本發(fā)明涉及植物提取物領(lǐng)域和化妝品領(lǐng)域，特別涉及一種從植物中制備牡丹酚的方法及在制備化妝品中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：牡丹酚(paeonol)又稱丹皮酚，是芍藥科植物牡丹(paeoniamoutansim.)的牡丹皮、牡丹種皮和牡丹果莢中及蘿摩科植物徐長卿(pycnostelmapaniculatumk.schum)的全草中的主要活性成分。其化學(xué)式為2-羥基-4-甲氧基苯乙酮，分子式為c9h10o3，相對分子質(zhì)量為166.18。牡丹酚為白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末，有特異性氣味，味微辣，易溶于乙醇和甲醇，在熱水中溶解，不溶于冷水，能隨水蒸汽揮發(fā)，熔點(diǎn)48℃～51℃。牡丹酚藥理活性廣泛，研究表明牡丹酚具有抑菌抗炎、解熱鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜催眠、解痙、抗過敏、活血化瘀、增強(qiáng)免疫功能等作用，臨床多用于心腦血管、變態(tài)反應(yīng)、炎癥、免疫系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)等多種疾病，同時(shí)還具有明顯的抗腫瘤、逆轉(zhuǎn)mdr、抗血栓、抗動脈粥樣硬化、抗心律失常的作用。在日化方面，現(xiàn)研究發(fā)現(xiàn)，牡丹酚還具有卓越的抗過敏、美白、抗皺、淡斑、去粉刺等作用，它能夠有效地抑制組胺的釋放、抑制抗體生產(chǎn)細(xì)胞活化cd40單抗、重組白介素-4和重組組胺釋放因子；有較強(qiáng)的抗氧化與自由基清除作用，抑制細(xì)胞內(nèi)o2-自由基產(chǎn)生，能促進(jìn)皮膚血液循環(huán)，活化皮膚衰老的表皮細(xì)胞，防皮膚老化、消除皺紋；能將皮膚中沉積色素還原退色，使皮膚增白，消淤化斑；能抑制金黃色葡萄球菌、大腸桿菌等細(xì)菌，抑制各種炎癥因子的形成，具有很好地抗炎、促進(jìn)皮膚新陳代謝，去粉刺作用；對色斑、肌肉痛、皮膚瘙癢、牛皮癬、帶狀瘡疹、濕疹具有較好的治療和保健效果，此外，在牙膏、含漱液、牙粉、牙痛水中有較好的作用。隨著人們?nèi)罕娚钏降娜找嫣岣撸瑢︶t(yī)藥保健及化妝品產(chǎn)品需求的大副增長，目前國內(nèi)牡丹酚需求量也在大副增長，但大部分依賴進(jìn)口。為了適應(yīng)牡丹酚日益增長的需要，如發(fā)明專利cn201310577900.8-丹皮酚萃取方法：公開了從牡丹皮或徐長卿中co2超臨界萃取牡丹酚的方法；現(xiàn)有牡丹酚的提取分離方法有：醇提法、水蒸氣蒸餾法、co2超臨界流體萃取法。醇提法、水蒸氣蒸餾法存在能耗高、生產(chǎn)周期長、收率低的缺陷；特別是牡丹酚對溫度的不穩(wěn)定性，在較長時(shí)間加熱蒸餾時(shí)易氧化變色。co2超臨界流體萃取法雖然提取效率高，但是由于設(shè)備造價(jià)高，工業(yè)化生產(chǎn)難度大，成本高。本發(fā)明采用的水溫浸提取牡丹酚的方法可克服上述不足，采用該方法生產(chǎn)，收率高，操作簡單，能耗低，易實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化放大，目前還未見有報(bào)道。又由于牡丹酚氣味特異，揮發(fā)性強(qiáng)，對光照、溫度和濕度均不穩(wěn)定，水溶性差，不利于直接應(yīng)用于醫(yī)藥和日化方面，常采用包合的方式對其進(jìn)行處理。如發(fā)明專利cn201410124917.2-一種丹皮酚制劑的制備方法：公開了用水蒸氣蒸餾法從牡丹皮中提取牡丹酚的方法并提供了一種牡丹酚的包合物的包合方法。本發(fā)明牡丹酚在制備化妝品中的應(yīng)用，巧妙利用了牡丹酚的特性及化妝品制備的多相組成，其牡丹酚無需包合，即能達(dá)到克服上述不足，大大地節(jié)約了成本。