本發(fā)明涉及抗腫瘤化合物，尤其涉及一種苯丙素類化合物及其提取純化方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、腫瘤分為良性腫瘤和惡性腫瘤兩大類，其中惡性腫瘤即癌癥，因其生長(zhǎng)速度快、增殖能力強(qiáng)、極易轉(zhuǎn)移等特性具有較強(qiáng)的致死率。在近些年發(fā)現(xiàn)的新抗癌藥物中，天然產(chǎn)物是抗腫瘤新藥開(kāi)發(fā)的重要來(lái)源。

2、月腺大戟（radix?euphorbiae?ebracteolatae）是大戟科大戟屬多年生的草本植物，作為中藥狼毒的基原之一，臨床上主要用來(lái)治療淋巴結(jié)結(jié)核、皮癬等?，F(xiàn)代藥理研究表明，月腺大戟具有抑制白血病、抗痛風(fēng)及抗癌等活性。其特殊的活性成分已被證明具有顯著的抗腫瘤活性，例如月腺大戟素a（ebracteolatain?a）是一種從月腺大戟中提取的乙?；g苯三酚化合物，能夠顯著抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖。

3、但是，目前從月腺大戟中提取的具有抗腫瘤作用的化合物仍然較少，從月腺大戟中尋找新型的、具有優(yōu)異抗腫瘤活性的化合物具有重要意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、有鑒于此，本發(fā)明提供了一種苯丙素類化合物及其提取純化方法和應(yīng)用。本發(fā)明提供的苯丙素類化合物是從中藥月腺大戟中提取的新型化合物，具有優(yōu)異的抗腫瘤活性。

2、為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

3、一種苯丙素類化合物，具有式i所示結(jié)構(gòu)：

4、式i。

5、本發(fā)明還提供了上述方案所述苯丙素類化合物的提取純化方法，包括以下步驟：

6、使用乙醇對(duì)月腺大戟藥材粉末進(jìn)行提取，將所得提取液濃縮，得到浸膏；

7、將所述浸膏和水混合，得到浸膏液；將所述浸膏液用乙酸乙酯進(jìn)行萃取，得到乙酸乙酯部；

8、將所述乙酸乙酯部進(jìn)行硅膠柱色譜分離，得到10個(gè)餾分段，按照餾分的流出順序，依次記為a、b、c、d、e、f、g、h、i、j段；

9、將所述f段進(jìn)行反相色譜柱分離，得到18個(gè)組分，按照組分的流出順序，依次記為f1~f18；

10、將所述f16進(jìn)行制備型高效液相色譜純化，得到式i所示結(jié)構(gòu)的苯丙素類化合物。

11、優(yōu)選的，所述乙醇的體積分?jǐn)?shù)為80~90%，所述提取為回流提??；所述提取的次數(shù)為3~5次，每次提取的時(shí)間為2~3?h。

12、優(yōu)選的，所述濃縮的方式為減壓濃縮，所述減壓濃縮的溫度為47~50℃。

13、優(yōu)選的，所述硅膠柱色譜分離采用的洗脫劑為二氯甲烷和甲醇；所述硅膠柱色譜分離的洗脫方式為梯度洗脫，所述梯度洗脫中二氯甲烷和甲醇的體積比從1:0變化至0:1。

14、優(yōu)選的，所述硅膠柱色譜分離采用的硅膠的目數(shù)為100~200目；所述反相柱色譜分離采用的色譜柱為c18ods中壓柱。

15、優(yōu)選的，所述反相柱色譜分離采用的洗脫劑為甲醇水溶液；所述反相柱色譜分離的洗脫方式為梯度洗脫，所述梯度洗脫時(shí)甲醇水溶液中甲醇的體積分?jǐn)?shù)由15%變化至100%。

16、優(yōu)選的，所述制備型高效液相色譜純化采用的流動(dòng)相為乙腈-甲酸水溶液，所述乙腈-甲酸水溶液中乙腈和甲酸水溶液的體積比為85:15~90:10；所述甲酸水溶液中甲酸的體積分?jǐn)?shù)為0.1~0.5%；所述流動(dòng)相的流速為8~10?ml/min。

17、本發(fā)明還提供了上述方案所述的苯丙素類化合物或上述方案所述提取純化方法得到的苯丙素類化合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

18、優(yōu)選的，所述抗腫瘤藥物為抗肝癌藥物、抗結(jié)腸癌藥物或抗白血病藥物。

19、本發(fā)明提供了一種苯丙素類化合物（記為euphebrarin?a），具有式i所示結(jié)構(gòu)。本發(fā)明首次從中藥狼毒（月腺大戟）中提取分離并鑒定了化合物euphebrarin?a，該化合物具有顯著的抗腫瘤活性。通過(guò)體外抗腫瘤作用研究發(fā)現(xiàn)，化合物euphebrarin?a能夠抑制hl-60、smmc-7721和sw480細(xì)胞系增殖，其中抑制smmc-7721和sw480細(xì)胞增殖的活性優(yōu)于陽(yáng)性藥物順鉑，尤其是抑制smmc-7721肝癌細(xì)胞的ic50值僅為1.878±0.072?μm；因此，化合物euphebrarin?a在開(kāi)發(fā)成治療白血病、肝癌和結(jié)腸癌的藥物方面具有一定的潛力；同時(shí)，本發(fā)明進(jìn)一步檢測(cè)了化合物euphebrarin?a對(duì)smmc-7721肝癌細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的影響，結(jié)果顯示化合物euphebrarin?a能抑制該細(xì)胞周期阻滯在g2/m期，并且呈現(xiàn)濃度依賴性，在0.3?μm濃度下細(xì)胞凋亡最多。因此，本發(fā)明提供的新型苯丙素類化合物抗腫瘤活性高，在抗腫瘤藥物領(lǐng)域，尤其是在抗肝癌藥物方面具有廣闊的應(yīng)用前景。

20、本發(fā)明還提供了上述方案所述苯丙素類化合物的提取純化方法，本發(fā)明首先采用乙醇對(duì)月腺大戟粉末進(jìn)行提取，再通過(guò)乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯部，之后通過(guò)硅膠柱色譜分離、反相色譜柱分離和制備型高效液相色譜純化得到本發(fā)明的苯丙素類化合物；本發(fā)明提供的提取純化方法步驟簡(jiǎn)單，容易操作。

技術(shù)特征：

1.一種苯丙素類化合物，其特征在于，具有式i所示結(jié)構(gòu)：

2.權(quán)利要求1所述苯丙素類化合物的提取純化方法，其特征在于，包括以下步驟：

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的提取純化方法，其特征在于，所述乙醇的體積分?jǐn)?shù)為80~90%，所述提取為回流提??；所述提取的次數(shù)為3~5次，每次提取的時(shí)間為2~3?h。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的提取純化方法，其特征在于，所述濃縮的方式為減壓濃縮，所述減壓濃縮的溫度為47~50℃。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的提取純化方法，其特征在于，所述硅膠柱色譜分離采用的洗脫劑為二氯甲烷和甲醇；所述硅膠柱色譜分離的洗脫方式為梯度洗脫，所述梯度洗脫中二氯甲烷和甲醇的體積比從1:0變化至0:1。

6.根據(jù)權(quán)利要求2或5所述的提取純化方法，其特征在于，所述硅膠柱色譜分離采用的硅膠的目數(shù)為100~200目；所述反相柱色譜分離采用的色譜柱為c18ods中壓柱。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的提取純化方法，其特征在于，所述反相柱色譜分離采用的洗脫劑為甲醇水溶液；所述反相柱色譜分離的洗脫方式為梯度洗脫，所述梯度洗脫時(shí)甲醇水溶液中甲醇的體積分?jǐn)?shù)由15%變化至100%。

8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的提取純化方法，其特征在于，所述制備型高效液相色譜純化采用的流動(dòng)相為乙腈-甲酸水溶液，所述乙腈-甲酸水溶液中乙腈和甲酸水溶液的體積比為85:15~90:10；所述甲酸水溶液中甲酸的體積分?jǐn)?shù)為0.1~0.5%；所述流動(dòng)相的流速為8~10ml/min。

9.權(quán)利要求1所述的苯丙素類化合物或權(quán)利要求2~8任意一項(xiàng)所述提取純化方法得到的苯丙素類化合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述抗腫瘤藥物為抗肝癌藥物、抗結(jié)腸癌藥物或抗白血病藥物。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及抗腫瘤化合物技術(shù)領(lǐng)域，提供了一種苯丙素類化合物及其提取純化方法和應(yīng)用。本發(fā)明首次從中藥狼毒（月腺大戟）中提取分離并鑒定了苯丙素類化合物（euphebrarin?A），通過(guò)體外抗腫瘤作用研究發(fā)現(xiàn)，化合物euphebrarin?A能夠抑制HL?60、SMMC?7721和SW480細(xì)胞系增殖，尤其是抑制SMMC?7721肝癌細(xì)胞的活性較高；同時(shí)，化合物euphebrarin?A能抑制SMMC?7721肝癌細(xì)胞周期阻滯在G<subgt;2</subgt;/M期，并且呈現(xiàn)濃度依賴性。綜上所述，本發(fā)明提供的新型苯丙素類化合物抗腫瘤活性高，在抗腫瘤藥物領(lǐng)域，尤其是抗肝癌藥物領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。

技術(shù)研發(fā)人員：郁陽(yáng),鄭漢,王舉濤,徐寧雯,楊永慧,馬思齊
受保護(hù)的技術(shù)使用者：安徽中醫(yī)藥大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/17