背景技術(shù)：

1、白介素2(il-2)是主要由活化cd4+t細(xì)胞產(chǎn)生的多能細(xì)胞因子，其在產(chǎn)生正常免疫應(yīng)答中起著至關(guān)重要的作用。il-2促進(jìn)活化t淋巴細(xì)胞的增殖和擴(kuò)增，加強(qiáng)b細(xì)胞生長(zhǎng)，并使單核細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞活化。正是憑借這些活性，il-2得到了測(cè)試，并被批準(zhǔn)用于癌癥治療(阿地白介素，)。在真核細(xì)胞中，人il-2被合成為153個(gè)氨基酸的前體多肽，從中去除20個(gè)氨基酸產(chǎn)生了成熟的分泌性il-2(taniguchi?1983)。已在大腸桿菌(e.coli)(rosenberg?1984)、昆蟲細(xì)胞(smith?1985)和哺乳動(dòng)物cos細(xì)胞(taniguchi?1983)中產(chǎn)生了重組人il-2。

2、白介素2(il-2)是四個(gè)α螺旋束的i型細(xì)胞因子，最初被鑒定為t細(xì)胞生長(zhǎng)因子(morgan等人,science?193:1007(1976))，但隨后經(jīng)證實(shí)具有廣泛的作用。il-2促進(jìn)cd4+t輔助細(xì)胞的分化(zhu等人,annual?review?of?immunology?28:445(2010)；liao等人,natimmunol?9:1288(2008)；和liao等人,nat?immunol?12:551(2011))以及調(diào)節(jié)性t(treg)細(xì)胞的發(fā)育(cheng等人,immunol?rev?241:63(2011))，誘導(dǎo)自然殺傷細(xì)胞和細(xì)胞毒性cd8+t細(xì)胞(liao等人,immunity?38:13(2013))，并且介導(dǎo)活化誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡(aicd)(lenardo等人,nature?353:858(1991))。

3、il-2通過(guò)與以下三種不同的受體相互作用而發(fā)揮作用：白介素2受體α(il-2rα；cd25)、白介素2受體β(il-2rβ；cd122)和白介素2受體γ(il-2rγ；cd132；常見(jiàn)γ鏈)。第一個(gè)鑒定的受體是il-2rα，它是一種在t細(xì)胞活化后出現(xiàn)的55kd的多肽(p55)，最初稱為tac(用于t活化)抗原。il-2rα以大約10-8m的kd結(jié)合il-2，并且也稱為“高親和力”il-2受體。il-2與僅表達(dá)il-2rα的細(xì)胞結(jié)合不會(huì)產(chǎn)生任何可檢測(cè)的生物應(yīng)答。在大多數(shù)情況下，il-2通過(guò)以下三種不同的受體起作用：il-2rα、il-2rβ和il-2rγ。大多數(shù)細(xì)胞，諸如靜息t細(xì)胞，對(duì)il-2無(wú)應(yīng)答，因?yàn)樗鼈儍H表達(dá)對(duì)il-2具有低親和力的il-2rβ和il-2rγ。刺激后，靜息t細(xì)胞表達(dá)相對(duì)較高親和力的il-2受體il-2rα。il-2與il-2rα結(jié)合導(dǎo)致該受體依次接合il-2rβ和il-2rγ，從而引起t細(xì)胞活化。先前開發(fā)了il-2“超級(jí)因子”，由于對(duì)il-2rβ的結(jié)合親和力增強(qiáng)，該超級(jí)因子的作用得到加強(qiáng)(levin等人,nature?484:529(2012))。

4、盡管關(guān)于il-2(包括il-2超級(jí)激動(dòng)劑)的知識(shí)很豐富，但是本領(lǐng)域仍然需要雙特異性il-2細(xì)胞因子融合物。本發(fā)明滿足這一需求，提供了作為與另一種蛋白質(zhì)的融合物的il-2超級(jí)激動(dòng)劑或激動(dòng)劑。在一些實(shí)施方案中，雙特異性融合物的il-2突變蛋白部分包含根據(jù)野生型il-2編號(hào)的取代l80f、r81d、l85v、i86v和i92f。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、il-2對(duì)免疫系統(tǒng)有廣泛的影響，并且在調(diào)節(jié)免疫活化和體內(nèi)平衡方面起著至關(guān)重要的作用。作為免疫系統(tǒng)刺激物，雙特異性il-2細(xì)胞因子融合物已有所描述并且可用于單一療法以及與抗pd-1抗體或其他免疫檢查點(diǎn)抑制劑和/或治療劑的組合中以治療癌癥。