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的首要目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)與不足，提供一種從植物中制備牡丹酚的方法。本發(fā)明的另一目的在于提供通過上述方法得到的牡丹酚單體成分。本發(fā)明的再一目的在于提供所述的牡丹酚單體成分在制備化妝品中的應(yīng)用。本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：一種從植物中制備牡丹酚的方法，包括如下步驟：(1)牡丹酚的提取：以牡丹皮、牡丹種皮、牡丹果莢或徐長卿全草為原料，進(jìn)行凈選、干燥，粉碎，得到的粉末用水溫浸提取或用水溫浸超聲提??；提取完后，保溫趁熱固液分離，取液體，得到含牡丹酚的提取液；(2)牡丹酚粗體的分離：將步驟(1)得到的含牡丹酚的提取液放冷至室溫，于1～25℃的條件下靜置24小時(shí)以上，固液分離，棄去液體，收集固體，得到牡丹酚粗提物；(3)牡丹酚單體成分的精制純化：通過步驟①或步驟①和②進(jìn)行精制純化；①第一次結(jié)晶：往步驟(1)得到的牡丹酚粗提物中加入濃度為體積百分比20～40％的乙醇水溶液，加熱溶解，保溫趁熱固液分離，取液體，液體置25℃以下環(huán)境中攪拌降溫，至有針狀結(jié)晶析出，于1～25℃的條件下靜置24小時(shí)以上，固液分離，棄去液體，收集結(jié)晶，為牡丹酚單體成分；②重結(jié)晶；將得到的結(jié)晶再按照步驟①重結(jié)晶，得到純度更高的牡丹酚單體成分。步驟(1)中所述的粉碎的程度優(yōu)選為粉碎成5～10目的粗粉；優(yōu)選為粉碎成5～8目的粗粉。步驟(1)中所述的用水溫浸提取或用水溫浸超聲提取中的溫度為40～80℃；優(yōu)選50～70℃；更優(yōu)選為60～65℃；最優(yōu)選為60℃。步驟(1)中所述的用水溫浸超聲提取中的超聲的條件優(yōu)選為200～300hz；更優(yōu)選為250hz。步驟(1)中所述的用水溫浸提取或用水溫浸超聲提取的次數(shù)優(yōu)選為2～3次，具體步驟優(yōu)選如下：提取次數(shù)為2次時(shí)：第一次加入相當(dāng)于粉末質(zhì)量10倍量的水，充分?jǐn)嚢杌靹?，加熱溫浸提?～3小時(shí)，或加熱溫浸超聲提取0.5～2.0小時(shí)；第二次加入相當(dāng)于粉末質(zhì)量8倍量的水，加熱溫浸提取0.5～2小時(shí)，或加熱溫浸超聲提取0.5～1.5小時(shí)；提取次數(shù)為3次時(shí)：前兩次與提取次數(shù)為2次時(shí)的步驟相同，第三次加入相當(dāng)于粉末質(zhì)量8倍量的水，加熱溫浸提取0.5～2小時(shí)，或加熱溫浸超聲提取0.5～1.5小時(shí)；提取完后，保溫趁熱固液分離，合并2～3次分離得到的液體，棄去固體；具體步驟更優(yōu)選如下：提取次數(shù)為2次時(shí)：第一次加入相當(dāng)于粉末質(zhì)量10倍量的水，充分?jǐn)嚢杌靹?，加熱溫浸提?～3小時(shí)，或加熱溫浸超聲提取1～2小時(shí)；第二次加入相當(dāng)于粉末質(zhì)量8倍量的水，加熱溫浸提取1～2小時(shí)，或加熱溫浸超聲提取0.5～1.5小時(shí)；提取次數(shù)為3次時(shí)：前兩次與提取次數(shù)為2次時(shí)的步驟相同，第三次加入相當(dāng)于粉末質(zhì)量8倍量的水，加熱溫浸提取1～2小時(shí)，或加熱溫浸超聲提取0.5～1.5小時(shí)；提取完后，保溫趁熱固液分離，合并2～3次分離得到的液體，棄去固體。步驟(2)中所述的室溫指的是5～35℃；優(yōu)選為10～30℃；更優(yōu)選為20～28℃；最優(yōu)選為25℃。步驟(2)中所述的靜置的條件優(yōu)選為于3～5℃靜置24小時(shí)。步驟(3)①中所述的加熱的溫度優(yōu)選為40～80℃；優(yōu)選50～70℃；更優(yōu)選為60～65℃；最優(yōu)選為60℃。