技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及氨基酸酯化合物以及包含該氨基酸酯化合物的組合物。本發(fā)明還涉及該化合物或組合物在抑制p38MAP激酶中的應(yīng)用。此外，本發(fā)明涉及由本發(fā)明化合物的酯基水解產(chǎn)生的酸。
背景技術(shù)：
導(dǎo)致諸如TNF-α、IL1-β和IL-8等細(xì)胞因子水平升高的包括單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞在內(nèi)的白細(xì)胞的不當(dāng)活化是一些炎性疾病的致病特征，這些炎性疾病包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩病、慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘和牛皮癬、以及涉及炎性組分的細(xì)胞增殖性疾病。炎癥細(xì)胞響應(yīng)各種外界刺激產(chǎn)生細(xì)胞因子，導(dǎo)致許多細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)機制的活化。其中較為顯著的是由調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、分化和應(yīng)激反應(yīng)的高度保守的信號傳導(dǎo)激酶構(gòu)成的細(xì)胞分裂素活化蛋白激酶(MAPK)超家族。哺乳動物細(xì)胞包含至少三個MAPK家族：p42/44細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(ERK)MAPK，c-Jun NH2-末端激酶(JNK)和p38MAPK(也稱為p38a/Mpk2/RK/SAPK2a/CSBP1/2)。p38MAPK在其鑒定為激酶后首先被克隆，用脂多糖(LPS)刺激單核細(xì)胞之后酪氨酸磷酸化[Han等，Science1994,265,808]。已經(jīng)描述了哺乳動物p38的其他同系物，包括p38β[Jiang等,J.Biol.Chem,1996,271,17920],p38γ[Li等,Biochem.Biophys.Res.Commun.,1996,228,334]和p38δ[Jiang等,J.Biol.Chem.1997,272,30122]。p38α和p38β表達廣泛，p38γ主要限于骨骼肌，并且p38δ主要在肺和腎臟中表達。
宿主防御細(xì)胞釋放細(xì)胞因子以及白細(xì)胞對細(xì)胞因子和其他促炎應(yīng)激的響應(yīng)受到p38MAPK各種程度的調(diào)節(jié)[Cuenda等,FEBS Lett,1995,364,229-233]。在其他細(xì)胞類型中，p38MAPK控制應(yīng)激響應(yīng)，例如TNF-α刺激支氣管上皮細(xì)胞產(chǎn)生IL-8和上調(diào)LPS-刺激的上皮細(xì)胞中的細(xì)胞粘附分子ICAM-1。一旦活化，經(jīng)雙特異性激酶MKK3和MKK6的TGY基序的雙重磷酸化，p38MAPK通過轉(zhuǎn)錄因子和其他激酶的磷酸化作用而產(chǎn)生效果。MAP激酶活化的蛋白激酶-2(MAPKAP-K2)已鑒定為p38磷酸化的目標(biāo)。顯示缺少MAPKAP-K2的小鼠[Kotlyarov等,Nat.Cell Biol.1999,1,94-97]響應(yīng)LPS/半乳糖胺介導(dǎo)的內(nèi)毒素性休克而釋放降低水平的TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-10和IFN-γ。在mRNA水平調(diào)節(jié)這些細(xì)胞因子以及COX-2的水平。TNF-α的水平通過TNF-αmRNA的3’-UTR中的富AU元件經(jīng)翻譯控制進行調(diào)節(jié)，而MAPKAP-K2信號傳導(dǎo)增加TNF-αmRNA翻譯。MAPKAP-K2信號傳導(dǎo)導(dǎo)致COX-2、IL-6和巨噬細(xì)胞炎癥蛋白的mRNA穩(wěn)定性增加。MAPKAP-K2決定p38MAPK以及轉(zhuǎn)導(dǎo)p38MAPK信號傳導(dǎo)的細(xì)胞位置，具有位于其羧基末端的核定位信號以及作為自動抑制結(jié)構(gòu)域的核輸出信號[Engel等,EMBO J.1998,17,3363-3371]。在應(yīng)激細(xì)胞中，MAPKAP-K2和p38MAPK由細(xì)胞核遷移進入細(xì)胞質(zhì)，這種遷移僅僅在p38MAPK催化活化時發(fā)生。據(jù)信該事件是由于p38MAPK的磷酸化導(dǎo)致的MAPKAP-K2核輸出信號的暴露而驅(qū)動的[Meng等,J.Biol.Chem.2002,277,37401-37405]。此外，p38MAPK直接或間接地導(dǎo)致一些據(jù)信介導(dǎo)炎癥的轉(zhuǎn)錄因子的磷酸化，包括ATF1/2(活化轉(zhuǎn)錄因子1/2),CHOP-10/GADD-153(生長停滯和DNA損傷誘導(dǎo)基因153),SAP-1(血清應(yīng)答因子輔助蛋白-1)和MEF2C(肌細(xì)胞增強子因子-2)[Foster等,Drug News Perspect.2000,13,488-497]。
在一些實例中已顯示，小分子抑制p38MAPK活性可用于治療一些由不當(dāng)細(xì)胞因子產(chǎn)生介導(dǎo)的疾病狀態(tài)，包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、COPD、哮喘和腦缺血。這種模式已成為一些綜述的主題[Salituro等,Current Medicinal Chemistry,1999,6,807-823和Kumar等,Nature Reviews Drug Discovery 2003,2,717-726]。
