本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及左氧氟沙星的新用途，具體涉及左氧氟沙星的藥物組合物及其在治療慢性腎衰竭中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

左氧氟沙星是喹諾酮類藥物中的一種，具有廣譜抗菌作用，抗菌作用強(qiáng)，對(duì)多數(shù)腸桿菌科細(xì)菌，如大腸埃希菌、克雷伯菌屬、變形桿菌屬、沙門菌屬、志賀菌屬和流感嗜血桿菌、嗜肺軍團(tuán)菌、淋病奈瑟菌等革蘭陰性菌有較強(qiáng)的抗菌活性。對(duì)金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、化膿性鏈球菌等革蘭陽性菌和肺炎支原體、肺炎衣原體也有抗菌作用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種左氧氟沙星的藥物組合物，該藥物組合物中含有左氧氟沙星和一種天然產(chǎn)物，左氧氟沙星和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同治療慢性腎衰竭。

本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：

一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物(Ⅰ)，

一種左氧氟沙星的藥物組合物，包括左氧氟沙星、如權(quán)利要求1所述的化合物(Ⅰ)和藥學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。

進(jìn)一步地，藥學(xué)上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體或潤(rùn)滑劑。

進(jìn)一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。

上述化合物(Ⅰ)的制備方法，包含以下操作步驟：(a)將廣藿香粉碎，用70～80％乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步驟(a)中正丁醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用15％乙醇洗脫6個(gè)柱體積，再用70％乙醇洗脫10個(gè)柱體積，收集70％洗脫液，減壓濃縮得70％乙醇洗脫濃縮物；(c)步驟(b)中70％乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；(d)步驟(c)中組分3用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為25:1、15:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；(e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為72％的甲醇水溶液等度洗脫，收集8～14個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物(Ⅰ)。

進(jìn)一步地，化合物(Ⅰ)的制備方法中，步驟(a)用75％乙醇熱回流提取，合并提取液。

進(jìn)一步地，化合物(Ⅰ)的制備方法中，所述大孔樹脂為D101型大孔吸附樹脂。

進(jìn)一步地，化合物(Ⅰ)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進(jìn)行萃取，得到二氯甲烷萃取物。

上述化合物(Ⅰ)在制備治療慢性腎衰竭的藥物中的應(yīng)用。

上述左氧氟沙星的藥物組合物在制備治療慢性腎衰竭的藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：

本發(fā)明提供的左氧氟沙星的藥物組合物中含有左氧氟沙星和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，左氧氟沙星、化合物(Ⅰ)單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)慢性腎衰竭具有治療作用；左氧氟沙星和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時(shí)，對(duì)慢性腎衰竭的治療效果進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成治療慢性腎衰竭的藥物。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范圍。盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。

實(shí)施例1：化合物(Ⅰ)分離制備及結(jié)構(gòu)確證

試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購(gòu)自上海凌峰化學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購(gòu)自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。

分離方法：(a)將廣藿香(2kg)粉碎，用75％乙醇熱回流提取(20L×3次)，合并提取液，濃縮至無醇味(4L)，依次用石油醚(4L×3次)、乙酸乙酯(4L×3次)和水飽和的正丁醇(4L×3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步驟(a)中正丁醇萃取物用D101型大孔樹脂除雜，先用15％乙醇洗脫6個(gè)柱體積，再用70％乙醇洗脫10個(gè)柱體積，收集70％洗脫液，減壓濃縮得70％乙醇洗脫濃縮物；(c)步驟(b)中70％乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1(8個(gè)柱體積)、30:1(8個(gè)柱體積)、15:1(8個(gè)柱體積)和5:1(10個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；(d)步驟(c)中組分3用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為25:1(8個(gè)柱體積)、15:1(10個(gè)柱體積)和2:1(5個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；(e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為72％的甲醇水溶液等度洗脫，收集8～14個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(Ⅰ)(HPLC歸一化純度大于98％)。

