本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及抗cd10蛋白單克隆抗體雜交瘤細胞及其產(chǎn)生的抗cd10單克隆抗體和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

cdl0分子最初作為普通急性淋巴細胞白血病抗原(calla)被發(fā)現(xiàn)，由mme基因編碼含750aa的一個相對分子質(zhì)量為90-110kda的ii型單鏈穿膜糖蛋白。cdl0主要表達在骨髓中的早期b細胞和胎兒胸腺的一群細胞上，主要是cd2^-的細胞。cdl0可以鑒別骨髓來源的t細胞前體，隨著細胞進入t細胞的分化，cdl0的表達開始減少。在b細胞內(nèi)，cdl0的表達隨著細胞獲得膜表面免疫球蛋白而開始減少。cdl0也表達在生發(fā)中心的b細胞上和成熟的中性粒細胞上。在非造血組織中，cdl0分子也表達在許多組織細胞上，如腎小管和腎小球細胞、小腸上皮細胞、骨髓基質(zhì)細胞、膽管、乳腺和涎腺的肌上皮細胞等，腦組織中觸突膜，培養(yǎng)的纖維母細胞和某些實體腫瘤細胞系上也有cdl0的表達。

cdl0分子廣泛分布在各種組織，具有中性肽鏈內(nèi)切酶(nep)的功能，并且表達在不同的組織，其功能不盡相同。目前廣泛應(yīng)用于用血液系統(tǒng)腫瘤以及部分實體腫瘤的診斷和預(yù)后判斷，還用于造血細胞分化發(fā)育研究和部分組織干細胞的研究。

目前臨床上通常用免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry,ihc)實驗檢測腫瘤組織內(nèi)腫瘤細胞中cd10的表達狀況，其實驗方法的核心為特異性結(jié)合cd10的單克隆抗體，其性能的優(yōu)劣直接決定著整個檢測的靈敏度和特異性。因此，研制出一種結(jié)合特異性較高的針對cd10蛋白的單克隆抗體具有重要的意義。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供抗cd10蛋白單克隆抗體雜交瘤細胞及其產(chǎn)生的抗cd10單克隆抗體和應(yīng)用，提高所述雜交瘤細胞產(chǎn)生的單抗與cd10蛋白的結(jié)合特異性并應(yīng)用到相關(guān)產(chǎn)品的制備中。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

抗cd10蛋白單克隆抗體雜交瘤細胞，保藏編號為cgmccno：13286。

本發(fā)明所述抗cd10蛋白單克隆抗體雜交瘤細胞由以下方法制備獲得：

(1)重組表達載體的構(gòu)建：根據(jù)cd10orf核苷酸序列(cd10orf核苷酸序列如seqidno.1所示，2250bp；cd10氨基酸序列如seqidno.2所示)設(shè)計引物，以origene公司產(chǎn)品cd10全長質(zhì)粒rc224141為模板，進行pcr擴增cd10的c末端411-750aa片段，基因兩側(cè)分別引入限制性內(nèi)切酶位點ecori和xhoi，插入表達載體pet-23a(+)(novagen公司,貨號69745-3)，構(gòu)建cd10重組表達質(zhì)粒pet-23a/rcd10；

(2)cd10重組蛋白的表達與純化：將cd10重組表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入e.coli，擴增培養(yǎng)后裂解離心取上清，his親和層析柱純化，獲得純化的cd10重組蛋白；

(3)單克隆抗體的篩選與制備：采用上述純化的cd10重組蛋白免疫balb/c小鼠，取小鼠脾臟細胞與sp2/0細胞進行融合，有限稀釋法獲得單克隆，elisa法篩選陽性雜交瘤細胞，獲得能分泌抗cd10特異性抗體的雜交瘤細胞株；通過無血清培養(yǎng)基制備抗體，通過親和層析柱純化獲得cd10單克隆抗體。通過免疫組化實驗驗證該單克隆抗體的靈敏度和特異性。

經(jīng)過上述方法制備后，篩選出能夠穩(wěn)定分泌抗cd10單克隆抗體的雜交瘤細胞，命名為umab235，亞型鑒定為igg1，并于2016年11月22日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學(xué)院微生物研究所，保藏編號為cgmccno：13286。