步驟(3)①和②中所述的乙醇水溶液的濃度優(yōu)選為體積百分比25～35％；更優(yōu)選為體積百分比30％。步驟(3)①中所述的乙醇水溶液的用量優(yōu)選為每克牡丹酚粗提物配比60～150ml乙醇水溶液；更優(yōu)選為配比70～120ml乙醇水溶液；最優(yōu)選為配比75～80ml乙醇水溶液。步驟(3)①中所述的攪拌降溫的環(huán)境溫度優(yōu)選為20～23℃。步驟(3)①中所述的靜置的條件優(yōu)選為于2～5℃靜置24小時(shí)。步驟(3)②中所述的重結(jié)晶步驟中乙醇水溶液的用量優(yōu)選為每克結(jié)晶配比60～150ml乙醇水溶液；更優(yōu)選為配比80～120ml乙醇水溶液；最優(yōu)選為配比90～110ml乙醇水溶液。步驟(3)②中所述的重結(jié)晶步驟中所述的加熱的溫度優(yōu)選為40～80℃；優(yōu)選50～70℃；更優(yōu)選為60～65℃；最優(yōu)選為60℃。步驟(3)②中所述的重結(jié)晶步驟中所述的靜置的條件優(yōu)選為于2～5℃靜置24小時(shí)。步驟(3)②中所述的重結(jié)晶的次數(shù)優(yōu)選為1次，得到的牡丹酚單體成分純度含量≥98％。本發(fā)明中所述的固液分離可通過過濾或離心進(jìn)行。所述的方法在制備化妝品中的應(yīng)用。一種牡丹酚單體成分，通過上述制備方法得到，純度含量≥98％。所述的牡丹酚單體成分在制備化妝品中的應(yīng)用。所述的化妝品是具有抗過敏、美白、抗皺、淡斑和去粉刺作用的化妝品?？惯^敏作用是指牡丹酚制備的化妝品可抑制組胺的釋放、顯著抑制抗體生產(chǎn)細(xì)胞活化cd40單抗、重組白介素-4(ril-4)和重組組胺釋放因子(rhrf)，有效下調(diào)表達(dá)il-4在細(xì)胞活化的逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)，可以顯著抑制過敏性細(xì)胞因子白細(xì)胞介素33(il-33)與來自人嗜堿性粒細(xì)胞(ku812細(xì)胞)的cc族趨化因子2(ccl-2)、cc族趨化因子5(ccl-5)、人白介素-8(cxcl-8)以及人白介素-6(il-6)的釋放，從而發(fā)揮抗過敏的作用；美白、抗皺、淡斑刺是指牡丹酚制備的化妝品有較強(qiáng)的抗氧化與自由基清除作用，能促進(jìn)皮膚血液循環(huán)，活化皮膚衰老的表皮細(xì)胞，防皮膚老化、消除皺紋，抑制細(xì)胞內(nèi)o2-自由基產(chǎn)生，將皮膚中沉積色素還原退色，使皮膚增白，消淤化斑；去粉刺是指牡丹酚制備的化妝品有較強(qiáng)的抗菌消炎作用，能抑制金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、痢疾志賀氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、乙型副傷寒沙門氏菌等細(xì)菌，能顯著抑制各種炎癥因子的形成，具有很好地抗炎、促進(jìn)皮膚新陳代謝，去粉刺作用。所述的牡丹酚單體成分在制備化妝品中的應(yīng)用，包括如下步驟：將所述的牡丹酚單體成分需要先溶解或加熱溶解于制備化妝品允許的藥物賦形劑或載體中，再與其他成分混合。所述的牡丹酚單體成分在所述的化妝品中的含量是治療有效量。所述的制備化妝品允許的藥物賦形劑或載體可以選自：溶劑、增溶劑、防腐劑、抗氧劑、ph調(diào)節(jié)劑、促滲劑、脂質(zhì)體、保濕劑、增稠劑、螯合劑、膚感調(diào)節(jié)劑、表面活性劑、乳化劑、推進(jìn)/拋射劑、香精、色素，以及其他功效添加劑。所述的化妝品的形式是乳化體系、表面活性劑體系、水劑、水凝膠、泡沫凝膠、巴布劑、膜劑、外用搽劑、軟膏劑。所述的乳化體系和所述的表面活性劑體系可以為洗面奶、沐浴露、化妝水、護(hù)膚啫喱、護(hù)膚乳液、護(hù)膚霜、精華液、眼霜、氣霧或噴霧形式。這些形式可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法制備。