本發(fā)明涉及豬分子標(biāo)記，具體涉及一種與豬肉質(zhì)性狀基因gab1相關(guān)的snp分子標(biāo)記、引物對(duì)及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、中國(guó)是豬生產(chǎn)大國(guó)，無(wú)論是生豬養(yǎng)殖規(guī)模還是豬肉消費(fèi)量均居世界第一。肉質(zhì)性狀是生豬育種產(chǎn)業(yè)的重要經(jīng)濟(jì)性狀，豬肉品質(zhì)的高低直接影響豬場(chǎng)的生產(chǎn)和經(jīng)濟(jì)效益。肉質(zhì)遺傳力在0.25～0.42之間，大多為中遺傳力性狀。目前能夠利用并闡明肌內(nèi)脂肪含量對(duì)肉質(zhì)性狀影響機(jī)制的關(guān)鍵基因仍然不足。因此，尋找控制豬肉質(zhì)性狀的關(guān)鍵分子遺傳標(biāo)記，并將其用于分子標(biāo)記輔助育種，對(duì)提高豬的肉質(zhì)性狀，增加經(jīng)濟(jì)效益具有重要意義。

2、grb2相關(guān)結(jié)合蛋白1(gab1)是含有pleckstrin同源(ph)結(jié)構(gòu)域的蛋白gab/dos家族的創(chuàng)始成員。在接受各種刺激后，gab1細(xì)胞定位從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)槟?，在那里它被一系列激酶磷酸化，募集含有sh2結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)，如shp2、pi3k的p85亞基、crk等，從而激活不同的信號(hào)通路，包括mapk、pi3k/akt和jnk，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)移和血管生成等多種生物過(guò)程。

3、研究表明gab1的激活可以維持pi3k和akt的下游激活，重組snca作為一種新的葡萄糖調(diào)節(jié)劑可以通過(guò)lpar2/gab1/pi3k/akt通路促進(jìn)小鼠脂肪細(xì)胞前體外和體內(nèi)脂肪組織和骨骼肌中的葡萄糖攝取。也有研究表明，gab1是成纖維細(xì)胞存活和維持心臟功能所必需的。

4、然而，關(guān)于gab1基因能否提高豬肉品質(zhì)，這一分子機(jī)制尚未見(jiàn)報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種與豬肉質(zhì)性狀基因gab1相關(guān)的snp分子標(biāo)記、引物對(duì)及其應(yīng)用，本發(fā)明發(fā)掘了第8號(hào)染色體gab1基因中的一個(gè)snp與豬肉質(zhì)性狀關(guān)聯(lián)，可作為豬肉質(zhì)性狀篩選和豬選育的分子標(biāo)記。

2、第一方面，本發(fā)明提供了一種與豬肉質(zhì)性狀基因gab1相關(guān)的snp分子標(biāo)記，所述肉質(zhì)性狀為肌內(nèi)脂肪含量性狀；所分子標(biāo)記位于豬第8號(hào)染色體gab1基因第5外顯子中，其核苷酸序列如序列表seq?id?no.1所示，在該序列的第112bp處存在一處g.112g>a堿基突變。

3、進(jìn)一步的，序列seq?id?no.1中第112bp處的a或g堿基多態(tài)性位點(diǎn)，表現(xiàn)為aa、ag或gg三種基因型，其中a等位基因?yàn)閮?yōu)勢(shì)等位基因。

4、第二方面，本發(fā)明提供了一種如第一方面所述的snp分子標(biāo)記在豬肉質(zhì)性狀篩選和/或豬育種中的應(yīng)用。

5、第三方面，本發(fā)明提供了一種用于擴(kuò)增如第一方面所述的分子標(biāo)記的引物對(duì)，所述引物對(duì)包括：上游引物的核苷酸序列如seq?id?no.2所示，下游引物的核苷酸序列如seqid?no.3所示。

6、第四方面，本發(fā)明提供了一種如第三方面所述的引物對(duì)在豬肉質(zhì)性狀篩選和/或豬育種中的應(yīng)用。

7、第五方面，本發(fā)明提供了一種利用如第一方面所述的snp分子標(biāo)記進(jìn)行快速選育的試劑盒，包含如第三方面所述的引物對(duì)。

8、第六方面，本發(fā)明提供了一種豬肉質(zhì)性狀篩選和/或豬選育的方法，包括以下步驟：

9、s1、提取豬的基因組dna；

10、s2、以步驟s1得到的基因組dna作為模板，采用如權(quán)利要求4所述的引物對(duì)進(jìn)行pcr擴(kuò)增，得到如權(quán)利要求1所述的分子標(biāo)記并純化；

11、s3、對(duì)步驟s2純化后的分子標(biāo)記進(jìn)行測(cè)序分析，保留該序列第112bp處攜帶有a等位基因的個(gè)體，淘汰攜帶有g(shù)等位基因的個(gè)體。

