一、技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及化學(xué)制藥領(lǐng)域，具體涉及一種達肝素鈉和那屈肝素鈣的聯(lián)合制備方法。
二、技術(shù)背景
達肝素鈉和那屈肝素鈣均為低分子量肝素的一種，都是肝素鈉在酸性條件下，被亞硝酸鈉裂解制得。
達肝素鈉可用于治療急性深靜脈血栓，預(yù)防急性腎功能衰竭或慢性腎功能不全者進行血液透析和血液過濾期間體外循環(huán)系統(tǒng)中的抗凝血，治療不穩(wěn)定型冠狀動脈疾病，預(yù)防與手術(shù)有關(guān)的血栓形成。歐洲藥典規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，抗xa效價為110～210iu/mg，抗xa/抗iia效價比值為1.9～3.2，重均分子量為5600～6400。
那屈肝素鈣主要用于在外科手術(shù)中，用于靜脈血栓形成中度或高度危險的情況，預(yù)防靜脈血栓栓塞性疾病，治療已形成的深靜脈血栓；聯(lián)合阿司匹林用于不穩(wěn)定性心絞痛和非q波性心肌梗塞急性期的治療；在血液透析中預(yù)防體外循環(huán)中的血凝塊形成。歐洲藥典規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，抗xa效價為95～130iu/mg，抗xa/抗iia效價比值為2.5～4.0，分子量為3600～5000。
與普通肝素相比，這兩種低分子肝素在抗血栓形成、生物利用度和出血不良反應(yīng)等方面具有明顯優(yōu)勢，已廣泛應(yīng)用于臨床。
目前在生產(chǎn)低分子肝素工藝中，每次投料只能生產(chǎn)出一種低分子肝素，成本較高。聯(lián)合生產(chǎn)兩種低分子肝素的方法將更加有效利用原料，降低生產(chǎn)成本，目前尚未見報道。
三、
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種達肝素鈉和那屈肝素鈣的聯(lián)合制備工藝，該工藝一次投料，可以制備達肝素鈉和那屈肝素鈣兩種產(chǎn)品。該工藝通過肝素鈉降解、還原，乙醇分級沉淀，來制備達肝素鈉；乙醇分級沉淀過程中的上層料液經(jīng)回收，再經(jīng)過乙醇分級沉淀，鈉鈣置換，制備那屈肝素鈣。該方法簡單易行，操作便捷，更重要的是其綜合收率較高，可以達到60％以上，具有廣闊的應(yīng)用前景。
文中提到的重均分子量和效價檢測方法均為藥典方法，乙醇度數(shù)為折合20℃時，酒精計測量值。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)：
1)降解：以普通肝素鈉為原料，將其溶解，調(diào)節(jié)ph至2.0～3.5，然后加入亞硝酸鈉，攪拌反應(yīng)5～6小時，控制所得產(chǎn)品分子量在2800～3600，得到降解料液；將降解料液的ph調(diào)節(jié)至中性，加入硼氫化鈉，10℃～30℃攪拌反應(yīng)6小時；調(diào)節(jié)料液ph至4.0～4.5，攪拌1小時得到還原料液。
2)達肝素鈉制備：將還原料液加入乙醇至35～45°得到沉淀，沉淀中低分子肝素重均分子量控制在5600～6400。有時分子量會低于這個范圍。如果低于這個范圍，收集沉淀用5倍重量水溶解后加入料液體積3％的氯化鈉，再用乙醇分級35～45°得到沉淀，重復(fù)操作，直至重均分子量達到5600～6400。