為了說明從植物中制備牡丹酚及其在化妝品中的應(yīng)用的有益效果，本發(fā)明以金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、痢疾志賀氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、乙型副傷寒沙門氏菌為研究對象，通過藥敏紙片法、二倍稀釋法實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明的制備的牡丹酚具有顯著的抗菌消炎作用；以酪氨酸酶為研究對象，通過牡丹酚對酪氨酸酶的抑制試驗(yàn)，證明本發(fā)明的牡丹酚具有顯著的美白作用。本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果：(1)本發(fā)明從植物中制備牡丹酚的方法，克服了牡丹酚的現(xiàn)已有醇提法、水蒸氣蒸餾法、co2超臨界流體萃取法等方法的缺點(diǎn)，根據(jù)牡丹酚的性質(zhì)與特點(diǎn)，發(fā)明了用水溫浸提取的新方法，最大限度地提取并保留了牡丹酚的含量與活性。(2)本發(fā)明從植物中制備牡丹酚的方法中，牡丹酚單體成分的精制純化，首次發(fā)明了通過加入低濃度乙醇水溶液熱溶冷析的方法，不僅可將雜質(zhì)有效祛除，而且牡丹酚的轉(zhuǎn)移率高(約98％)。(3)由于牡丹酚氣味特異，揮發(fā)性強(qiáng)，對光照、溫度和濕度均不穩(wěn)定，水溶性差，不利于直接應(yīng)用于化妝品，常采用包合的方式對其進(jìn)行處理，否則其制備的化妝品易產(chǎn)生撮泥感及活性成分難被皮膚吸收。本發(fā)明巧妙利用了牡丹酚的特性及化妝品制備的多相組成，將牡丹酚先溶解或加熱溶解于制備化妝品允許的脂溶性的賦形劑或載體中，其牡丹酚無需包合，即能達(dá)到克服上述不足，大大地節(jié)約了成本。(4)采用本發(fā)明所提供的方法，工藝流程簡單，操作方便，產(chǎn)品質(zhì)量控制方便，有可操作性，是適合于工業(yè)生產(chǎn)的安全可靠的制備方法。附圖說明圖1是從牡丹皮中制備得到的牡丹酚照片圖。圖2是從牡丹皮中制備得到的牡丹酚hplc色譜圖；其中，圖a為牡丹酚對照品，圖b為牡丹皮中制備的牡丹酚樣品。圖3是從牡丹果莢中制備得到的牡丹酚照片圖。圖4是從牡丹果莢中制備得到的牡丹酚hplc色譜圖；其中，圖a為牡丹酚對照品，圖b為牡丹果莢中制備的牡丹酚樣品。圖5是從徐長卿的根及根莖中制備得到的牡丹酚照片圖。圖6是從徐長卿的根及根莖中制備得到的牡丹酚hplc色譜圖；其中，圖a為牡丹酚對照品，圖b為徐長卿的根及根莖中制備的牡丹酚樣品。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例及附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。實(shí)施例1：從牡丹皮中提取制備牡丹酚(1)牡丹酚的提取以牡丹皮為原料，進(jìn)行凈選，經(jīng)過干燥，粉碎成約8目的粗粉。取牡丹皮粗粉1000g，加入10倍量(10kg)的加熱至60℃的溫水，充分?jǐn)嚢杌靹颍訜岵⒈３炙疁?0℃，溫浸提取2.5小時(shí)并不時(shí)攪拌，在保溫條件下趁熱過濾，濾液待用；濾渣繼續(xù)加入8倍量(8kg)的加熱至60℃的溫水，充分?jǐn)嚢杌靹?，加熱并保持水?0℃，溫浸提取1.5小時(shí)并不時(shí)攪拌，在保溫條件下趁熱過濾，濾液待用；濾渣繼續(xù)加入8倍量(8kg)的加熱至60℃的溫水，充分?jǐn)嚢杌靹?，加熱并保持水?0℃，溫浸提取1.5小時(shí)并不時(shí)攪拌，在保溫條件下趁熱過濾，濾液與前二次的濾液合并得牡丹酚的提取液，待用；濾渣棄去。(2)牡丹酚粗體的分離取上述牡丹酚的提取液，放冷至室溫(約25℃)，置約5℃冷藏室中，靜置24小時(shí)，離心分離，棄去上清液，收集沉淀，得牡丹酚的粗提物沉淀約62g。