本發(fā)明屬于腫瘤分子生物學(xué)，具體涉及一種血清外泌體tsrna分子trf-1003及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、多發(fā)性骨髓瘤(multiple?myeloma，mm)是由骨髓中克隆性漿細(xì)胞異常增生并分泌單克隆球蛋白或其片段而引起的疾病，為第二常見(jiàn)血液惡性腫瘤，中位發(fā)病年齡69歲，且其發(fā)病率在近十年來(lái)呈上升趨勢(shì)，在人口老齡化的當(dāng)代，正在成為臨床、社會(huì)與經(jīng)濟(jì)的重要負(fù)擔(dān)。隨著對(duì)mm發(fā)生發(fā)展機(jī)制的理解不斷深入，以蛋白酶體抑制劑[硼替佐米(btz)等]和免疫調(diào)節(jié)藥物為基礎(chǔ)的治療模式極大改善了患者預(yù)后，但目前mm仍不可治愈，新診斷mm(newlydiagnosed?multiple?myeloma，ndmm)患者在規(guī)范治療后中位無(wú)進(jìn)展生存期為59.3月，患者不可避免面臨疾病復(fù)發(fā)的困境。因此，不斷探索mm進(jìn)展的機(jī)制，有助于提供更優(yōu)化的治療策略，改善mm患者預(yù)后，具有重要的臨床意義。

2、近年來(lái)的研究揭示了骨髓微環(huán)境在mm進(jìn)展及復(fù)發(fā)進(jìn)程中的重要功能。mm外泌體，作為一種新的細(xì)胞間通訊模式，在mm骨髓微環(huán)境中的意義受到了廣泛關(guān)注。血管新生作為mm的關(guān)鍵標(biāo)志，與mm疾病的復(fù)發(fā)進(jìn)展、藥物作用機(jī)制等密切相關(guān)，也是制約mm患者療效的重要原因之一。雖然目前已對(duì)mm血管新生的機(jī)制進(jìn)行了大量探索，但直接靶向這些血管生成細(xì)胞因子在mm患者中并未顯示出很好的療效，這也提示mm血管新生的關(guān)鍵機(jī)制仍有待進(jìn)一步闡明。

3、tsrna(trna?derived?small?rna)是trna衍生的小rna片段，根據(jù)其trna來(lái)源及特異性切割位點(diǎn)而分為trf-5、trf-3、trf-1、trf-2和tirna，最初被視為無(wú)功能的降解碎片。近年來(lái)研究不斷深入，發(fā)現(xiàn)其長(zhǎng)度類(lèi)似于microrna，但在細(xì)胞中的種類(lèi)更為豐富，并通過(guò)參與rna沉默、轉(zhuǎn)錄調(diào)控及表觀遺傳調(diào)控，發(fā)揮著更多樣化的功能，在實(shí)體腫瘤等病理生理進(jìn)程中扮演著重要角色，也揭示了一種高效的rna干擾治療的臨床應(yīng)用前景。近年來(lái)的研究顯示了外泌體tsrna通過(guò)參與調(diào)控免疫細(xì)胞極化等病理進(jìn)程，在多種實(shí)體腫瘤微環(huán)境中發(fā)揮重要作用。而在血液腫瘤領(lǐng)域，僅有少量研究顯示了骨髓tsrna用于預(yù)測(cè)冒煙型mm向mm進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)以及在mm患者預(yù)后分層中的意義，外泌體tsrna在mm復(fù)發(fā)耐藥中的功能作用和分子機(jī)制尚不明確。

4、本發(fā)明基于前期二代測(cè)序結(jié)果，進(jìn)一步采用超高速離心法提取mm患者血清外泌體，并通過(guò)qpcr檢測(cè)trf-1003分子表達(dá)，最后與體外內(nèi)皮細(xì)胞共孵育，鑒定了trf-1003分子促進(jìn)mm血管新生的重要意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的首要目的是提供一種新的血清外泌體tsrna分子trf-1003，序列為gctaaggaagtcctgtgctcagtttt，該分子在多發(fā)性骨髓瘤診斷和治療方面具有很好的潛力。

2、本發(fā)明第二個(gè)方面的目的是提供抑制表達(dá)trf-1003的試劑在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

3、進(jìn)一步地，抑制表達(dá)trf-1003的試劑包括trf-1003的inhibitor。

4、更進(jìn)一步地，腫瘤包括多發(fā)性骨髓瘤。

5、本發(fā)明第三個(gè)方面的目的是提供過(guò)表達(dá)trf-1003的試劑在制備促進(jìn)血管新生制劑中的應(yīng)用。

6、進(jìn)一步地，過(guò)表達(dá)trf-1003的試劑包括trf-1003mimics。

7、本發(fā)明第四個(gè)方面的目的是提供抑制表達(dá)trf-1003的試劑在制備抑制血管新生制劑中的應(yīng)用。

8、進(jìn)一步地，抑制表達(dá)trf-1003的試劑包括trf-1003的inhibitor。

9、本發(fā)明第五個(gè)方面的目的是提供一種治療腫瘤的藥物，為抑制表達(dá)trf-1003的試劑。

10、本發(fā)明第六個(gè)方面的目的是提供檢測(cè)所述的血清外泌體tsrna分子trf-1003的試劑在制備復(fù)發(fā)難治多發(fā)性骨髓瘤診斷或預(yù)后制劑中的應(yīng)用；

11、優(yōu)選檢測(cè)血清外泌體tsrna分子trf-1003的試劑包括pcr試劑。

12、引物序列如下：

13、f:5'-gctaaggaagtcctgtgct-3'，

14、r:5'-gtccagtttttttttttttttaaaactga-3'。

15、本發(fā)明基于二代測(cè)序提示trf-1003在r/rmm骨髓標(biāo)本中表達(dá)增高，qpcr檢測(cè)trf-1003表達(dá)，結(jié)果顯示r/rmm血清外泌體中trf-1003水平較ndmm顯著升高，而r/rmm及ndmm無(wú)外泌體血清中trf-1003表達(dá)均相對(duì)較低，提示trf-1003主要通過(guò)外泌體釋放進(jìn)入血液循環(huán)，可以作為r/rmm診斷或預(yù)后的標(biāo)記物，trf-1003分子最后與體外內(nèi)皮細(xì)胞共孵育，trf-1003分子在促進(jìn)血管新生領(lǐng)域具有重要意義，同時(shí)發(fā)現(xiàn)trf-1003的inhibitor能夠?qū)е履[瘤細(xì)胞增殖速率下降，具備治療腫瘤的潛能。

技術(shù)特征：

1.一種血清外泌體tsrna分子trf-1003，序列為：gctaaggaagtcctgtgctcagtttt。

2.抑制表達(dá)權(quán)利要求1中trf-1003的試劑在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，抑制表達(dá)trf-1003的試劑包括trf-1003的inhibitor。

4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的應(yīng)用，其特征在于，腫瘤包括多發(fā)性骨髓瘤。

5.過(guò)表達(dá)權(quán)利要求1中trf-1003的試劑在制備促進(jìn)血管新生制劑中的應(yīng)用。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，過(guò)表達(dá)trf-1003的試劑包括trf-1003mimics。

7.抑制表達(dá)權(quán)利要求1中trf-1003的試劑在制備抑制血管新生制劑中的應(yīng)用。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，抑制表達(dá)trf-1003的試劑包括trf-1003的inhibitor。

9.一種治療腫瘤的藥物，其特征在于，為抑制表達(dá)trf-1003的試劑。

10.檢測(cè)權(quán)利要求1所述的血清外泌體tsrna分子trf-1003的試劑在制備復(fù)發(fā)難治多發(fā)性骨髓瘤診斷或預(yù)后制劑中的應(yīng)用；

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開(kāi)了一種血清外泌體tsRNA分子tRF?1003及其應(yīng)用。基于二代測(cè)序提示tRF?1003在R/RMM骨髓標(biāo)本中表達(dá)增高，qPCR檢測(cè)tRF?1003表達(dá)，結(jié)果顯示R/RMM血清外泌體中tRF?1003水平較NDMM顯著升高，而R/RMM及NDMM無(wú)外泌體血清中tRF?1003表達(dá)均相對(duì)較低，提示tRF?1003主要通過(guò)外泌體釋放進(jìn)入血液循環(huán)，可以作為R/RMM診斷或預(yù)后的標(biāo)記物，tRF?1003分子與體外內(nèi)皮細(xì)胞共孵育，tRF?1003分子在促進(jìn)血管新生領(lǐng)域具有重要意義，同時(shí)發(fā)現(xiàn)tRF?1003的inhibitor能夠?qū)е履[瘤細(xì)胞增殖速率下降。

技術(shù)研發(fā)人員：傅云峰,高萌,許聰,趙國(guó)勝,唐浩
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/17