本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)，具體涉及一種針對(duì)甲型流感病毒h1n1亞型na蛋白的納米抗體及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、甲型流感病毒是一種具有高度傳染性的rna病毒，其表面的血凝素（ha）和神經(jīng)氨酸酶（na）蛋白是病毒入侵和釋放的關(guān)鍵因子。h1n1亞型病毒自1918年首次爆發(fā)以來(lái)，已多次引起全球性流感大流行，導(dǎo)致數(shù)百萬(wàn)人感染，數(shù)十萬(wàn)人死亡。近年來(lái)，隨著病毒基因的不斷變異，新的流感病毒株不斷出現(xiàn)，給全球公共衛(wèi)生安全帶來(lái)嚴(yán)重威脅。

2、目前，針對(duì)甲型流感病毒的藥物主要包括小分子抗病毒藥物包括神經(jīng)氨酸酶抑制劑（nai）、m2離子通道抑制劑和病毒rna聚合酶抑制劑。然而，現(xiàn)有藥物在抗流感病毒治療上存在明顯不足：

3、（1）耐藥性問(wèn)題：隨著病毒的不斷變異，部分病毒已對(duì)上述藥物產(chǎn)生耐藥性，導(dǎo)致治療效果降低。由于流感病毒對(duì)m2離子通道抑制劑廣泛耐藥，該類(lèi)藥物已不再被推薦用于臨床流感的治療

4、（2）副作用：部分藥物在治療過(guò)程中可能產(chǎn)生副作用，如惡心、嘔吐、頭痛等，影響患者的依從性。

5、（3）使用限制：部分藥物僅對(duì)特定類(lèi)型的流感病毒有效，且需要在病毒感染早期使用才能發(fā)揮最佳效果。如nai的代表性藥物奧司他韋僅在癥狀出現(xiàn)后48小時(shí)內(nèi)開(kāi)始使用有效，一些病毒突變也已顯示出對(duì)其的耐藥性。

6、可見(jiàn)，盡管現(xiàn)有藥物在治療流感方面發(fā)揮了一定作用，還是存在流感病毒的高度變異性和現(xiàn)有藥物的局限性問(wèn)題。納米抗體指重鏈抗體的重鏈可變區(qū)。與傳統(tǒng)單抗相比，納米抗體尺寸僅有傳統(tǒng)單抗的1/10，能識(shí)別傳統(tǒng)單抗無(wú)法觸及的隱藏表位，且具有更高的穩(wěn)定性，大規(guī)模生產(chǎn)成本較低、易于改造等優(yōu)點(diǎn)，在病原診斷及新型抗流感藥物研究領(lǐng)域展現(xiàn)出廣闊的應(yīng)用前景。因此，急需開(kāi)發(fā)新的納米抗體用于甲型流感病毒診斷與治療。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，提供一種分子量小、穩(wěn)定性高、親和力強(qiáng)的針對(duì)甲型流感病毒h1n1亞型na蛋白的納米抗體及應(yīng)用。

2、本發(fā)明的目的通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)：

3、第一方面，本發(fā)明提供一種針對(duì)甲型流感病毒h1n1亞型na蛋白的納米抗體，所述納米抗體包含如seq?id?no：1所示的氨基酸序列或由其組成。

4、作為優(yōu)選技術(shù)方案，所述納米抗體的互補(bǔ)決定區(qū)包括cdr1、cdr2和cdr3，所述cdr1的氨基酸序列如seq?id?no：2所示，所述cdr2的氨基酸序列如seq?id?no：3所示，所述cdr3的氨基酸序列如seq?id?no：4所示。

5、第二方面，本發(fā)明提供了編碼上述的針對(duì)甲型流感病毒h1n1亞型na蛋白的納米抗體的dna分子。

6、作為優(yōu)選技術(shù)方案，所述dna分子的序列如seq?id?no：5所示。

7、作為優(yōu)選技術(shù)方案，用于擴(kuò)增所述dna分子的引物對(duì)包括正向引物和反向引物，所述正向引物的核苷酸序列如seq?id?no：6所示，所述反向引物的核苷酸序列如seq?id?no：7所示。