同時，本發(fā)明還提供一種抗cd10蛋白單克隆抗體，由保藏編號為cgmccno：13286的雜交瘤細胞分泌產(chǎn)生。制備抗cd10蛋白單克隆抗體可采用本技術(shù)領(lǐng)域常規(guī)方法，如通過無血清培養(yǎng)基制備抗體，通過親和層析柱純化獲得cd10單克隆抗體。

本發(fā)明所述保藏編號為cgmccno：13286的雜交瘤細胞染色體穩(wěn)定，其分泌產(chǎn)生的抗cd10蛋白單克隆抗體為igg1型，效價較高。所述單克隆抗體的蛋白印記(western-blot)檢測結(jié)果顯示在k562，ramos和raji細胞中的cd10蛋白。

同時免疫組化檢測結(jié)果顯示，其能夠特異性識別腎透明細胞癌組織、乳腺癌組織、淋巴瘤組織、正常扁桃體和腎組織中的cd10蛋白。

此外，采用origene高密度蛋白芯片檢測所述單抗的特異性試驗表明，本發(fā)明所述單克隆抗體與近10000種其他蛋白無交叉反應(yīng)。

因此，本發(fā)明還提供了保藏編號為cgmccno：13286的的雜交瘤細胞在制備抗cd10蛋白單克隆抗體中的應(yīng)用以及所分泌的抗cd10蛋白單克隆抗體在制備檢測cd10蛋白的免疫檢測產(chǎn)品中的應(yīng)用。

作為優(yōu)選，所述免疫檢測產(chǎn)品為試劑盒、試紙或芯片。

本發(fā)明還提供一種免疫組化檢測的試劑盒，包括保藏編號為cgmccno：13286的雜交瘤細胞分泌產(chǎn)生的抗cd10蛋白單克隆抗體。所述免疫檢測試劑盒可檢測腫瘤組織及其微環(huán)境中cd10的表達狀況。

此外，本發(fā)明還提供保藏編號為cgmccno：13286的雜交瘤細胞分泌產(chǎn)生的抗cd10蛋白單克隆抗體在制備標(biāo)記腫瘤組織及其微環(huán)境中淋巴細胞的試劑盒中的應(yīng)用。

作為優(yōu)選，所述腫瘤包括腎透明細胞癌、淋巴瘤和乳腺癌。

本發(fā)明提供的雜交瘤細胞可穩(wěn)定分泌產(chǎn)生抗cd10蛋白單克隆抗體，且與cd10蛋白特異性結(jié)合，而與蛋白芯片上近10000種其他蛋白無交叉反應(yīng)，顯著提高了cd10蛋白免疫檢測的特異性、準(zhǔn)確性和可靠性，廣泛適用于各種腫瘤組織及其微環(huán)境中cd10的檢測。

生物保藏信息說明

umab235，分類命名為cd10單克隆抗體雜交瘤細胞株，于2016年11月22日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學(xué)院微生物研究所，保藏編號為cgmccno：13286。

附圖說明

圖1所示為實施例1中克隆位點圖；

圖2所示為實施例2中cd10蛋白sds-page結(jié)果圖；

圖3所示為實施例4中cd10蛋白蛋白印記western-blot結(jié)果圖(一抗為umab235分泌產(chǎn)生的cd10單抗，1:500)；

圖4所示實施例5腎透明細胞癌組織免疫組化檢測結(jié)果圖(一抗為umab235分泌產(chǎn)生的cd10單抗，1:600)；

圖5所示實施例5淋巴瘤組織免疫組化檢測結(jié)果圖(一抗為umab235分泌產(chǎn)生的cd10單抗，1:600)；

圖6所示實施例5乳腺癌組織免疫組化檢測結(jié)果圖(一抗為umab235分泌產(chǎn)生的cd10單抗，1:600)；

圖7所示實施例5人正常扁桃體組織免疫組化檢測結(jié)果圖(一抗為umab235分泌產(chǎn)生的cd10單抗，1:600)；

圖8所示實施例5人正常腎組織免疫組化檢測結(jié)果圖(一抗為umab235分泌產(chǎn)生的cd10單抗，1:600)；

圖9所示實施例6origene蛋白芯片鑒定結(jié)果圖(一抗為umab235分泌產(chǎn)生的cd10單抗,1:100；二抗為alexa647-標(biāo)記的驢抗鼠igg，1:500)。

