本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)工程領(lǐng)域，特別涉及一種抗平滑肌肌球蛋白單克隆抗體及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、myosin，smooth?muscle(平滑肌肌球蛋白)是一種在平滑肌細(xì)胞中起關(guān)鍵作用的蛋白質(zhì)，特別是其重鏈部分，對于平滑肌的收縮功能至關(guān)重要。平滑肌肌球蛋白重鏈?zhǔn)欠肿恿繛?00kda的多肽，是六聚肌球蛋白的結(jié)構(gòu)成分。它主要表達(dá)在平滑肌組織中，這些組織廣泛分布于人體的多個系統(tǒng)，包括但不限于消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)以及生殖系統(tǒng)等，并通過收縮和舒張功能來維持人體的正常生理功能。

2、myosin，smooth?muscle在多種腫瘤中均有表達(dá)，但具體表達(dá)情況因腫瘤類型和分期而異。平滑肌肌球蛋白重鏈常用于間葉腫瘤的診斷和分類?？梢宰鳛殍b別平滑肌肉瘤與其他類型間葉腫瘤的重要標(biāo)志物。在乳腺腫瘤中，平滑肌肌球蛋白重鏈可用于乳腺肌上皮細(xì)胞的檢測，有助于鑒別乳腺原位癌與浸潤癌。同時平滑肌肌球蛋白重鏈的檢測也是腫瘤診斷的輔助手段之一?？梢酝ㄟ^檢測腫瘤組織或細(xì)胞樣本中平滑肌肌球蛋白重鏈的表達(dá)水平，初步判斷腫瘤的類型和來源。myosin，smooth?muscle作為平滑肌細(xì)胞中的重要蛋白質(zhì)成分，在腫瘤的診斷、治療和預(yù)后評估中具有廣泛的應(yīng)用前景。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、發(fā)明人提供了一種抗平滑肌肌球蛋白單克隆抗體，所述單克隆抗體的重鏈可變區(qū)的氨基酸序列為seq?id?no.1所示的氨基酸序列；所述單克隆抗體輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列為seq?id?no.2所示的氨基酸序列。

2、進(jìn)一步的，所述單克隆抗體為鼠單克隆抗體，克隆號為15c1d4。

3、發(fā)明人又提供了一種抗平滑肌肌球蛋白單克隆抗體的制備方法，用于免疫鼠的抗原為重組蛋白，所述重組蛋白由大腸桿菌重組表達(dá)。

4、進(jìn)一步的，所述重組蛋白包含平滑肌肌球蛋白片段及his蛋白標(biāo)簽。

5、進(jìn)一步的，所述平滑肌肌球蛋白片段為1180-1400位點的片段，其為seq?id?no.3所示的氨基酸序列。

6、進(jìn)一步的，重組過程中選用的質(zhì)粒載體為pet30a。

7、發(fā)明人還提供一種平滑肌肌球蛋白免疫檢測試劑，所述免疫檢測試劑含有上述抗平滑肌肌球蛋白單克隆抗體為其有效成分。

8、進(jìn)一步的，所述免疫檢測包括免疫組織化學(xué)法，免疫印跡法和酶聯(lián)免疫法。

9、區(qū)別于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明所產(chǎn)生的有益技術(shù)效果為：上述技術(shù)方案選取平滑肌肌球蛋白位1180-1400位點氨基酸為抗原肽，進(jìn)行密碼子優(yōu)化，成為適合在大腸桿菌bl21(de3)表達(dá)的基因片段，最后得到的重組蛋白包含平滑肌肌球蛋白片段及組氨酸蛋白標(biāo)簽。所述重組蛋白對小鼠進(jìn)行免疫，經(jīng)細(xì)胞融合、篩選和亞克隆，獲得小鼠雜交瘤細(xì)胞株15c1d4,以及由該細(xì)胞株所分泌的抗平滑肌肌球蛋白單克隆抗體。本方案得到的抗體具有高特異性、敏感性，可以特異性識別表達(dá)平滑肌肌球蛋白的細(xì)胞，適用于免疫學(xué)檢測，特別是免疫組化檢測。

技術(shù)特征：

1.一種抗平滑肌肌球蛋白單克隆抗體，其特征在于，所述單克隆抗體的重鏈可變區(qū)的氨基酸序列為seq?id?no.1所示的氨基酸序列；所述單克隆抗體輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列為seq?id?no.2所示的氨基酸序列。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的單克隆抗體，其特征在于，所述單克隆抗體為鼠單克隆抗體，克隆號為15c1d4。

3.一種抗平滑肌肌球蛋白單克隆抗體的制備方法，其特征在于，用于免疫鼠的抗原為重組蛋白，所述重組蛋白由大腸桿菌重組表達(dá)。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述重組蛋白包含平滑肌肌球蛋白片段及his蛋白標(biāo)簽。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述平滑肌肌球蛋白片段為1180-1400位點的片段，其為seq?id?no.3所示的氨基酸序列。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，重組過程中選用的質(zhì)粒載體為pet30a。

7.一種平滑肌肌球蛋白免疫檢測試劑，其特征在于，所述免疫檢測試劑含有權(quán)利要求1所述抗平滑肌肌球蛋白單克隆抗體為其有效成分。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的免疫檢測試劑，其特征在于，所述免疫檢測包括免疫組織化學(xué)法，免疫印跡法和酶聯(lián)免疫法。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及一種可以識別人平滑肌肌球抗原的單克隆抗體、制備方法以及其在免疫檢測中的用途。上述技術(shù)方案選取平滑肌肌球蛋白的1180?1400位氨基酸為抗原肽，進(jìn)行密碼子優(yōu)化，成為適合在大腸桿菌表達(dá)的基因片段，最后得到的重組蛋白包含平滑肌肌球蛋白片段及組氨酸蛋白標(biāo)簽。所述重組蛋白對小鼠進(jìn)行免疫，經(jīng)細(xì)胞融合、篩選和亞克隆，獲得小鼠雜交瘤細(xì)胞株15C1D4以及由該細(xì)胞株所分泌的抗平滑肌肌球蛋白單克隆抗體。本方案得到的抗體具有高特異性、敏感性，可以特異性識別表達(dá)平滑肌肌球蛋白的細(xì)胞，適用于免疫學(xué)檢測，特別是免疫組化檢測。

技術(shù)研發(fā)人員：蔣寧城,楊清海,陳惠玲,任搏文,黃林軍
受保護(hù)的技術(shù)使用者：福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/26