2、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種雙功能性分子，所述雙功能性分子包含(i)表2或表4的基于il-2的氨基酸序列，以及(ii)表3、表8、表9或表10中任一者的氨基酸序列。

3、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種雙功能性分子，所述雙功能性分子包含(i)表9的基于il-4的氨基酸序列，以及(ii)表2、表3、表4、表8或表10中任一者的氨基酸序列。

4、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種雙功能性分子，所述雙功能性分子包含(i)表8的基于il-13的氨基酸序列，以及(ii)表2、表3、表4、表9或表10中任一者的氨基酸序列。

5、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種雙功能性分子，所述雙功能性分子包含(i)表10的基于il-7、il-12、il-15、il-18或il-33的氨基酸序列，以及(ii)表2、表3、表4、表8或表9中任一者的氨基酸序列。

6、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種雙功能性分子，所述雙功能性分子包含seqid?no:395、484、501、502、503、504、505、506、507或508的氨基酸序列，以及表2的基于il-2的氨基酸序列。

7、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種雙功能性分子，所述雙功能性分子包含seqid?no:395、484、501、502、503、504、505、506、507或508的氨基酸序列，以及表10的基于il-7、il-12、il-15或il-18、il-33的氨基酸序列。

8、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種雙功能性分子，所述雙功能性分子包含seqid?no:395、484、501、502、503、504、505、506、507或508的氨基酸序列，以及表2、表3、表4、表5、表6、表7、表8、表9、表10、表11、表12、表13、表15或表39中任一者的氨基酸序列。

9、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種雙功能性分子，所述雙功能性分子包含seqid?no:395、484、501、502、503、504、505、506、507或508的氨基酸序列，以及選自由以下組成的組的氨基酸序列：seq?id?no:6(h9-f42a)、seq?id?no:7(h9-k43n)、seq?id?no:8(h9-f42a/y45a；h9-fyaa)、seq?id?no:9(h9-f42a/e62a；h9-feaa)、seq?id?no:10；h9-f42a/y45a/e62a；h9-fyeaaa)、seq?id?no:20、seq?id?no:21、seq?id?no:22、seq?id?no:23、seqid?no:24、seq?id?no:25、seq?id?no:26、seq?id?no:27、seq?id?no:28、seq?id?no:29、seqid?no:30、seq?id?no:31(mdna109或h9)、seq?id?no:32、seq?id?no:33、seq?id?no:34、seqid?no:35和seq?id?no:146(f42a、e62a、l80f、r81d、l85v、i86v、i92f和c125s)。

10、在一些實(shí)施方案中，與野生型il-13相比，所述雙功能性分子包含以下取代：l10h、e15r、r86t、d87g、t88r和r108k。

11、在一些實(shí)施方案中，與野生型il-13相比，所述雙功能性分子包含以下取代：l10v、e12a、v18i、r65d、d87s、t88s、l101f、k104r和k105t。

12、在一些實(shí)施方案中，所述雙功能性分子還包含r39多態(tài)性和/或q111多態(tài)性。

13、在一些實(shí)施方案中，與野生型il-2相比，所述雙功能性分子包含以下取代：l80f、r81d、l85v、i86v、i92f。

14、在一些實(shí)施方案中，與野生型il-2相比，所述雙功能性分子還包含以下取代：f42a和e62a。

15、在一些實(shí)施方案中，與野生型il-2相比，所述雙功能性分子還包含以下取代：c125s。

16、在一些實(shí)施方案中，與野生型il-4相比，所述雙功能性分子包含以下取代：r121k、y124f、s125r。

17、在一些實(shí)施方案中，與野生型il-4相比，所述雙功能性分子包含以下取代：k117r、t118v、r121q、d122s、y124w、s125f、s128g、s129a。

18、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種雙功能性分子，所述雙功能性分子包含表2、表3、表4、表8、表9或表10中任一者的一個(gè)或多個(gè)氨基酸序列，包括表2、表3、表4、表8、表9或表10的一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞因子結(jié)合部分。