具體實施方式：

本發(fā)明公開了抗cd10蛋白單克隆抗體雜交瘤細胞及其產(chǎn)生的抗cd10單克隆抗體和應(yīng)用，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的產(chǎn)品及應(yīng)用已經(jīng)通過較佳實施例進行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對本文所述的方法和應(yīng)用進行改動或適當(dāng)變更與組合，來實現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。

下面就本發(fā)明提供的抗cd10蛋白單克隆抗體雜交瘤細胞及其產(chǎn)生的抗cd10單克隆抗體和應(yīng)用做進一步說明。

實施例1：cd10重組表達質(zhì)粒的構(gòu)建

根據(jù)cd10的全長cdna序列模板rc224141(origene公司產(chǎn)品，貨號rc224141)，針對其c端411-750aa片段設(shè)計兩條引物并分別引入酶切位點ecori和xhoi，克隆入表達載體pet-23a(+)(novagen公司,貨號69745-3)，建立cd10的c末端片段411-750aa蛋白的重組原核表達質(zhì)粒，經(jīng)測序確定重組質(zhì)粒的正確性?？寺∥稽c設(shè)計如圖1所示。

實施例2：cd10重組蛋白的表達與純化

1、轉(zhuǎn)化e.coli感受態(tài)細菌：取一個1.5ml離心管，加入100μl感受態(tài)細胞懸液，置冰上：加入2ul質(zhì)粒pet-23a/rcd10，用移液器輕柔混勻。冰上靜置20min；42℃水浴中熱激90秒，然后迅速置冰上3～5min；加入1mllb液體培養(yǎng)基(不含抗生素)，混勻后37℃振蕩培養(yǎng)(180rpm)1小時；取100ul菌液，至含有抗生素amp的lb固體培養(yǎng)基上，涂布均勻；待菌液被培養(yǎng)基吸收后，37℃倒置培養(yǎng)12～16小時，菌落生長良好而又未互相重疊時，取出，然后挑單菌落菌株于5mllb(amp+)挑上述單菌落菌株于5mllb(amp+)培養(yǎng)基220rpm培養(yǎng)8小時后轉(zhuǎn)移至1升lb(amp+)培養(yǎng)基擴大培養(yǎng)，待其生長到od280＝0.6后加入iptg至終濃度為0.25mm誘導(dǎo)蛋白表達，繼續(xù)4度200rpm振蕩培養(yǎng)12～14小時后，4度離心菌液，收集菌體沉淀。

2、蛋白純化：將上步收集的菌體沉淀用pbs緩沖液重選并進行超聲破碎(超聲探頭為6ф，功率為400w，全程工作時間30min,每個循環(huán)超聲3秒間隔5秒)，離心(12000rpm,5min)，收集上清，并按照novagen公司蛋白純化方法進行純化(novagen,ni-ntahis-bindresin試劑盒，貨號：70666-5)，收獲得到純化的帶his標(biāo)簽的重組蛋白rcd10/411-750aa。

3、純化蛋白鑒定：純化后的重組cd10的c端411-750片段蛋白用sds-page鑒定，見圖2。

由圖2結(jié)果可見，經(jīng)過his親和層析柱純化，得到高純度的cd10重組蛋白。

實施例3：抗cd10單克隆抗體雜交瘤細胞及其單克隆抗體的制備篩選

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法用重組產(chǎn)生的純化的全長cd10重組蛋白rcd10/411-750aa(以下簡稱為cd10抗原)用于對b6/c57小鼠(北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司)進行免疫。具體方法如下：

1、動物免疫：經(jīng)過純化的cd10抗原以完全弗氏佐劑乳化，采用皮下或腹腔注射方法免疫6-8周齡balb/c小鼠，免疫劑量為50μg/只，間隔兩周后進行第二次免疫，以不完全弗氏佐劑乳化，免疫劑量為50μg/只。免疫兩次后取尾血以elisa法梯度稀釋測定血清效價；根據(jù)結(jié)果確定是否加強免疫，選取抗體效價最高的小鼠進行細胞融合。

