本發(fā)明屬于銀耳加工技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種銀耳多糖及其制備方法。

背景技術(shù)：

銀耳，又名白木耳，為擔(dān)子菌綱銀耳科銀耳的干燥子實體，為食藥兩用菌，含有豐富的多糖和蛋白等物質(zhì)。銀耳多糖，其主鏈為1-3連接的甘露糖組成；在主鏈的2，4和6位具有分支點，連接著由葡萄糖、甘露糖、木糖、巖藻糖組成的側(cè)鏈；其非還原末端主要為葡萄糖醛酸構(gòu)成，包括酸性雜多糖、中性雜多糖、胞壁多糖、胞外多糖和酸性低聚糖等多種組分，具有保濕性能、增稠穩(wěn)定性能和抗氧化性能，富含天然特性膠質(zhì)-果膠；果膠能夠促進(jìn)糞便中脂肪、中性類固醇及膽汁的排泄，而增加中性類固醇的排泄有利于降低與性激素有關(guān)癌癥的患病率；果膠還能促進(jìn)胃腸道中的鉛、汞、錳及鈹?shù)呐欧?，是高檔的天然食品添加濟(jì)和保健品，在食品上可作為膠凝劑、增稠劑、穩(wěn)定劑、懸浮劑、乳化劑、增香增效劑；在醫(yī)藥保健品上可顯著降低血糖，血脂，減少膽固醇，疏通血管，對糖尿病、高血壓、便秘，解除鉛中毒都存有明顯作用，還可用于化妝品，對保護(hù)皮膚，防止紫外線輻射，冶療創(chuàng)口，美容養(yǎng)顏都存在一定的作用，長期使用有很好的潤膚功效，是一種優(yōu)良的化妝品添加劑，在日化領(lǐng)域受到廣泛的重視，合理地利用銀耳資源和研究銀耳多糖的提取純化工藝具有重要意義，

銀耳多糖是一種結(jié)構(gòu)復(fù)雜的大分子多糖，所以銀耳多糖的提取及純化就是現(xiàn)在面臨的一個難題，提取不當(dāng)或純化不當(dāng)，銀耳多糖很容易失去活性?，F(xiàn)有的銀耳多糖的制備方法多采用熱水浸取法、溶劑提取法、酸堿或微波提取，從銀耳子實體或孢子中提取銀耳多糖，這些方法是通過破壞銀耳細(xì)胞而使胞內(nèi)多糖溶出，得到的粗多糖中含有大量的蛋白質(zhì)，為提高多糖純度，還需要再采用sevag法除去多糖中的蛋白質(zhì)，這些提取方法存在提取效率低、溶劑殘留，設(shè)備要求高、能耗高、成本高、多糖純度低、破壞多糖結(jié)構(gòu)、易變性失活、多糖收率低，不利于工業(yè)化生產(chǎn)等問題，因此，現(xiàn)在迫切地需要提供一種新的技術(shù)方案來解決上述問題。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種銀耳多糖及其制備方法，本發(fā)明提供的方法簡單易于操作，獲得的銀耳多糖純度較高，且收率較高。

本發(fā)明提供了一種銀耳多糖的制備方法，包括以下步驟：

a)將銀耳預(yù)處理后與纖維素酶混合進(jìn)行酶解，然后熱水浸提；

b)將得到的浸提液過濾之后純化；

c)將純化后的產(chǎn)物進(jìn)行濃縮、醇沉、脫色后真空干燥、粉碎，得到銀耳多糖。

本發(fā)明采用酶處理結(jié)合熱水煮提的方法提取銀耳多糖，不僅可以節(jié)約成本、減少污染，而且可以去除銀耳細(xì)胞壁，便于深層次提??；后續(xù)再通過過濾、葡聚糖凝膠柱純化，獲得的銀耳多糖純度可達(dá)93％以上，總糖含量在95％以上，其中醛酸含量在20％～35％之間，蛋白含量在2％以下，果膠含量2％～10％。本發(fā)明提供的方法在中性條件下進(jìn)行提取，便于銀耳膳食纖維、銀耳蛋白等的回收再利用，可將提取過的殘渣進(jìn)行降解或高溫處理，進(jìn)行不同分子量規(guī)格的提??；也可將提取過的殘渣直接做為動物飼料或植物肥料使用，從而有效地利用資源和最大限度的減少環(huán)境污染；此外，本發(fā)明提供的方法提取過程中沒有使用酸堿和其他有機(jī)化學(xué)試劑，省去了大量的溶劑回收工序，具有節(jié)能、環(huán)保的優(yōu)點。本發(fā)明提供的提取方法簡單、易于操作，不需要特殊設(shè)備，便于工業(yè)化生產(chǎn)，而且，本發(fā)明提供的方法提取率高、耗時短，獲得的銀耳多糖純度高。