19、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種雙功能性分子，所述雙功能性分子包含表5、表6、表7、表11、表12、表13、表15或表39中任一者的一個(gè)或多個(gè)氨基酸序列，包括表5、表6、表7、表11、表12、表13、表15或表39的一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞因子結(jié)合部分。

20、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種雙功能性分子，所述雙功能性分子包含以下任一者或多者的氨基酸序列：seq?id?no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300、301、302、303、304、305、306、307、308、309、310、311、312、313、314、315、316、317、318、319、320、321、322、323、324、325、326、327、328、329、330、331、332、333、334、335、336、337、338、339、340、341、342、343、344、345、346、347、348、349、350、351、352、353、354、355、356、357、358、359、360、361、362、363、364、365、366、367、368、369、370、371、372、373、374、375、376、377、378、379、380、381、382、383、384、385、386、387、388、389、390、391、392、393、394、395、396、397、398、399、400、401、402、403、404、405、406、407、408、409、410、411、412、413、414、415、416、417、418、419、420、421、422、423、424、425、426、427、428、429、430、431、432、433、434、435、436、437、438、439、440、441、442、443、444、445、446、447、448、449、450、451、452、453、454、455、456、457、458、459、460、461、462、463、464、465、466、467、468、469、470、471、472、473、474、475、476、477、478、479、480、481、482、483、484、485、486、487、488、489、490、491、492、493、494、495、501、502、503、504、505、506、507和/或508。

21、在一些實(shí)施方案中，所述雙功能性分子還包含fc結(jié)構(gòu)域、白蛋白、抗pd1抗體或抗cd3抗體。

22、在一些實(shí)施方案中，所述雙功能性分子是mpd1?igg-mdna132l39/q111(kih)、hupd1?igg-mdna132?l39/q111(kih)、mpd1igg-mdna109feaas125(kih)、hupd1?igg-mdna109feaas125(kih)、mpd1?igg-mdna413r39/q111、hupd1?igg-mdna413?r39/q111、mdna413r39/q111-fc(1:1kih)、mpd1?igg-mdna109feaas125(kih)、hupd1?igg-mdna109feaas125(kih)、mpd1?igg-mdna413r39/q111、hupd1?igg-mdna413?r39/q111、mdna413r39/q111-fc(1:1kih)、hupd1?igg-mdna109feaac125(kih)、mpd1?igg-mdna109feaac125(kih)、m抗pd1-mdna132.15(1:1kih)、hu抗pd1-mdna109feaa-t3a-c125s(1:1kih)、hupd1-mdna109feaa(kih)、mpd1-mdna109feaa(kih)、mdna109feaa-fc-mdna132.15(2:1:1kih)、mdna132.15-fc-mdna413(1:1:2kih)、hupd1-mdna109feaa(kih)*、mpd1-mdna109feaa(kih)*、抗mpd1-mdna109(kih)或抗hupd1-mdna109(kih)。

23、在一些實(shí)施方案中，所述雙功能性分子包含seq?id?no:395(mdna132.15)。

24、在一些實(shí)施方案中，所述雙功能性分子包含seq?id?no:484(mdna132r.15)。

25、在一些實(shí)施方案中，所述雙功能性分子包含seq?id?no:501(mdna132-q111)。

26、在一些實(shí)施方案中，所述雙功能性分子包含seq?id?no:502(mdna132-r111)。

27、在一些實(shí)施方案中，所述雙功能性分子包含seq?id?no:503(cpmdna132.15-q111)。

28、在一些實(shí)施方案中，所述雙功能性分子包含seq?id?no:504(cpmdna132.15-r111)。

29、在一些實(shí)施方案中，所述雙功能性分子包含seq?id?no:505(cpmdna132.15-q111-pe)。

30、在一些實(shí)施方案中，所述雙功能性分子包含seq?id?no:506(cpmdna132.15-r111-pe)。

31、在一些實(shí)施方案中，所述雙功能性分子包含seq?id?no:507(mdna132.15-q111-pe)。

32、在一些實(shí)施方案中，所述雙功能性分子包含seq?id?no:508(mdna132.15-r111-pe)。

33、在一些實(shí)施方案中，所述雙功能性分子包含基于il-2的序列，所述基于il-2的序列與野生型人il-2相比表現(xiàn)出增加的對(duì)cd122(il-2rβ)的結(jié)合親和力。

