技術(shù)特征：

1.一種EGFR/L858R突變液體活檢試劑盒，其特征在于，包含EGFR基因上游引物，EGFR突變型基因下游富集引物（野生型阻滯引物），EGFR野生型基因下游富集引物（突變型阻滯引物），qPCR反應(yīng)體系試劑，突變型與野生型EGFR基因的陽(yáng)性質(zhì)粒。

2.一種EGFR/L858R突變液體活檢試劑盒的使用方法，其特征在于，具體步驟包括：

步驟1：針對(duì)突變位點(diǎn)設(shè)計(jì)合成EGFR基因上游引物，突變型基因下游富集引物（野生型阻滯引物），野生型基因下游富集引物（突變型阻滯引物）；

步驟2：樣本處理與DNA提取；

步驟3：qPCR擴(kuò)增方法與定量。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種EGFR/L858R突變液體活檢試劑盒的使用方法，其特征在于：在所述的步驟3中qPCR中的DNA樣本適用于病人血漿中的循環(huán)腫瘤DNA，石蠟切片組織或胸水來(lái)源的腫瘤DNA。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種EGFR/L858R突變液體活檢試劑盒的使用方法，其特征在于：在所述的步驟3中qPCR擴(kuò)增反應(yīng)體系包括反應(yīng)1：1μl EGFR基因上游引物（濃度5-10 μM ），1μl EGFR突變型基因下游富集引物（濃度5-10 μM ）；12.5μl 2× SYBR Green (含熱啟動(dòng)Taq酶 1U)； dNTP 0.5 mM；MgCl₂ 2-5 mM，模板DNA 5 μl（1 ng），總反應(yīng)體系25 μl。

5.據(jù)權(quán)利要求2所述的一種EGFR/L858R突變液體活檢試劑盒的使用方法，其特征在于：在所述的步驟3中qPCR擴(kuò)增反應(yīng)體系包括反應(yīng)2：1μl EGFR基因上游引物（濃度5-10 μM ），1μl EGFR野生型基因下游富集引物（濃度5-10 μM ）；12.5 μl 2× SYBR Green (含熱啟動(dòng)Taq酶 1U)； dNTP 0.5 mM；MgCl₂ 2-5 mM，模板DNA 5 μl（1 ng），總反應(yīng)體系25 μl。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種EGFR/L858R突變液體活檢試劑盒的使用方法，其特征在于：在所述的步驟3中的定量計(jì)算方法，突變型對(duì)野生型基因的相對(duì)值RQ=(1+Ex)^-ΔCt, 其中ΔCt=Ct_mut.-Ct_wt, 在本試劑盒中擴(kuò)增效率Ex=97%，Ct_mut為PCR反應(yīng)1的Ct值，Ct_wt為PCR反應(yīng)2的Ct值。