本發(fā)明涉及分子標(biāo)記，尤其涉及藏綿羊ino80基因作為免疫性狀的遺傳標(biāo)記及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、隨著養(yǎng)羊業(yè)的不斷發(fā)展，羊病的種類越來越多，復(fù)雜程度不斷加劇，控制也越來越困難。羊病對(duì)養(yǎng)羊生產(chǎn)的危害日趨嚴(yán)重，同時(shí)大量藥物的使用會(huì)使動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生耐藥性，給畜產(chǎn)品的安全造成隱患。

2、長(zhǎng)遠(yuǎn)來看，從抗病力的遺傳基礎(chǔ)研究出發(fā)，篩選抗性基因，從分子水平開展抗病育種，從遺傳上提高羊只對(duì)病原的抗性，增強(qiáng)免疫力是從根本上解決這一問題的重要途徑。藏綿羊長(zhǎng)期生活在青藏高原地區(qū)，環(huán)境惡劣，需要更高的抗病力來適應(yīng)這種環(huán)境。因此，提高藏綿羊抗病力，才能使羊只對(duì)高海拔、低氣壓、強(qiáng)紫外線、缺氧和冷季營(yíng)養(yǎng)脅迫等惡劣的自然環(huán)境具有更強(qiáng)的適應(yīng)性。

3、免疫指標(biāo)可以反映動(dòng)物的抗病力。動(dòng)物的抗病能力主要取決于其免疫系統(tǒng)的健康狀況和能力。免疫系統(tǒng)的主要功能是識(shí)別和消除侵入體內(nèi)的病原體，如細(xì)菌、病毒等。當(dāng)病原體入侵時(shí)，免疫系統(tǒng)會(huì)迅速做出反應(yīng)，啟動(dòng)一系列的免疫反應(yīng)過程，以對(duì)抗和清除病原體。

4、免疫球蛋白g(igg)與動(dòng)物的抗病力密切相關(guān)。iga指的是免疫球蛋白a，在血清中的含量位居第二，僅次于lgg，具有抗感染的作用。igg和iga如果在體內(nèi)含量下降，就容易導(dǎo)致免疫功能低下。igg和iga如果在體內(nèi)含量上升，機(jī)體抗病能力就增強(qiáng)。而抗病力的增強(qiáng)可減少藥物的使用，降低生產(chǎn)成本，增加養(yǎng)殖效益。因此，篩選與藏綿羊免疫性狀相關(guān)聯(lián)的snp分子標(biāo)記具有重要意義。而且免疫指標(biāo)可以作為一個(gè)重要的參考，來評(píng)估動(dòng)物的抗病能力和健康狀況。通過監(jiān)測(cè)免疫指標(biāo)的變化，可以及時(shí)發(fā)現(xiàn)動(dòng)物的免疫問題，并采取相應(yīng)的措施來提高其抗病能力，預(yù)防和治療疾病。

5、ino80是一種編碼蛋白質(zhì)的基因，在基因組中被稱為ino80基因。ino80基因編碼的蛋白質(zhì)是ino80復(fù)合物的一個(gè)重要組成部分。ino80復(fù)合物是一種高度保守的atpase驅(qū)動(dòng)的染色質(zhì)重塑復(fù)合物，參與基因表達(dá)調(diào)控、染色質(zhì)結(jié)構(gòu)維護(hù)和dna損傷修復(fù)等生物學(xué)過程。

6、ino80復(fù)合物通過atpase活性和其它次單位，參與染色質(zhì)的解旋、滑動(dòng)和扭曲，從而調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄、dna修復(fù)和染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的動(dòng)態(tài)平衡。ino80復(fù)合物還與其他蛋白質(zhì)和復(fù)合物相互作用，形成復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。現(xiàn)有技術(shù)中對(duì)ino80基因的研究，主要在原發(fā)性免疫缺陷病致病基因的檢測(cè)當(dāng)中(cn201811585465.2)，以及dna損傷修復(fù)過程中(https://baijiahao.baidu.com/s？id＝1799193892331443005&wfr＝spider&for＝pc)。但目前還沒有建立有關(guān)ino80基因作為藏綿羊免疫性狀分子標(biāo)記的檢測(cè)方法，同時(shí)該基因作為藏綿羊免疫性狀分子標(biāo)記輔助選擇也未見應(yīng)用。

7、因此，如何通過遺傳學(xué)和基因工程技術(shù)等手段，在藏綿羊育種中從基因?qū)用鎸ふ襥no80基因中的變異位點(diǎn)，通過其與性狀間的關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)基因與性狀間的關(guān)系，進(jìn)行早期選擇，從而提高選種效率和準(zhǔn)確性，具有廣闊的應(yīng)用價(jià)值。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供藏綿羊ino80基因作為免疫性狀的遺傳標(biāo)記及應(yīng)用。

2、為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

3、本發(fā)明提供了一種與藏綿羊免疫性狀相關(guān)的ino80基因分子標(biāo)記，所述分子標(biāo)記位于國(guó)際綿羊基因組oar_v4.0版本第7號(hào)染色體上第29519205個(gè)堿基處，突變堿基為g或a。

4、優(yōu)選的，突變堿基為g的藏綿羊的基因型為gg或ga；

5、突變堿基為a的藏綿羊的基因型為aa；

6、所述aa基因型的藏綿羊個(gè)體的免疫球蛋白iga、igg顯著高于gg和ga基因型個(gè)體；

7、所述ga基因型的藏綿羊個(gè)體的免疫球蛋白iga、igg顯著高于gg基因型個(gè)體。

8、本發(fā)明還提供了所述的分子標(biāo)記用于非診斷目的的藏綿羊免疫性狀標(biāo)記輔助選擇中的應(yīng)用。

9、本發(fā)明還提供了所述的分子標(biāo)記在藏綿羊輔助育種中的應(yīng)用。

10、本發(fā)明還提供了擴(kuò)增所述分子標(biāo)記的引物對(duì)，所述引物對(duì)如seq?id?no.2和3所示。

11、本發(fā)明還提供了所述的引物對(duì)在制備非診斷目的的藏綿羊免疫性狀標(biāo)記輔助選擇產(chǎn)品中的應(yīng)用。

12、本發(fā)明還提供了所述的引物對(duì)在制備藏綿羊輔助育種的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

13、本發(fā)明還提供了一種非診斷目的的藏綿羊免疫性狀標(biāo)記輔助選擇的方法，包括如下步驟：

14、(1)提取藏綿羊基因組dna；

15、(2)以步驟(1)得到的藏綿羊基因組dna為模板，利用所述的引物對(duì)進(jìn)行擴(kuò)增，得到擴(kuò)增產(chǎn)物；

16、(3)對(duì)所述的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行基因型分析，得到不同基因型的藏綿羊；將藏綿羊的基因型與免疫指標(biāo)關(guān)聯(lián)；所述免疫指標(biāo)包括iga和/或igg。

17、優(yōu)選的，步驟(2)所述的擴(kuò)增的體系為：金牌mix(green)22μl，上、下游引物各1μl，模板dna?1μl；

18、步驟(2)所述的擴(kuò)增的程序?yàn)椋?8℃2min；98℃10s，58℃10s，72℃10s，共40個(gè)循環(huán)；72℃延伸2min。

19、本發(fā)明還提供了一種非診斷目的的藏綿羊免疫性狀標(biāo)記輔助選擇和/或藏綿羊輔助育種的試劑盒，包括檢測(cè)所述的分子標(biāo)記的試劑或所述的引物對(duì)。

