本發(fā)明涉及生物工程領(lǐng)域。更具體地說，本發(fā)明涉及一種抗腫瘤重組蛋白ifti及其編碼基因與應(yīng)用。

背景技術(shù)：

惡性腫瘤是目前危害人類健康最嚴重的一類疾病。目前治療癌癥的常用方法有：外科手術(shù)治療、化學(xué)藥物療法、放射治療、生物療法和中醫(yī)中藥療法。其中以外科手術(shù)治療、化學(xué)藥物療法、放射治療最為常用。外科手術(shù)治療作為大多數(shù)腫瘤治療的首選和主要方案，使無數(shù)腫瘤患者得以康復(fù)、延長壽命或者提高了生活質(zhì)量。但是，在腫瘤治療方面，外科手術(shù)治療只適用于一定條件和范圍的病人，而且由于腫瘤可復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的原因，手術(shù)切除并不都能達到根治的目的。化學(xué)藥物療法和放射治療的運用在腫瘤的治療方面也發(fā)揮著非常重要和必不可少的作用，并且也在不斷的發(fā)展。但是，目前應(yīng)用的化療藥物療法和放射治療對身體中所有活躍的增殖細胞都有侵害，如造血系統(tǒng)、胃腸道等，所以放化療的病人常有血象降低、胃腸道出血、惡心、嘔吐等癥狀。而且，由于受到病人機體和精神方面承受力及腫瘤細胞出現(xiàn)耐藥性等多方面原因的限制，放化療并不能殺死所有的腫瘤細胞，為腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移及疾病的惡化留下了隱患。生物療法和中醫(yī)中藥療法也是抗腫瘤的合理的方法，但仍需繼續(xù)研究以提高療效。因此，開發(fā)有明顯治療效果、安全的抗腫瘤藥物已經(jīng)成為醫(yī)藥界面臨的一項迫在眉睫的任務(wù)。

研究表明，惡性實體腫瘤的無限制侵襲性生長及其轉(zhuǎn)移依賴于新血管的不斷生成，所以抑制血管生成能顯著地抑制腫瘤的生長。抑制血管生成,阻斷瘤體血液供應(yīng)是不同于常規(guī)抗腫瘤治療的新策略，也稱為“腫瘤饑餓療法”,已經(jīng)成為抗腫瘤治療研究的熱點。正常生理狀態(tài)下,除了女性生殖系統(tǒng)在排卵，黃體生成，懷孕等過程，有短暫的新生血管生成過程外，成年人的脈管系統(tǒng)增生處于相對靜止狀態(tài)。但是在腫瘤組織中,為適應(yīng)瘤組織的快速生長,血管生成非?；钴S,以及時為瘤組織生長供應(yīng)血液。腫瘤組織中的微血管來源有兩種：一種是腫瘤細胞等產(chǎn)生的血管內(nèi)皮生長因子，誘導(dǎo)瘤體生成微血管；另一種是殘存于瘤體的宿主血管逐漸變?yōu)槟[瘤血管，既宿主血管的腫瘤化。與正常血管不同，腫瘤血管的血管內(nèi)皮細胞不完整，基底膜稀疏且易于泄露。腫瘤血管生成后不再進一步分化改建成動脈及靜脈，無平滑肌及神經(jīng)末梢，屬于被動血管，其血流完全依賴于體循環(huán)。新生的微血管是腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移的第一站，腫瘤細胞通過腫瘤微血管壁進入血液循環(huán)向遠處轉(zhuǎn)移。

實體腫瘤生長需要大量的血液供應(yīng)。許多實驗研究證實抑制動物體內(nèi)新血管生成，可有效地切斷為腫瘤生長提供養(yǎng)分的血液供應(yīng)，使瘤體萎縮以至消失?？剐律芩幬飔np-470以及抗bfgf、vegf單克隆抗體的應(yīng)用，突變型vegf受體flk-1競爭性阻斷vegf信號傳導(dǎo)，αvβ3過度表達誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞凋亡、以及angiostatin特異抑制腫瘤新生血管形成等，均可抑制腫瘤生長,是一種新型的、有前途的抗腫瘤藥物,可以彌補當前臨床腫瘤治療手段的局限并取代部分治療手段。由于這類藥物是通過抑制新生血管的形成來達到抑制腫瘤生長的，而人的正常組織細胞的生長不依賴于新生血管的生成，所以對正常組織幾乎沒有毒副作用。這類藥物不直接作用于腫瘤細胞，故抑制腫瘤具有廣譜性而不產(chǎn)生抗藥性，是當前國際上公認的有效、安全、有前途的抗腫瘤藥物。它主要用于原位和轉(zhuǎn)移實體瘤的治療和輔助腫瘤的手術(shù)治療，也可以用來防止腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。因此，開發(fā)具有血管增生抑制作用的抗腫瘤藥物，在惡性腫瘤的防治方面，具有重要的臨床意義。

