本發(fā)明涉及心血管疾病治療的藥物領域。具體地講，本發(fā)明涉及對心血管疾病尤其是血栓栓塞性疾病具有治療作用的一類含腈基噻吩芳基氧化膦結構的P2Y12受體拮抗劑、其制備方法及用途。
背景技術：
：與發(fā)生血栓形成有關的醫(yī)學并發(fā)癥代表一種主要的致死原因。一些與發(fā)展血栓形成有關的病理學實例包括急性心肌梗塞、不穩(wěn)定型心絞痛和慢性穩(wěn)定型心絞痛、短暫性缺血發(fā)作、腦血管意外、周圍性血管疾病、先兆子癇和子癇、深部靜脈血栓形成、栓塞(腦栓塞、肺栓塞、冠狀動脈栓塞、腎栓塞等等)、彌散性血管內(nèi)凝血或血栓性血小板減少性紫癜。在侵入性外科手術期間和之后仍有發(fā)生血栓形成和再狹窄并發(fā)癥的危險，所述侵入性外科手術如血管成形術、頸動脈內(nèi)膜切除術、主動脈冠狀動脈旁路移植術或支架或血管內(nèi)假體的安置。動脈血栓形成可在血管壁損傷或動脈粥樣化斑塊破裂后發(fā)生。血小板在這些血栓形成中發(fā)揮著必要的作用。血小板可通過以下物質激活：血流中循環(huán)細胞或沿血管壁呈現(xiàn)的損害性內(nèi)皮細胞所釋放的介體，或者在血管損傷期間所暴露的內(nèi)皮下基質(如膠原)的血栓形成分子。此外，血小板還可在具有高剪切應力的血流條件下如在狹窄血管中所觀察到的那樣激活。激活后，所述循環(huán)血小板粘附并積聚在血管損傷處，形成血栓。在該過程中，血管中所產(chǎn)生的血栓對血流是體積足夠大的，從而使其被部分或完全堵塞。在靜脈中，血栓還可在阻塞或血流慢處形成。由于這些靜脈血栓的性質，其可產(chǎn)生在血管系統(tǒng)中移動的栓子。這些栓子因而可堵塞更遠距離的血管中的血流，所述血管如肺動脈或冠狀動脈。許多研究已經(jīng)證明5'-二磷酸腺苷(ADP)是血小板激活和聚集的主要介體，在血栓形成的啟動和進展中發(fā)揮著決定性作用(Maffrandetal.,Thromb.Haemostas.,1988,59,225-230)。ADP通過損害的紅細胞和動脈粥樣硬化壁的內(nèi)皮細胞釋放到循環(huán)中，更具體而言，由以密集顆粒在非常高濃度儲存ADP之處的激活血小板所分泌。ADP-誘導的血小板聚集由其與在人血小板的細胞膜表達的兩種特異性嘌呤能受體P2Y1和P2Y12的結合所觸發(fā)。所述P2Y1受體，與經(jīng)Gαq的PLCβ刺激聯(lián)合，負責內(nèi)部鈣儲存的動員、血小板形狀的改變和在ADP上的瞬間聚集。所述P2Y12，與經(jīng)Gαi2的腺苷酸環(huán)化酶的抑制和PI-3激酶的激活聯(lián)合，負責響應的放大和聚集的穩(wěn)定化。P2Y1-/-轉基因小鼠(Gachetetal.,J.Clin.Invest.,1999,104,1731-1737)和P2Y12-/-小鼠(Conleyetal.,Nature,2001,409,202-207)的使用證明了所述兩種受體在體內(nèi)血栓發(fā)展中的重要性。在人類中，已經(jīng)描述P2Y12基因缺陷與出血表型和ADP-誘導的血小板聚集的顯著衰退有關。在人類臨床實踐中使用氯吡格雷已經(jīng)證明，由拮抗劑阻斷P2Y12受體代表著治療心血管疾病的關鍵治療策略。氯吡格雷為噻吩并吡啶家族的前藥，其活性代謝物共價結合至P2Y12受體，導致體內(nèi)血小板活性的不可逆抑制(Savietal.,Biochem.Biophys.Res.Commun.,2001,283,379-383)，該藥物在若干臨床試驗中顯示其效能，即降低有危險的患者發(fā)生心血管意外的危險。本發(fā)明公開了一種含腈基噻吩芳基氧化膦結構的P2Y12受體拮抗劑，這些化合物可用于制備治療心血管疾病尤其是血栓栓塞性疾病的藥物。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明的一個目的是提供一種具有式I的良好活性的P2Y12受體拮抗劑。本發(fā)明的另一個目的是提供制備具有式I的化合物的方法。本發(fā)明的再一個目的是提供含有式I的化合物作為有效成分，及其在治療心血管疾病尤其是血栓栓塞性疾病方面的應用?，F(xiàn)結合本發(fā)明的目的對本