已顯示p38MAPK的抑制劑在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的動物模型中是有效的，例如大鼠中膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎[Revesz等,Biorg.Med.Chem.Lett.,2000,10,1261-1364]和大鼠中佐劑誘發(fā)關(guān)節(jié)炎[Wadsworth等,J.Pharmacol.Exp.Ther.,1999,291,1685-1691]。在胰腺炎誘發(fā)的肺損傷的鼠模型中，用p38MAPK抑制劑預(yù)處理可降低氣道和肺水腫中TNF-α的釋放[Denham等,Crit.Care Med.,2000,29,628和Yang等,Surgery,1999,126,216]。在OVA-致敏小鼠中在卵清蛋白刺激之前抑制p38MAPK降低了炎癥過敏氣道模型中氣道的細(xì)胞因子和炎癥細(xì)胞蓄積[Underwood等,J.Pharmacol.Exp.Ther.,2000,293,281]。已觀察到在患有炎性腸病的患者中p38MAP激酶活性增加[Waetzig等,J.Immunol,2002,168,5432-5351]。在心臟肥大[Behr等,Circulation,2001,104,1292-1298]和腦局部缺血[Barone等,J.Pharmacol.Exp.Ther.,2001,296,312-321]的大鼠模型中顯示p38MAPK抑制劑是有效的。
WO 2007/129040和WO 2009/060160都揭示α氨基酸酯是p38MAP激酶的抑制劑。在揭示的化合物中，酯基團是可以被一種或多種細(xì)胞內(nèi)酯酶水解成羧酸基團的酯基團；并且α氨基酸酯的碳上的取代基形成側(cè)鏈，其是天然或非天然α氨基酸的側(cè)鏈。
據(jù)稱揭示的化合物是p38MAPK(p38α,β,γ和δ)及其亞型和剪接變體，特別是p38α,p38β和p38β2的強效的選擇性抑制劑。因此，化合物可用于醫(yī)療用途，例如治療和預(yù)防本文所述的免疫和炎性疾病。該化合物的特征在于，氨基酸基序或氨基酸酯基序分子中存在-NH-CHR1R2，其可以被細(xì)胞內(nèi)羧酸酯酶水解。具有親脂性氨基酸酯基序的化合物穿過細(xì)胞膜，并且由細(xì)胞內(nèi)羧酸酯酶水解成酸。由于其不易于穿過所述細(xì)胞膜，所述極性水解產(chǎn)物在細(xì)胞中積聚。因此，化合物的p38MAP激酶活性在細(xì)胞內(nèi)得到延長和增強。本發(fā)明化合物涉及國際專利申請WO03076405所涵蓋的p38MAP激酶抑制劑，但區(qū)別在于它們具有上述氨基酸酯基序。
WO 2007/129040還揭示了包括在巨噬細(xì)胞中選擇性蓄積的化合物。已知巨噬細(xì)胞通過釋放細(xì)胞因子，特別是TNFα和IL-1在炎性疾病中發(fā)揮關(guān)鍵作用(van Roon等,Arthritis and Rheumatism,2003,1229-1238)。在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中，其是維持關(guān)節(jié)炎癥和關(guān)節(jié)破壞的主要作用物。巨噬細(xì)胞也參與腫瘤生長和發(fā)育(Naldini和Carraro，Curr Drug Targets Inflamm Allergy,2005,3-8)。因此選擇性靶向巨噬細(xì)胞增殖的試劑可具有治療癌癥和自體免疫疾病的價值。預(yù)期靶向特定細(xì)胞類型會引起副作用降低。酯酶基序連接至p38激酶抑制劑的方式確定其是否水解，因而確定是否在不同細(xì)胞類型中積聚。具體說，巨噬細(xì)胞包含人羧酸酯酶hCE-1而其他細(xì)胞類型沒有。在WO 2007/129040的通式(I)中，當(dāng)酯酶基序R1CH(R2)NH-的氮不與羰基(-C(＝O)-)直接相連時，即Y不是–C(＝O),-C(＝O)O-或-C(＝O)NR3-基團，酯將只能由hCE-1水解，因而抑制劑僅在巨噬細(xì)胞中積聚。本文中，除非指定一種或多種“單核細(xì)胞”，所述術(shù)語一種或多種巨噬細(xì)胞用于指示巨噬細(xì)胞(包含腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞)和/或單核細(xì)胞。
WO 2009/060160揭示了一組落在WO 2007/129040一般描述范圍內(nèi)的具體化合物，但并未具體鑒定或示例。這些化合物顯示如上所述的巨噬細(xì)胞選擇性。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，化合物N-[2-{4-[6-氨基-5-(2,4-二氟苯甲酰)-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3,5-二氟苯基}乙基]-L-丙氨酸叔丁酯在抑制p38MAP激酶活性方面意外地好。測試顯示，在人血中酯TNF-α抑制的IC50值明顯低于相關(guān)化合物觀察到的人血中酯TNF-α抑制的IC50值。而且，本發(fā)明人進行的測試顯示，本發(fā)明化合物的生物利用度要比結(jié)構(gòu)類似的已知化合物預(yù)計的結(jié)果要高得多。
因此，本發(fā)明提供了以下化合物：N-[2-{4-[6-氨基-5-(2,4-二氟苯甲酰)-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3,5-二氟苯基}乙基]-L-丙氨酸叔丁酯或其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或溶劑合物。
本發(fā)明還提供了包含該化合物以及一種或多種藥學(xué)上可接受的運載體和/或賦形劑的藥物組合物。
另一方面，本發(fā)明提供了上文所述的化合物或者上文限定的組合物，通過療法在人或動物體的治療方法中使用。
本發(fā)明還提供了上文所述的化合物或上文限定的組合物用于在體外或體內(nèi)抑制p38MAP激酶活性。還提供了上文限定的化合物或上文限定的組合物用于預(yù)防或治療自身免疫或炎性疾病。還提供了上文限定的化合物或上文限定的組合物，在細(xì)胞增殖性疾病的治療中使用。
另一方面，本發(fā)明提供了一種抑制p38MAP激酶活性的方法，該方法包括使該酶與一定量能夠有效實現(xiàn)這種抑制的上文限定的化合物或上文限定的組合物接觸。還提供了一種治療或預(yù)防對象自身免疫或炎性疾病的方法，該方法包括給予所述對象有效量的上文限定的化合物或上文限定的組合物。還提供了一種治療對象細(xì)胞增殖性疾病的方法，該方法包括給予所述對象有效量的上文限定的化合物或上文限定的組合物。所述治療可包括緩解或降低細(xì)胞增殖性疾病的發(fā)病。