(3)牡丹酚單體成分的精制純化取上述牡丹酚的粗提物沉淀，加入濃度為體積百分比30％的乙醇水溶液4960ml，60℃加熱，攪拌溶解后，60℃保溫趁熱過濾，棄去沉淀，濾液置23℃環(huán)境中攪拌降溫，并繼續(xù)攪拌至有針狀結(jié)晶析出，置2-5℃冷藏室中，靜置24小時(shí)，過濾，棄去濾液，收集結(jié)晶，得牡丹酚粗晶25.2g；所得粗晶加入濃度為體積百分比30％的乙醇水溶液2500ml，60℃加熱，攪拌溶解后，60℃保溫趁熱過濾，棄去沉淀，濾液置22℃環(huán)境中攪拌降溫，并繼續(xù)攪拌至有針狀結(jié)晶析出，置2-5℃冷藏室中，靜置24小時(shí)，過濾，棄去濾液，收集結(jié)晶，得牡丹酚精制結(jié)晶23.1g。按藥典牡丹皮中丹皮酚(牡丹酚)的含量測定方法測定，測得牡丹酚的純度含量為99.3％，其牡丹酚照片圖及測定色譜圖分別見圖1與圖2。實(shí)施例2：從牡丹果莢中提取制備牡丹酚(1)牡丹酚的提取以牡丹果莢為原料，進(jìn)行凈選，經(jīng)過干燥，粉碎成約5目的粗粉。取牡丹果莢粗粉1000g，加入10倍量(10kg)的加熱至60℃的溫水，充分?jǐn)嚢杌靹颍訜岵⒈３炙疁?0℃，溫浸提取2.5小時(shí)并不時(shí)攪拌，在保溫條件下趁熱過濾，濾液待用；濾渣繼續(xù)加入8倍量(8kg)的加熱至60℃的溫水，充分?jǐn)嚢杌靹?，加熱并保持水?0℃，溫浸提取1.5小時(shí)并不時(shí)攪拌，在保溫條件下趁熱過濾，濾液待用；濾渣繼續(xù)加入8倍量(8kg)的加熱至60℃的溫水，充分?jǐn)嚢杌靹?，加熱并保持水?0℃，溫浸提取1.5小時(shí)并不時(shí)攪拌，在保溫條件下趁熱過濾，濾液與前二次的濾液合并得牡丹酚的提取液，待用；濾渣棄去。(2)牡丹酚的粗體的分離取上述牡丹酚的提取液，放冷至室溫(約25℃)，置約5℃冷藏室中，靜置24小時(shí)，離心分離，棄去上清液，收集沉淀，得牡丹酚的粗提物沉淀約33g。(3)牡丹酚單體成分的精制純化取上述牡丹酚的粗提物沉淀，加入濃度為體積百分比30％的乙醇水溶液2500ml，60℃加熱，攪拌溶解后，60℃保溫趁熱過濾，棄去沉淀，濾液置20℃環(huán)境中攪拌降溫，并繼續(xù)攪拌至有針狀結(jié)晶析出，置2-5℃冷藏室中，靜置24小時(shí)，過濾，棄去濾液，收集結(jié)晶，得牡丹酚粗晶10.3g；所得粗晶加入濃度為體積百分比30％的乙醇水溶液1200ml，60℃加熱，攪拌溶解后，60℃保溫趁熱過濾，棄去沉淀，濾液置20℃環(huán)境中攪拌降溫，并繼續(xù)攪拌至有針狀結(jié)晶析出，置2-5℃冷藏室中，靜置24小時(shí)，過濾，棄去濾液，收集結(jié)晶，得牡丹酚精制結(jié)晶9.1g。按藥典牡丹皮中丹皮酚(牡丹酚)的含量測定方法測定，測得牡丹酚的純度含量為99.6％，其牡丹酚照片圖及測定色譜圖分別見圖3與圖4。實(shí)施例3：從徐長卿中提取制備牡丹酚(1)牡丹酚的提取以徐長卿的根及根莖為原料，進(jìn)行凈選，經(jīng)過干燥，粉碎成約8目的粗粉。取牡丹皮粗粉1500g，加入12倍量(18kg)的加熱至65℃的溫水，充分?jǐn)嚢杌靹?，加熱并保持水?0℃，超聲(250hz)提取1.5h，在保溫條件下趁熱過濾，濾液待用；濾渣繼續(xù)加入8倍量(12kg)的加熱至60℃的溫水，充分?jǐn)嚢杌靹颍訜岵⒈３炙疁?0℃，超聲(250hz)提取1.0h，在保溫條件下趁熱過濾，濾液與前次的濾液合并得牡丹酚的提取液，待用；濾渣棄去。(2)牡丹酚的粗體的分離取上述牡丹酚的提取液，放冷至室溫(約25℃)，置約3℃冷藏室中，靜置24小時(shí)，離心分離，棄去上清液，收集沉淀，得牡丹酚的粗提物沉淀約75g。(3)牡丹酚單體成分的精制純化取上述牡丹酚的粗提物沉淀，加入濃度為體積百分比30％的乙醇水溶液6000ml，60℃加熱，攪拌溶解后，60℃保溫趁熱過濾，棄去沉淀，濾液置23℃環(huán)境中攪拌降溫，并繼續(xù)攪拌至有針狀結(jié)晶析出，置2-5℃冷藏室中，靜置24小時(shí)，過濾，棄去濾液，收集結(jié)晶，得牡丹酚粗晶33.2g；所得粗晶加入濃度為體積百分比30％的乙醇水溶液3500ml，60℃加熱，攪拌溶解后，60℃保溫趁熱過濾，棄去沉淀，濾液置20℃環(huán)境中攪拌降溫，并繼續(xù)攪拌至有針狀結(jié)晶析出，置2-5℃冷藏室中，靜置24小時(shí)，過濾，棄去濾液，收集結(jié)晶，得牡丹酚精制結(jié)晶31.1g。