本發(fā)明涉及一種芽孢桿菌，特別是涉及一種棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌、發(fā)酵濾液及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：棉花黃萎病(cottonverticilliumwilt)是由大麗輪枝菌(verticilliumdahliaekleb.)引起的土傳性真菌病害，侵害棉花的維管束系統(tǒng)，被稱為“棉花癌癥”。在我國最大商品棉生產(chǎn)基地-新疆，由于長年連作、秸稈還田以及病原菌的變異，病害呈逐年加重、擴(kuò)大趨勢，嚴(yán)重阻礙了新疆棉花產(chǎn)業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展。目前防治棉花黃萎病的主要方法有培育抗性品種、噴施化學(xué)農(nóng)藥和生物防治。然而，培育抗性品種局限性較大，噴施化學(xué)農(nóng)藥對環(huán)境污染非常嚴(yán)重。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的主要目的在于，提供一種新型棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌、發(fā)酵濾液及其應(yīng)用，所要解決的技術(shù)問題是使其防治棉花黃萎病，從而更加適于實(shí)用。本發(fā)明的目的及解決其技術(shù)問題是采用以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的。依據(jù)本發(fā)明提出的一種棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌，其保藏編號為cgmccno.12885，分類名稱為莫哈韋芽孢桿菌(bacillusmojavensis)，保藏日期2016年8月22日，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏單位地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號；所述的棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌分離于棉花根際土壤中。本發(fā)明的目的及解決其技術(shù)問題還可采用以下技術(shù)措施進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)。優(yōu)選的，前述的棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌，其中所述的棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌對棉花黃萎病菌菌絲生長的抑菌率為51.23％-56.25％優(yōu)選的，前述的棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌，其中所述的棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌分類為莫哈韋芽孢桿菌。優(yōu)選的，前述的棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌，其中所述的棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌生長ph為4.5-9.0。本發(fā)明的目的及解決其技術(shù)問題還采用以下的技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)。依據(jù)本發(fā)明提出的一種棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌發(fā)酵濾液，由本發(fā)明所述的棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌經(jīng)過發(fā)酵培養(yǎng)制得。本發(fā)明的目的及解決其技術(shù)問題還可采用以下技術(shù)措施進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)。優(yōu)選的，前述的棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌發(fā)酵濾液，其中所述的發(fā)酵培養(yǎng)的步驟為：將棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌接入nb培養(yǎng)基中，30-37℃、180-200r·min-1培養(yǎng)60-72h，獲得發(fā)酵液，發(fā)酵液于4-6℃、8000-9000r·min-1離心分離，沉淀為菌體，上清液為發(fā)酵濾液。優(yōu)選的，前述的棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌發(fā)酵濾液，其中所述的發(fā)酵濾液對棉花黃萎病病菌孢子萌發(fā)的抑制率為78.54％-92.47％。本發(fā)明的目的及解決其技術(shù)問題還采用以下的技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)。依據(jù)本發(fā)明提出的一種棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌的應(yīng)用，本發(fā)明所述的棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌應(yīng)用于促進(jìn)棉花出苗和防治棉花黃萎病。本發(fā)明的目的及解決其技術(shù)問題還采用以下的技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)。依據(jù)本發(fā)明提出的一種棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌發(fā)酵濾液的應(yīng)用，本發(fā)明所述的棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌發(fā)酵濾液應(yīng)用于促進(jìn)棉花出苗。借由上述技術(shù)方案，本發(fā)明棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌、發(fā)酵濾液及其應(yīng)用至少具有下列優(yōu)點(diǎn)：1、本發(fā)明的棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌對棉花黃萎病菌絲具有顯著的拮抗作用，同時可以促進(jìn)棉花出芽，本發(fā)明所篩選棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌是從棉花根際土壤中分離得到的，對植物本身、環(huán)境、及人都是安全的，不會使人產(chǎn)生抗藥性，也沒有劇毒性，在使用過程中不產(chǎn)生有害物質(zhì)。2、本發(fā)明的棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌發(fā)酵液對棉花黃萎病病菌孢子萌發(fā)的抑制率為78.54％-92.47％，同時可以促進(jìn)棉花發(fā)芽。上述說明僅是本發(fā)明技術(shù)方案的概述，為了能夠更清楚了解本發(fā)明的技術(shù)手段，并可依照說明書的內(nèi)容予以實(shí)施，以下以本發(fā)明的較佳實(shí)施例并配合附圖詳細(xì)說明如后。附圖說明圖1是菌株h14的生長曲線圖。圖2是菌株h14的耐鹽曲線圖。圖3是菌株h14及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)菌株的16srdna序列采用鄰接法建立的系統(tǒng)發(fā)育樹圖。圖4是菌株h14的耐酸堿曲線圖。圖5是菌株h14發(fā)酵濾液對熱穩(wěn)定圖。圖6是菌株h14發(fā)酵濾液對紫外線穩(wěn)定圖。圖7是菌株h14發(fā)酵濾液對蛋白酶穩(wěn)定圖。圖8是菌株h14發(fā)酵濾液對酸堿穩(wěn)定圖。圖9是菌株h14促進(jìn)棉花出苗圖。圖10是菌株h14發(fā)酵濾液促進(jìn)棉花出苗圖。具體實(shí)施方式為更進(jìn)一步闡述本發(fā)明為達(dá)成預(yù)定發(fā)明目的所采取的技術(shù)手段及功效,以下結(jié)合附圖及較佳實(shí)施例，對依據(jù)本發(fā)明提出的棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌、發(fā)酵濾液及其應(yīng)用其具體實(shí)施方式、特征及其功效，詳細(xì)說明如后。在下述說明中，不同的“一實(shí)施例”或“實(shí)施例”指的不一定是同一實(shí)施例。此外，一或多個實(shí)施例中的特定特征或特點(diǎn)可由任何合適形式組合。本發(fā)明的一個實(shí)施例提出的一種棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌，其保藏編號為cgmccno.12885，保藏日期2016年8月22日，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；所述的棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌分離于棉花根際土壤中。計(jì)本發(fā)明的棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌為菌株h14，具體的分離篩選方法如實(shí)施例1所示。較佳的，本發(fā)明的實(shí)施例中的棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌對棉花黃萎病菌的抑菌率為51.23％-56.25％。較佳的，本發(fā)明的實(shí)施例所述的棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌分類為莫哈韋芽孢桿菌。較佳的，本發(fā)明的實(shí)施例中的棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌生長ph為4.5-9.0。實(shí)施例1取新疆石河子棉田根際土壤10g，置于裝有90ml無菌水的250ml三角瓶中，振蕩均勻，在80℃水浴中加熱20min得到混合液，取1ml混合液進(jìn)行梯度稀釋，分別取10-3、10-4、10-5稀釋梯度稀釋液0.1ml涂布于na培養(yǎng)基(牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基)平板上，將上述na培養(yǎng)基在30℃黑暗培養(yǎng)24h，挑取形態(tài)、大小、色澤不同的單菌落劃線純化，轉(zhuǎn)接到na斜面培養(yǎng)基上，在4℃保存，得到棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌，即菌株h14。經(jīng)觀察發(fā)現(xiàn)：菌株h14在na平板上單菌落為乳白色、不透明的圓形，濕潤粘稠狀，邊緣不整齊，中間有突起；革蘭氏染色結(jié)果表明菌株h14為革蘭氏陽性菌株，菌體呈桿狀。將菌株h14接入到nb培養(yǎng)基中，30℃、180r·min-1培養(yǎng)12h，0.5ml菌株h14接種至裝有50mlnb培養(yǎng)基的100ml三角瓶中，每2h測定600nm的吸光值，菌株h14的生長曲線的測試結(jié)果如圖1所示，由圖1可知，菌株h14在18h后生長穩(wěn)定。取培養(yǎng)14h的菌株h14的菌液，將菌液分別至nacl濃度為0％、0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.4％、4.0％、5.0％、6.0％、7.0％、8.0％、9.0％、10.0％的nb培養(yǎng)基中，其中，接種的菌液和nb培養(yǎng)基體積比為1％，30℃、180r·min-1培養(yǎng)18h，測定600nm的吸光值，菌株h14的耐鹽性測試結(jié)果如圖2所示，由圖2可知，菌株h14能耐7.0％nacl。實(shí)施例2將斜面保存的棉花黃萎病病菌轉(zhuǎn)接到pda平板上活化，8d后，用滅菌打孔器在該棉花黃萎病菌的菌落邊緣區(qū)域制備直徑為5mm菌餅，將菌餅接種在直徑為90mm的pda平板中央，25℃培養(yǎng)4d，在菌餅四周對稱位置，距離菌餅20mm處接種實(shí)施例1中的菌株h14，以不接種菌株h14的pda平板為對照，置于25℃培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)7d，計(jì)算抑菌率為51.23％。實(shí)施例3將斜面保存的棉花黃萎病病菌轉(zhuǎn)接到pda平板上活化，10d后，用滅菌打孔器在該棉花黃萎病菌的菌落邊緣區(qū)域制備直徑為5mm菌餅，將菌餅接種在直徑為90mm的pda平板中央，25℃培養(yǎng)4d，在菌餅四周對稱位置，距離菌餅20mm處接種實(shí)施例1中的菌株h14，以不接種菌株h14的pda平板為對照，置于25℃培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)10d，計(jì)算抑菌率為56.25％。實(shí)施例4以16srdna通用引物27f/1492r作為pcr引物，以本發(fā)明的棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌h14基因組dna為模板，擴(kuò)增菌株染色體dna上的16srdna基因。pcr產(chǎn)物在含eb的1％瓊脂糖上電泳，檢測其純度及片段大小。產(chǎn)物經(jīng)試劑盒純化后，送上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司測序。將菌株h14的16srdna序列與genbank中所有已測定的原核生物進(jìn)行blast比較。根據(jù)比較結(jié)果，利用mega4軟件中鄰接法方法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，bootstrap檢驗(yàn)值≥50％，1000次重復(fù)。菌株h14的16srdna基因序列擴(kuò)增目的基因序列長度為1435bp。將h14菌株的16srdna序列與genbank中所有已測定的細(xì)菌16srdna序列進(jìn)行比對分析，然后通過mega4軟件采用鄰接法繪制系統(tǒng)發(fā)育樹。結(jié)果表明，供試菌株h14芽孢桿菌屬的標(biāo)準(zhǔn)菌株同源相似度都在97％以上，將該菌株歸屬為芽孢桿菌屬。菌株h14與標(biāo)準(zhǔn)菌株nr118290莫哈韋芽孢桿菌處在同一分支，序列相似性高達(dá)99.58％。圖3為基于菌株h14及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)菌株的16srdna序列采用鄰接法建立的系統(tǒng)發(fā)育樹圖，菌株h14核苷酸序列如下所示。根據(jù)16srdna序列相似性分析，結(jié)合形態(tài)特征及生理生化試驗(yàn)，確定菌株h14為莫哈韋芽孢桿菌。實(shí)施例5將菌株h14接入nb培養(yǎng)基(營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基)中，30℃、180r·min-1培養(yǎng)14h，得到菌液，將該菌液按1％分別接種至ph為4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0的nb培養(yǎng)基中，30℃、180r·min-1培養(yǎng)18h后測定600nm的吸光值。測試結(jié)果如圖4所示，由圖4可知本發(fā)明的棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌生長ph為4.5-9.0。本發(fā)明的另一個實(shí)施例提出一種棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌發(fā)酵濾液，由本發(fā)明的菌株h14經(jīng)過發(fā)酵培養(yǎng)制得。較佳的，本發(fā)明的實(shí)施例中的棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌發(fā)酵濾液其中所述的發(fā)酵培養(yǎng)的步驟為：將棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌接入nb培養(yǎng)基中，30-37℃、180-200r·min-1培養(yǎng)60-72h，獲得發(fā)酵液，發(fā)酵液于4-6℃，8000-9000r·min-1離心分離，沉淀為菌體，上清為發(fā)酵濾液。較佳的，本發(fā)明的實(shí)施例中的棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌發(fā)酵濾液其中所述的發(fā)酵濾液對棉花黃萎病菌孢子的萌發(fā)抑制率為78.54％-92.47％。實(shí)施例6將菌株h14接入nb培養(yǎng)基中，30℃、200rpm培養(yǎng)60h，獲得發(fā)酵液，發(fā)酵液于4℃，8500r·min-1離心20min分離，沉淀為菌體h14，上清液為發(fā)酵濾液。將取5個5ml離心管，每個離心管中添加3ml發(fā)酵濾液，將5只試管分別在45℃、65℃、85℃、100℃、121℃恒溫水浴鍋處理30min，對照液(ck)為不經(jīng)過熱處理的發(fā)酵濾液，通過牛津杯法測定對照液和熱處理后發(fā)酵濾液的對棉花黃萎病菌的抑菌活性，測量抑菌圈直徑，每個實(shí)驗(yàn)設(shè)置3個平行實(shí)驗(yàn)，最終數(shù)據(jù)表示成平均值±標(biāo)準(zhǔn)差的形式，實(shí)驗(yàn)測試結(jié)果如圖5所示，由圖5可知，菌株h14的發(fā)酵濾液經(jīng)過高溫45-121℃處理后仍具有較強(qiáng)的抑菌性。將發(fā)酵濾液置于25w的紫外線燈下，距燈15cm處分別照射處理20min、40min、60min、80min、100min、120min、140min、160min、180min，對照液(ck)為不經(jīng)過紫外線照射處理的發(fā)酵濾液，用牛津杯法測定經(jīng)紫外線照射處理過的樣品及對照液對棉花黃萎病菌的抑菌活性，測量抑菌圈直徑，每個實(shí)驗(yàn)設(shè)置3個平行實(shí)驗(yàn)，最終數(shù)據(jù)表示成平均值±標(biāo)準(zhǔn)差的形式，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖6所示，由圖6可知紫外線照射20-180min處理后仍具有較強(qiáng)的抑菌性。取3個5ml離心管，每個離心管加入3ml發(fā)酵濾液，然后分別加胃蛋白酶、胰蛋白酶、蛋白酶k至酶反應(yīng)終濃度為1mg·ml-1，在37℃恒溫水浴條件下反應(yīng)90min，繼續(xù)在50℃恒溫水浴1h終止酶反應(yīng)，對照液(ck)為不經(jīng)過酶處理的發(fā)酵濾液，用牛津杯法測定經(jīng)過酶處理過的發(fā)酵液和對照液對棉花黃萎病菌的抑菌活性，測量抑菌圈直徑，每個實(shí)驗(yàn)設(shè)置3個平行實(shí)驗(yàn)，最終數(shù)據(jù)表示成平均值±標(biāo)準(zhǔn)差的形式，實(shí)驗(yàn)測試結(jié)果如圖7所示，由圖7可知，菌株h14的發(fā)酵濾液對胃蛋白酶、胰蛋白酶、蛋白酶k具有耐受性。取9個5ml離心管，每個離心管中添加3ml發(fā)酵濾液，在25℃下分別調(diào)ph為2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0，4℃靜置過夜，再依次調(diào)ph至7.0，對照液(ck)為不經(jīng)過酸堿處理的發(fā)酵濾液，用牛津杯法測定經(jīng)過酸堿處理過的發(fā)酵液和對照液對棉花黃萎病菌的抑菌活性，測量抑菌圈直徑，每個實(shí)驗(yàn)設(shè)置3個平行實(shí)驗(yàn)，最終數(shù)據(jù)表示成平均值±標(biāo)準(zhǔn)差的形式，實(shí)驗(yàn)測試結(jié)果如圖8所示，由圖8可知，菌株h14的發(fā)酵濾液經(jīng)過酸堿(ph：2-10)處理后仍具有較強(qiáng)的抑菌性。實(shí)施例7將活化的棉花黃萎病菌菌餅接種到裝有100ml察氏培養(yǎng)基250ml三角瓶中，26℃、220r·min-1搖床培養(yǎng)7d，用雙層紗布除去菌絲，獲得孢子懸浮液，用無菌水稀釋濃度為1×105個·ml-1，取0.1ml孢子稀釋液涂布于pda培養(yǎng)基平板上(馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基)，然后等距放置兩個牛津杯，向牛津杯中加入經(jīng)微孔濾膜(濾孔：0.22μm)過濾除菌的實(shí)施例5中的發(fā)酵濾液200μl，設(shè)置三組平行實(shí)驗(yàn)，25℃培養(yǎng)7d，測量抑菌圈直徑為18mm.實(shí)施例8分別取1％wt葡萄糖溶液、濃度為1×105個·ml-1黃萎病病菌孢子懸浮液和菌株h14發(fā)酵濾液各30μl滴于凹玻片內(nèi)，以無菌水代替菌株h14發(fā)酵濾液作為對照，將凹玻片放于鋪有濕潤濾紙的培養(yǎng)皿內(nèi)保持濕度，26℃培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)設(shè)三次重復(fù)；菌株h14發(fā)酵濾液分別稀釋10倍、稀釋20倍，用稀釋10倍、稀釋20倍的菌株h14發(fā)酵濾液進(jìn)行以上實(shí)驗(yàn)，其他條件不變；以無菌水替代菌株h14發(fā)酵濾液作為對比實(shí)驗(yàn)。6h后使用顯微鏡(10×40)觀察分生孢子的萌發(fā)情況，計(jì)算孢子萌發(fā)率。孢子萌發(fā)率(％)＝(萌發(fā)孢子數(shù)/總孢子數(shù))×100％；孢子萌發(fā)抑制率(％)＝(對照孢子萌發(fā)率-處理孢子萌發(fā)率)/對照孢子萌發(fā)率×100％。測試結(jié)果如表1所示。表1菌株h14發(fā)酵濾液對棉花黃萎病菌孢子萌發(fā)抑制作用由表1可知，菌株h14的發(fā)酵濾液對棉花黃萎病病菌孢子萌發(fā)的抑制率為78.54-92.47％。本發(fā)明的另一個實(shí)施例提出一種棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌的應(yīng)用，本發(fā)明所述的棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌應(yīng)用于促進(jìn)棉花出苗和防治棉花黃萎病。實(shí)施例9挑選飽滿、大小一致的棉花種子，75％乙醇浸泡45s，無菌水沖洗3次，然后將種子浸于10％h2o2中2h，再用無菌水沖洗3次，將表面殺菌的種子播種于裝有2/3的體積發(fā)芽盒中。將實(shí)施例5中的菌體h14分別用無菌水分別稀釋10、100、1000倍，將稀釋后的菌體h14水懸液分別澆灌到3個上述裝棉花種子的體積營養(yǎng)盒，記a1,a2,a3，對照組用無菌水澆灌，記為s，每個實(shí)驗(yàn)設(shè)置3個平行實(shí)驗(yàn)，最終數(shù)據(jù)表示成平均值±標(biāo)準(zhǔn)差的形式，每盒澆灌量為350ml，溫室25℃培養(yǎng)，每天調(diào)查出苗數(shù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖9所示，由圖9可知，菌株h14可以促進(jìn)棉花出苗，其中經(jīng)無菌水稀釋100倍的菌株處理出苗效果最好。實(shí)施例10棉花種子表面殺菌后，25-30℃下催芽，種子露白后播種裝有滅菌土的營養(yǎng)袋中，每袋1株，常規(guī)管理。待棉苗長至2片真葉時灌根接種菌株h14發(fā)酵液，每袋接種5ml(菌體個數(shù)：1×107個·ml-1)，24h后傷根接種棉花黃萎病菌孢子懸浮液5ml(1×107個·ml-1)；設(shè)置兩組對照，對照組1：棉花種子表面殺菌后，25-30℃下催芽，種子露白后播種裝有滅菌土的營養(yǎng)袋中，每袋1株，常規(guī)管理，待棉苗長至2片真葉時傷根接種棉花黃萎病菌；對照組2：棉花種子表面殺菌后，25-30℃下催芽，種子露白后播種裝有滅菌土的營養(yǎng)袋中，每袋1株，常規(guī)管理，傷根不接種；每個實(shí)驗(yàn)設(shè)置3個平行實(shí)驗(yàn)。接種后常規(guī)管理，25d后記錄發(fā)病情況，每個實(shí)驗(yàn)的發(fā)病情況如表2所示。表2棉花的發(fā)病情況發(fā)病率(％)病情指數(shù)防治效果(％)菌株h14發(fā)酵液接種組30.20±0.0816.70±1.8079.40±0.90對照組1100.00±0.0081.20±5.00/對照組20.00±0.000.00±0.00/由表2可知，棉花根際接種棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌h14顯著降低了棉花黃萎病的病情指數(shù)，定殖25d后溫室相對防效達(dá)到80％。本發(fā)明的另一個實(shí)施例提出一種棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌發(fā)酵濾液的應(yīng)用，本發(fā)明所述的棉花黃萎病拮抗芽孢桿菌發(fā)酵濾液應(yīng)用于促進(jìn)棉花出苗。實(shí)施例11挑選飽滿、大小一致的棉花種子，75％乙醇浸泡45s，無菌水沖洗3次，然后將種子浸于10％h2o2中2h，再用無菌水沖洗3次，將表面殺菌的種子播種于裝有2/3的體積營養(yǎng)盒中。將實(shí)施例5中的發(fā)酵濾液分別用無菌水分別稀釋10、20、50倍，將稀釋后的發(fā)酵濾液分別澆灌到3個上述裝棉花種子的體積營養(yǎng)盒，記b1,b2,b3，對照組用無菌水澆灌，記為s，每個實(shí)驗(yàn)設(shè)置3個平行實(shí)驗(yàn)，最終數(shù)據(jù)表示成平均值±標(biāo)準(zhǔn)差的形式，每盒澆灌量為350ml，溫室25℃培養(yǎng)，每天調(diào)查出苗數(shù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖10所示，由圖10可知，菌株h14的發(fā)酵濾液可以促進(jìn)棉花出苗，其中經(jīng)無菌水稀釋50倍的發(fā)酵濾液出苗效果最好。以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非對本發(fā)明作任何形式上的限制，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對以上實(shí)施例所作的任何簡單修改、等同變化與修飾，均仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁12