本發(fā)明涉及脂肪組織處理技術(shù)領(lǐng)域，特別是指一種小顆?；钚灾窘M織的處理方法。

背景技術(shù)：

軟組織缺損是一類造成人體形態(tài)與功能障礙的常見疾病，但由于人工合成材料的安全性和有效性不佳等原因，軟組織缺損的重建一直是亟需解決的難題。近年來隨著醫(yī)學(xué)的進(jìn)步，人們發(fā)現(xiàn)自體脂肪組織是軟組織修復(fù)的最佳材料，具有來源充足，無生物排異等優(yōu)點(diǎn)，但既往傳統(tǒng)的脂肪提取技術(shù)獲取的脂肪組織顆粒較大，從自身提取后一般采用2-3mm的注射針進(jìn)行脂肪的移植注射操作，因此一般只在組織較為疏松的皮下、脂肪組織內(nèi)、肌肉間等組織間隙進(jìn)行填充；而且傳統(tǒng)方法提取的脂肪組織顆粒較粗，不能通過直徑1mm以內(nèi)的注射針，也難以在皮膚內(nèi)等組織較為致密的部位進(jìn)行移植注射操作，但在臨床實(shí)際操作中，往往需要0.6-0.8mm的精細(xì)注射來實(shí)現(xiàn)皮膚內(nèi)填充，矯正精細(xì)的軟組織缺損問題。因此目前傳統(tǒng)的脂肪移植技術(shù)尚不能在臨床中得到廣泛應(yīng)用。

既往為獲取細(xì)小顆粒的脂肪需要采用直徑1mm的定制脂肪抽吸管來抽吸脂肪，這種方法非常耗時(shí)，獲取效率低，且由于脂肪組織在細(xì)小針管內(nèi)收到擠壓，其活性會顯著受到影響。因此高效地獲得細(xì)小顆粒的脂肪目前仍存在技術(shù)上的難度。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提出一種小顆?；钚灾窘M織的處理方法，解決了現(xiàn)有技術(shù)中制取小顆粒脂肪過程中活性下降的技術(shù)問題，并提高了獲取的效率。

本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的：

一種小顆?；钚灾窘M織的處理方法，包括：

取大顆粒脂肪組織；

將所述大顆粒脂肪組織置于低頻超聲儀探頭下作用1-1.5分鐘；所述低頻超聲儀的工作條件為功率80-95w，脈沖間斷工作模式；

過濾上述超聲處理后的脂肪組織，去除纖維組織，即得小顆?；钚灾窘M織。

作為優(yōu)選的技術(shù)方案，所述脈沖間斷工作模式中，作用時(shí)間為1.5-3秒。更優(yōu)選的是2秒。

作為優(yōu)選的技術(shù)方案，所述脈沖間斷工作模式中，暫停時(shí)間為2.5-5秒。更優(yōu)選的是3秒。

作為優(yōu)選的技術(shù)方案，所述過濾使用的濾網(wǎng)為金屬濾網(wǎng)，孔徑為1mm。

作為優(yōu)選的技術(shù)方案，所述低頻超聲儀的頻率為20khz。

作為優(yōu)選的技術(shù)方案，上述制得的小顆?；钚灾窘M織能通過0.6mm直徑的注射針。

上述制得的小顆?；钚灾窘M織應(yīng)用于精細(xì)注射。

有益效果

(1)本發(fā)明使用超聲儀設(shè)備，采用脈沖間斷工作模式，在引入的間隔時(shí)間可避免超聲處理時(shí)產(chǎn)生的熱效應(yīng)對組織造成損傷，從而在處理脂肪組織時(shí)仍保留原組織的活性。在組織消化和體外培養(yǎng)后可見活細(xì)胞增殖參見圖1所示。由于保留了原組織的活性，因此在實(shí)現(xiàn)了細(xì)針皮內(nèi)注射的同時(shí)不影響移植后的脂肪存活率。

(2)本發(fā)明的方法簡單、可重復(fù)性高，適合于大規(guī)模推廣應(yīng)用。

(3)本發(fā)明方法制得的脂肪顆粒，其粒徑更細(xì)小，組織更加勻質(zhì)，可通過孔徑為0.6mm的注射針，脂肪組織的細(xì)胞大小約為傳統(tǒng)方法獲取的脂肪細(xì)胞的1/3-1/2，更大的滿足了臨床的需求。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施方案或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對實(shí)施方案或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實(shí)施方案，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)性的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。

圖1為實(shí)施例1的小顆粒活性脂肪組織通過消化離心后獲取的活細(xì)胞培養(yǎng)圖。

圖2為實(shí)施例1的大顆粒脂肪組織通過消化離心后獲取的活細(xì)胞培養(yǎng)圖。

圖3為實(shí)施例1的小顆?；钚灾窘M織切片染色圖。

圖4為傳統(tǒng)方法獲取的大顆粒脂肪組織切片染色圖。

圖5為實(shí)施例1的脂肪培養(yǎng)細(xì)胞的成脂染色結(jié)果圖；其中a：傳統(tǒng)脂肪培養(yǎng)細(xì)胞的成脂染色結(jié)果；b：小顆?；钚灾九囵B(yǎng)細(xì)胞的成脂染色結(jié)果。

圖6為實(shí)施例1的脂肪培養(yǎng)細(xì)胞的成骨染色結(jié)果；其中a：傳統(tǒng)脂肪培養(yǎng)細(xì)胞的成骨染色結(jié)果；b：小顆?；钚灾九囵B(yǎng)細(xì)胞的成骨染色結(jié)果。