發(fā)明內(nèi)容進行具體描述。本發(fā)明具有式I的化合物具有下述結構式：其中，R選自C1-C6的烷基。優(yōu)選，式I結構的化合物：本發(fā)明所述式I化合物可以通過以下路線合成：化合物II和化合物III先反應生成烯胺中間體，后者經(jīng)過還原得到化合物IV；化合物IV先在低溫下用n-BuLi處理，得到的芳基鋰中間體再與二苯基氯化膦反應，得到化合物V；化合物V用氧化劑處理得到化合物I；其中R的定義如權利要求1-2所示。本發(fā)明所述式I化合物具有P2Y12受體的拮抗作用，可作為有效成分用于制備心血管疾病尤其是血栓栓塞性疾病治療藥物。本發(fā)明所述式I化合物的活性是通過體外人血血小板聚集的抑制試驗來驗證的。本發(fā)明的式I化合物在相當寬的劑量范圍內(nèi)是有效的。例如每天服用的劑量約在1mg-700mg/人范圍內(nèi)，分為一次或數(shù)次給藥。實際服用本發(fā)明式I化合物的劑量可由醫(yī)生根據(jù)有關的情況來決定。具體實施方式下面結合實施例對本發(fā)明作進一步的說明。需要說明的是，下述實施例僅是用于說明，而并非用于限制本發(fā)明。本領域技術人員根據(jù)本發(fā)明的教導所做出的各種變化均應在本申請權利要求所要求的保護范圍之內(nèi)。實施例1化合物I-1的合成步驟1.化合物IV-1的合成化合物II(0.85g,10mmol)和化合物III-1(1.47g,10mmol)溶于10mL甲醇中，室溫下攪拌過夜，而后再加入NaCNBH3(1.26g,20mmol)，室溫下再攪拌5小時，TLC顯示反應完成。反應混合物小心傾倒入200mL冰水中，攪拌，用50mL×3CH2Cl2萃取，合并萃取相，用鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥。抽濾除去干燥劑，濾液在旋轉蒸發(fā)儀上蒸干，殘余物使用硅膠柱層析純化，得到化合物IV-1，白色固體。ESI-MS,m/z＝216([M+H]+)。步驟2.化合物V-1的合成化合物IV-1(1.29g,6mmol)溶于15mL干燥的THF中，攪拌，在氮氣氣氛中冷卻到-78℃，而后用注射器慢慢滴加1.6M的n-BuLi的正己烷溶液(3.75mL,6mmol)，滴加完畢后，反應混合物在該溫度下繼續(xù)攪拌1小時。用注射器再慢慢滴加二苯基氯化磷(1.32g,6mmol)溶于7mL干燥的THF制成的溶液，滴加完畢后，反應混合物在該溫度下攪拌半小時，而后升溫至室溫再攪拌過夜。反應混合物小心傾倒入200mL冰水中，攪拌，用50mL×3CH2Cl2萃取，合并萃取相，用鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥。抽濾除去干燥劑，濾液在旋轉蒸發(fā)儀上蒸干，殘余物使用硅膠柱層析純化，得到化合物V-1，白色固體。ESI-MS,m/z＝366([M+H]+)。步驟3.化合物I-1的合成化合物V-1(0.73g,2mmol)溶于10mL冰醋酸中，室溫下攪拌，慢慢滴加30％的H2O2水溶液(1mL)，滴加完畢后，反應混合物在室溫下繼續(xù)攪拌過夜，TLC發(fā)現(xiàn)反應完成。反應混合物小心傾倒入200mL冰水中，攪拌，用50mL×3CH2Cl2萃取，合并萃取相，用鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥。抽濾除去干燥劑，濾液在旋轉蒸發(fā)儀上蒸干，殘余物使用硅膠柱層析純化，得到化合物I-1，白色固體，熔點212-214℃，ESI-MS,m/z＝382([M+H]+)。實施例2化合物I-2的合成步驟1.化合物IV-2的合成化合物II(0.99g,10mmol)和化合物III-2(1.71g,10mmol)溶于10mL甲醇中，室溫下攪拌過夜，而后再加入NaCNBH3(1.26g,20mmol)，室溫下再攪拌5小時，TLC顯示反應完成。反應混合物小心傾倒入200mL冰水中，攪拌，用50mL×3CH2Cl2萃取，合并萃取相，用鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥。抽濾除去干燥劑，濾液在旋轉蒸發(fā)儀上蒸干，殘余物使用硅膠柱層析純化，得到化合物IV-2，白色固體。ESI-MS,m/z＝255([M+H]+)。步驟2.化合物V-2的合成化合物IV-2(1.52g,6mmol)溶于15mL干燥的THF中，攪拌，在氮氣氣氛中冷卻到-78℃，而后用注射器慢慢滴加1.6M的n-BuLi的正己烷溶液(3.75mL,6mmol)，滴加完畢后，反應混合物在該溫度下繼續(xù)攪拌1小時。用注射器再慢慢滴加二苯基氯化磷(1.32g,6mmol)溶于7mL干燥的THF制成的溶液，滴加完畢后，反應混合物在該溫度下攪拌半小時，而后升溫至室溫再攪拌過夜。反應混合物小心傾倒入200mL冰水中，攪拌，用50mL×3CH2Cl2萃取，合并萃取相，用鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥。抽濾除去干燥劑，濾液在旋轉蒸發(fā)儀上蒸干，殘余物使用硅膠柱層析純化，得到化合物V-2，白色固體，ESI-MS,m/z＝405([M+H]+)。步驟3.化合物I-2的合成化合物V-2(0.81g,2mmol)溶于10mL冰醋酸中，室溫下攪拌，慢慢滴加30％的H2O2水溶液(1mL)，滴加完畢后，反應混合物在室溫下繼續(xù)攪拌過夜，TLC發(fā)現(xiàn)反應完成。反應混合物小心傾倒入200mL冰水中，攪拌，用50mL×3CH2Cl2萃取，合并萃取相，用鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥。抽濾除去干燥劑，濾液在旋轉蒸發(fā)儀上蒸干，殘余物使用硅膠柱層析純化，得到化合物I-2，白色固體，熔點162-165℃，ESI-MS,m/z＝421([M+H]+)。實施例3-6參照實施例1-2操作步驟，合成了下表所列化合物。實施例7化合物體外對人血血小板的抑制作用使用含有2mL緩沖的檸檬酸鈉的20mL注射器，從健康志愿者采集血液。將血液轉移至聚丙烯管中，并在室溫離心(100g)5分鐘(不使用離心機的制動)。然后收集浮在表面的富血小板血漿(PRP)，稀釋，并在將其用于聚集測量之前進行血小板計數(shù)。在玻璃管中37℃進行血小板聚集的測量(血小板聚集儀)。將4μL測試化合物(比需要的終濃度濃100倍的DMSO溶液)與392μL新制的PRP混合，并伴隨攪拌孵育1分鐘。然后向混合物中加入4μL250μM的ADP溶液。持續(xù)攪拌，通過按照G.V.R.Born的方法記錄光密度變化(Born,Nature,1962,194,927)，監(jiān)測聚集的測量6至8分鐘。使用以高度表示的聚集振幅計算結果，并以抑制百分數(shù)表示。本發(fā)明化合物的(血小板聚集抑制作用的)IC50如下表所示。化合物IC50(nM)實施例1化合物328實施例2化合物97實施例3化合物125實施例4化合物171實施例5化合物264實施例6化合物412從上表結果可以看出，本發(fā)明的化合物對P2Y12具有很強的拮抗作用，可以作為制備治療心血管疾病尤其是血栓栓塞性疾病的藥物。當前第1頁1 2 3