本發(fā)明屬于菌落定量計數(shù)鑒定技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種新型用于檢測大腸埃希菌的定量計數(shù)鑒定方法。

背景技術(shù)：

目前，大腸埃希菌的檢測是食品、藥品、水質(zhì)等檢驗的法定檢測項目，在國標(biāo)及藥典中均有嚴(yán)格的檢驗條件和檢驗方法要求，在《中國藥典》2015年版（1106非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法）規(guī)定使用的培養(yǎng)基為麥康凱液體培養(yǎng)基或麥康凱瓊脂培養(yǎng)基，《中國藥典》2015年版規(guī)定的檢測方法：供試液制備和增菌培養(yǎng)取供試品，照“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法（通則1105）”制成1：10供試液，取相當(dāng)于1g或1ml供試品的供試液，接種至適宜體積（經(jīng)方法適用性試驗確定）的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，30～35℃培養(yǎng)18～24小時，選擇和分離培養(yǎng)取上述培養(yǎng)物1ml接種至100ml麥康凱液體培養(yǎng)基中，42～44℃培養(yǎng)24～48小時。取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上，30～35℃培養(yǎng)18～72小時，結(jié)果判斷若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長，應(yīng)進(jìn)行分離、純化及適宜的鑒定試驗，確證是否為大腸埃希菌；若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上沒有菌落生長，或雖有菌落生長但鑒定結(jié)果為陰性，判供試品未檢出大腸埃希菌?，F(xiàn)有技術(shù)存在只能判斷供試品中是否存在大腸埃希菌，而不能準(zhǔn)確計數(shù)的問題。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供一種新型用于檢測大腸埃希菌的定量計數(shù)鑒定方法，以解決上述背景技術(shù)中提出了現(xiàn)有技術(shù)存在只能判斷供試品中是否存在大腸埃希菌，而不能準(zhǔn)確計數(shù)的問題。

本發(fā)明所解決的技術(shù)問題采用以下技術(shù)方案來實現(xiàn)：一種新型用于檢測大腸埃希菌的定量計數(shù)鑒定方法，所述方法包括：

制備1：10供試品的供試液；

取2ml供試液直接接種至培養(yǎng)基gcm108上作培養(yǎng)實驗；

定性判斷：判斷經(jīng)培養(yǎng)實驗的培養(yǎng)基是否存在菌落生長，若不存在，則判定供試品未檢出大腸埃希菌，若存在，則根據(jù)特定的化學(xué)變化，即可判斷該菌落為大腸埃希菌；

定量判斷：可以直接對大腸埃希菌進(jìn)行肉眼菌落計數(shù)。

進(jìn)一步，所述檢測大腸埃希菌的定量計數(shù)鑒定方法需同一個稀釋級的供試品同時做兩個平行試驗，并同時做空白對照。

進(jìn)一步，所述特定的化學(xué)變化包括培養(yǎng)基對微生物的代謝產(chǎn)物產(chǎn)生的特殊化學(xué)物質(zhì)而產(chǎn)生的特定的化學(xué)變化。

進(jìn)一步，所述判斷菌落是否為大腸埃希菌包括通過肉眼觀察菌落如顏色、大小和形態(tài)變化而判定是大腸埃希菌。

進(jìn)一步，所述培養(yǎng)基為由蛋白胨、牛膽鹽、乳糖、溴甲酚紫、濾膜、濾紙、培養(yǎng)皿等組成。

進(jìn)一步，所述培養(yǎng)基對大腸埃希菌具有特異性。

進(jìn)一步，所述培養(yǎng)基經(jīng)方法適用性試驗確定。

進(jìn)一步，所述培養(yǎng)實驗包括接種的培養(yǎng)基搖勻至完全濾過，37℃培養(yǎng)24～48小時。

同時，本發(fā)明還提供一種新型用于檢測大腸埃希菌的定量計數(shù)鑒定培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基由蛋白胨、牛膽鹽、乳糖、溴甲酚紫等組成。

同時，本發(fā)明再提供一種新型用于檢測大腸埃希菌的定量計數(shù)鑒定培養(yǎng)皿，所述培養(yǎng)皿包括由蛋白胨、牛膽鹽、乳糖、溴甲酚紫等組成的培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基經(jīng)濾紙、濾膜等過濾。

有益技術(shù)效果：

1、本專利采用定性判斷：判斷經(jīng)培養(yǎng)實驗的培養(yǎng)基是否存在菌落生長，若不存在，則判定供試品未檢出大腸埃希菌，若存在，則根據(jù)特定的化學(xué)變化，即可判斷該菌落為大腸埃希菌：并對單個生成的單個菌落進(jìn)行肉眼計數(shù)，由于通過供試液制備：取供試品，制成1：10供試液。取2ml供試品的供試液，直接接種至（經(jīng)方法適用性試驗確定）培養(yǎng)基中，搖勻至完全濾過，37℃培養(yǎng)24～48小時，結(jié)果判斷：若培養(yǎng)基上有菌落生長，則根據(jù)該培養(yǎng)基對微生物的代謝產(chǎn)物產(chǎn)生的特殊化學(xué)物質(zhì)而產(chǎn)生的特定的化學(xué)變化，并根據(jù)肉眼觀察菌落顏色，大小和形態(tài)變化而判定即為大腸埃希菌；并可以從單個生成的單個菌落進(jìn)行肉眼計數(shù)，若該培養(yǎng)基上沒有菌落生長，則鑒定結(jié)果為陰性，進(jìn)而判定供試品未檢出大腸埃希菌。通過對培養(yǎng)基的化學(xué)變化結(jié)合現(xiàn)有方法和技術(shù)，本發(fā)明不但實現(xiàn)了供試品的定性判斷，而且實現(xiàn)了供試品的定量判斷，本發(fā)明可用于大腸埃希菌的鑒定，可定量檢測出供試品中的大腸菌落數(shù)。

2、本專利采用所述培養(yǎng)基為由蛋白胨、牛膽鹽、乳糖、溴甲酚紫、濾膜、濾紙、培養(yǎng)皿等組成，所述培養(yǎng)基對大腸埃希菌具有特異性。由于該培養(yǎng)基具有很強的選擇性，只針對大腸埃希菌的檢測，其他菌落不易生長，因此具有良好的鑒定作用，并且大腸埃希菌在培養(yǎng)基上可生長出易于分辨的細(xì)菌形態(tài)，方便計數(shù)等優(yōu)勢。

3、本專利采用所述檢測大腸埃希菌的定量計數(shù)鑒定方法需同一個稀釋級的供試品同時做兩個平行試驗，并同時做空白對照，由于鑒定和計數(shù)一次性培養(yǎng)，整個實驗要求同一個稀釋級的供試品同時做兩個平行試驗，并同時做空白對照，平行實驗是考查試驗方法及操作的準(zhǔn)確性，排除偶然性結(jié)果，降低誤差，使結(jié)果更真實可靠；而空白對照通常不加入樣品，主要是來衡量培養(yǎng)基的滅菌程度，是否有菌。

4、本專利適于醫(yī)藥、食品、水質(zhì)等檢測應(yīng)用，應(yīng)用前景良好，具有顯著的社會效益、經(jīng)濟效益。

5、本專利本產(chǎn)品具有檢測精確，快速且靈敏度高的優(yōu)點。

附圖說明

圖1是本發(fā)明一種新型用于檢測大腸埃希菌的定量計數(shù)鑒定方法的流程圖。

具體實施方式

以下結(jié)合附圖對本發(fā)明做進(jìn)一步描述：

圖中：

s1-制備1：10供試品的供試液；

s2-取2ml供試液直接接種至gcm108培養(yǎng)基上實驗。

s3-定性判斷；

s4-定量判斷。

實施例：

本實施例：如圖1所示，一種新型用于檢測大腸埃希菌的定量計數(shù)鑒定方法，所述方法包括：

制備1：10供試品的供試液s1；

取2ml供試液直接接種至gcm108培養(yǎng)基上作培養(yǎng)實驗s2；

定性判斷s3：判斷經(jīng)培養(yǎng)實驗的培養(yǎng)基是否存在菌落生長，若不存在，則判定供試品未檢出大腸埃希菌，若存在，則根據(jù)特定的化學(xué)變化，即可判斷菌落為大腸埃希菌；

定量判斷s4：若為大腸埃希菌，則對單個生成的單個菌落進(jìn)行肉眼計數(shù)。

由于采用定性判斷：判斷經(jīng)培養(yǎng)實驗的培養(yǎng)基是否存在菌落生長，若不存在，則判定供試品未檢出大腸埃希菌，若存在，則根據(jù)特定的化學(xué)變化，判斷菌落即為大腸埃希菌,定量判斷：直接對大腸埃希菌進(jìn)行肉眼菌落計數(shù)，由于通過供試液制備：取供試品，制成1：10供試液。取2ml供試品的供試液，直接接種至（經(jīng)方法適用性試驗確定）培養(yǎng)基中，搖勻至完全濾過，37℃培養(yǎng)24～48小時，結(jié)果判斷：若培養(yǎng)基上有菌落生長，則根據(jù)該培養(yǎng)基對微生物的代謝產(chǎn)物產(chǎn)生的特殊化學(xué)物質(zhì)而產(chǎn)生的特定的化學(xué)變化，并根據(jù)肉眼觀察菌落顏色，大小和形態(tài)變化而判定為大腸埃希菌；并可以從單個生成的單個菌落進(jìn)行肉眼計數(shù)，若該培養(yǎng)基上沒有菌落生長，則鑒定結(jié)果為陰性，進(jìn)而判定供試品未檢出大腸埃希菌。通過對培養(yǎng)基的化學(xué)變化結(jié)合現(xiàn)有方法和技術(shù)，本發(fā)明不但實現(xiàn)了供試品的定性判斷，而且實現(xiàn)了供試品的定量判斷，本發(fā)明可用于大腸埃希菌的鑒定，可定量檢測出供試品中的大腸菌落數(shù)。

所述檢測大腸埃希菌的定量計數(shù)鑒定方法需同一個稀釋級的供試品同時做兩個平行試驗，并同時做空白對照。

由于采用所述檢測大腸埃希菌的定量計數(shù)鑒定方法需同一個稀釋級的供試品同時做兩個平行試驗，并同時做空白對照，由于鑒定和計數(shù)一次性培養(yǎng)整個實驗要求同一個稀釋級的供試品同時做兩個平行試驗，并同時做空白對照，平行實驗是考查試驗方法及操作的準(zhǔn)確性，排除偶然性結(jié)果，降低誤差，使結(jié)果更真實可靠；而空白對照通常不加入樣品，主要是來衡量培養(yǎng)基的滅菌程度，是否有菌。

所述特定的化學(xué)變化包括培養(yǎng)基對微生物的代謝產(chǎn)物產(chǎn)生的特殊化學(xué)物質(zhì)而產(chǎn)生的特定的化學(xué)變化。

所述判斷菌落是否為大腸埃希菌包括通過肉眼觀察菌落如顏色、大小和形態(tài)變化而判定是否為大腸埃希菌。

所述培養(yǎng)基為由蛋白胨、牛膽鹽、乳糖、溴甲酚紫、濾膜、濾紙、培養(yǎng)皿等組成。

由于采用所述gcm108培養(yǎng)基對大腸埃希菌具有特異性。由于該培養(yǎng)基具有很強的選擇性，只針對大腸埃希菌的檢測，其他菌落不易生長，因此具有良好的鑒定作用，并且大腸埃希菌在培養(yǎng)基上可生長出易于分辨的細(xì)菌形態(tài)，方便計數(shù)等優(yōu)勢。

所述培養(yǎng)基對大腸埃希菌具有特異性。

所述培養(yǎng)基經(jīng)方法適用性試驗確定。

所述培養(yǎng)實驗包括接種的培養(yǎng)基搖勻至完全濾過，37℃培養(yǎng)24～48小時。

同時，本發(fā)明還提供一種新型用于檢測大腸埃希菌的定量計數(shù)鑒定培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基由蛋白胨、牛膽鹽、乳糖、溴甲酚紫等組成。

同時，本發(fā)明再提供一種新型用于檢測大腸埃希菌的定量計數(shù)鑒定培養(yǎng)皿，所述培養(yǎng)皿包括由蛋白胨、牛膽鹽、乳糖、溴甲酚紫等組成的培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基經(jīng)濾紙、濾膜等過濾。

工作原理：

本專利通過采用定性判斷：判斷經(jīng)培養(yǎng)實驗的培養(yǎng)基是否存在菌落生長，若不存在，則判定供試品未檢出大腸埃希菌，若存在，則根據(jù)特定的化學(xué)變化，即可判斷菌落為大腸埃希菌,定量判斷：若為大腸埃希菌，則對單個生成的單個菌落進(jìn)行肉眼計數(shù)，由于通過供試液制備：取供試品，制成1：10供試液。取2ml供試品的供試液，直接接種至（經(jīng)方法適用性試驗確定）培養(yǎng)基中，搖勻至完全濾過，37℃培養(yǎng)24～48小時，結(jié)果判斷：若培養(yǎng)基上有菌落生長，則根據(jù)該培養(yǎng)基對微生物的代謝產(chǎn)物產(chǎn)生的特殊化學(xué)物質(zhì)而產(chǎn)生的特定的化學(xué)變化，并根據(jù)肉眼觀察菌落顏色，大小和形態(tài)變化而判定為大腸埃希菌；并可以從單個生成的單個菌落進(jìn)行肉眼計數(shù)，若該培養(yǎng)基上沒有菌落生長，則鑒定結(jié)果為陰性，進(jìn)而判定供試品未檢出大腸埃希菌。通過對培養(yǎng)基的化學(xué)變化結(jié)合現(xiàn)有方法和技術(shù)，本發(fā)明不但實現(xiàn)了供試品的定性判斷，而且實現(xiàn)了供試品的定量判斷，本發(fā)明解決了現(xiàn)有技術(shù)存在只能判斷供試品中是否存在大腸埃希菌，而不能準(zhǔn)確計數(shù)的問題，具有可定量檢測出供試品中的大腸菌落數(shù)、易于分辨的細(xì)菌形態(tài)，方便計數(shù)等優(yōu)勢、應(yīng)用前景良好的有益技術(shù)效果。

利用本發(fā)明的技術(shù)方案，或本領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明技術(shù)方案的啟發(fā)下，設(shè)計出類似的技術(shù)方案，而達(dá)到上述技術(shù)效果的，均是落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。