本發(fā)明涉及微生物培養(yǎng)領(lǐng)域，尤其涉及一種改良沙堡瓊脂培養(yǎng)基及其制備方法。

背景技術(shù)：

培養(yǎng)基是微生物發(fā)酵過(guò)程或動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中供微生物或動(dòng)、植物細(xì)胞生長(zhǎng)、繁殖或累積代謝產(chǎn)物所必需的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。一般培養(yǎng)基的成分包括:碳源、氮源、礦物質(zhì)，以及其他必需物質(zhì)，如某些生物自身不能合成的物質(zhì)，如某些氨基酸、維生素或核苷酸等。此外，培養(yǎng)基中還常加入ph緩沖劑以維持穩(wěn)定的ph。

培養(yǎng)基按其化學(xué)成分可分為天然培養(yǎng)基、復(fù)合培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。天然培養(yǎng)基的成分全由天然產(chǎn)物組成，如動(dòng)、植物或微生物體包括其提取物等。復(fù)合培養(yǎng)基是由部分天然產(chǎn)物和部分已知成分的化合物組成。合成培養(yǎng)基由已知成分的化合物所組成，如各種純的化合物的組合。

培養(yǎng)基按其物理形態(tài)又可分為固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基等。培養(yǎng)基按其用途還可以分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、豐富培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基?；A(chǔ)培養(yǎng)基提供最基礎(chǔ)的營(yíng)養(yǎng)成分。豐富培養(yǎng)基是在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加了更多量的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，以實(shí)現(xiàn)培養(yǎng)的微生物或動(dòng)植物細(xì)胞快速生長(zhǎng)。鑒別培養(yǎng)基是在培養(yǎng)基中加入某些試劑，從而在培養(yǎng)過(guò)程中表現(xiàn)出一些特殊反應(yīng)，可用作鑒別不同類型的微生物或動(dòng)植物細(xì)胞。選擇培養(yǎng)基是根據(jù)某些生物體的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或?qū)δ承┗瘜W(xué)物質(zhì)具有抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基。

現(xiàn)有技術(shù)中細(xì)菌培養(yǎng)基大部分以瓊脂為基質(zhì)，并添加一些細(xì)菌生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)物，然后在無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室中按照嚴(yán)格的無(wú)菌操作程序?qū)?xì)菌進(jìn)行培養(yǎng)、觀察與測(cè)定。但是由于瓊脂的特性在40℃-45℃時(shí)的凝固速度過(guò)快，凝固時(shí)間過(guò)短導(dǎo)致培養(yǎng)基與菌液混合不均勻，菌液分布密集，培養(yǎng)生長(zhǎng)會(huì)出現(xiàn)菌落成團(tuán)結(jié)塊、重疊、生長(zhǎng)狀態(tài)不良等不利用后期計(jì)算測(cè)定結(jié)果的缺點(diǎn)。從而導(dǎo)致試驗(yàn)的準(zhǔn)確性不高，試驗(yàn)結(jié)果不可行，需要多次重復(fù)試驗(yàn)，浪費(fèi)時(shí)間。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

發(fā)明目的：為了克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提出了一種有效延緩凝固時(shí)間，提高菌液與培養(yǎng)基的混合均勻度的改良沙堡瓊脂培養(yǎng)基及其制備方法。

技術(shù)方案：為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：一種改良沙堡瓊脂培養(yǎng)基，在普通的瓊脂培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上加入甘草酸單銨鹽，具體以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)算，包括如下成分：蛋白胨0.5-2份、葡萄糖2-6份、甘草酸單銨鹽1-3份、瓊脂粉1.5-2.5份，以蒸餾水作為培養(yǎng)基配劑至額定量100份，ph調(diào)節(jié)為5.4-5.8。