按藥典牡丹皮中丹皮酚(牡丹酚)的含量測定方法測定，測得牡丹酚的純度含量為99.5％，其牡丹酚照片圖及測定色譜圖分別見圖5與圖6。實(shí)施例4：本發(fā)明方法提取分離的牡丹酚體外抑菌作用研究牡丹皮又名丹皮，是我國傳統(tǒng)中藥，性寒，味苦，涼，微寒?！侗静菥V目》記載:“滋陰降火，解斑毒，利咽喉，通小便血滯?！蹦档てせ瘜W(xué)成分復(fù)雜，主要包括牡丹酚、芍藥苷、芍藥酚、揮發(fā)油、沒食子酸、甾醇生物堿及植物甾醇類等。其中牡丹酚為主要活性成分，化學(xué)名為2-羥基-4-甲氧基苯乙酮。牡丹酚水溶液有較好的抗菌消炎作用，能抑制金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、痢疾志賀氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、乙型副傷寒沙門氏菌等細(xì)菌；具有很好地抗炎、促進(jìn)皮膚新陳代謝作用，實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果如下：1材料與方法1.1儀器dy6000ⅱ電熱恒溫培養(yǎng)箱(天津泰斯特儀器有限公司)；ht-20-5mt雙人超凈臺(蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司)；微量移液器(上海熱電儀器有限公司)；ldzx-50k高壓滅菌器(上海三申醫(yī)療器械有限公司)。1.2試藥牡丹酚按本發(fā)明方法由實(shí)施例1從牡丹皮中提取制備而得，經(jīng)丹皮酚(牡丹酚)對照品的hplc對照，并按藥典牡丹皮中丹皮酚(牡丹酚)的含量測定方法測定，測得牡丹酚的純度含量為99.3％，其牡丹酚照片圖及測定色譜圖分別見圖1與圖2。1.3菌種金黃色葡萄球菌(cmcc26003)、表皮葡萄球菌(atcc12228)、大腸桿菌(jm110)、痢疾志賀氏菌(cmcc51252)、鼠傷寒沙門氏菌(cmcc50115)、乙型副傷寒沙門氏菌(cmcc50094)均從廣東省微生物菌種保藏中心購買。2方法與結(jié)果2.1牡丹酚水溶液的制備將實(shí)施例1制備的牡丹酚1.5g加入100ml的加熱至50℃的蒸餾水，50℃水浴中加熱至牡丹酚完全容解，得到15mg·ml-1牡丹酚水溶液，備用。2.2菌液的制備將不同菌種的單個(gè)菌落分別接種于lb培養(yǎng)液中，37℃恒溫?fù)u床增菌培養(yǎng)18～24h。再取出少量菌液，用滅菌的濃度為質(zhì)量百分比0.9％的氯化鈉溶液稀釋至107～108cfu·ml-1。2.3抑菌實(shí)驗(yàn)2.3.1藥敏紙片法制作含有不同濃度牡丹酚且直徑為5mm的藥敏紙片。將不同的菌種100μl涂布于lb培養(yǎng)基上，當(dāng)培養(yǎng)基表面干燥后，將紙片貼于培養(yǎng)基表面，37℃培養(yǎng)24h后，觀察并測定抑菌環(huán)直徑，重復(fù)3次，陰性對照組用濃度為質(zhì)量百分比0.9％氯化鈉溶液紙片。2.3.2二倍稀釋法在5ml帶塞滅菌試管中分別加入各菌種所需培養(yǎng)基2.0ml，每種菌種各8管。按1～8編號，分別在第1管中加入丹皮酚溶液2ml，混勻后取出2.0ml放入第2管，采用二倍稀釋法，依次將藥液吸收成1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64系列溶液，即含藥量分別為7.50、3.75、1.88、0.94、0.47、0.24mg·ml-1。各管均加入濃度約為5×105cfu·ml-1的各病原指示菌菌液0.2ml，同時(shí)分別設(shè)陰性對照管(含藥液不含菌液)，陽性對照管(含菌液不含藥物)。37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后觀察菌種生長情況。病原菌濃度計(jì)算方法：觀察平板上的菌落形成的單位(cfu)。cfu≤5的濃度為抑菌濃度，標(biāo)記“-”號，cfu≥5的濃度為無抑菌濃度，標(biāo)記“+”，產(chǎn)生抑菌作用的最小濃度表示該管藥量即是受試藥的最低抑菌濃度(mic)。2.4結(jié)果與討論2.4.1結(jié)果紙片法測定牡丹酚對6種菌的抑菌活性見表1；二倍稀釋法測定丹皮酚對6種菌的mic值見表2。表1丹皮酚對6種菌的平均抑菌環(huán)直徑mm表2丹皮酚對6種菌的mic值n＝3，mg·ml-1由表1，2可知，牡丹酚對6種菌均有明顯的抑菌作用，并隨著濃度的增加抑菌作用增強(qiáng)。其中對金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和大腸桿菌的抑菌作用最強(qiáng)，mic均為0.94mg·ml-1；對鼠傷寒沙門氏菌和乙型副傷寒沙門氏菌抑菌作用其次，mic為1.88mg·ml-1；對變形桿菌抑菌作用最弱，mic為3.75mg·ml-1。2.4.2討論本發(fā)明用藥敏紙片法和試管二倍稀釋法考察了牡丹酚對金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、痢疾志賀氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、乙型副傷寒沙門氏菌抑菌作用。研結(jié)果顯示牡丹酚對金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和大腸桿菌抑菌作用最強(qiáng)，其次是鼠傷寒沙門氏菌和乙型副傷寒沙門氏菌，對變形桿菌作用較弱。結(jié)果提示：牡丹酚及其化妝品制劑在臨床有較強(qiáng)的抗菌消炎作用，能抑制金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、痢疾志賀氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、乙型副傷寒沙門氏菌等細(xì)菌；有顯著的抗菌消炎、促進(jìn)皮膚新陳代謝，去粉刺作用。實(shí)施例5：本發(fā)明方法提取分離的牡丹酚對酪氨酸酶活性抑制實(shí)驗(yàn)?zāi)档し铀芤河休^好的抗菌消炎作用，能抑制金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、痢疾志賀氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、乙型副傷寒沙門氏菌；此外，牡丹酚對酪氨酸酶活性有抑制作用。本試驗(yàn)通過牡丹酚溶液對酪氨酸酶的抑制試驗(yàn)，證明本發(fā)明的牡丹酚具有顯著的美白作用，實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果如下：1、實(shí)驗(yàn)原理在皮膚黑色素生物合成中，酪氨酸酶是關(guān)鍵酶，作用于多巴，形成多巴醌，后者自發(fā)進(jìn)行一系列反應(yīng)最后形成黑色素。酪氨酸酶在ph6.8的磷酸緩沖液中，可催化多巴轉(zhuǎn)化成多巴醌(呈腎上腺素紅色)，在分光光度計(jì)475nm處可測定吸光值。具有抑制酪氨酸酶活性作用的物質(zhì)可以減少多巴轉(zhuǎn)化成多巴醌，從而降低吸光值，根據(jù)吸光值的變化，評估被測物質(zhì)對酪氨酸酶的抑制作用。2材料與方法2.1儀器與試藥2.1.1儀器dk-98-iia數(shù)顯電熱恒溫水浴鍋(天津泰斯特儀器有限公司)；thermomultiskan酶標(biāo)儀(山東省科學(xué)院生物研究所)；微量移液器(上海熱電儀器有限公司)。2.1.2試藥牡丹酚按本發(fā)明方法由實(shí)施例1從牡丹皮中提取制備而得，經(jīng)丹皮酚(牡丹酚)對照品的hplc對照，并按藥典牡丹皮中丹皮酚(牡丹酚)的含量測定方法測定，測得牡丹酚的純度含量為99.3％，其牡丹酚照片圖及測定色譜圖分別見圖1與圖2；酪氨酸酶溶液(購自sigma公司)；多巴l-dopa(購自sigma公司)；pbs溶液(ph6.8，0.1m)。