又一方面，本發(fā)明提供了使用上文限定的化合物或上文限定的組合物在制備用于抑制p38MAP激酶活性的藥物中的應(yīng)用。還提供了上文限定的化合物或上文限定的組合物在制備用于預(yù)防或治療自身免疫或炎性疾病的藥物中的應(yīng)用。還提供了上文限定的化合物或上文限定的組合物在制備用于治療細(xì)胞增殖性疾病的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明還提供了一種用于抑制p38MAP激酶活性的試劑，該試劑包含上文限定的化合物或上文限定的組合物作為活性成分。該試劑通常用于預(yù)防或治療自身免疫或炎性疾病?？蛇x地，可用于治療細(xì)胞增殖性疾病。
本發(fā)明還提供了一種酸，即N-[2-{4-[6-氨基-5-(2,4-二氟苯甲酰)-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3,5-二氟苯基}乙基]-L-丙氨酸。
具體實施方式
本發(fā)明提供了一種化合物，即N-[2-{4-[6-氨基-5-(2,4-二氟苯甲酰)-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3,5-二氟苯基}乙基]-L-丙氨酸叔丁酯。
本發(fā)明的化合物可以以鹽、水合物或溶劑合物的形式制備。因此，本發(fā)明也提供了該化合物的鹽、水合物或溶劑合物。通常，所述鹽是藥學(xué)上可接受的鹽。
如本文所用，藥學(xué)上可接受的鹽是與藥學(xué)上可接受的酸或堿形成的鹽。藥學(xué)上可接受的酸包括無機酸和有機酸，無機酸包括例如鹽酸、硫酸、磷酸、二磷酸、氫溴酸或硝酸，有機酸包括例如檸檬酸、水楊酸、谷氨酸、乳酸、富馬酸、馬來酸、蘋果酸、抗壞血酸、琥珀酸、酒石酸、苯甲酸、醋酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸或?qū)妆交撬?。藥學(xué)上可接受的堿包括堿金屬(例如鈉或鉀)和堿土金屬(例如，鈣、鋇或鎂)氫氧化物和有機堿，例如烷基胺、芳烷基胺和雜環(huán)胺。合適的有機堿的例子包括但不限于：N-甲基-D-葡萄糖胺、膽堿三(羥甲基)氨基-甲烷、L-精氨酸、L-賴氨酸、N-乙基哌啶、二芐胺。關(guān)于合適的鹽的綜述，參見《藥用鹽手冊：性質(zhì)、選擇及用途》(Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use)，Stahl和Wermuth編著(Wiley-VCH,Weinheim,德國,2002)。
本發(fā)明化合物的合適的鹽包括作為藥學(xué)上可接受的鹽的例子的本文所述的那些。
本文中使用的術(shù)語“溶劑合物”描述了一種包含本發(fā)明的化合物和化學(xué)計量的一種或多種藥學(xué)上可接受的溶劑分子(如乙醇)的分子復(fù)合物。當(dāng)該溶劑是水時，則使用術(shù)語“水合物”。
為避免疑慮，本發(fā)明化合物可以以任何互變異構(gòu)形式使用。
本發(fā)明的化合物包括手性中心?；衔锿ǔＪ荓-丙氨酸衍生物的形式(即，如實施例1所示)。然而，化合物也可以是D-丙氨酸衍生物或者D-和L-形式的混合物。如果存在混合物，優(yōu)選地至少90％、95％或99％是L-丙氨酸衍生物的形式。
參照實施例部分，下面描述了用于制備本發(fā)明化合物的合適的方案和工藝。
起始材料通常是4-氯苯基3-(2,4-二氟苯基)-3-氧代硫趕亞氨逐丙酸酯(propanimidothioate)鹽酸鹽和2-(4-氨基-3,5-二氟苯基)乙醇。2-(4-氨基-3,5-二氟苯基)乙醇可以采用以下方案制備，類似于實施例部分的方案1：
二氟硝基苯市售可得。階段1要求在苯環(huán)的硝基對位加上乙酸叔丁酯基團。階段2要求酯基團水解形成相應(yīng)的酸。階段3中酸降解形成伯醇。階段4中硝基還原成胺。
采用WO 2003076405所述實驗方法制備4-氯苯基3-(2,4-二氟苯基)-3-氧代硫趕亞氨逐丙酸酯鹽酸鹽。
然后類似于實施例部分的方案2，采用以下方案合成化合物N-[2-{4-[6-氨基-5-(2,4-二氟苯甲酰)-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3,5-二氟苯基}乙基]-L-丙氨酸叔丁酯。
階段1中，2-(4-氨基-3,5-二氟苯基)乙醇和4-氯苯基3-(2,4-二氟苯基)-3-氧代硫趕亞氨逐丙酸酯鹽酸鹽一起反應(yīng)形成2-(4-{[3-(2,4-二氟苯基)-3-氧代亞氨逐丙酰氨基(propanimidoyl)]氨基}-3,5-二氟苯基)乙酸乙酯。階段2中，加入丙炔酸形成2-{4-[6-氨基-5-(2,4-二氟苯甲?；?-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3,5-二氟苯基}乙酸乙酯。階段3中，乙酸酯基團水解形成醇，階段4中，所得醇基團氧化形成醛。然后在階段5，加入L-丙氨酸叔丁酯鹽酸鹽，形成本發(fā)明的化合物。L-丙氨酸叔丁酯鹽酸鹽市售可得。
本發(fā)明還提供了包含該化合物以及一種或多種藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑的藥物組合物。所述藥物組合物通常包含最高達85重量％的本發(fā)明化合物。更具體地，其包含最高達50重量％的本發(fā)明化合物。優(yōu)選的藥物組合物是無菌且無熱原的。
本發(fā)明的化合物可以以各種劑型給予。因此，它們可以口服給予，例如作為片劑、含片、膠囊劑、錠劑、水性或油性混懸劑、可分散粉末劑或顆粒劑給予。本發(fā)明的化合物也可以胃腸外給予，皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、胸骨內(nèi)、經(jīng)皮或者通過輸注技術(shù)給予。根據(jù)所用的載劑和濃度，可將藥物懸浮或溶解于載劑中。優(yōu)選地，可將輔助試劑(如局部麻醉劑、防腐劑和緩沖劑)溶解于載劑中。該化合物也可以以栓劑給予。該化合物可以以氣溶膠的形式通過吸入器或噴霧器吸入給予。
