酸溶于0.001mol/L氯化鈷水溶液 1000毫升中，用(1+1 )鹽酸調(diào)pH至4，加入豬腎?；窱 ( Aminoacylase I from porcine kidney, EC Number: 3.5.1.14, CAS Number: 9012-37-7) 0.224克，控 制溫度為15°C ,反應(yīng)每隔l小時取樣用HPLC測定溶液中L-硒-甲基硒代半胱氨 酸含量，監(jiān)控酶解進(jìn)度，反應(yīng)約40小時后完成。然后將溶液于90。C加熱使酶變 性沉淀，抽濾，用732型陽離子交換樹脂分離，用水和5%氨水洗脫。將水洗脫 疼減壓蒸干，用曱醇溶解，放置析出N-乙酰-D-硒-曱基硒代半胱氨酸1.68克。 將5%氨水洗脫液減壓蒸干，用水-曱醇混合溶劑溶解，放置析出L-硒-甲基硒代 半胱氨酸0.35克，光學(xué)純度95.88%。(3) N-乙酰-D-硒-甲基灑代半胱氨酸的水解將22.4克N-乙酰-D-硒-曱基硒代半胱氨酸溶于200毫升(1+1 )鹽酸中，
于95。C回流3小時至N-乙酰-D-硒-曱基硒代半胱氨酸水解完全(薄層色譜檢 測)。減壓蒸干溶劑，除去未反應(yīng)的鹽酸，得固體，用曱醇溶解。在曱醇溶液 中通氨氣至pH約為10，再減壓蒸干溶劑，除去剩余氨氣，得固體，用曱醇溶 解，將不溶物濾掉，濾液;^欠置，析出白色固體，用水-曱醇重結(jié)晶，得D-硒-曱 基硒代半胱氨酸15.00克，產(chǎn)率82.42%。 實(shí)施例5:(1) N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸的制備取18.2克混旋硒-曱基硒代半胱氨酸置于帶有冷凝回流管、溫度計(jì)和攪拌器 的250毫升三口燒瓶中，將10克NaOH溶于100毫升水中，冷卻后加到燒瓶中， 攪拌使硒-曱基硒代半胱氨酸完全溶解，再緩慢滴加乙酸酐14毫升，控制反應(yīng) 溫度在30。C。加完后再攪拌約24小時，用茚三酮檢測至無氨基酸反應(yīng)。用硫酸 調(diào)節(jié)pH至l-2，然后用乙酸乙酯萃取，將有機(jī)相合并后減壓蒸干溶劑，得固體， 用甲醇溶解，過濾除去不溶物，將曱醇溶液放置，析出白色固體，曱醇重結(jié)晶， 得混旋N-乙酰-硒-曱基硒代半胱氨酸體21.35克，產(chǎn)率95.31%。(2) 混旋N-乙酰-硒-曱基硒代半胱氨酸的拆分將22.4克混旋N-乙酰-硒曱基硒代半胱氨酸溶于0.01mol/L氯化鈷水溶液 IOO亳升中，用(1+1 )氨水調(diào)pH至lO,加入豬腎?；窱 ( Aminoacylase I from porcine kidney, EC Number: 3.5.1.14, CAS Number: 9012-37-7 ) 0'0224克,控 制溫度為60。C ,反應(yīng)每隔l小時取樣用HPLC測定溶液中L-硒-曱基硒代半胱氨 酸含量，監(jiān)控酶解進(jìn)度，反應(yīng)約l小時后完成。然后將溶液于90。C加熱使酶變 性沉淀，抽濾，用732型陽離子交換樹脂分離，用水和5%氨水洗脫。將水洗脫 液減壓蒸干，用曱醇溶解，放置析出N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸16.72克。 將5%氨水洗脫液減壓蒸干，用水-曱醇混合溶劑溶解，放置析出L-硒-曱基硒代 半胱氨酸3.82克，光學(xué)純度97.85%。(3) N-乙酰-D-硒-曱基硒代半胱氨酸的水解將22.4克N-乙酰-D-硒-曱基硒代半胱氨酸溶于200毫升(1+1 )鹽酸中， 于95。C回流3小時至N-乙酰-D-硒-曱基硒代半胱氨酸水解完全(薄層色譜檢 測)。減壓蒸干溶劑，除去未反應(yīng)的鹽酸，得固體，用曱醇溶解。在曱醇溶液 中通氨氣至pH約為10，再減壓蒸干溶劑，除去剩余氨氣，得固體，用曱醇溶 解，將不溶物濾掉，濾液放置，析出白色固體，用水-曱醇重結(jié)晶，得D-硒-曱 基硒代半胱氨酸15.00克，產(chǎn)率82.42%。 