2.2試驗(yàn)溶液的制備與試驗(yàn)方法2.2.1試驗(yàn)溶液的制備牡丹酚溶液：精密稱取牡丹酚1.5g，加入加熱至50℃的pbs溶液(ph6.8)100ml，50℃水浴中加熱至牡丹酚完全容解，得15mg·ml-1牡丹酚pbs溶液(ph6.8)；再分別吸取一定量的牡丹酚pbs溶液，分別加入對應(yīng)量的溶液(ph6.8)，分別制成對應(yīng)濃度的牡丹酚溶液，備用。2.2.1試驗(yàn)方法在樣品管和樣品對照管中各加入1.0ml對應(yīng)濃度的牡丹酚溶液，陰性對照管和空白對照管則分別加入1.0mlpbs。在樣品管和陰性對照管中各加入0.5ml(100u/ml)酪氨酸酶溶液，樣品對照與空白對照管以0.5mlpbs溶液代替。振搖混勻，30℃水槽孵育10分鐘。在各管中加入2.0ml的5×10-4g/ml的多巴l-dopa，繼續(xù)孵育5分鐘，即刻測定在475nm處的吸光值(abs)。計(jì)算對酪氨酸酶活性的抑制率：抑制率(％)＝[1-(t-t0)/(c-c0)]×100％式中：t-樣品管abs；t0-樣品對照管abs；c-陰性對照管abs；c0-空白對照abs。3結(jié)果與討論3.1結(jié)果牡丹酚溶液對酪氨酸酶活性的抑制作用試驗(yàn)結(jié)果見表3，結(jié)果表明：本發(fā)明方法提取制備的牡丹酚具有抑制酪氨酸酶活性的作用。表3牡丹酚溶液對酪氨酸酶活性的抑制作用實(shí)驗(yàn)濃度(mg/ml)3.750.940.24ic50(mg/ml)抑制率(％)96.7646.510.000.963.2討論本發(fā)明方法提取分離的牡丹酚具有抑制酪氨酸酶活性的作用，且這種抑制作用與濃度呈依賴關(guān)系；在3.75mg/ml的濃度下對酪氨酸酶的抑制率高達(dá)96.76％，證實(shí)本發(fā)明方法提取分離的牡丹酚具有顯著美白功效。實(shí)施例6：牡丹酚化妝品制備實(shí)例(1)面霜的制備組方：制備工藝：①取牡丹酚、鯨蠟硬脂基葡糖苷、十六-十八醇、辛酸/癸酸三甘油酯、霍霍巴油、棕櫚酸異丙酯、甘油混合加熱至60℃，作為a相，保溫備用；②取甘草酸二鉀、加入漢生膠、卡波940、透明質(zhì)酸鈉、去離子水，混合加熱至60℃，分散均勻，作為b相，保溫備用；③將a相在均質(zhì)下慢慢加入到預(yù)先分散均勻并加熱至80℃的b相中，加入環(huán)二甲基硅油345均質(zhì)3分鐘，加入氫氧化鈉調(diào)節(jié)ph6-7，攪拌冷卻到50℃，加入香精，攪拌、冷卻到35℃即得。(2)乳液的制備組方：制備工藝：①取牡丹酚、環(huán)戊硅甲基氧烷995、凡士林、吐溫-80、維生素e醋酸酯、甘油混合加熱至60℃，作為a相，保溫備用；②取甘草酸二鉀，加入漢生膠、carbopolultrez10、1,3-丁二醇、去離子水，混合加熱至60℃，分散均勻，作為b相，保溫備用；③將a相在均質(zhì)下慢慢加入到預(yù)先分散均勻并加熱至80℃的b相中，均質(zhì)3分鐘，加入三乙醇胺調(diào)節(jié)ph6-7，攪拌冷卻到50℃，加入香精和防腐劑phenonip，攪拌、冷卻到35℃即得。(3)眼霜的制備組方：制備工藝:①取甘草酸二鉀，加入1,3-丁二醇、綠茶提取物、乙二胺四乙酸二鈉、去離子水，分散均勻，加熱至50℃，攪拌直至清澈；在攪拌下緩慢加入有機(jī)硅彈性體，作為a相，備用；②取牡丹酚、dc245、霍霍巴油、維生素e醋酸酯、維生素a棕櫚酸酯混合加熱至60℃，作為b相，保溫備用；③將a相在均質(zhì)下慢慢加入到預(yù)先分散均勻并加熱至60℃的b相中，均質(zhì)3分鐘，冷卻到35℃即得。(4)啫喱的制備組方：制備工藝:①取牡丹酚、甘草酸二鉀，加入聚丙烯酸、甘油、1,3-丁二醇、巖藻聚糖硫酸酯、透明質(zhì)酸鈉，攪拌分散均勻，作為a相，備用；②取去離子水加入a相，分散均勻，加熱至60℃，加入三乙醇胺調(diào)節(jié)ph6-7，攪拌，冷卻到50℃加入香精、甲基異噻唑琳酮，攪拌、冷卻到35℃即得。上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁12