本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)工程技術(shù)領(lǐng)域，也屬于精細(xì)化工技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種抗腫瘤藥物6-羥基亞硒酸酯化殼聚糖銅的合成方法，目的在于能夠提供一種硒化位點(diǎn)明確，便于生產(chǎn)的具有抗腫瘤活性的殼聚糖衍生物。
背景技術(shù)：
殼聚糖[β(1,4)-2-氨基-2-去氧-D-葡萄糖]是一種堿性生物多糖，在酸性條件下帶正電，與腫瘤細(xì)胞表面的陰離子可以通過(guò)吸附放電進(jìn)行中和，抵制其生長(zhǎng)，具有抗腫瘤、抗炎、抗菌等多種生物活性，且生物相容性良好，幾乎無(wú)毒性，沒(méi)有其它不良反應(yīng)，在現(xiàn)代藥物合成中經(jīng)常作為良好的藥物材料進(jìn)行開(kāi)發(fā)，拓展其應(yīng)用范圍。
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硒是人和動(dòng)物體內(nèi)必需的微量元素之一，大量流行病學(xué)研究和體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)表明多種疾病如腫瘤、衰老、免疫力低下等都與機(jī)體缺硒有關(guān)，適量補(bǔ)充硒對(duì)提高機(jī)體免疫力、抑制腫瘤、預(yù)防疾病等有著重要的意義。然而自然界中的硒多為無(wú)機(jī)硒，無(wú)機(jī)補(bǔ)硒劑如二氧化亞硒、亞硒酸、硒酸鈉等，其活性和毒性范圍較窄，生物利用率較低，致死量LC50相對(duì)較小，這些均使其應(yīng)用受到限制，因此尋找生物活性高且毒性低的有機(jī)硒化合物就成為現(xiàn)代有機(jī)硒化學(xué)研究的一項(xiàng)重要任務(wù)。
硒化殼聚糖是利用殼聚糖與亞硒酸制備而成的有機(jī)硒，前期研究結(jié)果表明，它可對(duì)包括白血病細(xì)胞在內(nèi)的多種腫瘤細(xì)胞具有顯著的抑制增殖和促進(jìn)凋亡作用，小劑量的硒化殼聚糖尚具有一定的誘導(dǎo)分化作用，同等含硒量下，硒化殼聚糖對(duì)NB4細(xì)胞和K562細(xì)胞的藥理作用效果分別約為亞硒酸鈉的3倍和5倍，進(jìn)一步研究顯示硒化殼聚糖的這些藥理作用是通過(guò)調(diào)控細(xì)胞內(nèi)多條細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路來(lái)實(shí)現(xiàn)的，通過(guò)序貫或同時(shí)給藥，硒化殼聚糖還可大大提高與其他臨床常用化療藥物的效果，減少化療藥物使用劑量，降低化療藥物的毒副作用，提示硒化殼聚糖具有良好的應(yīng)用前景。
然而，由于殼聚糖幾乎不溶于水，也幾乎不溶于其他有機(jī)溶劑，但能溶于含有無(wú)機(jī)酸和某些有機(jī)酸的水溶液，而殼聚糖分子中2-NH2和6-OH被硒化后，引進(jìn)了親水基團(tuán)制備成的硒化殼聚糖的水溶性雖略有增加，但是分子中的氨基被?；?，氨基與有機(jī)酸和無(wú)機(jī)酸的親和力減弱，使其在酸性溶液中的溶解度大大降低。這些限制了硒化殼聚糖的使用。
中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利CN1743342A，2006殼聚糖硫酸酯金屬配合物及其制備方法提出，金屬離子及酯基與殼聚糖分子有效的結(jié)合，可產(chǎn)生協(xié)同增效作用，毒性低、易吸收，有較好的水溶性。為此，我們通過(guò)金屬離子的屏蔽作用，在殼聚糖2-NH2和3-OH上引入金屬離子銅進(jìn)行環(huán)化，單一對(duì)6-OH進(jìn)行亞硒酸酯化，以期達(dá)到既提高硒化殼聚糖水溶性，又不降低其在無(wú)機(jī)酸和某些有機(jī)酸水溶液中的溶解性的目的；同時(shí)由于金屬離子及亞硒酸酯基與殼聚糖分子有效的結(jié)合，不僅產(chǎn)生協(xié)同增效作用，顯著增強(qiáng)了殼聚糖和硒的抗氧化、抗菌、抗腫瘤活性，而且毒性低、易吸收。但按中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利CN1685831A，2005殼聚糖金屬銅復(fù)合抗菌劑的制備方法[P]所制備的有機(jī)/無(wú)機(jī)復(fù)合物，并非配合比例與結(jié)構(gòu)明確的單一化合物，無(wú)法得到單一6-OH亞硒酸酯化的化合物。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種抗腫瘤藥物6-羥基亞硒酸酯化殼聚糖銅的合成方法。
為此本發(fā)明的技術(shù)方案為：一種抗腫瘤藥物6-羥基亞硒酸酯化殼聚糖銅的合成方法，包括殼聚糖銅，其特征在于：所述的亞硒酸酯化殼聚糖銅，是通過(guò)在殼聚糖銅單體上單一對(duì)6-OH進(jìn)行亞硒酸酯化得到的，其合成方法如下，將殼聚糖銅溶解于酸溶液，再加入到亞硒酸的水溶液中，其中殼聚糖銅中殼聚糖單體與亞硒酸的摩爾比比例為1：1，反應(yīng)溫度應(yīng)控制在75-90oC之間，加熱攪拌反應(yīng)2～3小時(shí)得亞硒酸酯化殼聚糖銅水溶液，加入乙醇至無(wú)沉淀產(chǎn)生為止，過(guò)濾、并用75%乙醇洗滌2-3次，干燥得亞硒酸酯化殼聚糖銅純品。
進(jìn)一步的改進(jìn)在于：酸溶液為1%的甲酸或乙酸水溶液。
有益效果:
本發(fā)明中的亞硒酸酯化殼聚糖銅是一種對(duì)環(huán)境無(wú)害，無(wú)毒副作用、易吸收、富含硒和微量元素銅的制劑，可作為一類(lèi)新的補(bǔ)充硒和微量元素的制劑用于醫(yī)藥、保健品、化妝品和農(nóng)業(yè)領(lǐng)域，也可作為一類(lèi)新型抗腫瘤藥物。
具體實(shí)施方式
舉例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施。
實(shí)例1、殼聚糖銅的合成
殼聚糖銅是按照文獻(xiàn)的方法合成，其分子中殼聚糖單體與Cu2+的摩爾比為1：1。
實(shí)例2、亞硒酸酯化殼聚糖銅的合成
將包含10mmol殼聚糖單體的殼聚糖銅粉末溶解于100ml 1%的甲酸或乙酸的水溶液中，在攪拌下加入10ml溶有10mmol亞硒酸的水，控制反應(yīng)溫度75-90oC，加熱攪拌反應(yīng)2～3小時(shí)，直至亞硒酸反應(yīng)完全，得亞硒酸酯化殼聚糖銅水溶液，加入乙醇至無(wú)沉淀產(chǎn)生為止，過(guò)濾、并用75%乙醇洗滌2-3次，干燥得亞硒酸酯化殼聚糖銅純品，按此法合成的產(chǎn)品分子中殼聚糖單體：Cu2+：Se原子=1：1：1（摩爾比）。
此上述方法合成的亞硒酸酯化殼聚糖銅是單一對(duì)殼聚糖單體的6-OH進(jìn)行亞硒酸酯化，達(dá)到了既提高硒化殼聚糖水溶性，又不降低其在無(wú)機(jī)酸和某些有機(jī)酸水溶液中的溶解性的目的，克服無(wú)機(jī)硒和普通硒化殼聚糖的諸多缺點(diǎn)，金屬元素銅與硒又有一定的協(xié)同作用，它通過(guò)調(diào)控細(xì)胞內(nèi)多條信號(hào)傳導(dǎo)通路來(lái)抑制腫瘤細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)凋亡，增加腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性，具有較高的抗腫瘤活性。