實(shí)施例6:(1) N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸的制備取18.2克混旋硒-曱基硒代半胱氨酸置于帶有冷凝回流管、溫度計(jì)和攪拌器 的250毫升三口燒瓶中，將10克NaOH溶于100毫升水中，冷卻后加到燒瓶中， 攪拌使硒-曱基硒代半胱氨酸完全溶解，再緩慢滴加乙酸酐14毫升，控制反應(yīng) 溫度在30。C。加完后再攪拌約24小時，用茚三酮檢測至無氨基酸反應(yīng)。用鹽酸 調(diào)節(jié)pH至l-2，然后用乙酸乙酯萃取，將有機(jī)相合并后減壓蒸干溶劑，得固體，
用曱醇溶解，過濾除去不溶物，將曱醇溶液;故置，析出白色固體，曱醇重結(jié)晶，得混旋N-乙酰-硒-曱基硒代半胱氨酸體21.35克，產(chǎn)率95.31%。(2) 混旋N-乙酰-硒-甲基竭代半胱氨酸的拆分將2.24克混旋N-乙酰-硒曱基硒代半胱氨酸溶于0.01mol/L氯化鈷水溶液 1000毫升中，用(1+1 )氨水調(diào)pH至7，加入豬腎酰化酶I (Aminoacylase I from porcine kidney, EC Number: 3.5.1.14， CAS Number: 9012-37-7 ) 0.0224克，控 制溫度為37°C ，反應(yīng)每隔1小時取樣用HPLC測定溶液中L-硒-曱基硒代半胱氨 酸含量，監(jiān)控酶解進(jìn)度，反應(yīng)約l小時后完成。然后將溶液于90。C加熱使酶變 性沉淀，抽濾，用732型陽離子交換樹脂分離，用水和5%氨水洗脫。將水洗脫 液減壓蒸干，用曱醇溶解，放置析出N-乙酰-D-硒-曱基硒代半胱氨酸0.97克。 將5%氨水洗脫液減壓蒸干，用水-曱醇混合溶劑溶解，放置析出L-硒-曱基硒代 半胱氨酸0.87克，光學(xué)純度97.卯％。(3) N-乙酰-D-硒-曱基硒代半胱氨酸的水解將22.4克N-乙酰-D-硒-曱基硒代半胱氨酸溶于200毫升(1+1 )鹽酸中， 于95。C回流3小時至N-乙酰-D-硒-曱基硒代半胱氨酸水解完全(薄層色譜檢 測)。減壓蒸干溶劑，除去未反應(yīng)的鹽酸，得固體，用曱醇溶解。在甲醇溶液 中加入三乙胺至pH約為10，再減壓蒸干溶劑，得固體，用曱醇溶解，將不溶 物濾掉，濾液放置，析出白色固體，用水-曱醇重結(jié)晶，得D-硒-曱基硒代半胱 氨酸15.00克，產(chǎn)率82.42%。 實(shí)施例7:(1) N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸的制備取18.2克混旋硒-曱基硒代半胱氨酸置于帶有冷凝回流管、溫度計(jì)和攪拌器 的250毫升三口燒瓶中，將10克NaOH溶于100毫升水中，冷卻后加到燒瓶中， 攪拌使硒-甲基硒代半胱氨酸完全溶解，再緩慢滴加乙酸酐14毫升，控制反應(yīng) 溫度在30。C。加完后再攪拌約24小時，用茚三酮檢測至無氨基酸反應(yīng)。用鹽酸 調(diào)節(jié)pH至l-2，然后用乙酸乙酯萃取，將有機(jī)相合并后減壓蒸干溶劑，得固體， 用曱醇溶解，過濾除去不溶物，將甲醇溶液放置，析出白色固體，曱醇重結(jié)晶， 得混旋N-乙酰-硒-曱基硒代半胱氨酸體21.35克，產(chǎn)率95.31%。(2) 混旋N-乙酰-硒-曱基竭代半胱氨酸的拆分 將22.4克混旋N-乙酰-硒甲基硒代半胱氨酸溶于0.001mol/L氯化鈷水溶液500毫升中，用(1+1 )氨水調(diào)pH至7，加入豬腎?；窱 ( Aminoacylase I from porcine kidney, EC Number: 3.5.1.14, CAS Number: 9012-37-7 ) 0.0224克，控 制溫度為37。C,反應(yīng)每隔l小時取樣用HPLC測定溶液中L-硒-曱基硒代半胱氨 酸含量，監(jiān)控酶解進(jìn)度，反應(yīng)約24小時后完成。