心肌肌鈣蛋白i是心肌肌鈣蛋白的亞基，目前常被用作心肌梗塞診斷的標志物，心肌肌鈣蛋白i是序列表中的seqidno.1，由210個氨基酸殘基組成，現(xiàn)已通過實驗研究(中國專利：zl03109861.4)證實心肌肌鈣蛋白i具有明顯的抑制血管內(nèi)皮細胞生長和抗腫瘤作用。

大腸桿菌表達系統(tǒng)是用于表達外源蛋白的最成功的表達系統(tǒng)之一，近年來發(fā)展非常迅速，目前已有幾百種蛋白在該表達系統(tǒng)中得以表達，其生長迅速，培養(yǎng)條件簡單，可以高密度連續(xù)培養(yǎng)，技術(shù)已相當成熟，是工業(yè)生產(chǎn)中常用的高表達菌種。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種抗腫瘤重組蛋白ifti及其編碼基因與應(yīng)用，提供抗腫瘤重組蛋白及其編碼基因，以及高效表達該蛋白的方法，所述重組蛋白ifti為心肌肌鈣蛋白i的氨基端氨基酸殘基與具有seqidno.2中的氨基酸殘基序列的人工短肽的羧基端氨基酸殘基序列部分或全部相融合的蛋白質(zhì)，本發(fā)明的重組蛋白ifti可作為藥物在臨床上用于治療多種實體惡性腫瘤，具有高效、廣譜、毒副作用小等特點，有望成為全新的抗腫瘤藥物。

為了實現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的這些目的和其它優(yōu)點，提供了一種抗腫瘤重組蛋白ifti，所述重組蛋白ifti為心肌肌鈣蛋白i的氨基端氨基酸殘基與具有seqidno.2中的氨基酸殘基序列的人工短肽的羧基端氨基酸殘基序列部分或全部相融合的蛋白質(zhì)。

優(yōu)選的是，所述重組蛋白ifti為心肌肌鈣蛋白i的第一個氨基酸的氨基與具有seqidno.2中的氨基酸殘基序列的人工短肽的末端氨基酸的羧基結(jié)合形成的蛋白質(zhì)。

優(yōu)選的是，所述的抗腫瘤重組蛋白ifti中，所述心肌肌鈣蛋白i為seqidno.1中的氨基酸殘基序列或?qū)eqidno.1中的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代、缺失和/或添加且具有與seqidno.1中的氨基酸殘基序列相同活性的由seqidno.4中的氨基酸殘基序列衍生的蛋白質(zhì)。

優(yōu)選的是，所述的抗腫瘤重組蛋白ifti中，所述人工短肽為seqidno.2中的氨基酸殘基序列或?qū)eqidno.2中的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代、缺失和/或添加且具有與seqidno.2中相同活性的由seqidno.2衍生的短肽。

優(yōu)選的是，所述的抗腫瘤重組蛋白ifti中，所述心肌肌鈣蛋白i為氨基端氨基酸殘基的起始位點在seqidno.1中的序列1-152中的任意部位的氨基酸殘基。

優(yōu)選的是，所述的抗腫瘤重組蛋白ifti中，所述人工短肽為氨基端氨基酸殘基的起始位點在seqidno.2中的序列1-20中的任意部位的氨基酸殘基。

優(yōu)選的是，所述的抗腫瘤重組蛋白ifti中，所述心肌肌鈣蛋白i和所述人工短肽通過甘氨酸和絲氨酸形成的二肽連接，所述二肽的基因編碼序列為ggatcc。

一種抗腫瘤重組蛋白ifti的編碼基因，是下列核苷酸序列之一：

a、編碼序列表中seqidno.1蛋白質(zhì)序列的多核苷酸或與其限定的dna序列具有90％以上同源性，且編碼相同功能蛋白質(zhì)的dna序列；

b、編碼序列表中seqidno.2蛋白質(zhì)序列的多核苷酸或與其限定的dna序列具有90％以上同源性，且編碼相同功能蛋白質(zhì)的dna序列；

c、含有所述a和所述b中的基因的表達載體及細胞系。

一種抗腫瘤重組蛋白ifti在大腸桿菌中的高效表達方法，包括以下步驟：

步驟一、選用大腸桿菌優(yōu)選密碼子，設(shè)計并合成seqidno.3和seqidno.4的部分或全部序列的融合蛋白基因序列；

步驟二、將步驟一中合成的基因片段分別與載體pet21b連接，得到表達質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化大腸桿菌后獲得表達工程菌；

