本發(fā)明涉及一種亞硝酸鹽降解菌的培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
目前污水中，都會含有亞硝酸鹽，但是在污水中對亞硝酸鹽如何清潔有效的去除，尚處于研究階段。經(jīng)檢索并非發(fā)現(xiàn)相關(guān)文獻(xiàn)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
為克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明提供一種亞硝酸鹽降解菌的培養(yǎng)方法，本發(fā)明的技術(shù)方案是：
一種亞硝酸鹽降解菌的培養(yǎng)方法，包括以下步驟：
(1)制備營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，具體制備方法如下：稱取蛋白胨10份，牛肉膏粉5份，瓊脂粉18份，氯化鈉5份，按照配比進(jìn)行混合，混合后在微波爐中加熱，加熱時(shí)間：1-2min，加熱溫度：70-80℃，至瓊脂粉完全融化為止，放入高壓滅菌鍋進(jìn)行滅菌，滅菌溫度121℃，時(shí)間30min，然后在生物安全柜內(nèi)倒入已滅菌的干燥培養(yǎng)皿內(nèi)，每個(gè)培養(yǎng)皿倒入15ml，將倒好培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿放在安全柜內(nèi)至冷卻，冷卻時(shí)間：4-5h，冷卻溫度：室溫25℃，冷卻后可放入冰箱冷藏備用；
(2)將亞硝酸鹽降解菌活化在營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，所述營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基的制備方法如下：稱取蛋白胨10份，牛肉膏粉3份，氯化鈉5份，然后混合，混合后放入30℃的恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)2天，然后在超凈工作臺內(nèi)對肉湯培養(yǎng)基中已活化并生長好的亞硝酸鹽降解菌進(jìn)行平板涂布，同時(shí)將亞硝酸鹽降解菌溶液濃度進(jìn)行梯度稀釋，分別稀釋到10的-2次方，10的-4次方、10的-6次方以及10的-8次方。
(3)用移液槍取稀釋好的亞硝酸鹽降解菌溶液分別200微升，分別注入在培養(yǎng)皿內(nèi)的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，用涂布棒將亞硝酸鹽降解菌溶液涂布均勻，并用記號筆在培養(yǎng)皿的底部進(jìn)行標(biāo)注，然后放入35℃的恒溫培養(yǎng)箱中，進(jìn)行培養(yǎng)，1-2天后，觀察營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上亞硝酸鹽降解菌的生長情況，用記號筆分別劃出培養(yǎng)基上生長的不同形態(tài)的亞硝酸鹽降解菌，并標(biāo)注序號，然后對標(biāo)注的亞硝酸鹽降解菌進(jìn)行平板劃線；
(4)將劃好的平板放入恒溫培養(yǎng)箱，35℃，培養(yǎng)1-2天，觀察平板上亞硝酸鹽降解菌的生長，并對生長好的亞硝酸鹽降解菌進(jìn)行染色鏡檢，記錄其形態(tài)特征，重復(fù)該操作，直至顯微鏡下觀察的亞硝酸鹽降解菌形態(tài)完全純化為止，將純化的亞硝酸鹽降解菌進(jìn)行在試管斜面培養(yǎng)基中進(jìn)行斜面劃線保藏。
所述的步驟(2)中具體稀釋方法為：用注射器取10ml蒸餾水放入試管中，將蒸餾水進(jìn)行滅菌，在生物安全柜內(nèi)，用移液槍取100微升的菌株溶液，注入到無菌蒸餾水的試管中，此時(shí)，該試管中的菌株溶液濃度為10的-2次方，同樣方法，將菌株溶液分別稀釋到10的-4次方、10的-6次方以及10的-8次方。
所述的步驟(3)平板劃線方法如下：在生物安全柜內(nèi)，點(diǎn)燃酒精燈，用接種環(huán)頂部輕觸標(biāo)序號的亞硝酸鹽降解菌，劃在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，每一序號的亞硝酸鹽降解菌在培養(yǎng)基上劃四區(qū)，每劃一區(qū)將接種環(huán)放在酒精燈上燃燒，重復(fù)操作。
所述的步驟(4)試管斜面培養(yǎng)基的制備方法：稱取蛋白胨10份，牛肉膏粉5份，瓊脂粉18份，氯化鈉5份，按照配比進(jìn)行混合，混合后在微波爐中加熱，加熱時(shí)間：1-2min，加熱溫度：70-80℃，至瓊脂粉完全融化為止，用10ml的注射器取5ml注入試管中，將試管放入2l的燒杯進(jìn)行包扎，然后放入高壓滅菌鍋進(jìn)行滅菌，滅菌121℃，時(shí)間30min，滅菌后，將試管取出擺斜面，斜面的擺放標(biāo)準(zhǔn)是斜面上營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的長度不超過整個(gè)試管長度的2/3，靜置8h，待冷凝后，放入冰箱冷藏即可。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是：經(jīng)過本發(fā)明培養(yǎng)的亞硝酸鹽降解菌，能夠有效的去除亞硝酸鹽，而且不會污染環(huán)境。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例來進(jìn)一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)將會隨著描述而更為清楚。但這些實(shí)施例僅是范例性的，并不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