具體實(shí)施方式

下面將對本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

下述實(shí)施例中所用的超聲儀為醫(yī)學(xué)與生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室較常規(guī)的一般設(shè)備(市售)，該設(shè)備簡易便于攜帶且成本低廉。儀器操作簡便，可重復(fù)性高。

實(shí)施例1

一種小顆?；钚灾窘M織的處理方法，包括：

(1)收集傳統(tǒng)脂肪抽吸方法獲取的大顆粒脂肪組織15ml；

(2)置于20khz超聲儀探頭下作用1分鐘，功率為95w，工作模式為脈沖間斷模式，作用2s暫停間隔3s；

(3)將超聲儀處理后脂肪通過金屬濾網(wǎng)去除脂肪組織內(nèi)的纖維組織，金屬濾網(wǎng)孔徑為1mm；即得小顆?；钚灾窘M織，該組織更加勻質(zhì)，可通過孔徑為0.6mm的注射針。

驗(yàn)證組織內(nèi)細(xì)胞的活性：

具體實(shí)驗(yàn)方法：收集小顆?；钚灾窘M織5ml，加入濃度為1％的膠原酶溶液5ml，置入37攝氏度恒溫?fù)u床中作用60min，置入離心機(jī)內(nèi)以800g離心5min，收集細(xì)胞沉淀，用細(xì)胞培養(yǎng)液重懸后接種于培養(yǎng)皿進(jìn)行體外細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)后可見細(xì)胞生長，參見圖1。

對照實(shí)驗(yàn)方法：收集傳統(tǒng)方法獲取的脂肪組織5ml，加入濃度為1％的膠原酶溶液5ml，置入37攝氏度恒溫?fù)u床中作用60min，置入離心機(jī)內(nèi)以800g離心5min，收集細(xì)胞沉淀，用細(xì)胞培養(yǎng)液重懸后接種于培養(yǎng)皿進(jìn)行體外細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)后可見細(xì)胞生長，參見圖2。

參見圖1所示：本實(shí)施例獲得的小顆?；钚灾窘M織通過消化離心后獲取的活細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果，證實(shí)細(xì)小顆粒脂肪組織內(nèi)具有增殖能力的活細(xì)胞。

通過圖1和圖2可知，本實(shí)施例的小顆?；钚灾窘M織與傳統(tǒng)方法提取的大顆粒脂肪相比，超聲處理方法并不破壞組織內(nèi)細(xì)胞的活性。由于保留了原組織的活性，因此在實(shí)現(xiàn)了細(xì)針皮內(nèi)注射的同時(shí)不影響移植后的脂肪存活率。

另外：

本實(shí)施例獲得的小顆?；钚灾窘M織和傳統(tǒng)方法所得脂肪組織的培養(yǎng)所得細(xì)胞進(jìn)行了細(xì)胞誘導(dǎo)成脂實(shí)驗(yàn)及成骨實(shí)驗(yàn)，成脂誘導(dǎo)后行油紅染色；成骨誘導(dǎo)后行茜素紅染色，在顯微鏡下觀察染色結(jié)果。實(shí)驗(yàn)鏡檢圖請見圖5-6。由這些附圖可知：利用本方法所述方法所獲得的細(xì)小顆粒勻質(zhì)脂肪的培養(yǎng)所得細(xì)胞和傳統(tǒng)方法獲得脂肪組織的培養(yǎng)所得細(xì)胞，在成脂和成骨能力上無明顯差異。

獲取時(shí)間比較：

傳統(tǒng)方法通過直徑2-3mm脂肪抽吸管從患者皮下抽吸出15ml大顆粒脂肪的時(shí)間為3-5分鐘，將大顆粒脂肪通過超聲處理來獲取15ml細(xì)小顆粒脂肪的時(shí)間為2-3分鐘，總時(shí)間為5-8分鐘。通過定制的直徑1mm脂肪抽吸管雖然也能獲得細(xì)小顆粒脂肪，但從患者皮下抽吸出15ml細(xì)小顆粒脂肪需要15-20分鐘。

上述制得的小顆粒活性脂肪組織應(yīng)用于精細(xì)注射。

實(shí)施例2

一種小顆粒活性脂肪組織的處理方法，包括：

(1)收集傳統(tǒng)脂肪抽吸方法獲取的大顆粒脂肪組織25ml；

(2)置于20khz超聲儀探頭下作用1.5分鐘，功率為80w，工作模式為脈沖間斷模式，作用2s暫停間隔5s；

(3)將超聲儀處理后脂肪通過金屬濾網(wǎng)去除脂肪組織內(nèi)的纖維組織，金屬濾網(wǎng)孔徑為1mm。；即得小顆?；钚灾窘M織，該組織更加勻質(zhì)，可通過孔徑為0.6mm的注射針。脂肪組織的細(xì)胞大小約為傳統(tǒng)方法獲取的脂肪細(xì)胞的1/3-1/2，更大的滿足了臨床的需求。

在其它的實(shí)施例中，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)需要在脈沖間斷工作模式中，選用功率為80-95w，作用時(shí)間為1.5-3秒，暫停時(shí)間為2.5-5秒。這些數(shù)據(jù)組合均能滿足本發(fā)明的要求。得到組織更加勻質(zhì)，可通過孔徑為0.6mm的注射針。脂肪組織的細(xì)胞大小約為傳統(tǒng)方法獲取的脂肪細(xì)胞的1/3-1/2。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。