結(jié)構(gòu)確證：HR-ESI-MS顯示[M+H]⁺為m/z 519.2668，結(jié)合核磁特征可得分子式為C₃₂H₃₈O₆，不飽和度為13。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δ_H(ppm，pyridine-d₅，500MHz)：H-1(6.85，d，J＝12.3Hz)，H-2(6.01，d，J＝12.3Hz)，H-5(4.21，s)，H-6(5.96，s)，H-7a(2.03，dd，J＝2.0，15.1Hz)，H-7b(1.74，m)，H-8(2.31，m)，H-11(5.68，d，J＝4.4Hz)，H-12(2.98，d，J＝4.4Hz)，H-15a(1.60，dd，J＝3.0，15.9Hz)，H-15b(2.01，m)，H-16(5.71，d，J＝3.0Hz)，H-18a(5.09，s)，H-18b(4.93，s)，H-19(6.71，s)，H-20(3.00，m)，H-21(1.08，d，J＝7.2Hz)，H-22(4.44，m)，H-23a(2.05，m)，H-23b(2.36，m)，H-24(6.45，d，J＝6.0Hz)，H-27(1.85，s)，H-28(1.21，s)，H-29(1.50，s)，H-30(1.46，s)，6-OAc(1.98，s)；核磁共振碳譜數(shù)據(jù)δ_C(ppm，pyridine-d₅，125MHz)：145.6(CH，1-C)，119.1(CH，2-C)，166.4(C，3-C)，79.7(C，4-C)，50.7(CH，5-C)，68.0(CH，6-C)，33.0(CH₂，7-C)，52.9(CH，8-C)，122.2(C，9-C)，140.0(C，10-C)，137.5(CH，11-C)，55.1(CH，12-C)，148.8(C，13-C)，43.7(C，14-C)，37.4(CH₂，15-C)，125.6(CH，16-C)，139.8(C，17-C)，108.7(CH₂，18-C)，148.9(CH，19-C)，40.1(CH，20-C)，15.1(CH₃，21-C)，80.8(CH，22-C)，26.3(CH₂，23-C)，139.7(CH，24-C)，128.1(C，25-C)，166.1(C，26-C)，17.2(CH₃，27-C)，27.1(CH₃，28-C)，29.7(CH₃，29-C)，26.2(CH₃，30-C)，170.4(C，COCH₃-C)，21.0(CH₃，COCH₃-C)。紅外波譜中的1697cm^-1和1710cm^-1吸收帶顯示該化合物含有α,β-不飽和內(nèi)酯結(jié)構(gòu)。UV譜中的228nm以及278nm吸收帶表明該化合物具有幾個(gè)共軛系統(tǒng)。¹³C-NMR、DEPT和HSQC譜中顯示有32個(gè)碳信號(hào)，包括六個(gè)甲基，四個(gè)亞甲基(一個(gè)烯屬亞甲基)，十二個(gè)次甲基(兩個(gè)連氧碳和六個(gè)烯烴碳)，十個(gè)季碳信號(hào)(五個(gè)烯碳信號(hào)，一個(gè)連氧碳和三個(gè)羰基碳)。以上功能結(jié)構(gòu)再結(jié)合不飽和數(shù)表明該化合物具有5個(gè)環(huán)狀結(jié)構(gòu)。¹H-NMR譜結(jié)合HSQC譜顯示五個(gè)甲基質(zhì)子信號(hào)δ_H 1.08(3H，d，J＝7.2Hz)，1.85(3H，s)，1.21(3H，s)，1.50(3H，s)，1.46(3H，s)，一個(gè)乙酰甲基質(zhì)子信號(hào)δ_H 1.98(3H，s)，一個(gè)端烯烴質(zhì)子信號(hào)δ_H5.09(1H，s)和4.93(1H，s)，六個(gè)烯屬次甲基質(zhì)子信號(hào)δ_H 6.85(1H，d，J＝12.3Hz)，6.01(1H，d，J＝12.3Hz)，5.68(1H，d，J＝4.4Hz)，5.71(1H，d，J＝3.0Hz)，6.71(1H，s)和6.45(1H，d，J＝6.0Hz)，兩個(gè)含氧次甲基質(zhì)子信號(hào)δ_H5.96(1H，s)，4.44(1H，m)，綜合以上信息可以得出該化合物為一個(gè)三萜類化合物。通過對(duì)該化合物的HMBC譜的解析發(fā)現(xiàn)H-19與C-11，H-11與C-19，H₂-7與C-9，H-19與C-9，H-12與C-9等之間的相關(guān)證明該化合物C-11和C-9之間存在一個(gè)雙鍵。HMBC譜中H-6與羰基碳δ_C170.4的相關(guān)性以及¹H-¹H COSY譜中H-5/H-6/H₂-7/H-8的相關(guān)性表明C-6位連有一個(gè)乙酰氧基。C-6位的乙?；南鄬?duì)構(gòu)型是通過ROESY譜圖來解析的，H-6/H-5α，H-6/CH₃-30α，H-6/H-7α，以及H-6/H-7β等之間的相關(guān)說明C-6位的乙?；俏挥讦挛?。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和ROESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過ECD試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致。

該化合物化學(xué)式及碳原子編號(hào)如下：

實(shí)施例2：藥理作用

本實(shí)例使用腺嘌呤(Adenine)制備慢性腎衰竭(CRF)大鼠模型，觀察藥物升高動(dòng)物一氧化氮(NO)、促紅細(xì)胞生成素(EPO)，降低腎組織羥脯氨酸含量等方面的抗CRF作用。

1、材料與方法

1.1動(dòng)物

SD大白鼠(購(gòu)自四川省抗菌素工業(yè)研究所)，開始實(shí)驗(yàn)時(shí)體重130～160g。

1.2試劑與樣品

左氧氟沙星購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所?；衔?Ⅰ)自制，制備方法見實(shí)施例1。腺嘌呤(購(gòu)自上海伯奧生物科技公司)，一氧化氮測(cè)定(北京幫定泰克生物技術(shù)公司試劑)，促紅細(xì)胞生成素測(cè)定(美國(guó)LIFEKEYBiomeditech公司試劑)。

1.3儀器

全自動(dòng)生化分析儀(購(gòu)自貝克曼公司)。

1.4大鼠分組及模型制備

大鼠隨機(jī)分為5組，每組12只，分別為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、左氧氟沙星組(80mg·kg^-1)、化合物(Ⅰ)組(80mg·kg^-1)、左氧氟沙星與化合物(Ⅰ)組合物組【40mg·kg^-1左氧氟沙星+40mg·kg^-1化合物(Ⅰ)】。腎衰造模方法：給實(shí)驗(yàn)大白鼠喂飼含0.75％腺嘌呤食物10周，其余飼養(yǎng)動(dòng)物條件按常規(guī)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)要求進(jìn)行。治療組從第15天開始按上述劑量灌胃藥物，共喂藥8周，同時(shí)模型對(duì)照組與正常對(duì)照組給等體積生理鹽水。

1.5腎組織NO測(cè)定實(shí)驗(yàn)

硝酸血原酶法；測(cè)定10％腎組織勻漿。腎臟EPO測(cè)定：BLISA(ABC夾心法)；測(cè)定10％腎組織勻漿。

1.6腎組織羥脯氨酸測(cè)定實(shí)驗(yàn)

以分析純明膠作標(biāo)準(zhǔn)品，與腎組織勻漿同樣處理、檢測(cè)。明膠水解液含量125μg/ml內(nèi)線性關(guān)系佳，γ＝0.9965。

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，應(yīng)用SPSS18.0版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析和t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1對(duì)慢性腎衰竭模型大鼠NO、EPO含量的影響

與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠NO及EPO含量明顯下降(P＜0.01)；與模型對(duì)照組比較，左氧氟沙星與化合物(Ⅰ)組合物組NO及EPO含量明顯升高(P＜0.01)；與模型對(duì)照組比較，左氧氟沙星組、化合物(Ⅰ)組NO及EPO含量升高(P＜0.05)。

試驗(yàn)結(jié)果見表1。

2.2對(duì)慢性腎衰竭模型大鼠腎組織羥脯氨酸含量的影響

與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠大鼠腎組織羥脯氨酸含量明顯升高(P＜0.01)。與模型對(duì)照組比較，左氧氟沙星與化合物(Ⅰ)組合物組大鼠腎組織羥脯氨酸含量明顯降低(P＜0.01)；與模型對(duì)照組比較，左氧氟沙星組、化合物(Ⅰ)組大鼠腎組織羥脯氨酸含量降低(P＜0.05)。

試驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1對(duì)慢性腎衰竭模型大鼠NO、EPO含量和腎組織羥脯氨酸含量的影響

慢性腎衰竭是危害人群健康的重大疾病，其發(fā)病機(jī)制為進(jìn)行性腎小球硬化和腎間質(zhì)纖維化，而后者更能決定CRF預(yù)后。近年發(fā)現(xiàn)一氧化氮(NO)在腎臟疾病的發(fā)生發(fā)展及病理生理中起重要作用，機(jī)體內(nèi)NO代謝異常易造成病情加重或反復(fù)，而干預(yù)性調(diào)節(jié)NO合成有利CRF的防治。Raymond和Dang等學(xué)者發(fā)現(xiàn)在尿毒癥時(shí)，內(nèi)源性NO合成抑制物-非對(duì)稱性二甲精氨酸(ADMA)堆積，以及此類患者NO合成原料左旋精氨酸(L-Arg)濃度降低，均使NO處于低水平狀態(tài)。短期的NO減少直接引起血壓升高與腎血管收縮，長(zhǎng)期阻斷還可影響交感神經(jīng)、腎素血管緊張素、前列腺素、血管加壓素共同導(dǎo)致高血壓，并可加重蛋白尿及腎小球硬化。NO尚能特異性調(diào)節(jié)腎髓質(zhì)血流動(dòng)力學(xué)和氧供，進(jìn)而有可能影響EPO的產(chǎn)生，因?yàn)?0％EPO在腎遠(yuǎn)曲小管和腎皮質(zhì)外髓部分小管周圍內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生。

上述結(jié)果表明，左氧氟沙星、化合物(Ⅰ)單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)慢性腎衰竭具有治療作用；左氧氟沙星和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時(shí)，對(duì)慢性腎衰竭的治療效果進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成治療慢性腎衰竭的藥物。

上述實(shí)施例的作用在于說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。