本發(fā)明屬于藥物制備領(lǐng)域，特別涉及一種高效價(jià)肝素鈉制備工藝。

背景技術(shù)：

肝素鈉是一種粘多糖硫酸酯類抗凝血藥，主要用于治療急性梗塞，能夠減輕不穩(wěn)定型心絞痛、抗血栓形成及降血脂、降膽固醇的作用。1916年人們?cè)诟闻K中首次發(fā)現(xiàn)了肝素，接著，又發(fā)現(xiàn)該物質(zhì)廣泛的存在于動(dòng)物肝、肺和小腸粘膜中。由于我國(guó)豬資源豐富，小腸粘膜價(jià)格低廉，因此，人們常以豬小腸為原料生產(chǎn)肝素鈉。

目前，傳統(tǒng)的肝素鈉生產(chǎn)工藝包括原料處理、酶解提取、離子交換吸附和精制，該工藝存在水解不完全、產(chǎn)品純度低和收率低等缺點(diǎn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種能夠水解完全、產(chǎn)品純度高

及收率高的高效價(jià)肝素鈉制備工藝。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的技術(shù)方案為：一種高效價(jià)肝素鈉制備工藝，其創(chuàng)新點(diǎn)在于：該生產(chǎn)工藝包括以下步驟：

（1）原料處理：將新鮮的豬腸用清水仔細(xì)清洗去除內(nèi)外污物和外部皮膚脂肪后，絞碎成肉糜狀；

（2）酶解提取：向步驟（1）中得到的肉糜狀中加入7～10倍的水，再加入2%～3%的胰蛋白酶，加30%～40%的NaOH調(diào)節(jié)pH至8～9之間，攪拌反應(yīng)40～60min后，再加入3%～5%的NaCl，置于反應(yīng)鍋中，提取時(shí)間為10～15min，結(jié)束后，過(guò)濾，得到酶解液；

（3）絮凝處理：在上述酶解液中加入3%～5%的殼聚糖絮凝劑，以100～120r/min的速度攪拌混合液20～30min，室溫靜置4～6h后，送入離心機(jī)離心過(guò)濾，得到含有肝素鈉的上清液；

（4）樹(shù)脂吸附：采用強(qiáng)堿性陰離子交換樹(shù)脂吸附上清液，樹(shù)脂的用量占母液的質(zhì)量比為0.8%～1.2%，攪拌吸附8～9h，然后收集強(qiáng)堿性陰離子交換樹(shù)脂，棄去廢液；

（5）樹(shù)脂洗滌：先用自來(lái)水及溫水洗滌，然后用4～5度的鹽水溶液洗滌強(qiáng)堿性陰離子交換樹(shù)脂30～40min，以去除樹(shù)脂表面雜質(zhì)；

（6）肝素洗脫：以3倍體積的5%～8%的氯化鈉溶液洗脫上樹(shù)脂，洗脫時(shí)間為3～4h，再用2倍體積的3%～5%的氯化鈉溶液洗脫3～5h，將兩次洗脫液合并；

（7）醇沉：將上述洗脫液，加入2倍體積的80%～90%的乙醇，攪拌20～30min，然后沉淀處理20～24h，收集沉淀物，干燥后得到肝素鈉粗品；

（8）精制：將肝素鈉粗品加入10倍體積的純水溶解，再用30%～40%的NaOH調(diào)節(jié)pH至9～10之間，吸入反應(yīng)罐，用框式壓濾機(jī)過(guò)濾除去雜質(zhì)，再用30%～40%的NaOH調(diào)pH至6～7之間，再緩慢加入80%～90%的乙醇，攪拌均勻，沉淀8～9h；收集復(fù)沉淀物，離心脫水，再在70～80℃的溫度下干燥20小時(shí)以上，即可得成品。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：本發(fā)明對(duì)肝素鈉酶解液進(jìn)行絮凝處理，使酶解液中的蛋白質(zhì)、核酸、菌絲體等大分子物質(zhì)產(chǎn)生絮凝，沉淀下來(lái)，為后續(xù)分離過(guò)程奠定基礎(chǔ)，降低后續(xù)除雜的難度；本發(fā)明中通過(guò)樹(shù)脂洗滌后，再對(duì)肝素洗脫，進(jìn)而減少了肝素鈉中的雜質(zhì)，使得洗脫液中的雜質(zhì)也相對(duì)減少；因而，通過(guò)本發(fā)明方法能夠水解完全，且使得產(chǎn)