20、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下的有益效果：

21、本發(fā)明所述的snp分子標(biāo)記位于國(guó)際綿羊參考基因組oar_v4.0版本第7號(hào)染色體上第29519205個(gè)堿基處；變異類型為g/a，命名為g29519205g>a，存在三個(gè)基因型，當(dāng)所述的第7號(hào)染色體上第29519205個(gè)堿基為g時(shí)，基因型為gg或ga；當(dāng)所述的第7號(hào)染色體上第29519205個(gè)堿基為a時(shí)，基因型為aa；通過不同基因型與免疫球蛋白iga、igg含量的關(guān)聯(lián)分析，發(fā)現(xiàn)所述aa基因型的藏綿羊個(gè)體的免疫球蛋白iga、igg顯著高于gg和ga基因型個(gè)體(p<0.05)，ga基因型的藏綿羊個(gè)體的免疫球蛋白iga、igg顯著高于gg基因型個(gè)體(p<0.05)。

22、本發(fā)明通過檢測(cè)藏綿羊第7號(hào)染色體上第29519205個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基，能夠判斷藏綿羊個(gè)體的免疫球蛋白iga、igg含量，本發(fā)明為用于非診斷目的的藏綿羊免疫性狀標(biāo)記輔助選擇提供了新的snp分子標(biāo)記資源。

技術(shù)特征：

1.一種與藏綿羊免疫性狀相關(guān)的ino80基因分子標(biāo)記，其特征在于，所述分子標(biāo)記位于國(guó)際綿羊基因組oar_v4.0版本第7號(hào)染色體上第29519205個(gè)堿基處，突變堿基為g或a。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分子標(biāo)記，其特征在于，突變堿基為g的藏綿羊的基因型為gg或ga；

3.權(quán)利要求1或2所述的分子標(biāo)記用于非診斷目的的藏綿羊免疫性狀標(biāo)記輔助選擇中的應(yīng)用。

4.權(quán)利要求1或2所述的分子標(biāo)記在藏綿羊輔助育種中的應(yīng)用。

5.擴(kuò)增權(quán)利要求1或2所述分子標(biāo)記的引物對(duì)，其特征在于，所述引物對(duì)如seq?id?no.2和3所示。

6.權(quán)利要求5所述的引物對(duì)在制備非診斷目的的藏綿羊免疫性狀標(biāo)記輔助選擇產(chǎn)品中的應(yīng)用。

7.權(quán)利要求5所述的引物對(duì)在制備藏綿羊輔助育種的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

8.一種非診斷目的的藏綿羊免疫性狀標(biāo)記輔助選擇的方法，其特征在于，包括如下步驟：

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，步驟(2)所述的擴(kuò)增的體系為：金牌mix(green)22μl，上、下游引物各1μl，模板dna?1μl；

10.一種非診斷目的的藏綿羊免疫性狀標(biāo)記輔助選擇和/或藏綿羊輔助育種的試劑盒，其特征在于，包括檢測(cè)權(quán)利要求1或2所述的分子標(biāo)記的試劑或權(quán)利要求5所述的引物對(duì)。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及分子標(biāo)記技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及藏綿羊INO80基因作為免疫性狀的遺傳標(biāo)記及應(yīng)用。一種與藏綿羊免疫性狀相關(guān)的INO80基因分子標(biāo)記，所述分子標(biāo)記位于國(guó)際綿羊基因組Oar_v4.0版本第7號(hào)染色體上第29519205個(gè)堿基處，突變堿基為G或A。本發(fā)明通過檢測(cè)藏綿羊第7號(hào)染色體上第29519205個(gè)核苷酸位點(diǎn)的堿基，能夠判斷藏綿羊個(gè)體的免疫球蛋白IgA、IgG含量，本發(fā)明為用于非診斷目的的藏綿羊免疫性狀標(biāo)記輔助選擇提供了新的SNP分子標(biāo)記資源。

技術(shù)研發(fā)人員：袁超,盧曾奎,劉建斌,郭婷婷,安雪姣
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/17