8、第三方面，本發(fā)明提供了一種重組載體，所述重組載體包括上述的dna分子。

9、第四方面，本發(fā)明提供了一種宿主細(xì)胞，所述宿主細(xì)胞包含上述的dna分子或上述的重組載體。

10、第五方面，本發(fā)明提供了上述的納米抗體在制備用于檢測(cè)樣品中甲型流感病毒h1n1亞型na蛋白或其含量的檢測(cè)試劑盒中的應(yīng)用。

11、第六方面，本發(fā)明還提供了上述的納米抗體在制備預(yù)防和治療甲型流感病毒藥物中的應(yīng)用。

12、本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明提供了一種針對(duì)h1n1來(lái)源的n1亞型na蛋白的高親和力特異性納米抗體，小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該抗體能有效地抑制pr8?h1n1病毒在體內(nèi)的增殖，抵抗致死劑量病毒對(duì)小鼠的感染。同時(shí)，這是首個(gè)針對(duì)n1亞型na蛋白的具有預(yù)防及治療作用的納米抗體，填補(bǔ)了市場(chǎng)的空白，為亞型流感h1n1的診斷和治療提供了更多、更優(yōu)的選擇，其具有諸多應(yīng)用潛力和優(yōu)勢(shì)，可應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室研究、生物傳感器開(kāi)發(fā)、臨床診斷及感染預(yù)防及治療等領(lǐng)域。本發(fā)明提供的納米抗體具有分子量小、穩(wěn)定性高、生產(chǎn)成本低等諸多優(yōu)點(diǎn)，與傳統(tǒng)的igg型抗體相比具有比更廣泛的應(yīng)用潛力及市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)。

技術(shù)特征：

1.一種針對(duì)甲型流感病毒h1n1亞型na蛋白的納米抗體，其特征在于，所述納米抗體包含如seq?id?no：1所示的氨基酸序列或由其組成。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種針對(duì)甲型流感病毒h1n1亞型na蛋白的納米抗體，其特征在于，所述納米抗體的互補(bǔ)決定區(qū)包括cdr1、cdr2和cdr3，所述cdr1的氨基酸序列如seq?idno：2所示，所述cdr2的氨基酸序列如seq?id?no：3所示，所述cdr3的氨基酸序列如seq?idno：4所示。

3.編碼權(quán)利要求1或2所述的針對(duì)甲型流感病毒h1n1亞型na蛋白的納米抗體的dna分子。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的dna分子，其特征在于，所述dna分子的序列如seq?id?no：5所示。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的dna分子，其特征在于，用于擴(kuò)增所述dna分子的引物對(duì)包括正向引物和反向引物，所述正向引物的核苷酸序列如seq?id?no：6所示，所述反向引物的核苷酸序列如seq?id?no：7所示。

6.一種重組載體，其特征在于，所述重組載體包括權(quán)利要求4所述的dna分子。

7.一種宿主細(xì)胞，其特征在于，所述宿主細(xì)胞包含權(quán)利要求4所述的dna分子或權(quán)利要求6所述的重組載體。

8.權(quán)利要求1所述的納米抗體在制備用于檢測(cè)樣品中甲型流感病毒h1n1亞型na蛋白或其含量的檢測(cè)試劑盒中的應(yīng)用。

9.權(quán)利要求1所述的納米抗體在制備預(yù)防和治療甲型流感病毒藥物中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種針對(duì)甲型流感病毒H1N1亞型NA蛋白的納米抗體及應(yīng)用。所述納米抗體包含如SEQ?ID?NO：1所示的氨基酸序列或由其組成。該納米抗體具有高親和力，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該抗體能有效地抑制PR8?H1N1病毒在體內(nèi)的增殖，抵抗致死劑量病毒對(duì)小鼠的感染。同時(shí)，為首個(gè)針對(duì)N1亞型NA蛋白的具有預(yù)防及治療作用的納米抗體，填補(bǔ)了市場(chǎng)的空白，可應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室研究、生物傳感器開(kāi)發(fā)、臨床診斷及感染預(yù)防及治療等領(lǐng)域。本發(fā)明提供的納米抗體具有分子量小、穩(wěn)定性高、生產(chǎn)成本低等諸多優(yōu)點(diǎn)，與傳統(tǒng)的IgG型抗體相比具有比更廣泛的應(yīng)用潛力及市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)。

技術(shù)研發(fā)人員：吳冬冬,劉彬,韓真,吉艷紅,尹越,郭夢(mèng)娜
受保護(hù)的技術(shù)使用者：四川大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19