品純度和收率也相應(yīng)地提高。

具體實(shí)施方式

下面的實(shí)施例可以使本專業(yè)的技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實(shí)施例范圍之中。

實(shí)施例1

本實(shí)施例的高效價(jià)肝素鈉制備工藝，包括如下步驟：

（1）原料處理：將新鮮的豬腸用清水仔細(xì)清洗去除內(nèi)外污物和外部皮膚脂肪后，絞碎成肉糜狀；

（2）酶解提?。合虿襟E（1）中得到的肉糜狀中加入7倍的水，再加入3%的胰蛋白酶，加40%的NaOH調(diào)節(jié)pH至9，攪拌反應(yīng)40min后，再加入5%的NaCl，置于反應(yīng)鍋中，提取時(shí)間為10min，結(jié)束后，過(guò)濾，得到酶解液；

（3）絮凝處理：在上述酶解液中加入5%的殼聚糖絮凝劑，以120r/min的速度攪拌混合液20min，室溫靜置4h后，送入離心機(jī)離心過(guò)濾，得到含有肝素鈉的上清液；

（4）樹(shù)脂吸附：采用強(qiáng)堿性陰離子交換樹(shù)脂吸附上清液，樹(shù)脂的用量占母液的質(zhì)量比為1.2%，攪拌吸附8h，然后收集強(qiáng)堿性陰離子交換樹(shù)脂，棄去廢液；

（5）樹(shù)脂洗滌：先用自來(lái)水及溫水洗滌，然后用5度的鹽水溶液洗滌強(qiáng)堿性陰離子交換樹(shù)脂30min，以去除樹(shù)脂表面雜質(zhì)；

（6）肝素洗脫：以3倍體積的8%的氯化鈉溶液洗脫上樹(shù)脂，洗脫時(shí)間為3h，再用2倍體積的5%的氯化鈉溶液洗脫3h，將兩次洗脫液合并；

（7）醇沉：將上述洗脫液，加入2倍體積的90%的乙醇，攪拌20min，然后沉淀處理20h，收集沉淀物，干燥后得到肝素鈉粗品；

（8）精制：將肝素鈉粗品加入10倍體積的純水溶解，再用40%的NaOH調(diào)節(jié)pH至9，吸入反應(yīng)罐，用框式壓濾機(jī)過(guò)濾除去雜質(zhì)，再用40%的NaOH調(diào)pH至7，再緩慢加入90%的乙醇，攪拌均勻，沉淀8h；收集復(fù)沉淀物，離心脫水，再在80℃的溫度下干燥20小時(shí)以上，即可得成品。

經(jīng)檢測(cè)，得到的肝素鈉產(chǎn)品效價(jià)＞200U/mg。

實(shí)施例2

本實(shí)施例的高效價(jià)肝素鈉制備工藝，包括如下步驟：

（1）原料處理：將新鮮的豬腸用清水仔細(xì)清洗去除內(nèi)外污物和外部皮膚脂肪后，絞碎成肉糜狀；

（2）酶解提?。合虿襟E（1）中得到的肉糜狀中加入10倍的水，再加入2%的胰蛋白酶，加30%的NaOH調(diào)節(jié)pH至8，攪拌反應(yīng)60min后，再加入3%的NaCl，置于反應(yīng)鍋中，提取時(shí)間為15min，結(jié)束后，過(guò)濾，得到酶解液；

（3）絮凝處理：在上述酶解液中加入3%的殼聚糖絮凝劑，以100r/min的速度攪拌混合液min，室溫靜置6h后，送入離心機(jī)離心過(guò)濾，得到含有肝素鈉的上清液；

（4）樹(shù)脂吸附：采用強(qiáng)堿性陰離子交換樹(shù)脂吸附上清液，樹(shù)脂的用量占母液的質(zhì)量比為0.8%，攪拌吸附9h，然后收集強(qiáng)堿性陰離子交換樹(shù)脂，棄去廢液；