更為優(yōu)選的，所述甘草酸單銨鹽的量為1-2份。

更為優(yōu)選的，所述甘草酸單銨鹽在在除培養(yǎng)基配劑蒸餾水外的質(zhì)量百分比含量高于73％。

更為優(yōu)選的，所述ph調(diào)節(jié)采用1％氫氧化鈉進(jìn)行調(diào)節(jié)。

本發(fā)明還公開了上述改良沙堡瓊脂培養(yǎng)基的制備方法，包括如下步驟：

a)培養(yǎng)基基液的配制：按配方中各原料所需比例稱取各原料備用，將蛋白胨、葡萄糖用蒸餾水作為培養(yǎng)基配劑進(jìn)行溶解，攪拌均勻調(diào)配得培養(yǎng)基基液；

b)ph調(diào)節(jié)：調(diào)節(jié)步驟a)配制的培養(yǎng)基基液ph為5.4-5.8；

c)培養(yǎng)基的配制：向已經(jīng)調(diào)節(jié)好ph的培養(yǎng)基基液中加入甘草酸單銨鹽和瓊脂粉，加熱攪拌至完全溶解得到目的培養(yǎng)基；

d)后處理：將目的培養(yǎng)基進(jìn)行分裝，滅菌處理后60℃保溫待用，得到所需改良沙煲瓊脂培養(yǎng)基成品。

更為優(yōu)選的，所述滅菌處理具體方式為濕熱滅菌和干熱滅菌中的一種。

更進(jìn)一步的，所述滅菌處理具體方式為121℃下濕熱滅菌20-40min。

有益效果：本發(fā)明提供的一種改良沙堡瓊脂培養(yǎng)基及其制備方法，屬于微生物培養(yǎng)領(lǐng)域。培養(yǎng)基具體以質(zhì)量計(jì)算由蛋白胨0.5-2份、葡萄糖2-6份、甘草酸單銨鹽1-3份、瓊脂粉1.5-2.5份，蒸餾水87-96份制備而成，本發(fā)明在沙堡瓊脂培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上改良添加甘草酸單銨鹽，有效延緩了培養(yǎng)基在40-45℃時(shí)的凝固時(shí)間，提高了菌液與培養(yǎng)基中各物質(zhì)的混合均勻程度，對(duì)使用傾注法培養(yǎng)真菌的試驗(yàn)有效避免由于混合均勻度不夠?qū)е碌木涑蓤F(tuán)結(jié)塊、重疊、生長(zhǎng)狀態(tài)不良等不利用后期計(jì)算測(cè)定結(jié)果的現(xiàn)象發(fā)生。從而提高試驗(yàn)以及試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，避免多次重復(fù)試驗(yàn)，縮短試驗(yàn)時(shí)間、減少誤差，有利于提高試驗(yàn)的精確程度，此外，本發(fā)明的制備方法設(shè)計(jì)合理，操作簡(jiǎn)單方便。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明：

實(shí)施例1：

一種改良沙堡瓊脂培養(yǎng)基，在普通的瓊脂培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上加入甘草酸單銨鹽，具體以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)算，包括如下成分：蛋白胨2g、葡萄糖4g、甘草酸單銨鹽1g、瓊脂粉2g，以蒸餾水作為培養(yǎng)基配劑至額定量100ml，用1％的氫氧化鈉ph調(diào)節(jié)為5.52。

上述改良沙堡瓊脂培養(yǎng)基的制備方法，包括如下步驟：

a)培養(yǎng)基基液的配制：按配方中各原料所需比例稱取各原料備用，將蛋白胨、葡萄糖用蒸餾水作為培養(yǎng)基配劑進(jìn)行溶解，攪拌均勻調(diào)配得培養(yǎng)基基液；

b)ph調(diào)節(jié)：調(diào)節(jié)步驟a)配制的培養(yǎng)基基液ph為規(guī)定值；

c)培養(yǎng)基的配制：向已經(jīng)調(diào)節(jié)好ph的培養(yǎng)基基液中加入甘草酸單銨鹽和瓊脂粉，加熱攪拌至完全溶解得到目的培養(yǎng)基；

d)后處理：將目的培養(yǎng)基進(jìn)行分裝，121℃下濕熱滅菌20min后并保溫60℃待用，得到所需改良沙煲瓊脂培養(yǎng)基成品。

實(shí)施例2：

一種改良沙堡瓊脂培養(yǎng)基，在普通的瓊脂培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上加入甘草酸單銨鹽，具體以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)算，包括如下成分：蛋白胨1g、葡萄糖3g、甘草酸單銨鹽1.5g、瓊脂粉1.8g，以蒸餾水作為培養(yǎng)基配劑至額定量100ml，用1％的氫氧化鈉ph調(diào)節(jié)為5.48。