然后將溶液于90。C加熱使酶變 性沉淀，抽濾，用732型陽離子交換樹脂分離，用水和5%氨水洗脫。將水洗脫 液減壓蒸干，用曱醇溶解，放置析出N-乙酰-D-硒-曱基硒代半胱氨酸13.70克。 將5%氨水洗脫液減壓蒸干，用水-曱醇混合溶劑溶解，放置析出L-硒-曱基硒代 半胱氨酸6.26克，光學(xué)純度98.20%。(3) N-乙酰-D-竭-曱基硒代半胱氨酸的水解將22.4克N-乙酰-D-硒-曱基硒代半胱氨酸溶于200毫升(1+1 )鹽酸中， 于95。C回流3小時至N-乙酰-D-硒-曱基硒代半胱氨酸水解完全(薄層色譜檢 測)。減壓蒸千溶劑，除去未反應(yīng)的鹽酸，得固體，用甲醇溶解。在甲醇溶液 中通氨氣至pH約為10,再減壓蒸干溶劑，除去剩余氨氣，得固體，用曱醇溶 解，將不溶物濾掉，濾液放置，析出白色固體，用水-曱醇重結(jié)晶，得D-硒-曱 基硒代半胱氨酸15.00克，產(chǎn)率82.42%。 實(shí)施例8:(1) N-乙酰-硒-曱基硒代半胱氨酸的制備取18.2克混旋硒-曱基硒代半胱氨酸置于帶有冷凝回流管、溫度計(jì)和攪拌器 的250毫升三口燒瓶中，將10克NaOH溶于100毫升水中，冷卻后加到燒瓶中， 攪拌使硒-曱基硒代半胱氨酸完全溶解，再緩慢滴加乙酸酐14毫升，控制反應(yīng) 溫度在30。C。加完后再攪拌約24小時，用茚三酮檢測至無氨基酸反應(yīng)。用鹽酸 調(diào)節(jié)pH至l-2，然后用乙酸乙酯萃取，將有機(jī)相合并后減壓蒸干溶劑，得固體， 用曱醇溶解，過濾除去不溶物，將甲醇溶液放置，析出白色固體，曱醇重結(jié)晶， 得混旋N-乙酰-硒-曱基硒代半胱氨酸體21.35克，產(chǎn)率95.31%。(2) 混旋N-乙酰-硒-曱基湖代半胱氨酸的拆分將22.4克混旋>1-乙酰-硒曱基硒代半胱氨酸溶于0,001mol/L氯化鈷水溶液 500毫升中，用(1+1 )氨水調(diào)pH至7，加入豬腎酰化酶I ( Aminoacylase I from porcine kidney, EC Number: 3.5.1.14， CAS Number: 9012-37-7 ) 2.24克，控制 溫度為15 °C ，反應(yīng)每隔1小時取樣用HPLC測定溶液中L-硒-甲基硒代半胱氨酸 含量，監(jiān)控酶解進(jìn)度，反應(yīng)約40小時后完成。然后將溶液于90。C加熱使酶變性 沉淀，抽濾，用732型陽離子交換樹脂分離，用水和5%氨水洗脫。將水洗脫液 減壓蒸干，用曱醇溶解，放置析出N-乙酰-D-硒-曱基硒代半胱氨酸17.32克。將 5%氨水洗脫液減壓蒸干，用水-曱醇混合溶劑溶解，放置析出L-硒-曱基硒代半 胱氨酸3.30克，光學(xué)純度95.20%。(3) N-乙跣-D-硒-甲基硒代半胱氨酸的水解將22.4克N-乙酰-D-硒-曱基硒代半胱氨酸溶于200毫升(1+1 )鹽酸中， 于95。C回流3小時至N-乙酰-D-硒-曱基硒代半胱氨酸水解完全(薄層色譜檢 測)。減壓蒸干溶劑，除去未反應(yīng)的鹽酸，得固體，用甲醇溶解。在曱醇溶液 中通氨氣至pH約為10,再減壓蒸干溶劑，除去剩余氨氣，得固體，用曱醇溶 解，將不溶物濾掉，濾液放置，析出白色固體，用水-甲醇重結(jié)晶，得D-硒-曱 基硒代半胱氨酸15.00克，產(chǎn)率82.42%。
權(quán)利要求
1、一種利用酶法拆分混旋硒-甲基硒代半胱氨酸制備光學(xué)純硒-甲基硒代半胱氨酸的方法，其特征在于包括以下步驟
(1)N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸的制備在氫氧化鈉水溶液中，將混旋硒-甲基硒代半胱氨酸用乙酸酐乙酰化，然后用鹽酸或硫酸酸化得混旋N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸；
