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一種除臭用EM菌液制備方法與流程

文檔序號:12457095閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種除臭用EM菌液制備方法,其特征在于:將常規(guī)的EM菌種分為DFA和DFB兩個(gè)部分,分別在糖蜜培養(yǎng)基中培養(yǎng)48小時(shí);其中:DFA培養(yǎng)溫度為37℃,不通氣培養(yǎng);DFB培養(yǎng)溫度為30℃,通氣培養(yǎng);培養(yǎng)后DFA和DFB按9:1的體積比混合,隨后,30℃密閉發(fā)酵,培養(yǎng)24h,即得除臭用EM菌液。

2.如權(quán)利要求1所述的一種除臭用EM菌液制備方法,其特征在于:DFA為不含酵母菌,以細(xì)菌和放線菌為主要成分的復(fù)合菌種;DFB為以酵母菌和絲狀真菌為主要成分的復(fù)合菌種。

3.如權(quán)利要求1所述的一種除臭用EM菌液制備方法,其特征在于:常規(guī)的EM菌液為市售EM菌液。

4.如權(quán)利要求1所述的一種除臭用EM菌液制備方法,其特征在于:所述DFA的制備包括以下步驟:

取常規(guī)EM菌液4℃下靜置30天后的上層液體按1%接種至無菌的糖蜜培養(yǎng)基中,按90%裝液量裝入錐形瓶中,密閉發(fā)酵,37℃振蕩培養(yǎng)7天后顯微鏡檢,取無酵母的樣品作DFA組分一;

取常規(guī)EM菌液按1%接種量接種至高溫滅菌的LB培養(yǎng)基中,按90%裝液量裝入錐形瓶中,密閉發(fā)酵,37℃振蕩培養(yǎng)7天后傳代,重復(fù)上述操作,取顯微鏡檢無酵母菌的樣品作組分二;

利用LB固體培養(yǎng)基與PDA培養(yǎng)基分離常規(guī)EM中菌種,除酵母菌外,分別培養(yǎng)分離得到的菌株后按相同比例接種至無菌的糖蜜培養(yǎng)基中,按90%裝液量裝入錐形瓶中,密閉發(fā)酵,自然協(xié)調(diào)菌種比例,37℃振蕩培養(yǎng)7天作為組分三;

以上所得的三種組分無酵母發(fā)酵液均按3%接種量混合接種至高溫滅菌的糖蜜培養(yǎng)基中,按90%裝液量裝入錐形瓶中,密閉發(fā)酵,37℃振蕩培養(yǎng)3天即得新鮮DFA,新鮮DFA與無菌保護(hù)液等體積混合后-80℃真空冷凍干燥24h制成菌粉。

5.如權(quán)利要求4所述的一種除臭用EM菌液制備方法,其特征在于:LB培養(yǎng)基,按質(zhì)量百分比計(jì),含胰蛋白胨1%,酵母提取物0.5%,Nacl 1%,培養(yǎng)基pH控制在7.4。

6.如權(quán)利要求4所述的一種除臭用EM菌液制備方法,其特征在于:LB固體培養(yǎng)基,按質(zhì)量百分比計(jì),含胰蛋白胨1%,酵母提取物0.5%,Nacl 1%,瓊脂1.0%~1.5%,培養(yǎng)基pH控制在7.4;PDA培養(yǎng)基,按質(zhì)量百分比計(jì),含馬鈴薯20%,葡萄糖2%,瓊脂1.5%~2.0%,自然pH。

7.如權(quán)利要求1所述的一種除臭用EM菌液制備方法,其特征在于:所述DFB的制備:取常規(guī)EM菌液4℃下靜置30天后的菌泥,按1%接種量接種至無菌的糖蜜培養(yǎng)基中,按25%裝液量裝入錐形瓶中,通氧發(fā)酵,30℃振蕩培養(yǎng)3天即得新鮮DFB,新鮮DFB與無菌保護(hù)液等體積混合后-80℃真空冷凍干燥24h制成菌粉。

8.如權(quán)利要求4或7所述的一種除臭用EM菌液制備方法,其特征在于:糖蜜培養(yǎng)基,按質(zhì)量百分比計(jì),含糖蜜 8%,蛋白胨 2%,K2HPO4 0.6%,CaCO3 3%,自然pH。

9.如權(quán)利要求1所述的一種除臭用EM菌液制備方法,其特征在于:新鮮DFA菌液按2%量直接接種至無菌的糖蜜培養(yǎng)基中,凍干菌粉需經(jīng)種子培養(yǎng),種子培養(yǎng)采用糖蜜培養(yǎng)基,90%裝液量,1%接種量,37℃密閉振蕩培養(yǎng),24h后按10%量接種至無菌的糖蜜培養(yǎng)基中,發(fā)酵罐裝液量為70%,密閉發(fā)酵,每隔24小時(shí)攪拌10分鐘,攪拌時(shí)打開放氣閥放出氣體,37℃培養(yǎng)48小時(shí);新鮮DFB菌液按2%量直接接種至無菌的糖蜜培養(yǎng)基中,凍干菌粉需經(jīng)種子培養(yǎng),種子培養(yǎng)采用糖蜜培養(yǎng)基,25%裝液量,1%接種量,30℃通氣振蕩培養(yǎng),24h后按10%量接種至無菌的糖蜜培養(yǎng)基中,30℃通氣攪拌/振蕩培養(yǎng)48小時(shí);發(fā)酵后的DFA和DFB按9:1體積比混合后按70%裝液量裝入發(fā)酵罐或無菌密閉容器,30℃密閉發(fā)酵,每隔6小時(shí)攪拌10分鐘,攪拌時(shí)打開放氣閥放出氣體,培養(yǎng)24h,即得除臭用EM菌液。

10.如權(quán)利要求4或7或9所述的一種除臭用EM菌液制備方法,其特征在于:無菌保護(hù)液,按質(zhì)量百分比計(jì),含蔗糖 100g/L、脫脂奶粉100g/L。

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