34、在一些實(shí)施方案中，所述雙功能性分子包含基于il-2的序列，所述基于il-2的序列與野生型人il-2相比表現(xiàn)出增加的對(duì)il-2rβ的結(jié)合能力。

35、在一些實(shí)施方案中，所述雙功能性分子包含基于il-2的序列，所述基于il-2的序列表現(xiàn)出消除的il2rα結(jié)合和/或無(wú)il2rα結(jié)合。

36、在一些實(shí)施方案中，所述基于il-2的序列還包含以下氨基酸取代：f42a和/或e62a，其中編號(hào)是根據(jù)seq?id?no:2的野生型人il-2。

37、在一些實(shí)施方案中，所述雙功能性分子表現(xiàn)出降低的對(duì)cd25(il-2rα)的結(jié)合親和力，誘導(dǎo)免疫細(xì)胞(包括cd8?t細(xì)胞和nk細(xì)胞)的擴(kuò)增，并且/或者誘導(dǎo)效應(yīng)免疫細(xì)胞(包括cd8?t細(xì)胞和nk細(xì)胞)的活化。

38、在一些實(shí)施方案中，所述雙功能性分子包含基于il-2的序列，所述基于il-2的序列與野生型人il-2相比表現(xiàn)出降低的對(duì)cd25的親和力。

39、在一些實(shí)施方案中，所述雙功能性分子在免疫抑制調(diào)節(jié)性t細(xì)胞(treg)的擴(kuò)增和/或活化方面誘導(dǎo)有限的活性和/或不誘導(dǎo)活性。

40、在一些實(shí)施方案中，所述雙功能性分子與靶細(xì)胞上的il-2r和pd1結(jié)合。

41、在一些實(shí)施方案中，所述雙功能性分子包含細(xì)胞因子結(jié)合部分和抗pd1抗體，并且：

42、i)誘導(dǎo)腫瘤浸潤(rùn)性cd8+t細(xì)胞的活化；并且

43、ii)阻止對(duì)i)中的同一腫瘤浸潤(rùn)性cd8+t細(xì)胞的耗盡。

44、在一些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞因子結(jié)合部分和所述抗pd1抗體是共價(jià)連接的。

45、在一些實(shí)施方案中，分析腫瘤浸潤(rùn)性cd8+t細(xì)胞對(duì)以下標(biāo)志物中一者或多者的表達(dá)：抑制性pd1受體、tim3和/或細(xì)胞毒性粒酶b。

46、在一些實(shí)施方案中，與未處理的細(xì)胞和/或用未共價(jià)連接的所述細(xì)胞因子結(jié)合部分和所述抗pd1抗體處理的細(xì)胞相比，所述雙功能性分子誘導(dǎo)cd8+t細(xì)胞中抑制性pd1受體表達(dá)的降低并且/或者誘導(dǎo)tim3表達(dá)的降低。

47、在一些實(shí)施方案中，與未處理的細(xì)胞和/或用未共價(jià)連接的所述細(xì)胞因子結(jié)合部分和所述抗pd1抗體處理的細(xì)胞相比，所述雙功能性分子誘導(dǎo)腫瘤浸潤(rùn)性cd8+t細(xì)胞中粒酶表達(dá)的增加。

48、在一些實(shí)施方案中，所述雙功能性分子與靶細(xì)胞上的il-2r和cd3結(jié)合。

49、在一些實(shí)施方案中，所述雙功能性分子包含細(xì)胞因子結(jié)合部分和抗cd3抗體。

50、在一些實(shí)施方案中，所述雙功能性分子包含基于il-13的序列，所述基于il-13的序列表現(xiàn)出增加的對(duì)il-13rα1的結(jié)合親和力和降低的對(duì)il-13rα2的結(jié)合親和力。

51、在一些實(shí)施方案中，所述雙功能性分子表現(xiàn)出增加的對(duì)il-13rα1的結(jié)合親和力，所述增加的對(duì)il-13rα1的結(jié)合親和力為至少5倍、8倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍、110倍、120倍或更多，并且其中所述降低的對(duì)il-13rα2的結(jié)合親和力為至少30倍、40倍、50倍或60倍或更多。