(2)混旋N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸的拆分采用豬腎?；覆鸱?。將混旋N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸溶于水，控制溶液的pH值、溫度、酶用量、底物濃度和鈷離子濃度等條件，酶解完畢后，將溶液用強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂分離，氨水洗脫得光學(xué)純L-硒-甲基硒代半胱氨酸和N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸；
(3)N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸的水解將N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸溶于鹽酸中，加熱水解完全，然后用氨水或氨氣或三乙胺中和得光學(xué)純D-硒-甲基硒代半胱氨酸。
2、 如權(quán)利要求
1所述的利用酶法拆分混旋硒-曱基硒代半胱氨酸制備光學(xué)純硒 -曱基硒代半胱氨酸的方法，其特征在于步驟(1 )所述混旋硒-曱基硒代半胱 氨酸的乙?；磻?yīng)是在氬氧化鈉水溶液中，溫度為0-60。C的條件下進(jìn)行的，乙 ?；噭橐宜狒?，產(chǎn)物為N-乙酰-硒-曱基硒代半胱氨酸。
3、 如權(quán)利要求
1所述的利用酶法拆分混旋硒-曱基硒代半胱氨酸制備光學(xué)純 硒-曱基硒代半胱氨酸的方法，其特征在于步驟(2)所述混旋N-乙酰-硒-曱 基硒代半胱氨酸的拆分反應(yīng)采用的酶是豬腎?；窱 (ECNumber: 3.5.1.14， CAS Number: 9012-37-7),拆分反應(yīng)是在pH4-10、溫度為15-60°C、底物濃 度為0.01-lmol/L 、 0)3+為0-0.0lmol/L、底物與酶質(zhì)量比為10-1000的條件下 進(jìn)行的，產(chǎn)物為光學(xué)純L-硒-曱基硒代半胱氨酸和N-乙酰-D-硒-曱基硒代半胱 氨酸。
4、 如權(quán)利要求
1所述的利用酶法拆分混旋硒-曱基硒代半胱氨酸制備光學(xué)純硒 -甲基硒代半胱氨酸的方法，其特征在于步驟(3)所述N-乙酰-D-硒-曱基硒 代半胱氨酸的水解反應(yīng)是在(1+1)鹽酸中、60-IOO'C加熱的條件下進(jìn)行的， 產(chǎn)物為光學(xué)純D-竭-曱基硒代半胱氨酸。
專利摘要
本發(fā)明公開了一種利用酶法拆分混旋硒-甲基硒代半胱氨酸制備光學(xué)純硒-甲基硒代半胱氨酸的方法，它是在氫氧化鈉水溶液中，將混旋硒-甲基硒代半胱氨酸用乙酸酐乙酰化，鹽酸等酸化得混旋N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸。然后在一定的pH值、反應(yīng)溫度、酶用量、底物和鈷離子濃度條件下，將混旋N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸用豬腎?；窱拆分得光學(xué)純L-硒-甲基硒代半胱氨酸和N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸，最后將N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸用鹽酸加熱水解，氨水等中和得光學(xué)純D-硒-甲基硒代半胱氨酸。該法具有操作方便、成本較低等優(yōu)點(diǎn)，是一種適合工業(yè)化生產(chǎn)光學(xué)純硒-甲基硒代半胱氨酸的方法。
文檔編號C12P41/00GKCN101157950SQ200710009544
公開日2008年4月9日 申請日期2007年9月11日
發(fā)明者劉小輝, 劉建群, 尹家琪, 張小平 申請人:江西川奇藥業(yè)有限公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan