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用豌豆蛋白廢水液體發(fā)酵生產(chǎn)納豆枯草芽孢桿菌菌劑的菌株、方法及應(yīng)用與流程

文檔序號:12696866閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.用豌豆蛋白廢水液體發(fā)酵生產(chǎn)納豆枯草芽孢桿菌菌劑的菌株,其特征在于其為納豆枯草芽孢桿菌,保藏名稱為:Bacillus subtilis LD-9308,保藏單位:中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心,保藏編號為CGMCC NO.13465,保藏日期:2016年12月19日。

2.用豌豆蛋白廢水液體發(fā)酵生產(chǎn)納豆枯草芽孢桿菌菌劑的方法,其特征在于包括如下步驟:

菌種活化:

采用斜面培養(yǎng)基對保存的納豆枯草芽孢桿菌種進(jìn)行活化,菌種活化用的斜面培養(yǎng)基為固體LB固體培養(yǎng)基(g/L):蛋白胨10,酵母提取物5,氯化鈉10,瓊脂粉15,余量水,pH 7.0-7.5;

在斜面培養(yǎng)基上無菌操作,劃線,置于37℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)10-24小時,備用;

搖瓶種子制備:

搖瓶種子培養(yǎng)基 (g/L):葡萄糖 10-20,蛋白胨 5-15,酵母提取物 3-5, KH2PO4 1-3,MgSO4 0.2-0.5,余量水,pH 6.5-7.5;

250ml三角瓶裝液量為20-50ml,500ml三角瓶裝液量為40-80ml,115℃滅菌20-30分鐘;

在超凈工作臺上,無菌操作接種三角瓶培養(yǎng)基,每瓶接種一環(huán)上述活化后的菌種,置于恒溫?fù)u床37℃培養(yǎng),搖床轉(zhuǎn)速200-250 rpm,培養(yǎng)時間6-15小時;

發(fā)酵種子罐液體菌種制備:

發(fā)酵罐種子培養(yǎng)基(g/L):葡萄糖5-25,硫酸銨5-10,余量為豌豆蛋白廢水,以氨水調(diào)節(jié)pH 6.5-7.5;

115℃滅菌30分鐘,降溫至38℃以下,接種搖瓶種子,接種量0.5%-2.0%(V/V);

培養(yǎng)參數(shù):溫度37±1℃,攪拌轉(zhuǎn)速150-250 rpm,通氣量1:0.2-0.5,培養(yǎng)時間6-12小時;

(4)發(fā)酵培養(yǎng):

發(fā)酵培養(yǎng)基:豌豆蛋白廢水,pH 6.5-7.5;

115℃滅菌30分鐘,降溫至38℃以下,接種種子罐液體菌種,接種量1%-3%(V/V);

培養(yǎng)參數(shù):溫度37±1℃,攪拌轉(zhuǎn)速150-250 rpm,通氣量前10小時1:0.2-0.3,后期1:0.3-0.5,培養(yǎng)時間15-25小時,菌體濃度達(dá)到2.0×109 CFU/mL以上。

3.用豌豆蛋白廢水液體發(fā)酵生產(chǎn)納豆枯草芽孢桿菌菌劑在生物肥料的應(yīng)用。

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