本發(fā)明涉及一種提高菲牛蛭素提取收率的方法，屬水蛭提取技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
從菲牛蛭體內(nèi)提取的一種抗凝活性成分，具有溶栓、抑制血小板凝聚、降低血粘度及血脂的作用，近年來在臨床醫(yī)學上受到廣泛關(guān)注和應用。菲牛蛭的抗凝活性成分主要用于治療腦血栓、心梗、冠心病、腦動脈硬化和腦梗死等心腦血管疾病，其具有廣闊的醫(yī)學應用前景和市場前景。目前提取菲牛蛭素活性成分一般采用組織勻漿蟲體后，三氯乙酸、丙酮等化學方法提取，但按現(xiàn)有方法提取粗提物后，測定菲牛蛭素的活性不太理想，經(jīng)測定菲牛蛭素的提取值僅為被測菲牛蛭蟲體總量的40-55%，大部分菲牛蛭素仍留存在勻漿后的菲牛蛭體內(nèi)，造成菲牛蛭原料的大量浪費。因此，研發(fā)一種提取方法簡單，操作方便，提取收率高，菲牛蛭素的提取活性可高達70～80%，最大限度避免浪費菲牛蛭原料，經(jīng)濟效益好的提高菲牛蛭素提取收率的方法是十分有必要的。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于，針對上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種提取收率高，分離、提純效果好，提取方法簡單、操作方便，處理量大，菲牛蛭素的提取活性可高達70～80%，使用安全，最大限度避免浪費菲牛蛭原料，降低成本，增加經(jīng)濟收益的提高菲牛蛭素提取收率的方法。
本發(fā)明是通過如下的技術(shù)方案來實現(xiàn)上述目的的：
一種提高菲牛蛭素提取收率的方法，其特征在于：它是通過如下步驟完成的：
1）將清洗干凈的菲牛蛭體用濾紙吸干水分，用粉碎機粉碎，再放入勻漿機中勻漿，勻漿2～4次，每次2～3分鐘，每勻漿一次后間隔1～2分鐘，勻漿機中流水降溫，保持勻漿液溫度在20℃～25℃之間；
2）用生理鹽水稀釋菲牛蛭勻漿液，生理鹽水量為菲牛蛭勻漿液的4～8倍，通過攪拌機攪拌均勻，攪拌時間2～3分鐘；
3）將稀釋攪拌均勻后的菲牛蛭碎片混合液放入超聲波機中繼續(xù)超微破碎處理，超聲功率為200～900w，超聲頻率20～25khz，超聲總時間15～30min；每超聲1～3秒后間隔1～3秒；
4）在超聲后的菲牛蛭溶液中加入10%三氯乙酸調(diào)ph值至2.5，70℃水浴20分鐘，期間適當攪拌，4℃10000rpm離心10分鐘后收集上清液；上清液用1mol/升的naoh調(diào)ph值至7.0，4℃12000rpm離心10分鐘收集上清液；
5）對超聲和經(jīng)過化學方法提純的菲牛蛭素進行活性測定，測定菲牛蛭素的提取活性達到菲牛蛭體總量的70～80%即成。
超聲波機的聲波可產(chǎn)生高速、強烈的空化效應和攪拌作用，其獨有的物理特性能促使菲牛蛭細胞組織破壁或變形，破壞菲牛蛭體的細胞，讓化學溶劑快速滲透到菲牛蛭體細胞中，使菲牛蛭的活性有效成分提取更充分，提取時間短，處理量大；大大提升了提取率。同時，提取溫度低，節(jié)省能耗；適應性廣，適用于絕大多數(shù)種類中藥材和各類生物成分的提取。此外，超聲波提取藥液雜質(zhì)少，有效成分易于分離、純化；提取工藝運行成本低，綜合經(jīng)濟效益顯著；超聲波機的操作簡單易行，設備維護和保養(yǎng)方便。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比的有益效果在于：
該提高菲牛蛭素提取收率的方法，通過超聲波產(chǎn)生高速、強烈的空化效應和攪拌作用，破壞菲牛蛭體的細胞，使化學溶劑滲透到菲牛蛭體的細胞中，縮短提取時間，分離、提純好。通過本發(fā)明5個步驟，使菲牛蛭素的提取活性由原來的40～55%提高到70～80%，大大提高了提取率。提取方法簡單、易操作，安全方便，處理量大，最大限度地避免浪費菲牛蛭原料，降低成本，增加了經(jīng)濟收益。解決了現(xiàn)有粉碎勻漿后，直接通過三氯乙酸化學法提純收率低、浪費原料的問題。
具體實施方式
一種提高菲牛蛭素提取收率的方法，其特征在于：它是通過如下步驟完成的：
1）將清洗干凈的菲牛蛭體粉碎機粉碎后用勻漿機勻漿，勻漿2～4次，每次2～3分鐘，每勻漿一次后間隔1～2分鐘，勻漿機中流水降溫，保持勻漿液溫度在20℃～25℃之間；
2）將勻漿后的菲牛蛭碎片放入生理鹽水中稀釋，生理鹽水為菲牛蛭勻漿液的4～8倍，通過攪拌機攪拌10min；
3）將稀釋攪拌均勻后的菲牛蛭碎片混合液放入超聲波機中繼續(xù)破碎處理，超聲功率為200～900w，超聲頻率20～25khz，超聲總時間15～30min；每超聲1～3秒后間隔1～3秒；
4）在超聲后的菲牛蛭混合液中加入10%三氯乙酸調(diào)ph值至2.5，70℃水浴20分鐘，期間適當攪拌，4℃10000rpm離心10分鐘后收集上清液；上清液用1mol/升的naoh調(diào)ph值至7.0，4℃12000rpm離心10分鐘收集上清液；
5）與超聲波前處理過的菲牛蛭液采用三氯乙酸化學方法提純的菲牛蛭素進行活性測定對比，測定超聲后提取的菲牛蛭素的提取活性達到菲牛蛭體總量的70～80%即成。
該提高菲牛蛭素提取收率的方法采用超聲波機輔助化學溶劑，通過本發(fā)明5個步驟從菲牛蛭體中提取菲牛蛭素活性物，操作簡單，安全性好，處理量大，得率高，縮短了提取時間，大大提高了提取率，使菲牛蛭素的提取活性由原來的40～55%提高到現(xiàn)在的70～80%，最大限度地避免浪費菲牛蛭原料，有效降低了成本，增加了企業(yè)的經(jīng)濟收益，同時為中藥制藥市場提供了優(yōu)質(zhì)的原料產(chǎn)品。
以上所述只是本發(fā)明的較佳實施例而已，上述舉例說明不對本發(fā)明的實質(zhì)內(nèi)容作任何形式上的限制，所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員在閱讀了本說明書后依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實質(zhì)對以上具體實施方式所作的任何簡單修改或變形，以及可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以變更或修飾為等同變化的等效實施例，均仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的范圍內(nèi)，而不背離本發(fā)明的實質(zhì)和范圍。