本發(fā)明涉及一種亞硝酸鹽降解菌的培養(yǎng)方法，包括以下步驟：
(1)制備營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，具體制備方法如下：稱取蛋白胨10g/l，牛肉膏粉5g/l，瓊脂粉18g/l，氯化鈉5g/l，按照配比進(jìn)行混合，混合后在微波爐中加熱，加熱時(shí)間：1-2min，加熱溫度：70-80℃，至瓊脂粉完全融化為止，放入高壓滅菌鍋進(jìn)行滅菌，滅菌溫度121℃，時(shí)間30min，然后在生物安全柜內(nèi)倒入已滅菌的干燥培養(yǎng)皿內(nèi)，每個(gè)培養(yǎng)皿倒入15ml，將倒好培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿放在安全柜內(nèi)至冷卻，冷卻時(shí)間：4-5h，冷卻溫度：室溫25℃，冷卻后可放入冰箱冷藏備用；
(2)將亞硝酸鹽降解菌活化在營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，所述營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基的制備方法如下：稱取蛋白胨10份，牛肉膏粉3份，氯化鈉5份，然后混合，混合后放入30℃的恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)2天，然后在超凈工作臺內(nèi)對肉湯培養(yǎng)基中已活化并生長好的亞硝酸鹽降解菌進(jìn)行平板涂布，同時(shí)將亞硝酸鹽降解菌溶液濃度進(jìn)行梯度稀釋，分別稀釋到10的-2次方，10的-4次方、10的-6次方以及10的-8次方。
(3)用移液槍取稀釋好的亞硝酸鹽降解菌溶液分別200微升，分別注入在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，用涂布棒將亞硝酸鹽降解菌溶液涂布均勻，并用記號筆在培養(yǎng)皿的底部進(jìn)行標(biāo)注(標(biāo)注溫度、日期等)，然后放入35℃的恒溫培養(yǎng)箱中，進(jìn)行培養(yǎng)，1-2天后，觀察培養(yǎng)基上亞硝酸鹽降解菌的生長情況，用記號筆分別劃出培養(yǎng)基上生長的不同形態(tài)的亞硝酸鹽降解菌，并標(biāo)注序號，然后對標(biāo)注的亞硝酸鹽降解菌進(jìn)行平板劃線；
(4)將劃好的平板放入恒溫培養(yǎng)箱，35℃，培養(yǎng)1-2天，觀察平板上亞硝酸鹽降解菌的生長，并對生長好的亞硝酸鹽降解菌進(jìn)行染色鏡檢，記錄其形態(tài)特征，重復(fù)該操作，直至顯微鏡下觀察的亞硝酸鹽降解菌形態(tài)完全純化為止，將純化的亞硝酸鹽降解菌進(jìn)行在試管斜面培養(yǎng)基中進(jìn)行斜面劃線保藏。
所述的步驟(2)中具體稀釋方法為：用注射器取10ml蒸餾水放入試管中，將蒸餾水進(jìn)行滅菌，在生物安全柜內(nèi)，用移液槍取100微升的菌株溶液，注入到無菌蒸餾水的試管中，此時(shí)，該試管中的菌株溶液濃度為10的-2次方，同樣方法，將菌株溶液分別稀釋到10的-4次方、10的-6次方以及10的-8次方。
所述的步驟(3)平板劃線方法如下：在生物安全柜內(nèi)，點(diǎn)燃酒精燈，用接種環(huán)頂部輕觸標(biāo)序號的亞硝酸鹽降解菌，劃在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，每一序號的亞硝酸鹽降解菌在培養(yǎng)基上劃四區(qū)，每劃一區(qū)將接種環(huán)放在酒精燈上燃燒，重復(fù)操作。
所述的步驟(4)試管斜面培養(yǎng)基的制備方法：稱取蛋白胨10份，牛肉膏粉5份，瓊脂粉18份，氯化鈉5份，按照配比進(jìn)行混合，混合后在微波爐中加熱，加熱時(shí)間：1-2min，加熱溫度：70-80℃，至瓊脂粉完全融化為止，用10ml的注射器取5ml注入試管中，將試管放入2l的燒杯進(jìn)行包扎，然后放入高壓滅菌鍋進(jìn)行滅菌，滅菌121℃，時(shí)間30min，滅菌后，將試管取出擺斜面，斜面的擺放標(biāo)準(zhǔn)是斜面上營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的長度不超過整個(gè)試管長度的2/3，靜置8h，待冷凝后，放入冰箱冷藏即可。
實(shí)施例：取帶有1l亞硝酸鹽的溶液，其中，亞硝酸鹽的含量為0.138g，接入該亞硝酸鹽降解菌1ml后，亞硝酸鹽的含量為0.011g/l，推算得知，本方法培養(yǎng)的純化后的亞硝酸鹽降解菌對亞硝酸鹽的去除率達(dá)到90％以上。