12、進(jìn)一步的，步驟s1中，從待測(cè)豬的耳緣組織中提取基因組dna。

13、進(jìn)一步的，步驟s2中，pcr反應(yīng)體系50μl，體系中各組分為：基因組dna?100ng、pcrmix?25μl、上述上下游引物各1μl、加ddh2o補(bǔ)至總體積50μl；pcr的運(yùn)行程序?yàn)椋?8℃預(yù)變性45s；98℃變性10s，60℃退火30s，72℃延伸30s，40個(gè)循環(huán)；72℃延伸5min；4℃保存。

14、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果包括：

15、本發(fā)明首次發(fā)掘了豬gab1基因相關(guān)的snp分子標(biāo)記與豬的肉質(zhì)性狀，具體為肌內(nèi)脂肪含量性狀相關(guān)，因此可將該分子標(biāo)記用于篩選豬肉質(zhì)性狀和選育，即提供了豬gab1基因相關(guān)的snp分子標(biāo)記在豬肉質(zhì)性狀的標(biāo)記輔助育種的新用途，實(shí)現(xiàn)了對(duì)豬肉質(zhì)性狀的早期篩選，篩選方法簡(jiǎn)單快速。

技術(shù)特征：

1.一種與豬肉質(zhì)性狀基因gab1相關(guān)的snp分子標(biāo)記，其特征在于，所述肉質(zhì)性狀為肌內(nèi)脂肪含量性狀；所分子標(biāo)記位于豬第8號(hào)染色體gab1基因第5外顯子中，其核苷酸序列如序列表seq?id?no.1所示，在該序列的第112bp處存在一處g.112g>a堿基突變。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的與豬肉質(zhì)性狀基因gab1相關(guān)的snp分子標(biāo)記，其特征在于，序列seq?id?no.1中第112bp處的a或g堿基多態(tài)性位點(diǎn)，表現(xiàn)為aa、ag或gg三種基因型，其中a等位基因?yàn)閮?yōu)勢(shì)等位基因。

3.如權(quán)利要求1或2任一項(xiàng)所述的snp分子標(biāo)記在豬肉質(zhì)性狀篩選和/或豬育種中的應(yīng)用。

4.一種用于擴(kuò)增如權(quán)利要求1所述的分子標(biāo)記的引物對(duì)，其特征在于，所述引物對(duì)包括：上游引物的核苷酸序列如seq?id?no.2所示，下游引物的核苷酸序列如seq?id?no.3所示。

5.如權(quán)利要求4所述的引物對(duì)在豬肉質(zhì)性狀篩選和/或豬育種中的應(yīng)用。

6.一種利用如權(quán)利要求1所述的snp分子標(biāo)記進(jìn)行快速選育的試劑盒，其特征在于，包含如權(quán)利要求4所述的引物對(duì)。

7.一種豬肉質(zhì)性狀篩選和/或豬選育的方法，其特征在于，包括以下步驟：

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述豬肉質(zhì)性狀篩選和/或豬選育的方法，其特征在于，步驟s1中，從待測(cè)豬的耳緣組織中提取基因組dna。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述豬肉質(zhì)性狀篩選和/或豬選育的方法，其特征在于，步驟s2中，pcr反應(yīng)體系50μl，體系中各組分為：基因組dna?100ng、pcr?mix25μl、上述上下游引物各1μl、加ddh2o補(bǔ)至總體積50μl；pcr的運(yùn)行程序?yàn)椋?8℃預(yù)變性45s；98℃變性10s，60℃退火30s，72℃延伸30s，40個(gè)循環(huán)；72℃延伸5min；4℃保存。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開(kāi)了一種與豬肉質(zhì)性狀基因GAB1相關(guān)的SNP分子標(biāo)記、引物對(duì)及其應(yīng)用，涉及豬分子標(biāo)記技術(shù)領(lǐng)域。其中所述肉質(zhì)性狀為肌內(nèi)脂肪含量性狀；所述分子標(biāo)記位于豬第8號(hào)染色體GAB1基因第5外顯子中，其核苷酸序列如序列表SEQ?ID?NO.1所示，在該序列的第112bp處存在一處g.112G>A堿基突變。本發(fā)明還提供了一種用于擴(kuò)增上述分子標(biāo)記的引物對(duì)以及利用上述分子標(biāo)記進(jìn)行選育的方法。本發(fā)明首次發(fā)掘了豬GAB1基因中的一個(gè)SNP分子標(biāo)記與豬的肌內(nèi)脂肪含量性狀相關(guān)，因此可以用于豬標(biāo)記輔助選擇育種，即提供了豬GAB1基因中的一個(gè)SNP分子標(biāo)記在豬肉質(zhì)性狀的標(biāo)記輔助育種的新用途，實(shí)現(xiàn)了對(duì)豬繁殖育種性狀的早期篩選，篩選方法簡(jiǎn)單快速。

技術(shù)研發(fā)人員：馮越,李亞賽,張宇,徐忠,梅書棋,彭先文,吳俊靜,喬木,周佳偉,李梓芃,孫華,李良華,趙海忠,宋忠旭
受保護(hù)的技術(shù)使用者：湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/26