52、在一些實(shí)施方案中，所述雙功能性分子將pstat6信號(hào)傳導(dǎo)阻斷至少20％、至少30％、至少40％或至少50％。

53、在一些實(shí)施方案中，所述雙功能性分子將il-13誘導(dǎo)的tf-1增殖阻斷至少20％、至少30％、至少40％或至少50％。

54、在一些實(shí)施方案中，所述雙功能性分子將il-4和/或il-13誘導(dǎo)的m2巨噬細(xì)胞極化阻斷至少20％、至少30％、至少40％或至少50％。

55、在一些實(shí)施方案中，所述雙功能性分子包含基于il-4的序列，所述基于il-4的序列表現(xiàn)出與天然il-4相比增加至少5倍、8倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍、110倍、120倍的與i型或ii型il-4r的特異性結(jié)合。

56、在一些實(shí)施方案中，所述雙功能性分子包含il-2突變蛋白或基于il-2的序列，所述il-2突變蛋白或基于il-2的序列包含選自由以下組成的組的序列：

57、a.seq?id?no:271、272和273；

58、b.seq?id?no:274、275和276；

59、c.seq?id?no:283、284和285；以及

60、d.seq?id?no:365、366和367。

61、在一些實(shí)施方案中，所述雙功能性分子共價(jià)連接至選自由以下組成的組的抗體：度普利尤單抗(dupilumab)、納武單抗(nivolumab)bms-936558、mdx-1106、ono-4538、amp224、ct-011和mk-3475(派姆單抗(pembrolizumab)或)、塞普利單抗(cemiplimab)(regn2810)、shr-1210(ctr20160175和ctr20170090)、shr-1210(ctr20170299和ctr20170322)、js-001(ctr20160274)、ibi308(ctr20160735)和/或bgb-a317(ctr20160872)。

62、在一些實(shí)施方案中，所述雙功能性分子共價(jià)連接至選自由以下組成的組的抗體：抗ctla4?mab，諸如伊匹木單抗(ipilimumab)、曲美木單抗(tremelimumab)；抗pd-l1拮抗性抗體，諸如bms-936559/mdx-1105、medi4736、rg-7446/mpdl3280a；抗lag-3，諸如imp-321；靶向免疫刺激蛋白的激動(dòng)性抗體，包括抗cd40?mab，諸如cp-870,893、魯卡木單抗(lucatumumab)、達(dá)西妥珠單抗(dacetuzumab)；抗cd137?mab(抗4-1-bb抗體)，諸如bms-663513烏瑞魯單抗(urelumab)(抗4-1bb抗體；參見(jiàn)例如美國(guó)專利第7,288,638號(hào)和第8,962,804號(hào)，所述專利以引用的方式整體并入本文)、麗瑞魯單抗(lirilumab)(抗kir?mab；iph2102/bms-986015；阻斷nk細(xì)胞抑制性受體)和pf-05082566(烏托米魯單抗(utomilumab)；參見(jiàn)例如美國(guó)專利第8,821,867號(hào)、第8,337,850號(hào)和第9,468,678號(hào)以及國(guó)際專利申請(qǐng)公布第wo?2012/032433號(hào)，所述專利以引用的方式整體并入本文)；抗ox40?mab(參見(jiàn)例如wo?2006/029879或wo?2010/096418，所述專利以引用的方式整體并入本文)；抗gitr?mab，諸如trx518(參見(jiàn)例如美國(guó)專利第7,812,135號(hào)，所述專利以引用的方式整體并入本文)；抗cd27?mab，諸如瓦力魯單抗(varlilumab)cdx-1127(參見(jiàn)例如wo?2016/145085以及美國(guó)專利公布第us2011/0274685號(hào)和第us2012/0213771號(hào)，所述專利以引用的方式整體并入本文)；抗icos?mab(例如medi-570、jtx-2011；以及抗tim-3抗體(參見(jiàn)例如wo?2013/006490或美國(guó)專利公布第us2016/0257758號(hào)，所述專利以引用的方式整體并入本文)、赫賽汀(herceptin)、抗egfr、抗vegf、抗tigit、抗lag3、抗cd8、抗cd47、抗sirs-α和/或抗cd112r。

63、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種組合物，所述組合物包含seq?id?no:395、484、501、502、503、504、505、506、507或508中的任一個(gè)或多個(gè)氨基酸序列。

64、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種組合物，所述組合物包含seq?id?no:395(mdna132.15)的氨基酸序列。

65、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種組合物，所述組合物包含seq?id?no:484(mdna132r.15)的氨基酸序列。

66、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種組合物，所述組合物包含seq?id?no:501(mdna132-q111)的氨基酸序列。

67、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種組合物，所述組合物包含seq?id?no:502(mdna132-r111)的氨基酸序列。

68、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種組合物，所述組合物包含seq?id?no:503(cpmdna132.15-q111)的氨基酸序列。

69、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種組合物，所述組合物包含seq?id?no:504(cpmdna132.15-r111)的氨基酸序列。

70、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種組合物，所述組合物包含seq?id?no:505(cpmdna132.15-q111-pe)的氨基酸序列。

71、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種組合物，所述組合物包含seq?id?no:506(cpmdna132.15-r111-pe)的氨基酸序列。

72、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種組合物，所述組合物包含seq?id?no:507(mdna132.15-q111-pe)的氨基酸序列。

73、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種組合物，所述組合物包含seq?id?no:508(mdna132.15-r111-pe)的氨基酸序列。

74、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種核酸，所述核酸編碼如本文所述的雙功能性分子或組合物。

75、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種載體，所述載體包含如本文所述的核酸。

76、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種治療有需要的受試者的癌癥的方法，所述方法包括施用如本文所述的雙功能性分子或組合物。

77、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種治療有需要的受試者的癌癥的方法，所述方法包括施用編碼如本文所述的雙功能性分子或組合物的核酸。

78、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種治療有需要的受試者的癌癥的方法，所述方法包括施用包含編碼如本文所述的雙功能性分子或組合物的核酸的載體。

79、在一些實(shí)施方案中，所述癌癥是實(shí)體瘤。

80、在一些實(shí)施方案中，所述癌癥選自由以下組成的組：肉瘤、癌、頭頸癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、膀胱癌、口腔癌、間皮瘤、胰腺癌、肝癌、結(jié)腸直腸癌、肺部癌癥、皮膚癌、淋巴癌、胃腸癌、前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌、基底樣乳腺腫瘤、子宮內(nèi)膜癌、多發(fā)性骨髓瘤、黑素瘤、淋巴瘤、肺癌(包括小細(xì)胞肺癌)、腎癌、胃癌、腦癌和cns腫瘤。

81、在一些實(shí)施方案中，所述癌癥是結(jié)腸癌。

82、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種治療有需要的受試者的病毒性疾病的方法，所述方法包括施用包含編碼如本文所述的雙功能性分子或組合物的核酸的載體。

83、在一些實(shí)施方案中，所述病毒性疾病是人乳頭狀瘤病毒(hpv)和/或肝炎，諸如甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎和/或丁型肝炎。

84、一種治療癌癥的方法，所述方法包括施用組合治療，所述組合治療包括：

85、(i)治療性抗體，以及

86、(ii)如本文所述的雙功能性分子或組合物，任選地其中所述雙功能性分子包含如本文所述的基于il-2、il-4或il-13的序列。

87、在一些實(shí)施方案中，所述治療性抗體是抗pd-1抗體或抑制劑，或抗pd-l1抗體或抑制劑。

88、在一些實(shí)施方案中，所述治療性抗體或抑制劑選自由以下組成的組：度普利尤單抗、納武單抗bms-936558、mdx-1106、ono-4538、amp224、ct-011和mk-3475(派姆單抗或)、塞普利單抗(regn2810)、shr-1210(ctr20160175和ctr20170090)、shr-1210(ctr20170299和ctr20170322)、js-001(ctr20160274)、ibi308(ctr20160735)和/或bgb-a317(ctr20160872)；抗ctla4?mab，諸如伊匹木單抗、曲美木單抗；抗pd-l1拮抗性抗體，諸如bms-936559/mdx-1105、medi4736、rg-7446/mpdl3280a；抗lag-3，諸如imp-321；靶向免疫刺激蛋白的激動(dòng)性抗體，包括抗cd40?mab，諸如cp-870,893、魯卡木單抗、達(dá)西妥珠單抗；抗cd137?mab(抗4-1-bb抗體)，諸如bms-663513烏瑞魯單抗(抗4-1bb抗體；參見(jiàn)例如美國(guó)專利第7,288,638號(hào)和第8,962,804號(hào)，所述專利以引用的方式整體并入本文)、麗瑞魯單抗(抗kir?mab；iph2102/bms-986015；阻斷nk細(xì)胞抑制性受體)和pf-05082566(烏托米魯單抗；參見(jiàn)例如美國(guó)專利第8,821,867號(hào)、第8,337,850號(hào)和第9,468,678號(hào)以及國(guó)際專利申請(qǐng)公布第wo?2012/032433號(hào)，所述專利以引用的方式整體并入本文)；抗ox40?mab(參見(jiàn)例如wo?2006/029879或wo?2010/096418，所述專利以引用的方式整體并入本文)；抗gitr?mab，諸如trx518(參見(jiàn)例如美國(guó)專利第7,812,135號(hào)，所述專利以引用的方式整體并入本文)；抗cd27mab，諸如瓦力魯單抗cdx-1127(參見(jiàn)例如wo?2016/145085以及美國(guó)專利公布第us2011/0274685號(hào)和第us2012/0213771號(hào)，所述專利以引用的方式整體并入本文)；抗icos?mab(例如medi-570、jtx-2011；以及抗tim-3抗體(參見(jiàn)例如wo2013/006490或美國(guó)專利公布第us2016/0257758號(hào)，所述專利以引用的方式整體并入本文)、赫賽汀、抗egfr、抗vegf、抗tigit、抗lag3和/或抗cd112r。

89、在一些實(shí)施方案中，所述抗pd-1抗體或抑制劑選自由以下組成的組：納武單抗bms-936558、mdx-1106、ono-4538、amp224、ct-011和mk-3475(派姆單抗或)、塞普利單抗(regn2810)、shr-1210(ctr20160175和ctr20170090)、shr-1210(ctr20170299和ctr20170322)、js-001(ctr20160274)、ibi308(ctr20160735)、bgb-a317(ctr20160872)和如表38中所列舉的pd-1抗體。

90、在一些實(shí)施方案中，所述抗pd-l1抗體或抑制劑選自由以下組成的組：阿特珠單抗、阿維魯單抗和德瓦魯單抗。

91、在一些實(shí)施方案中，所述癌癥選自由以下組成的組：肉瘤、癌、頭頸癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、膀胱癌、口腔癌、間皮瘤、胰腺癌、肝癌、結(jié)腸直腸癌、肺部癌癥、皮膚癌、淋巴癌、胃腸癌、前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌、基底樣乳腺腫瘤、子宮內(nèi)膜癌、多發(fā)性骨髓瘤、黑素瘤、淋巴瘤、肺癌(包括小細(xì)胞肺癌)、腎癌、胃癌和腦癌。

92、在一些實(shí)施方案中，所述癌癥是結(jié)腸癌。

93、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，所述藥物組合物包含如本文所述的雙功能性分子和藥學(xué)上可接受的載劑。

94、一種藥物組合物，所述藥物組合物包含抗pd-1抗體或抑制劑、如本文所述的雙功能性分子或組合物，以及藥學(xué)上可接受的載劑，其中任選地所述抗pd-1抗體或抑制劑和所述雙功能性分子是共價(jià)連接的。

95、一種藥物組合物，所述藥物組合物包含抗pd-l1抗體或抑制劑、如本文所述的雙功能性分子或組合物，以及藥學(xué)上可接受的載劑，其中任選地所述抗pd-l1抗體或抑制劑和所述雙功能性分子是共價(jià)連接的。

96、一種藥物組合物，所述藥物組合物包含抗cd3抗體或抑制劑、如本文所述的雙功能性分子或組合物，以及藥學(xué)上可接受的載劑，其中任選地所述抗cd3抗體或抑制劑和所述雙功能性分子是共價(jià)連接的。

97、一種藥物組合物，所述藥物組合物包含治療性抗體或抑制劑、如本文所述的雙功能性分子或組合物，以及藥學(xué)上可接受的載劑，其中任選地所述治療性抗體或抑制劑和所述雙功能性分子是共價(jià)連接的。

98、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了根據(jù)包括施用如本文所述的雙功能性分子或組合物的前述方法段落中任一項(xiàng)的用于治療有需要的受試者的癌癥的用途。