3)那屈肝素鈣制備：制備達肝素乙醇分級沉淀過程中的上層含乙醇料液，再加入2～4倍料液體積的乙醇，收集沉淀。沉淀用5倍重量水溶解后加入3％氯化鈉，再用乙醇分級沉淀，乙醇度數(shù)控制在45～55°，收集沉淀，沉淀中低分子肝素重均分子量控制在3600～5000。有時分子量會低于這個范圍。如果低于這個范圍，收集沉淀用5倍重量水溶解后加入料液體積3％的氯化鈉，再用乙醇分級45～55°得到沉淀，重復(fù)操作，直至重均分子量達到3600～5000。沉淀用水溶解后再經(jīng)過鈉鈣置換，得到那屈肝素鈣。
四、具體實施方案
實施例1，稱取肝素鈉2kg，并將其溶解，調(diào)節(jié)ph至2.0～3.5，然后加入亞硝酸鈉，攪拌反應(yīng)6小時，得到降解料液，其中低分子肝素重均分子量為2818。
將降解料液的ph調(diào)節(jié)至中性，加入硼氫化鈉，10℃～30℃攪拌反應(yīng)6小時，調(diào)節(jié)料液ph至4.0～4.5，攪拌1小時得到還原料液。
將還原料液加入乙醇分級沉淀，控制乙醇度數(shù)為35°。收集沉淀，沉淀用5倍重量水溶解后加入3％氯化鈉，再用乙醇分級沉淀，乙醇度數(shù)控制在35°，收集沉淀，檢測沉淀中低分子肝素重均分子量5967。沉淀干燥后得到達肝素鈉，重量0.67kg，收率33.5％。
乙醇分級沉淀過程中的上層料液，再加入2倍料液體積的乙醇，收集沉淀。將收集的沉淀用5倍重量水溶解后加入料液體積3％的氯化鈉，再用乙醇分級沉淀，控制乙醇度數(shù)為45°。沉淀用5倍重量水溶解后加入3％氯化鈉，再用乙醇分級沉淀，乙醇度數(shù)控制在45°，收集沉淀檢測沉淀中低分子肝素重均分子量4359。再經(jīng)過鈉鈣置換，得到那屈肝素鈣重量0.71kg，收率35％。
實施例2，稱取肝素鈉2kg，并將其溶解，調(diào)節(jié)ph至2.0～3.5，然后加入亞硝酸鈉，攪拌反應(yīng)5小時，得到降解料液，其中低分子肝素重均分子量為3591。
將降解料液的ph調(diào)節(jié)至中性，加入硼氫化鈉，10℃～30℃攪拌反應(yīng)6小時，調(diào)節(jié)料液ph至4.0～4.5，攪拌1小時得到還原料液。
將還原料液加入乙醇分級沉淀，控制乙醇度數(shù)為45°，收集沉淀檢測沉淀中低分子肝素重均分子量6055。沉淀干燥后得到達肝素鈉，重量0.69kg，收率34.5％。
乙醇分級沉淀過程中的上層料液，再加入2倍料液體積的乙醇，收集沉淀。將收集的沉淀用5倍重量水溶解后加入料液體積3％的氯化鈉，再用乙醇分級沉淀，控制乙醇度數(shù)為55°，收集沉淀檢測沉淀中低分子肝素重均分子量4864。再經(jīng)過鈉鈣置換，得到那屈肝素鈣重量0.66kg，收率33％。
實施例3，稱取肝素鈉2kg，并將其溶解，調(diào)節(jié)ph至2.0～3.5，然后加入亞硝酸鈉，攪拌反應(yīng)6小時，得到降解料液，其中低分子肝素重均分子量為3346。
將降解料液的ph調(diào)節(jié)至中性，加入硼氫化鈉，10℃～30℃攪拌反應(yīng)6小時，調(diào)節(jié)料液ph至4.0～4.5，攪拌1小時得到還原料液。
將還原料液加入乙醇分級沉淀，控制乙醇度數(shù)為40°，收集沉淀檢測沉淀中低分子肝素重均分子量5755。沉淀干燥后得到達肝素鈉，重量0.60kg，收率30％。
乙醇分級沉淀過程中的上層料液，再加入2倍料液體積的乙醇，收集沉淀。將收集的沉淀用5倍重量水溶解后加入料液體積3％的氯化鈉，再用乙醇分級沉淀，控制乙醇度數(shù)為50°，收集沉淀檢測沉淀中低分子肝素重均分子量4379。再經(jīng)過鈉鈣置換，得到那屈肝素鈣重量0.64kg，收率32％。
達肝素鈉檢測結(jié)果
那屈肝素鈣檢測結(jié)果