步驟三、培養(yǎng)步驟二中得到的工程菌，表達產(chǎn)物，獲得目標蛋白。

優(yōu)選的是，所述的抗腫瘤重組蛋白ifti在大腸桿菌中的高效表達方法中，所述大腸桿菌優(yōu)選為bl21-de3大腸桿菌。

本發(fā)明至少包括以下有益效果：

本發(fā)明的重組蛋白ifti的毒副作用小，引入腫瘤饑餓療法的全新概念，通過特異性抑制血管內(nèi)皮細胞的增生，阻斷新血管的生成，從而使瘤細胞缺乏營養(yǎng)，不能生長進而死亡,對正常組織無影響；同時由于其為蛋白類藥物，毒副作用小，明顯區(qū)別于目前臨床使用的抗腫瘤藥物。

本發(fā)明的重組蛋白ifti的抗腫瘤活性高，抑瘤率高達86％，并導(dǎo)致部分瘤體消失。

本發(fā)明的重組蛋白ifti的抗瘤譜廣：本發(fā)明可用于所有的實體腫瘤，無組織選擇性，因此其適用范圍很廣，包括但不限于纖維肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、軟骨肉瘤、骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、淋巴管肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、依汶氏瘤、平滑肌肉瘤、眼眶橫紋肌肉瘤、結(jié)腸癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、麟狀上皮細胞癌、基質(zhì)細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳突癌、乳突腺癌、囊腺癌、髓樣癌、支氣管癌、腎細胞癌、肝癌、膽管癌、絨毛膜癌、精母細胞瘤、胚胎上皮癌、腎母細胞瘤、子宮頸癌、睪丸癌、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮細胞癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、星形細胞瘤、髓母細胞瘤、顱咽管瘤、室管膜瘤、卡波西肉瘤、松果體瘤、血管母細胞瘤、聽覺神經(jīng)瘤、少突膠質(zhì)細胞瘤、黑色素瘤、神經(jīng)母細胞瘤和視網(wǎng)膜母細胞瘤。

本發(fā)明提供的的表達方法得到的抗腫瘤重組蛋白占培養(yǎng)液總蛋白的30-70％，表達過程操作簡單，產(chǎn)品成本較低，可用于規(guī)?；a(chǎn)，對于開發(fā)新的抗腫瘤藥物具有重要意義。

本發(fā)明的其它優(yōu)點、目標和特征將部分通過下面的說明體現(xiàn)，部分還將通過對本發(fā)明的研究和實踐而為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所理解。

附圖說明

圖1為本發(fā)明所述的iptg誘導(dǎo)后的bl21-de3大腸桿菌培養(yǎng)液初純產(chǎn)物ifti電泳圖譜。

具體實施方式

一種抗腫瘤重組蛋白ifti，所述重組蛋白ifti為心肌肌鈣蛋白i的氨基端氨基酸殘基與具有seqidno.2中的氨基酸殘基序列的人工短肽的羧基端氨基酸殘基序列部分或全部相融合的蛋白質(zhì)。

所述重組蛋白ifti為心肌肌鈣蛋白i的第一個氨基酸的氨基與具有seqidno.2中的氨基酸殘基序列的人工短肽的末端氨基酸的羧基結(jié)合形成的蛋白質(zhì)。

所述的抗腫瘤重組蛋白ifti中，所述心肌肌鈣蛋白i為seqidno.1中的氨基酸殘基序列或?qū)eqidno.1中的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代、缺失和/或添加且具有與seqidno.1中的氨基酸殘基序列相同活性的由seqidno.4中的氨基酸殘基序列衍生的蛋白質(zhì)。

所述的抗腫瘤重組蛋白ifti中，所述人工短肽為seqidno.2中的氨基酸殘基序列或?qū)eqidno.2中的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代、缺失和/或添加且具有與seqidno.2中相同活性的由seqidno.2衍生的短肽。

所述的抗腫瘤重組蛋白ifti中，所述心肌肌鈣蛋白i為氨基端氨基酸殘基的起始位點在seqidno.1中序列1-152中的任意部位的氨基酸殘基；例如以下組合：心肌肌鈣蛋白i的氨基端氨基酸殘基的起始位點在seqidno.1中序列1-210，其與由seqidno.2衍生的短肽的羧基端氨基酸殘基與seqidno.1中序列1的氨基端氨基酸殘基相融合形成的人工短肽融合形成融合蛋白；心肌肌鈣蛋白i的氨基端氨基酸殘基的起始位點在seqidno.1中序列101-210，其與由seqidno.2衍生的短肽的羧基端氨基酸殘基與seqidno.101中序列1的氨基端氨基酸殘基相融合形成的人工短肽融合形成融合蛋白；所述心肌肌鈣蛋白i的氨基端氨基酸殘基的起始位點在seqidno.1中序列153-210，其與由seqidno.2衍生的短肽的羧基端氨基酸殘基與seqidno.1中序列153的氨基端氨基酸殘基相融合形成的人工短肽融合形成融合蛋白。

所述的抗腫瘤重組蛋白ifti中，所述的抗腫瘤重組蛋白ifti中，所述人工短肽為氨基端氨基酸殘基的起始位點在seqidno.2中的序列1-20中的任意部位的氨基酸殘基；例如以下組合：seqidno.1中的氨基端氨基酸殘基與seqidno.2中序列1-23的羧基端氨基酸殘基相融合形成心肌肌鈣蛋白i，其與seqidno.2中序列1-23的氨基酸殘基融合形成融合蛋白；seqidno.1中的氨基端氨基酸殘基與seqidno.2中序列16-23的羧基端氨基酸殘基相融合形成心肌肌鈣蛋白i，其與seqidno.2中序列16-23的氨基酸殘基融合形成融合蛋白；seqidno.1中的氨基端氨基酸殘基與seqidno.2中序列20-23的羧基端氨基酸殘基相融合形成心肌肌鈣蛋白i，其與seqidno.2中序列20-23的氨基酸殘基融合形成融合蛋白；

所述的抗腫瘤重組蛋白ifti中，所述心肌肌鈣蛋白i和所述人工短肽通過甘氨酸和絲氨酸形成的二肽連接，所述二肽的基因編碼序列為ggatcc。

一種抗腫瘤重組蛋白ifti的編碼基因，是下列核苷酸序列之一：

a、編碼序列表中seqidno.1蛋白質(zhì)序列的多核苷酸或與其限定的dna序列具有90％以上同源性，且編碼相同功能蛋白質(zhì)的dna序列；

b、編碼序列表中seqidno.2蛋白質(zhì)序列的多核苷酸或與其限定的dna序列具有90％以上同源性，且編碼相同功能蛋白質(zhì)的dna序列；

c、含有所述a和所述b中的基因的表達載體及細胞系。

一種抗腫瘤重組蛋白ifti在大腸桿菌中的高效表達方法，包括以下步驟：

步驟一、選用大腸桿菌優(yōu)選密碼子，設(shè)計并合成seqidno.3和seqidno.4的部分或全部序列的融合蛋白基因序列；

步驟二、將步驟一中合成的基因片段分別與載體pet21b連接，得到表達質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化大腸桿菌后獲得表達工程菌；

步驟三、培養(yǎng)步驟二中得到的工程菌，表達產(chǎn)物，獲得目標蛋白。

所述的抗腫瘤重組蛋白ifti在大腸桿菌中的高效表達方法中，所述大腸桿菌優(yōu)選為bl21-de3大腸桿菌。

本技術(shù)方案將心肌肌鈣蛋白i的部分或全部分子結(jié)構(gòu)和人工短肽進行融合,合成新的具有抗腫瘤活性的蛋白質(zhì)融和體。該融合體具有明顯的抗小鼠實體腫瘤的作用，在惡性腫瘤的治療方面，具有重要意義。

本技術(shù)方案得到的重組蛋白ifti可用于治療多種實體惡性腫瘤，包括但不限于纖維肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、軟骨肉瘤、骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、淋巴管肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、依汶氏瘤、平滑肌肉瘤、眼眶橫紋肌肉瘤、結(jié)腸癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、麟狀上皮細胞癌、基質(zhì)細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳突癌、乳突腺癌、囊腺癌、髓樣癌、支氣管癌、腎細胞癌、肝癌、膽管癌、絨毛膜癌、精母細胞瘤、胚胎上皮癌、腎母細胞瘤、子宮頸癌、睪丸癌、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮細胞癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、星形細胞瘤、髓母細胞瘤、顱咽管瘤、室管膜瘤、卡波西肉瘤、松果體瘤、血管母細胞瘤、聽覺神經(jīng)瘤、少突膠質(zhì)細胞瘤、黑色素瘤、神經(jīng)母細胞瘤和視網(wǎng)膜母細胞瘤。

本技術(shù)方案中，需要的時候，在以上述抗腫瘤重組蛋白為活性成分的藥物中，還可以加入一種或多種藥學(xué)上可接受的載體，包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體和潤滑劑等，同時也可以制成注射液、凍干粉針劑等多種形式，上述各種劑型的藥物均可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法制備。

<實施例1>

抗腫瘤重組蛋白的大腸桿菌體外表達：

1、人工基因的合成：人工合成序列表中seqidno.3(心肌肌鈣蛋白i的編碼基因)的部分或全長序列，并在其5’端加上bamhi、3’端加上noti酶切位點，得到序列表中seqidno.3的克隆序列。設(shè)計并合成序列表中seqidno.2人工短肽氨基酸殘基編碼基因的部分或全部核酸序列，并在其5’端加上ndei、3’端加上bamhi酶切位點，得到序列表中seqidno.4的克隆序列。用bamhi分別酶切合成的人工短肽氨基酸殘基編碼基因的核酸序列和心肌肌鈣蛋白i氨基酸殘基編碼基因的核酸序列，純化、連接，合成融合蛋白的核酸序列。

2、抗腫瘤重組蛋白體外表達純化

(1)將上述人工合成的全序列分別裝入pgem-t-easy質(zhì)粒內(nèi)，構(gòu)建pgem-iftix克隆載體。

(2)表達質(zhì)粒的構(gòu)建

采用購自美國novagen公司的高效表達質(zhì)粒pet21b，用snabi和noti分別酶切pgem-ifti質(zhì)粒和pet21b質(zhì)粒，凝膠電泳收集目標片段，用t4dna連接酶16℃過夜連接。經(jīng)常規(guī)方法的轉(zhuǎn)化，挑菌，擴增獲得表達質(zhì)粒pet-iftix。

(3)分別將質(zhì)粒pet-ifti經(jīng)轉(zhuǎn)化導(dǎo)入bl21-de3大腸桿菌內(nèi)，經(jīng)培養(yǎng)，挑選，篩選等過程，獲得單克隆菌。

(4)挑選的單克隆菌，接種于5ml培養(yǎng)基中，37℃過夜，然后轉(zhuǎn)入1000ml培養(yǎng)基中，繼續(xù)培養(yǎng)至od600＝0.8，加入iptg至終濃度為1％、37℃誘導(dǎo)表達4小時。

(5)將培養(yǎng)的菌液8000g離心20分鐘，收集菌體，每升菌液收集的菌體加入50ml裂解緩沖液(其中：tris-hcl的濃度為50mmol/l，edta的濃度為1mmol/l，2-巰基乙醇的濃度為20mmol/l，氯化鈉的濃度為100mmol/l)，室溫放置30分鐘，然后加入10％triton-x-1002.5ml，加入0.1mpmsf0.25ml，37℃孵育15分鐘，進行超聲破碎，之后20000g離心20分鐘，棄上清，沉淀加入20ml濃度為8mol/l尿素裂解緩沖液，攪拌30分鐘，離心，收集上清。將含有ctni的上清液在溶液a(其中：tea/hclph7.5的濃度為25mmol/l，尿素的濃度為8mol/l，edta的濃度為2mmol/l，dtt的濃度為1mmol/l)中室溫下透析2-3小時，12000g4℃離心30分鐘。用溶液a平衡deaesepharose柱，然后將離心上清液上樣，以吸附雜蛋白，收集流出液。再用溶液a平衡cmsepharose柱,用所收集的流出液上樣，此時目的蛋白將被吸附在填料上，然后用溶液b(溶液a中加入氯化鈉，其中氯化鈉的濃度為1mol/l)將目的蛋白洗出。用分光光度法測定蛋白質(zhì)含量。取純化后的蛋白質(zhì)溶液5ug，用12％sds-page電泳，并經(jīng)考馬斯亮蘭染色。ifti1(短肽20-23、gs二肽和心肌肌鈣蛋白i全序列的融合蛋白)的結(jié)果如圖1所示，所得的目的蛋白的純度為96％。

<實施例2>

本發(fā)明抗腫瘤重組蛋白對培養(yǎng)血管內(nèi)皮細胞增值功能的影響：

人臍靜脈內(nèi)皮細胞evc304細胞株購自解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院；rpmi-1640培養(yǎng)基、胎牛血清、胰蛋白酶購自hyclone公司，其他試劑均購自sigma公司，抗腫瘤重組蛋白(ifti1)為純度為96％的表達純化產(chǎn)物。

ecv304細胞按內(nèi)皮細胞常規(guī)法進行培養(yǎng)，將培養(yǎng)的生長正常的ecv304細胞按每孔5*104細胞分別接種于96孔板，37℃培養(yǎng)12小時后換含有序列ifti1的表達提純的抗腫瘤重組蛋白5μg/ml的新鮮培養(yǎng)液，空白對照換含有等體積生理鹽水的新鮮培養(yǎng)液，37℃繼續(xù)培養(yǎng)36小時，用mtt法測定細胞增殖狀態(tài)。取出96孔培養(yǎng)板，每孔加入mtt溶液(5mg/ml)20μl，37℃繼續(xù)培養(yǎng)4小時后終止培養(yǎng)，小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，每孔加入150μldmso，振蕩10分鐘，使結(jié)晶物充分溶解，選擇490nm波長，在酶標儀上測定各孔的吸光值。結(jié)果與空白對照組相比，ifti的表達提純的抗腫瘤重組蛋白5μg/ml的細胞增殖抑制率分別為86±7％。

<實施例3>

本發(fā)明抗腫瘤重組蛋白的小鼠體內(nèi)抑瘤實驗：取24只昆明小鼠，分為磷酸鹽緩沖液和表達提純液組,分別頸部皮下接種s180腹水細胞瘤株，三天后分別皮下注射磷酸鹽緩沖液和表達提純液1.0mg蛋白/kg,每隔12小時注射一次，連續(xù)注射7天。觀察并切取瘤組織，稱重，結(jié)果磷酸鹽緩沖液和表達提純液序列ifti組瘤體重分別為1.09±0.31克和0.15±0.05克，抑瘤率為86.2％。

盡管本發(fā)明的實施方案已公開如上，但其并不僅僅限于說明書和實施方式中所列運用，它完全可以被適用于各種適合本發(fā)明的領(lǐng)域，對于熟悉本領(lǐng)域的人員而言，可容易地實現(xiàn)另外的修改，因此在不背離權(quán)利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發(fā)明并不限于特定的細節(jié)和這里示出與描述的實施例。

<110>廣西藥用植物園

<120>抗腫瘤重組蛋白ifti及其編碼基因與應(yīng)用

<160>16

<210>1

<211>210

<212>prt

<213>人屬人（homosapiens）

<220>

<223>

<400>1

metalaaspglyserseraspalaalaarggluproargproala

151015

proalaproileargargargserserasntyrargalatyrala

202530

thrgluprohisalalyslyslysserlysileseralaserarg

354045

lysleuglnleulysthrleuleuleuglnilealalysglnglu

505560

leugluargglualaglugluargargglyglulysglyargala

657075

leuserthrargcysglnproleugluleualaglyleuglyphe

808590

alagluleuglnaspleucysargglnleuhisalaargvalasp

95100105

lysvalaspglugluargtyraspileglualalysvalthrlys

110115120

asnilethrgluilealaaspleuthrglnlysilepheaspleu

125130135

argglylysphelysargprothrleuargargvalargileser

140145150

alaaspalametmetglnalaleuleuglyalaargalalysglu

155160165

serleuaspleuargalahisleulysglnvallyslysgluasp

170175180

thrglulysgluasnarggluvalglyasptrparglysasnile

185190195

aspalaleuserglymetgluglyarglyslyslysphegluser

200205210

<210>2

<211>28

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>2

edkspvpneqcekensanemasm

<210>3

<211>717

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>3

atgtcccgccctctttcagaccaggataagagaaagcaaatcagcgttcgtggcttagcc60

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