本發(fā)明首先對銀耳進(jìn)行預(yù)處理，然后對銀耳進(jìn)行酶解和熱水浸提。其中，所述預(yù)處理具體為：

將銀耳用水浸泡1～3次，每次1～2小時清洗干凈，然后粉碎至1～3公分。

預(yù)處理的目的是將銀耳子實體進(jìn)行清洗和粉碎，便于后續(xù)操作。預(yù)處理完畢后，將獲得的銀耳粉與纖維素酶和水混合進(jìn)行酶解，所述酶解的溫度為45℃～55℃，時間為40～60min；所述纖維素酶的加入量為銀耳粉的0.5～1wt％；所述水的用量為銀耳粉用量的30～70倍。

酶解完畢后，升溫進(jìn)行熱水浸提，所述浸提在攪拌條件下浸提；所述浸提的溫度為80～100℃，時間為1～4h。

浸提完畢后，將得到的浸提液過濾之后純化，其中，所述過濾具體包括：

將得到的浸提液經(jīng)100目～400目濾布過濾后經(jīng)過0.1～1μm的過濾器過濾。

具體而言，所述過濾具體包括：

將得到的浸提液依次經(jīng)100目、200目、400目的濾布過濾后經(jīng)過0.1～1μm的過濾器過濾。

過濾完畢后，將得到的浸提物經(jīng)過葡聚糖凝膠柱純化，采用去離子水和氯化鈉溶液進(jìn)行混合梯度洗脫。其中，所述葡聚糖凝膠柱的填料選自sephadexg-200、sephadexs-200、sephacryls-400或sephacryls-500。上柱完成后，用去離子水與3mol/l的氯化鈉溶液混合梯度洗脫，最后用去離子水洗脫，洗脫至流出液檢測不到多糖，停止洗脫，收集洗脫液，洗脫條件為：柱大小為2～5cm×20～90cm，流速為30～90ml/小時；洗脫程序為：

經(jīng)過酶解、熱水浸提、過濾和純化后，保留了銀耳中的多糖、蛋白和果膠等營養(yǎng)物質(zhì)，再對其進(jìn)行濃縮、醇沉、脫色后干燥、粉碎，即可得到純度較高的銀耳多糖。

具體而言，將純化后的濾液使用單效濃縮器濃縮至比重為1：3～1：7，然后加入乙醇或甲醇進(jìn)行醇沉，將得到的沉淀用乙醇脫色后，40～80℃熱風(fēng)干燥或真空干燥，粉碎后得到銀耳多糖。

參見圖1，圖1為本發(fā)明實施例提供的銀耳多糖的一個典型處理工藝流程圖，首先將銀耳浸泡、粉碎后，加0.5wt％～1wt5的纖維素酶，45℃～55℃酶解40min～60min；再加入30～70倍80～100℃熱水浸提1～4h，然后經(jīng)過100目～400目濾布粗濾，0.22μm濾芯精濾，再經(jīng)過葡聚糖凝膠柱梯度洗脫純化，單效濃縮器濃縮、甲醇或乙醇沉淀、乙醇脫色、真空干燥、粉碎，得到銀耳多糖。其中，銀耳浸泡次數(shù)為1～3次，粉碎后提及為3～5公分；梯度洗脫采用去離子水與3mol/l的氯化鈉溶液不同比例洗脫，最后用水將銀耳多糖洗脫下來；單效濃縮器濃縮提及為原來體積的三分之一至七分之一。

本發(fā)明還提供了一種上述技術(shù)方案所述的制備方法制備得到的銀耳多糖。所述銀耳多糖的純度為93％以上，總糖含量為95％以上，優(yōu)選95％～99％，醛酸含量為20％～35％，蛋白含量為2％以下，優(yōu)選1％～2％，果膠含量為2％～10％。

本發(fā)明采用酶處理結(jié)合熱水煮提的方法提取銀耳多糖，不僅可以節(jié)約成本、減少污染，而且可以去除銀耳細(xì)胞壁，便于深層次提取。實驗結(jié)果表明，本發(fā)明提供的方法獲得的銀耳多糖純度可達(dá)93％以上，總糖含量在95％以上，其中醛酸含量在20％～35％之間，蛋白含量在2％以下，果膠含量2％～10％。另外，本發(fā)明提供的方法獲得的銀耳多糖的提取率在15％以上(以干銀耳計)。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實施例提供的銀耳多糖的一個典型處理工藝流程圖；

圖2為本發(fā)明實施例6提供的銀耳多糖的一個典型處理工藝流程圖。

具體實施方式

實施例1

將干燥的銀耳子實體用水浸泡1次，清洗干凈，打碎至1～3公分大小；將粉碎的原料放入提取罐中，加30倍于干料的水，加入0.5wt％的纖維素酶，40℃水溫下攪拌酶解60min，將溫度升至80℃，攪拌浸提1小時，依次經(jīng)100目、200目、400目的濾布過濾，濾液最終經(jīng)0.1μm的過濾器過濾；將濾液經(jīng)sephadexg-200純化，用去離子水與3mol/l的氯化鈉溶液混合梯度洗脫，洗脫至流出液檢測不到多糖，停止洗脫，收集洗脫液，洗脫條件為：柱大小為2.6cm×30cm，流速為90ml/小時，洗脫程序如下：

將濾液使用單效濃縮器濃縮至1:3；均勻攪拌下，將濃縮液和乙醇充分混勻，使混合液體的乙醇終濃度為50％，收集沉淀，用純乙醇脫水脫色，收集沉淀；40℃真空干燥，粉碎，得到銀耳多糖。

銀耳多糖收率在15.1％(以干銀耳重量計)，數(shù)均分子量115.24萬；

銀耳多糖純度93.2％，其中，總糖含量95.6％，醛酸含量22.3％，蛋白含量1.63％，果膠2.6％。

實施例2

將干燥的銀耳子實體用水浸泡2次，清洗干凈，打碎至1～3公分大??；將粉碎的原料放入提取罐中，加50倍于干料的水，加入0.7％的纖維素酶，50℃水溫下攪拌酶解50min，將溫度升至100℃，攪拌浸提2小時，依次經(jīng)100目、200目、400目的濾布過濾，濾液最終經(jīng)0.5μm的過濾器過濾；將濾液經(jīng)sephadexs-200純化，用去離子水與3mol/l的氯化鈉溶液混合梯度洗脫，洗脫至流出液檢測不到多糖，停止洗脫，收集洗脫液，洗脫條件為：柱大小為3cm×50cm，流速為70ml/小時，洗脫程序如下：

將濾液使用單效濃縮器濃縮至1:5；均勻攪拌下，將濃縮液和甲醇充分混勻，使混合液體的甲醇終濃度為80％，收集沉淀，用95％乙醇脫水脫色，收集沉淀；80℃熱風(fēng)干燥，粉碎，得到銀耳多糖。

銀耳多糖收率在24.6％(以干銀耳重量計)，數(shù)均分子量124.07萬；

銀耳多糖純度97.1％，其中，總糖含量96.2％，醛酸含量25.8％，蛋白含量1.20％，果膠3.1％。

實施例3

將干燥的銀耳子實體用水浸泡2次，清洗干凈，打碎至1～3公分大??；將粉碎的原料放入提取罐中，加70倍于干料的水，加入1％的纖維素酶，60℃水溫下攪拌酶解60min，將溫度升至100℃，攪拌浸提4小時，依次經(jīng)100目、200目、400目的濾布過濾，濾液最終經(jīng)1μm的過濾器過濾；將濾液經(jīng)sephacryls-400純化，用去離子水與3mol/l的氯化鈉溶液混合梯度洗脫，洗脫至流出液檢測不到多糖，停止洗脫，收集洗脫液，洗脫條件為：柱大小為5cm×30cm，流速為50ml/小時，洗脫程序如下：

將濾液使用單效濃縮器濃縮至1:7；均勻攪拌下，將濃縮液和乙醇充分混勻，使混合液體的乙醇終濃度為70％，收集沉淀，用純乙醇脫水脫色，收集沉淀；60℃真空干燥，粉碎，得到銀耳多糖。

銀耳多糖收率在20.6％(以干銀耳重量計)，數(shù)均分子量120.43萬；

銀耳多糖純度93.6％，其中，總糖含量96.4％，醛酸含量26.9％，蛋白含量1.89％，果膠2.9％。

實施例4

將干燥的銀耳子實體用水浸泡3次，清洗干凈，打碎至1～3公分大??；將粉碎的原料放入提取罐中，加60倍于干料的水，加入0.7％的纖維素酶，50℃水溫下攪拌酶解40min，將溫度升至90℃，攪拌浸提3小時，依次經(jīng)100目、200目、400目的濾布過濾，濾液最終經(jīng)0.7μm的過濾器過濾；將濾液經(jīng)sephacryls-500純化，用去離子水與3mol/l的氯化鈉溶液混合梯度洗脫，洗脫至流出液檢測不到多糖，停止洗脫，收集洗脫液，洗脫條件為：柱大小為3.8cm×60cm，流速為40ml/小時，洗脫程序如下：

將濾液使用單效濃縮器濃縮至1:6；均勻攪拌下，將濃縮液和乙醚充分混勻，使混合液體的乙醚終濃度為80％，收集沉淀，用95％乙醇脫水脫色，收集沉淀；70℃熱風(fēng)干燥，粉碎，得到銀耳多糖。

銀耳多糖收率在23.5％(以干銀耳重量計)，數(shù)均分子量122.71萬；

銀耳多糖純度96.2％，其中，總糖含量97.5％，醛酸含量29.1％，蛋白含量2.01％，果膠4.8％。

實施例5

將干燥的銀耳子實體用水浸泡1次，清洗干凈，打碎至1～3公分大??；將粉碎的原料放入提取罐中，加50倍于干料的水，加入0.5％的纖維素酶，50℃水溫下攪拌酶解60min，將溫度升至80℃，攪拌浸提4小時，依次經(jīng)100目、200目、400目的濾布過濾，濾液最終經(jīng)0.3μm的過濾器過濾；將濾液經(jīng)sephacryls-500純化，用去離子水與3mol/l的氯化鈉溶液混合梯度洗脫，洗脫至流出液檢測不到多糖，停止洗脫，收集洗脫液，洗脫條件為：柱大小為2.6cm×70cm，流速為90ml/小時，洗脫程序如下：

將濾液使用單效濃縮器濃縮至1:3；均勻攪拌下，將濃縮液和乙醇充分混勻，使混合液體的乙醇終濃度為80％，收集沉淀，用純乙醇脫水脫色，收集沉淀；80℃熱風(fēng)干燥，粉碎，得到銀耳多糖。

銀耳多糖收率在20.8％(以干銀耳重量計)，數(shù)均分子量120.1萬；

銀耳多糖純度93.8％，其中，總糖含量96.8％，醛酸含量21.7％，蛋白含量1.43％，果膠4.3％。

實施例6

參見圖2，圖2為本發(fā)明實施例6提供的銀耳多糖的一個典型處理工藝流程圖，首先將銀耳浸泡、粉碎后，加0.8wt％的纖維素酶，45℃酶解50min；再加入60倍90℃熱水浸提3h，然后經(jīng)過200目濾布和400目濾布粗濾，0.22μmmpe折疊濾芯精濾，再經(jīng)過sephacryls-400葡聚糖凝膠柱梯度洗脫純化，20萬分子量超濾濃縮、3倍體積乙醇沉淀、1倍體積乙醇脫色、40℃真空干燥、粉碎，得到銀耳多糖。

其中，銀耳浸泡次數(shù)為三次；浸提為將銀耳加入到水溫到達(dá)90℃的熱水中浸提；梯度洗脫是采用去離子水與3mol/l的氯化鈉溶液不同比例洗脫。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。