本發(fā)明的化合物通常用藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑配制給予。例如，固體口服給藥形式可以含有與活性化合物一起給藥的增溶劑，例如環(huán)糊精或改性環(huán)糊精；稀釋劑，例如乳糖、右旋糖、蔗糖、纖維素、玉米淀粉或馬鈴薯淀粉；潤滑劑，例如二氧化硅、滑石、硬脂酸、硬脂酸鎂或硬脂酸鈣、和/或聚乙二醇；粘合劑，例如淀粉、阿拉伯樹膠、黃蓍膠、明膠、糖漿、阿拉伯膠、山梨糖醇、甲基纖維素、羧甲基纖維素或聚乙烯吡咯烷酮；解聚劑，例如淀粉、藻酸、藻酸鹽或羥乙酸淀粉鈉；泡騰劑混合物；染料；甜味劑；潤濕劑，例如卵磷脂、聚山梨醇酯、月桂基硫酸鹽；以及通常用于藥物配制的無毒性和藥學(xué)上無活性的物質(zhì)。這些藥物制劑可以以已知方式制備，例如通過混合、制粒、壓片、糖衣或薄膜包衣工藝進行制備。
用于口服給予的液體分散體可以是溶液、糖漿、乳劑和混懸劑。這類液體制劑可含有常規(guī)的添加劑，例如助懸劑(如山梨糖醇、糖漿、甲基纖維素、葡萄糖糖漿、明膠、氫化食用油)、乳化劑(如卵磷脂、去水山梨糖醇單油酸酯或阿拉伯膠)、非水性載劑(可包括食用油，如杏仁油、分餾椰子油，油酯(如甘油)、丙二醇或乙醇)、防腐劑(如對羥基苯甲酸甲酯或丙酯或者山梨酸)，需要時還可含有常規(guī)的調(diào)味劑或著色劑。溶液劑可包含增溶劑，例如環(huán)糊精或改性環(huán)糊精。糖漿劑可含有例如蔗糖或蔗糖與甘油和/或甘露醇和/或山梨糖醇作為載體。
混懸劑和乳劑可以含有，例如作為載體的天然膠、瓊脂、藻酸納、果膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素或者聚乙烯醇。用于肌內(nèi)注射的混懸劑或者溶液劑可以含有與活性化合物一起給藥的藥學(xué)上可接受的載體，例如無菌水、橄欖油、油酸乙酯、二醇，如丙二醇；增溶劑，例如環(huán)糊精或改性環(huán)糊精，以及如果需要的話，合適量的鹽酸利多卡因。
用于靜脈內(nèi)或輸注的溶液劑可以含有，例如作為載體的無菌水和增溶劑，例如環(huán)糊精或改性環(huán)糊精，或者優(yōu)選地它們可以是無菌、水性、等張鹽水溶液的形式。
對于在皮膚上局部的施用而言，可將藥物制成乳膏劑、洗劑或油膏劑?？捎糜谠撍幬锶楦鄤┗蛴透鄤┑闹苿┦潜绢I(lǐng)域熟知的常規(guī)制劑，例如藥劑學(xué)標(biāo)準(zhǔn)教科書如英國藥典(British Pharmacopoeia)所述。
對通過吸入的局部應(yīng)用而言，可將藥物制成氣霧劑遞送(例如通過壓力驅(qū)動噴射霧化器或超聲霧化器)，或優(yōu)選通過推進劑驅(qū)動定量氣霧劑或無推進劑情況下給予微粉化粉末(例如吸入膠囊或其他“干粉”遞送系統(tǒng))。這類吸入制劑中可含有賦形劑，例如推進劑(如定量氣霧劑情況下的氟利根(Frigen))、表面活性物質(zhì)、乳化劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、調(diào)味劑和填料(如粉末吸入器情況下的乳糖)。為了吸入，可用很多能生成和給予具有最佳顆粒尺寸的氣霧劑的儀器，使用對患者合適的吸入技術(shù)。對定量氣霧劑特別是粉末吸入器而言，除了使用銜接子(間隔子、擴展子)和梨形容器(如和發(fā)射噴藥器(puffer)噴霧的自動裝置外，還可使用多種技術(shù)方法(如或吸入器，例如歐洲專利申請EP 0 505 321所述)。
對眼睛的局部應(yīng)用而言，可將藥物制成合適的無菌水性或非水性載劑中的溶液或混懸劑。還可包括添加劑，例如緩沖劑(如焦亞硫酸鈉或依地酸二鈉(disodium edeate))、防腐劑(包括殺菌和殺真菌劑如(苯基汞乙酸鹽或硝酸鹽、苯扎氯銨或氯己定))和增稠劑(如羥丙甲纖維素)。
將治療有效量的本發(fā)明化合物給予對象。應(yīng)理解，針對任何特定對象的具體劑量水平取決于多種因素，包括所采用具體化合物的活性、年齡、體重、一般健康情況、性別、飲食、給藥時間、給藥途徑、排泄速度、藥物組合以及正在治療的特定疾病的嚴(yán)重程度。最佳劑量水平和給藥頻率通常由臨床實驗確定。
常規(guī)日劑量最高至50毫克/千克體重，例如0.001-50毫克/千克體重，基于具體化合物的活性、待治療對象的年齡、體重和狀態(tài)，疾病的類型和嚴(yán)重程度以及給藥頻率和途徑。優(yōu)選地，日劑量水平為0.05毫克至2克，優(yōu)選0.1毫克至10毫克。本發(fā)明化合物通常以無毒性的用量給予患者。
本發(fā)明還提供了本文限定的化合物或本文限定的組合物用于治療人體或動物體的方法。
已發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物和組合物能夠抑制p38MAP激酶的活性。因此，本發(fā)明的化合物和組合為可用于預(yù)防和治療p38MAP激酶活性調(diào)節(jié)的疾病和病癥。由p38MAP激酶活性調(diào)節(jié)的疾病和病癥包括細(xì)胞增殖疾病(如癌癥和牛皮癬)、多谷氨酰胺疾病(如亨廷頓病)、神經(jīng)退行性疾病(如阿爾茨海默病)、自身免疫疾病(如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)、糖尿病、血液疾病、炎性疾病、心血管疾病、動脈粥樣硬化和感染的炎性后遺癥。具體例子是細(xì)胞增殖性疾病、自身免疫疾病和炎性疾病。
自身免疫疾病通常有炎性成分。這類病癥包括急性播散性普禿、ANCA陽性疾病、貝切特病、美洲錐蟲病(Chagas’disease)、慢性疲勞綜合征、家族性自主神經(jīng)異常、腦脊髓炎、強直性脊柱炎、再生障礙性貧血、化膿性汗腺炎、自體免疫肝炎、自體免疫卵巢炎、乳糜瀉、炎性腸病、克羅恩氏病、1型糖尿病、范可尼綜合征、巨細(xì)胞性動脈炎、急性腎小球腎炎、肺出血腎炎綜合征、格雷夫癥、格-巴二氏綜合征、橋本氏疾病、亨-舒綜合征、川崎病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、顯微結(jié)腸炎、顯微鏡下多動脈炎、混合性結(jié)締組織病、多發(fā)性硬化、重癥肌無力、陣攣肌陣攣綜合征、視神經(jīng)炎、奧德甲狀腺炎(Ord’s thyroiditis)、天皰瘡、結(jié)節(jié)性多動脈炎、多肌痛、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、萊特爾綜合征、舍格倫綜合征、顳動脈炎、韋格納肉芽腫病、溫暖自體免疫溶血性貧血、間質(zhì)性膀胱炎、萊姆病、硬斑病、牛皮癬、結(jié)節(jié)病、硬皮病、潰瘍性結(jié)腸炎和白癜風(fēng)。