（5）樹(shù)脂洗滌：先用自來(lái)水及溫水洗滌，然后用4度的鹽水溶液洗滌強(qiáng)堿性陰離子交換樹(shù)脂40min，以去除樹(shù)脂表面雜質(zhì)；

（6）肝素洗脫：以3倍體積的5%的氯化鈉溶液洗脫上樹(shù)脂，洗脫時(shí)間為4h，再用2倍體積的3%的氯化鈉溶液洗脫5h，將兩次洗脫液合并；

（7）醇沉：將上述洗脫液，加入2倍體積的80%的乙醇，攪拌30min，然后沉淀處理24h，收集沉淀物，干燥后得到肝素鈉粗品；

（8）精制：將肝素鈉粗品加入10倍體積的純水溶解，再用30%的NaOH調(diào)節(jié)pH至9，吸入反應(yīng)罐，用框式壓濾機(jī)過(guò)濾除去雜質(zhì)，再用30%的NaOH調(diào)pH至6，再緩慢加入80%的乙醇，攪拌均勻，沉淀9h；收集復(fù)沉淀物，離心脫水，再在70℃的溫度下干燥20小時(shí)以上，即可得成品。

經(jīng)檢測(cè)，得到的肝素鈉產(chǎn)品效價(jià)＞200U/mg。

實(shí)施例3

本實(shí)施例的高效價(jià)肝素鈉制備工藝，包括如下步驟：

（1）原料處理：將新鮮的豬腸用清水仔細(xì)清洗去除內(nèi)外污物和外部皮膚脂肪后，絞碎成肉糜狀；

（2）酶解提?。合虿襟E（1）中得到的肉糜狀中加入9倍的水，再加入2.5%的胰蛋白酶，加35%的NaOH調(diào)節(jié)pH至8.5，攪拌反應(yīng)50min后，再加入4%的NaCl，置于反應(yīng)鍋中，提取時(shí)間為13min，結(jié)束后，過(guò)濾，得到酶解液；

（3）絮凝處理：在上述酶解液中加入4%的殼聚糖絮凝劑，以110r/min的速度攪拌混合液25min，室溫靜置5h后，送入離心機(jī)離心過(guò)濾，得到含有肝素鈉的上清液；

（4）樹(shù)脂吸附：采用強(qiáng)堿性陰離子交換樹(shù)脂吸附上清液，樹(shù)脂的用量占母液的質(zhì)量比為1.0%，攪拌吸附8.5h，然后收集強(qiáng)堿性陰離子交換樹(shù)脂，棄去廢液；

（5）樹(shù)脂洗滌：先用自來(lái)水及溫水洗滌，然后用4.5度的鹽水溶液洗滌強(qiáng)堿性陰離子交換樹(shù)脂35min，以去除樹(shù)脂表面雜質(zhì)；

（6）肝素洗脫：以3倍體積的7%的氯化鈉溶液洗脫上樹(shù)脂，洗脫時(shí)間為3.5h，再用2倍體積的4%的氯化鈉溶液洗脫4h，將兩次洗脫液合并；

（7）醇沉：將上述洗脫液，加入2倍體積的85%的乙醇，攪拌25min，然后沉淀處理22h，收集沉淀物，干燥后得到肝素鈉粗品；

（8）精制：將肝素鈉粗品加入10倍體積的純水溶解，再用35%的NaOH調(diào)節(jié)pH至9.5，吸入反應(yīng)罐，用框式壓濾機(jī)過(guò)濾除去雜質(zhì)，再用35%的NaOH調(diào)pH至6.5，再緩慢加入85%的乙醇，攪拌均勻，沉淀8.5h；收集復(fù)沉淀物，離心脫水，再在75℃的溫度下干燥20小時(shí)以上，即可得成品。

經(jīng)檢測(cè)，得到的肝素鈉產(chǎn)品效價(jià)＞200U/mg。

本行業(yè)的技術(shù)人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實(shí)施例的限制，上述實(shí)施例和說(shuō)明書(shū)中描述的只是說(shuō)明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下，本發(fā)明還會(huì)有各種變化和改進(jìn)，這些變化和改進(jìn)都落入要求保護(hù)的本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明要求保護(hù)范圍由所附的權(quán)利要求書(shū)及其等效物界定。