2、細胞融合：骨髓瘤細胞采用balb/c來源的sp2/0，融合時處于對數(shù)生長期；取已免疫小鼠脾臟，制成淋巴細胞單細胞懸液；小鼠脾淋巴細胞與骨髓瘤細胞以1:5-1:10混合，滴加37℃的50％peg(ph8.0)1ml，加入不完全培養(yǎng)基及其余終止液，離心棄上清后加入hat培養(yǎng)基懸浮混勻，mc定容到50ml，分裝到3.5cm培養(yǎng)皿中，放于濕盒中，置于37℃、5％co2恒溫培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

3、篩選和克?。喝诤?-10天內(nèi)挑選細胞克隆，使用純化的cd10重組蛋白進行elisa測試。標(biāo)記細胞株號。對陽性孔細胞進行有限稀釋，每次有限稀釋后5-6天測定elisa值，挑取od280陽性值較高的單克隆孔進行有限稀釋，直至elisa測定96孔板全板結(jié)果為陽性。挑取陽性值高的單克隆定株。其對應(yīng)融合板細胞株為umab235。

4、細胞上清單抗的制備與純化：將細胞株umab235用含15％血清的dmem培養(yǎng)基培養(yǎng)于10cm培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，擴培至約4×10⁷個時，800rpm離心5min，棄上清并將細胞轉(zhuǎn)移到2l轉(zhuǎn)瓶中，加入無血清培養(yǎng)基，使細胞密度約為3×10⁵個/ml。繼續(xù)培養(yǎng)1～2周后，當(dāng)細胞死亡率達到60％-70％時(此時細胞密度大概為1-2×10⁶個/ml)，收取細胞懸液6000rpm高速離心20min，取上清，親和層析法進行上清純化，根據(jù)抗體亞型選擇相應(yīng)柱料，細胞株umab235產(chǎn)生的單抗亞型為igg1，采用proteing進行純化。純化后的單抗?jié)舛葴y定、分裝(100ul/管，濃度為1mg/ml)、保存在4-8℃。

實施例4：cd10單克隆抗體umab235為一抗的蛋白印記(western-blot，以下簡稱wb)檢測

(1)、實驗方法：

1、準(zhǔn)備細胞：準(zhǔn)備k562,hl-60,ramos和raji細胞(均購買自atcc)，培養(yǎng)于含5％co2的37℃細胞培養(yǎng)箱中。

2、制備細胞裂解液：將上述細胞消化，水平離心機800-1000rpm/5min離心,pbs洗2次，細胞沉淀用pbs定容到400ul-ep管，加入細胞裂解液，冰浴裂解20分鐘后，12000rpm離心10分鐘，收集上清加入5xloadingbuffer稀釋成1x作為細胞裂解液，-80℃存儲備用。

3、sds-page電泳：恒壓180v50min溴酚蘭至凝膠底部。

4、轉(zhuǎn)膜：提前用轉(zhuǎn)移緩沖液浸泡nc膜與濾紙，三明治形式置于濕轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)膜儀，順序為：電極(-)-海綿-濾紙-凝膠-nc膜-濾紙-電極(+)，一定要保證膠在下膜在上，即凝膠靠近負極。恒流600ma,45分鐘。

5、染色：用立春紅s染色2min，用蒸餾水清洗，至marker條帶顯出，用圓珠筆做好標(biāo)記。蒸餾水沖洗膜。

6、封閉：用封閉液(含5％脫脂奶的tbst)浸沒nc膜并置于37℃孵育1小時。

7、一抗孵育：將nc膜置于pr鼠單抗umab235(以封閉液將抗體稀釋500倍)中，37℃溫箱孵育1小時后，再用15mltbst洗膜15min*3次。(根據(jù)容器大小可調(diào)整tbst用量)

8、二抗孵育：將nc膜置于hrp標(biāo)記的羊抗鼠igg二抗(jackson，catlogno.115-035-146；1：5000)中，室溫搖床孵育1小時后，tbst洗膜5次，15min/次。

9、底物曝光：魯米諾和雙氧水1：1混勻后加在nc膜上(1ml/膜),壓上x射線膠片曝光，然后將膠片進行顯影和定影(暗室中可根據(jù)膠片上的熒光估算艷片時間)。

10、根據(jù)陰性，陽性，空白對照來進行結(jié)果分析和判定，見圖3。

(2)、實驗結(jié)果：

由圖3結(jié)果可見，cd10鼠單抗umab235(1:500)能檢測到k562,ramos和raji細胞中cd10蛋白，分子量大小與預(yù)期相符，而在hl-60和jurkat細胞中則沒有相應(yīng)大小的條帶，表明umab235能檢測到cd10蛋白的特異性表達。

實施例5：umab235分泌產(chǎn)生的單克隆抗體為一抗的免疫組化檢測

(1)、實驗方法：

1、分別取腎透明細胞癌、bukitt淋巴瘤和濾泡性淋巴瘤、乳腺癌、正常扁桃體和腎組織塊進行石蠟包埋，使用sakura組織切片機進行切片，組織厚度為4μm。

2、脫蠟與水化：分析純二甲苯3×10min，無水乙醇3×10min，95％乙醇5min，85％乙醇5min，75％乙醇5min，去離子水浸泡3min×3次

3、加入抗原修復(fù)液(1mmedta,ph9.0的10mmtris-hcl緩沖液)高壓鍋高壓熱修復(fù)2.5min，待高壓鍋溫度降至約90℃時，打開高壓鍋，取出標(biāo)本，然后自然冷卻至室溫。去離子水浸泡3min×3次。

4、使用3％過氧化氫滅活組織內(nèi)源性過氧化物酶，室溫靜置10min。去離子水浸泡5min×3次。

5、加上封閉液(pbs+5％脫脂奶粉+5％正常山羊血清)，37℃孵育60min。

6、去除封閉液，勿沖洗，加入cd10單抗(umab235分泌產(chǎn)生)，稀釋比1:600，使用封閉液進行稀釋。置于濕盒中，37℃孵育60min。pbst(0.1％tween-20)洗滌2次，每次洗滌5min。pbst(0.02％tween-20)洗滌1次，每次洗滌5min。

7、滴加聚合物hrp染色試劑盒中試劑pv8000(購買自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，貨號pv-8000)，37℃孵育15分鐘。使用pbs洗滌3次，每次5min。

8、應(yīng)用dab溶液(中杉金橋zli-9019)顯色，顯色3～10min。蒸餾水洗滌。

9、蘇木精復(fù)染細胞核2min，蒸餾水漂洗，1％鹽酸分化。蒸餾水漂洗3次，室溫靜置1min。

10、脫水和透明：75％乙醇5min，100％乙醇5minx3次，85％乙醇5min，95％乙醇5min，100％乙醇3×5min；二甲苯3×5min，中性樹膠封片。

11、鏡檢，見圖4、圖5、圖6、圖7和圖8。

(2)、實驗結(jié)果：

由圖4結(jié)果可見，cd10蛋白在腎透明細胞癌組織的腫瘤細胞呈特異性細胞膜表達，如圖箭頭所示腫瘤細胞。

由圖5結(jié)果可見，cd10蛋白在淋巴瘤組織中的淋巴細胞上呈特異性細胞膜和細胞質(zhì)表達，如圖箭頭所示淋巴瘤細胞。

由圖6結(jié)果可見，cd10蛋白在乳腺癌組織的肌上皮細胞呈特異性細胞膜和細胞質(zhì)表達，如圖箭頭所示肌上皮細胞。

由圖7結(jié)果可見，cd10蛋白在正常扁桃體組織中的淋巴細胞上呈特異性細胞膜表達，如圖箭頭所示淋巴細胞。

由圖8結(jié)果可見，cd10蛋白在正常腎組織中的腎小管和腎小球細胞上呈特異性細胞膜和細胞質(zhì)表達，如圖箭頭所示組織細胞。

結(jié)果表明本發(fā)明umab235產(chǎn)生的單克隆抗體能夠特異性識別腎透明細胞癌、淋巴瘤組織、乳腺癌、正常扁桃體和腎組織中的cd10蛋白。

實施例6：umab235分泌產(chǎn)生的單克隆抗體的特異性蛋白芯片檢測

origene高密度蛋白芯片上包含10000個hek293t細胞蛋白過表達裂解物，每種蛋白裂解液在芯片上具有兩個拷貝的重復(fù)。蛋白裂解液被印跡在硝酸纖維素膜上。每一鐘蛋白裂解液的定位可以通過excel文件進行準(zhǔn)確定位。蛋白芯片上蛋白分為40個亞矩陣，每個亞矩陣上有一些參照，通過參照，可以定量每個芯片點上蛋白的含量，監(jiān)控每次免疫反應(yīng)數(shù)據(jù)的重復(fù)性，以及定位陽性信號的方向。以下為使用origene蛋白(origenecatpa100001)芯片進行umab235分泌產(chǎn)生的單克隆抗體鑒定實驗的方法：

1、將一張蛋白芯片放在50ml離心管中，使用40ml去離子水浸潤芯片，置于搖床上，室溫混合30分鐘。棄掉去離子水，使用10mlpbst平衡芯片。室溫處理10分鐘。

2、向50ml離心管中加入40ml5％脫脂牛奶(用pbst進行稀釋)置于搖床上，室溫封閉30分鐘。

3、使用封閉液(5％脫脂牛奶)稀釋一抗umab235，稀釋比列為1：100。

4、將潔凈的封口膜粘貼到實驗臺上，滴加250-300μl一抗在封口膜上。

5、將蛋白芯片從封閉液中抽出，將蛋白芯片nc膜的一面朝下，從芯片的一邊接觸抗體，慢慢滑下，依靠液體表面張力，抗體將慢慢浸潤芯片nc膜，直至整張nc膜浸潤在一抗溶液中。整個操作過程避免產(chǎn)生氣泡。將芯片移到4℃環(huán)境下，靜置，一抗孵育過夜。在芯片上加蓋培養(yǎng)皿蓋，其上黏附一張濕紙巾，以防止長時間孵育導(dǎo)致抗體蒸發(fā)。

6、第二天將芯片移至50ml離心管中，使用pbst漂洗芯片兩次，去除多余的抗體。使用40mlpbst(0.1％tween-20)洗滌芯片，置于搖床上混合均勻，洗滌三次，每次洗滌5min。

7、使用封閉液(5％脫脂牛奶)稀釋二抗alexa647-標(biāo)記的驢抗鼠igg，稀釋比例為1：500。

8、按照上述步驟4，步驟5進行二抗孵育操作。室溫孵育1小時。在芯片上方用鋁箔紙遮蓋，以防止發(fā)生信號漂白。

9、按照上述步驟6，使用pbst洗滌芯片。

10、使用去離子水沖洗芯片，以去除殘余的鹽分和變性劑。

11、室溫干燥芯片，確保芯片完全干燥。

12、使用芯片掃描儀讀取熒光信號。

13、根據(jù)bsa-cy3以及bsa-cy5確定芯片方向以及陽性信號的位點。

14、根據(jù)陽性信號位點找出對應(yīng)蛋白裂解液id，根據(jù)裂解液數(shù)據(jù)庫信息，查找到對應(yīng)蛋白名稱，ncbi錄入號(accessionnumber)，蛋白id，蛋白大小等信息。結(jié)果見圖9。

圖9結(jié)果顯示，在蛋白芯片上的cd10蛋白與umab235分泌產(chǎn)生的單克隆抗體特異性結(jié)合，而與其他蛋白無任何結(jié)合信號，表明本發(fā)明所述單抗umab235能特異性識別cd10蛋白，而與其他近10000種蛋白無交叉反應(yīng)。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護范圍。

<110>無錫傲銳東源生物科技有限公司

<120>抗cd10蛋白單克隆抗體及其用途

<210>1

<211>2250

<212>dna

<213>人工序列

<400>

1atgggcaagtcagaaagtcagatggatataactgatatcaacactccaaagccaaagaagaaacagcgat

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