可用本發(fā)明化合物和組合物預(yù)防或治療的其他炎性病癥包括例如闌尾炎、皮炎、皮肌炎、心內(nèi)膜炎、纖維組織炎、牙齦炎、舌炎、肝炎、化膿性汗腺炎、虹膜炎、喉炎、乳腺炎、心肌炎、腎炎、中耳炎、胰腺炎、腮腺炎、心外膜炎、腹膜炎(peritonoitis)、咽炎、胸膜炎、肺炎、前列腺炎、腎盂腎炎、和口腔炎、移植物排斥(涉及器官如腎、肝、心、肺、胰腺(如胰島細(xì)胞)、骨髓、角膜、小腸、皮膚同種異體移植物(allograft)、皮膚自體移植物(homograft)和心臟瓣膜異種移植物(xengraft)、血清病以及移植物抗宿主病)、急性胰腺炎、慢性胰腺炎、急性呼吸窘迫綜合征、賽塞里綜合征(Sexary syndrome)、先天性腎上腺增生、非化膿性甲狀腺炎、癌相關(guān)高鈣血癥、天皰瘡、大泡皰疹樣皮炎、重癥多形紅斑、剝脫性皮炎、脂溢性皮炎、季節(jié)性和常年性變應(yīng)性鼻炎、支氣管哮喘、接觸性皮炎、特應(yīng)性皮炎、藥物超敏反應(yīng)、變應(yīng)性結(jié)膜炎、角膜炎、眼帶狀皰疹、虹膜炎和虹膜睫狀體炎、脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜炎、視神經(jīng)炎、癥狀性結(jié)節(jié)病(symptomatic sarcoidosis)、暴發(fā)性或播散性肺結(jié)核化療、成人特發(fā)性血小板減少性紫癜、成年繼發(fā)性血小板減少癥、獲得性(自體免疫)溶血性貧血、成人白血病和淋巴瘤、兒童急性白血病、局限性腸炎、自體免疫血管炎、多發(fā)性硬化、慢性阻塞性肺病、實體器官移植排斥、敗血癥、原發(fā)性膽汁性肝硬化和原發(fā)性硬化性膽管炎。
本發(fā)明的化合物和組合物可用于預(yù)防和治療炎性和自身免疫疾病性疾病和病癥?？梢允褂帽景l(fā)明化合物和組合物治療的炎性和自身免疫性和病癥包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬關(guān)節(jié)炎、1型糖尿病、哮喘、炎性腸病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡，和伴隨感染病情的炎癥(如敗血癥)、牛皮癬、克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、慢性阻塞性肺病、多發(fā)性硬化、特應(yīng)性皮炎和移植物抗宿主病。
本發(fā)明的化合物和組合物也可用于治療細(xì)胞增殖性疾病，例如癌癥?？梢灾委煹陌┌Y的例子包括乳腺癌、卵巢癌、肺癌、胰腺癌、肝癌、結(jié)腸癌、腎癌、淋巴癌和黑色素瘤。例如，可以治療的癌癥包括乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌、肺癌、結(jié)腸癌、腎癌、淋巴癌或黑色素瘤。
本發(fā)明還涉及一種酸，即：
N-[2-{4-[6-氨基-5-(2,4-二氟苯甲酰)-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3,5-二氟苯基}乙基]-L-丙氨酸。
該酸可以通過本發(fā)明化合物的水解進行制備。
如本文所述，本發(fā)明的化合物是巨噬細(xì)胞選擇性的。因此，本發(fā)明化合物的酯基可以被包含人羧酸酯酶hCE-1的細(xì)胞水解而不被含有hCE-2或hCE-3的細(xì)胞水解。因此，該酸在包含hCE-1的細(xì)胞內(nèi)由本發(fā)明化合物的酯基水解產(chǎn)生并且該酸在該細(xì)胞中選擇性積聚。
在以下實施例中進一步闡述本發(fā)明。
實施例
根據(jù)以下實施例制備本發(fā)明的化合物。
縮寫
CDI＝羰二咪唑
DCM＝二氯甲烷
DMF＝二甲基甲酰胺
EtOAc＝乙酸乙酯
HCl＝鹽酸
LCMS＝高效液相色譜/質(zhì)譜
MeOH＝甲醇
MgSO4＝硫酸鎂
Na2CO3＝碳酸鈉
NaHCO3＝碳酸氫鈉
NMR＝核磁共振
STAB＝三乙酰氧基硼氫化鈉
THF＝四氫呋喃
g＝克
mg＝毫克
mL＝毫升
mmol＝毫摩爾
市售可得的試劑和溶劑(HPLC級)不需進一步純化即可使用。使用Buchi旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去溶劑。使用Biotage InitiatorTM 8微波合成儀進行微波輻射。使用獲自Fluorochem的硅凝膠、粒度40–63μm(230-400目)通過快速色譜柱進行化合物純化。
在氘代溶劑中于Bruker 300MHz AV光譜儀上記錄1H NMR光譜?；瘜W(xué)位移(d)以百萬分之計。用Kieselgel 60F254(默克公司(Merck))板進行薄層色譜(TLC)分析并用UV光觀察。
在Agilent HP1100LC系統(tǒng)上進行分析型HPLC/MS，使用反相Luna C18柱(3mm,50x 4.6mm)，2.25分鐘內(nèi)梯度5-95％B(A＝水+0.1％甲酸,B＝乙腈+0.1％甲酸)，流速＝2.25mL/分鐘。使用G1315B DAD檢測器在220和254nm記錄UV光譜。在LC/MSD SL G1956B檢測器上于范圍m/z 150–800內(nèi)獲得質(zhì)譜。使用ChemStation和ChemStation數(shù)據(jù)瀏覽器(Data Browser)軟件對數(shù)據(jù)進行積分運算和報告。
中間體
中間體1：4-氯苯基3-(2,4-二氟苯基)-3-氧代硫趕亞氨逐丙酸酯鹽酸鹽
中間體1可以采用WO 2003076405所述實驗方案進行制備。
中間體2：2-(4-氨基-3,5-二氟苯基)乙醇
中間體2采用下述方案1所示途徑合成。
方案1
階段1-(3,5-二氟-4-硝基苯基)乙酸叔丁酯
氮氣下，1小時內(nèi)在二氟硝基苯(24.96g,157mmol)和氯乙酸叔丁酯(38.0mL,267mmol)的無水DMF(200mL)溶液中逐滴加入冷的(-35℃)叔丁醇鉀(61.61g,549mmol)在無水DMF(200mL)中的懸浮液。反應(yīng)混合液在-35℃攪拌1.5小時，用2N HCl(240mL)淬滅并用庚烷萃取(4x200mL)。合并的有機萃取物用水(3x200mL)、鹽水(200mL)洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并減壓濃縮，形成黃色油狀物。柱色譜純化(含10％EtOAc的庚烷)得到黃色油狀物(37.64g)。另外兩個批次(10.00g和23.54g的二氟硝基苯)分別得到14.30g和31.39g產(chǎn)物。所有三個批次的1H NMR顯示所需化合物和少量未鑒定的雜質(zhì)的混合物。將3個批次合并，無需進一步純化即可用于下一階段。
1H NMR(300MHz,CDCl3)7.05(2H,d,J＝8.5Hz),3.56(2H,s),1.46(9H,s)。
階段2-(3,5-二氟-4-硝基苯基)乙酸
20分鐘內(nèi)將三氟乙酸(150mL)逐滴加入冷的(0℃)(3,5-二氟-4-硝基苯基)乙酸叔丁酯(83.33g,305mmol)的DCM(300mL)溶液中。加入完成后，使得反應(yīng)混合物升高至室溫并攪拌3小時。減壓濃縮反應(yīng)混合物，得到粘性棕色固體。用庚烷研磨后得到黃色固體狀的標(biāo)題化合物(53.29g,兩個步驟的產(chǎn)率為67％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)7.08(2H,d,J＝8.5Hz),3.74(2H,s),-CO2H未見。
階段3-2-(3,5-二氟-4-硝基苯基)乙醇
氮氣下，將硼烷-二甲基硫醚復(fù)合物(35mL,368mmol)逐滴加入冷的(0℃)(3,5-二氟-4-硝基苯基)乙酸(53.29g,245mmol)的無水THF(500mL)溶液中。加入完成之后，反應(yīng)混合物升高至室溫，攪拌16小時，冷卻至0℃，用MeOH(300mL)小心淬滅，減壓濃縮后得到棕色油狀物。干快速色譜法純化(含60-80％EtOAc的庚烷)得到橙色油狀的標(biāo)題化合物(38.90g,產(chǎn)率78％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)7.01(2H,d,J＝8.7Hz),3.93(2H,t,J＝6.2Hz),2.92(2H,t,J＝6.2Hz),2.34(1H,br s).
階段4-2-(4-氨基-3,5-二氟苯基)乙醇
2-(3,5-二氟-4-硝基苯基)乙醇(38.90g,191mmol)溶解在EtOAc(250mL)中。反應(yīng)容器抽真空并用氮氣充滿三次。加入鈀碳(10重量％，4.00g)，容器抽真空并用氮氣充滿三次。最后，容器抽真空并用氫氣充滿，配上含氫氣的氣球。然后，氫氣下室溫攪拌15小時，再次充滿氫氣球，混合物再攪拌25小時。反應(yīng)混合物過濾通過減壓濃縮濾液，得到棕色油狀物。干快速色譜法純化(含50％EtOAc的庚烷)得到駝色固體狀的標(biāo)題化合物(20.70g,產(chǎn)率62％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)6.73-6.70(2H,m),3.81(2H,t,J＝6.4Hz),2.75(2H,t,J＝6.4Hz),-OH和-NH2未見。
實施例1:N-(2-{4-[6-氨基-5-(2,4-二氟苯甲酰)-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3,5-二氟苯基}乙基)-L-丙氨酸叔丁酯
采用以下方案2所示途徑合成實施例1。
方案2
階段1-2-(4-{[3-(2,4-二氟苯基)-3-氧代亞氨逐丙酰氨基]氨基}-3,5-二氟苯基)乙酸乙酯
2-(4-氨基-3,5-二氟苯基)乙醇(20.71g,120mmol)加入4-氯苯基3-(2,4-二氟苯基)-3-氧代硫趕亞氨逐丙酸酯鹽酸鹽(41.26g,114mmol)的冰醋酸(400mL)溶液中。反應(yīng)混合物在80℃攪拌2.5小時，加入乙酸酐(21mL,228mmol)。在80℃再攪拌45分鐘后，反應(yīng)混合物冷卻至室溫，減壓濃縮后得到棕色油狀物。用EtOAc研磨得到駝色固體，用乙醚洗滌。固體用NaHCO3的飽和水溶液吸收，劇烈攪拌30分鐘。過濾收集固體，用水洗滌，減壓干燥，得到駝色固體狀的標(biāo)題化合物(23.36g,產(chǎn)率52％)。
LCMS:m/z 397[M+H]+。
階段2-2-{4-[6-氨基-5-(2,4-二氟苯甲酰)-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3,5-二氟苯基}乙酸乙酯
氮氣下，5分鐘內(nèi)將丙炔酸(5.4mL,88mmol)逐滴加入冷的(0℃)CDI(14.27g,88mmol)的無水THF(400mL)溶液中。加入完成之后，反應(yīng)混合物升高至室溫，攪拌1小時。加入2-(4-{[3-(2,4-二氟苯基)-3-氧代亞氨逐丙酰氨基]氨基}-3,5-二氟-苯基)乙酸乙酯(23.26g,59mmol)的無水THF(200mL)的溶液，反應(yīng)混合物回流攪拌6.5小時。反應(yīng)混合物冷卻至室溫，靜置16.5小時。丙炔酸(5.4mL,88mL),CDI(14.27g,88mmol)和THF(200mL)如上文所示進行處理并加入到反應(yīng)混合物中，接著再回流攪拌6小時。然后反應(yīng)混合物冷卻至室溫，減壓濃縮后得到棕色油狀物。干快速色譜法純化(含5％MeOH的DCM)得到暗褐色固體，用EtOAc研磨進一步純化后得到黃色固體狀的標(biāo)題化合物(7.45g,產(chǎn)率28％)。
LCMS:m/z 449[M+H]+和471[M+Na]+。
階段3-6-氨基-5-(2,4-二氟苯甲酰)-1-[2,6-二氟-4-(2-羥乙基)苯基]吡啶-2(1H)-酮
將2-{4-[6-氨基-5-(2,4-二氟苯甲酰)-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3,5-二氟苯基}乙酸乙酯(7.45g,17mmol)懸浮在6N HCl(80mL)中，反應(yīng)化合物回流21.5小時。過濾收集固體，用NaHCO3飽和水溶液(200mL)吸收，劇烈攪拌30分鐘。過濾收集固體，用水洗滌，真空爐中干燥(40℃)，得到駝色固體狀的標(biāo)題化合物。
LCMS:m/z 407[M+H]+和429[M+Na]+。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)7.57(1H,td,J＝6.6,8.3Hz),7.41(1H,td,J＝2.4,9.7Hz),7.37-7.29(3H,m),7.23(1H,td,J＝2.3,8.5Hz),5.74(1H,d,J＝9.8Hz),4.78(1H,t,J＝5.1Hz),3.76-3.70(2H,m),2.86(2H,t,J＝6.7Hz),-NH2未見
階段4-{4-[6-氨基-5-(2,4-二氟苯甲酰)-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3,5-二氟苯基}-乙醛
戴斯-馬丁氧化劑(1.03g,2.4mmol)加入6-氨基-5-(2,4-二氟苯甲酰)-1-[2,6-二氟-4-(2-羥乙基)苯基]吡啶-2(1H)-酮(823mg,2.0mmol)的DCM(20mL)懸浮液中。反應(yīng)混合物室溫攪拌2小時，用NaHCO3飽和水溶液(10mL)和硫代硫酸鈉的飽和水溶液(10mL)淬滅，劇烈攪拌30分鐘。分離水層，用DCM(2x20mL)進一步萃取。合并的有機萃取物經(jīng)干燥(MgSO4)，過濾，減壓濃縮后得到淡棕色固體狀的標(biāo)題化合物(819mg)。該產(chǎn)物無需進一步純化即可用于下一階段。
階段5-N-(2-{4-[6-氨基-5-(2,4-二氟苯甲酰)-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3,5-二氟苯基}乙基)-L-丙氨酸叔丁酯
L-丙氨酸叔丁酯鹽酸鹽(552mg,3.0mmol)和STAB(1.29g,6.1mmol)加入{4-[6-氨基-5-(2,4-二氟苯甲酰)-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3,5-二氟苯基}-乙醛(819mg,2.0mmol)的溶液中。反應(yīng)混合物室溫攪拌3.5小時，用Na2CO3的飽和水溶液(20mL)淬滅，劇烈攪拌20分鐘。分離水層，用EtOAc(2x20mL)進一步萃取。合并的有機萃取物用鹽水(20mL)洗滌，干燥(MgSO4)，過濾，減壓濃縮后得到黃色油狀物。柱色譜純化(含5％MeOH的DCM)得到淡黃色固體狀的標(biāo)題化合物(492mg,兩個步驟的產(chǎn)率為78％)。
LCMS:純度98％,m/z 534[M+H]+。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)7.58(1H,td,J＝6.8,8.3Hz),7.41(1H,td,J＝2.3,9.8Hz),7.37-7.30(3H,m),7.23(1H,td,J＝2.3,8.5Hz),5.74(1H,d,J＝9.8Hz),3.20(1H,d,J＝7.0Hz),2.89-2.70(4H,m),1.42(9H,s),1.16(3H,d,J＝7.0Hz),-NH2和-NH-未見
生物活性的測定
p38MAP激酶活性
在由英國鄧迪的奧普斯特(Upstate)進行的試驗中測量化合物抑制p38MAP激酶活性的能力。在25μL的最終反應(yīng)體積中，p38MAP激酶a(5-10mU)與25mM Tris pH 7.5,0.002mMEGTA,0.33mg/mL髓磷脂堿蛋白,10mM乙酸鎂和[g-33p-ATP](比活度約500cpm/pmol,濃度按照需要)進行孵育。加入MgATP混合物啟動反應(yīng)。室溫孵育40分鐘之后，加入5μL 3％的磷酸溶液終止反應(yīng)。然后10μL的反應(yīng)液點樣到P30Filtermat上，在75mM磷酸中洗滌三次持續(xù)5分鐘，一旦在甲醇中之后，進行干燥和閃爍計數(shù)。
從DMSO的儲液的1/3log稀釋系列生成重復(fù)數(shù)據(jù)點。用10μM的頂端濃度開始9個稀釋步驟，并且包括“無化合物”的空白。在ATP濃度為或者接近Km時進行標(biāo)準(zhǔn)放射度濾膜結(jié)合試驗。收集閃爍計數(shù)得到的數(shù)據(jù)并由Prism軟件進行自由擬合分析。通過產(chǎn)生的曲線，確定并報告實現(xiàn)50％抑制的濃度。
THP-1細(xì)胞的LPS刺激
將100μl THP-1細(xì)胞以4x 104細(xì)胞/孔的密度接種在V形底的96孔組織培養(yǎng)處理板中，37℃5％CO2中孵育16小時。在100μl組織培養(yǎng)基中加入抑制劑之后2小時，用終濃度1μg/ml的LPS(大腸桿菌菌株005:B5,西格瑪公司(Sigma))刺激細(xì)胞，在37℃5％CO2中孵育6小時。通過夾心ELISA(安迪生物公司#QTA00B)從無細(xì)胞上清液中測量TNF-α水平。
人全血的LPS刺激
采用含肝素的真空采集管(BD公司(Becton Dickinson))通過靜脈穿刺獲取全血，在等體積的RPMI1640組織培養(yǎng)基(西格瑪公司)中稀釋。100μl接種到V形底的96孔組織培養(yǎng)處理板中。在100μl RPMI1640培養(yǎng)基中加入抑制劑之后2小時，用終濃度100ng/ml的LPS(大腸桿菌菌株005:B5,西格瑪公司(Sigma))刺激全血，在37℃5％CO2中孵育6小時。通過夾心ELISA(安迪生物公司#QTA00B)從無細(xì)胞上清液中測量TNF-α水平。
小鼠中血漿暴露
根據(jù)以下方法在水中以8％DMSO,92％11.25％羥丙基-β-環(huán)糊精配制化合物：化合物完全溶解在100％DMSO中，然后加入羥丙基-β-環(huán)糊精溶液。加入HCl水溶液重新溶解形成的細(xì)沉淀物，用氫氧化鈉水溶液將pH調(diào)節(jié)至4。
以10mg/kg口服給予雄性CD1小鼠(25-20g)每種化合物，總劑量體積5ml/kg。每個時間點采用三只小鼠。在氟烷/異氟烷麻醉條件下，通過末端心臟穿刺，在以下時間點獲取血樣：5,15,30,60,120,240和360分鐘。血樣收集到含NaF/EDTA的預(yù)冷卻的試管中并混合。樣品以7-7.5x g旋轉(zhuǎn)2分鐘。吸出血漿并冷凍。
采用三體積的含內(nèi)標(biāo)的乙腈，通過蛋白質(zhì)沉淀制備血漿樣品。通過LCMS(Sciex API 3000,HP1100二元泵,CTC PAL)分析上清液。色譜基于Acentis C8(50x 2.1mm)柱和含5-95％乙腈的水/0.1％甲酸的流動相。
采用PK Solutions 2.0(美國科羅拉多州名特的頂峰研究服務(wù)公司(Summit Research Services,Montrose,Colorado))，由血漿濃度與時間分布計算暴露(AUC)。
表1–本發(fā)明化合物和結(jié)構(gòu)相關(guān)化合物的生物活性
A-D提供了以下數(shù)據(jù)：
A–酯酶測試(p38激酶A(英杰公司(invitrogen)),IC50(nM)；
A–酸酶測試(p38激酶A(英杰公司(invitrogen)),IC50(nM)；
C–酯TNF-α抑制(THP-1細(xì)胞),IC50(nM)；和
C–酯TNF-α抑制(人全血),IC50(nM)。
表2–小鼠中的血漿暴露
結(jié)論
表1顯示，本發(fā)明化合物是p38MAP激酶非常好的抑制劑。而且，在THP-1細(xì)胞和人血中酯TNF-α抑制的IC50值非常低。具體說，考慮到相關(guān)化合物觀察到的人血中酯TNF-α抑制的IC50值，人血中酯TNF-α抑制的IC50值明顯低于期望。
表2顯示的AUC數(shù)據(jù)表明，本發(fā)明化合物的生物利用度比結(jié)構(gòu)類似的已知化合物要高得多。
本申請中提供了如下的實施方式：
1.一種化合物：
N-[2-{4-[6-氨基-5-(2,4-二氟苯甲酰)-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3,5-二氟苯基}乙基)-L-丙氨酸叔丁酯，或其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或溶劑合物。
2.一種藥物組合物，其包含如實施方式1所述的化合物以及一種或多種藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑。
3.如實施方式1所述的化合物或如實施方式2所述的組合物用于通過療法治療人或動物體的方法。
4.如實施方式1所述的化合物或如實施方式2所述的組合物用于體外或體內(nèi)p38MAP激酶活性的抑制。
5.如實施方式4所述使用的化合物或組合物，其中，所述化合物或組合物用于預(yù)防或治療自身免疫或炎性疾病。
6.如實施方式4或5所述使用的化合物或組合物，其中，所述化合物或組合物用于預(yù)防或治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬關(guān)節(jié)炎、1型糖尿病、哮喘、炎性腸病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡，伴隨感染病情的炎癥、牛皮癬、克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、慢性阻塞性肺病、多發(fā)性硬化、特應(yīng)性皮炎或移植物抗宿主病。
7.如實施方式4所述使用的化合物或組合物，其中，所述化合物或組合物用于治療細(xì)胞增殖性疾病。
8.如實施方式4或7所述使用的化合物或組合物，其中，所述化合物或組合物用于治療癌癥。
9.如實施方式4、7或8所述使用的化合物或組合物，其中，所述化合物或組合物用于治療乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌、肺癌、結(jié)腸癌、腎癌、淋巴癌或黑色素瘤。
10.一種抑制p38MAP激酶活性的方法，所述方法包括使所述酶與一定量能夠有效實現(xiàn)這種抑制的如實施方式1所述的化合物或如實施方式2所述的組合物相接觸。
11.一種治療或預(yù)防對象自身免疫性或炎性疾病的方法，所述方法包括給予所述對象有效量的如實施方式1所述的化合物或如實施方式2所述的組合物。
12.如實施方式11所述的方法，用于治療或預(yù)防類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬關(guān)節(jié)炎、1型糖尿病、哮喘、炎性腸病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡，伴隨感染病情的炎癥、牛皮癬、克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、慢性阻塞性肺病、多發(fā)性硬化、特應(yīng)性皮炎或移植物抗宿主病。
13.一種治療、緩解或降低對象細(xì)胞增殖性疾病的發(fā)病的方法，所述方法包括給予所述對象有效量的如實施方式1所述的化合物或如實施方式2所述的組合物。
14.如實施方式13所述的方法，用于治療、緩解或降低癌癥的發(fā)病。
15.如實施方式13或14所述的方法，用于治療、緩解或降低乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌、肺癌、結(jié)腸癌、腎癌、淋巴癌或黑色素瘤的發(fā)病。
16.如實施方式1所述的化合物或如實施方式2所述的組合物在制備用于抑制p38MAP激酶活性的藥物中的應(yīng)用。
17.如實施方式1所述的化合物或如實施方式2所述的組合物在制備用于治療或預(yù)防自身免疫性或炎性疾病的藥物中的應(yīng)用。
18.如實施方式17所述的應(yīng)用，其中，所述疾病是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬關(guān)節(jié)炎、1型糖尿病、哮喘、炎性腸病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡，伴隨感染病情的炎癥、牛皮癬、克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、慢性阻塞性肺病、多發(fā)性硬化、特應(yīng)性皮炎或移植物抗宿主病。
19.如實施方式1所述的化合物或如實施方式2所述的組合物在制備用于治療細(xì)胞增殖性疾病的藥物中的應(yīng)用。
20.如實施方式19所述的應(yīng)用，其中，所述疾病是癌癥。
21.如實施方式19或20所述的應(yīng)用，其中，所述疾病是乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌、肺癌、結(jié)腸癌、腎癌、淋巴癌或黑色素瘤。
22.一種酸：N-[2-{4-[6-氨基-5-(2,4-二氟苯甲酰)-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3,5-二氟苯基}乙基)-L-丙氨酸。