上述改良沙堡瓊脂培養(yǎng)基的制備方法同實(shí)施例1。

實(shí)施例3：

一種改良沙堡瓊脂培養(yǎng)基，在普通的瓊脂培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上加入甘草酸單銨鹽，具體以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)算，包括如下成分：蛋白胨1.5g、葡萄糖5g、甘草酸單銨鹽2g、瓊脂粉2.2g，以蒸餾水作為培養(yǎng)基配劑至額定量100ml，用1％的氫氧化鈉ph調(diào)節(jié)為5.55。

上述改良沙堡瓊脂培養(yǎng)基的制備方法同實(shí)施例1。

實(shí)施例4：

一種改良沙堡瓊脂培養(yǎng)基，在普通的瓊脂培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上加入甘草酸單銨鹽，具體以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)算，包括如下成分：蛋白胨1.8g、葡萄糖6g、甘草酸單銨鹽2.5g、瓊脂粉1.5g，以蒸餾水作為培養(yǎng)基配劑至額定量100ml，用1％的氫氧化鈉ph調(diào)節(jié)為5.65。

上述改良沙堡瓊脂培養(yǎng)基的制備方法同實(shí)施例1。

實(shí)施例5：

一種改良沙堡瓊脂培養(yǎng)基，在普通的瓊脂培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上加入甘草酸單銨鹽，具體以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)算，包括如下成分：蛋白胨0.8g、葡萄糖2g、甘草酸單銨鹽3g、瓊脂粉2.5g，以蒸餾水作為培養(yǎng)基配劑至額定量100ml，用1％的氫氧化鈉ph調(diào)節(jié)為5.62。

上述改良沙堡瓊脂培養(yǎng)基的制備方法同實(shí)施例1。

有益效果試驗(yàn)驗(yàn)證：

以實(shí)施例1-5制備的改良沙堡瓊脂培養(yǎng)基與基礎(chǔ)沙堡瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)；其中基礎(chǔ)沙堡瓊脂培養(yǎng)基制備方法為將2g蛋白胨和4g葡萄糖用熱水溶解，加水至總體積100ml，調(diào)節(jié)ph為5.4-5.8；加入2g瓊脂粉，加熱溶解，然后分裝，在121℃濕熱滅菌20min，保溫60℃待用。

將實(shí)施例1-5與制備完成的對(duì)照組基礎(chǔ)沙堡瓊脂培養(yǎng)基在60℃時(shí)，分別進(jìn)行傾注法試驗(yàn)進(jìn)行真菌培養(yǎng)，并測(cè)定凝固時(shí)間。具體方法如下：

無(wú)菌條件下倒入保溫45℃的平板上，從倒入開始計(jì)時(shí)，手持平板水平方向輕搖使培養(yǎng)基在平面內(nèi)均勻分布；待培養(yǎng)基完全凝固時(shí)記下時(shí)間，進(jìn)行差異顯著性分析。每組三個(gè)平行試驗(yàn)，同時(shí)觀察培養(yǎng)基分布情況，軟硬程度。結(jié)果見表1：

表1實(shí)施例1-5以及對(duì)照組凝固時(shí)間對(duì)比分析

注：與對(duì)照組比：*p<0.05，**p<0.01

從表1中數(shù)據(jù)可以看出，實(shí)施例1-5的改良沙堡瓊脂培養(yǎng)基和對(duì)照組基礎(chǔ)沙堡瓊脂培養(yǎng)基在平板上的凝固時(shí)間均差異明顯，其中實(shí)施例1-4的改良沙堡瓊脂培養(yǎng)基的凝固時(shí)間較對(duì)照組基礎(chǔ)沙堡瓊脂培養(yǎng)基的凝固時(shí)間有極顯著差異；實(shí)施例5的改良沙堡瓊脂培養(yǎng)基的凝固時(shí)間較對(duì)照組基礎(chǔ)沙堡瓊脂培養(yǎng)基的凝固時(shí)間有顯著性差異。

綜上：本發(fā)明一種改良沙堡瓊脂培養(yǎng)基在平板上的凝固時(shí)間明顯優(yōu)于基礎(chǔ)沙堡瓊脂培養(yǎng)基在平板上的凝固時(shí)間，且甘草酸單銨鹽在本發(fā)明限定范圍內(nèi)不同的用量差異均達(dá)顯著或極顯著水平。

應(yīng)當(dāng)指出，以上具體實(shí)施方式僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍，在閱讀了本發(fā)明之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明的各種等價(jià)形式的修改均落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求所限定的范圍。