本發(fā)明涉及天然產物制備技術領域，特別涉及一種從金合歡樹皮中提取花旗松素的方法。
背景技術：
花旗松素（Taxifolin）花旗松素又稱二氫槲皮素，分子式為C15H12O7，是全球稀缺，且極為珍貴的藥品及保健食品成分，其抗氧化性是目前文獻報道的最強的天然活性成分之一，具有改善免疫功能，防止心血管疾病，提高人的記憶力，同時還具美白、保濕等護膚效果。
花旗松素主要來源于紫杉、黃杉、落葉松屬植物花旗松及金合歡樹等，因紫杉和黃杉已列入全球瀕危樹種禁止采伐，而落葉松屬只分布在氣候寒冷的高緯度地區(qū)，生長周期較長，所以可利用生產花旗松素的資源極為稀少和匱乏。金合歡樹樹皮中花旗松素的含量較高，且金合歡樹具有來源廣、原材料豐富的特點，故而可從金合歡樹樹皮中提取花旗松素。
當前國內外對花旗松素的主要提取方法包括溶劑浸提法、合成法等。但溶劑提取法存在提取時間長、產率低等缺陷，如金建忠等人從落葉松中提取的花旗松素提取率僅0.3%；王萍等人從刺玫薔薇莖中提取的花旗松素提取率僅為1.5 - 2.5%。合成法有以兒茶素為原料合成，花旗松素濃度不高于4 %，且存在原料價格昂貴、副產品多的問題；以苯乙酮和苯甲醛出發(fā)進行全合成，花旗松素濃度在3.5%左右，存在原料毒性大，環(huán)境污染，產品穩(wěn)定性差的問題。此外，還有光延反應法、微波萃取法、超濾法、吸附精制法等，但這些都因成本高、工藝復雜，無法實現(xiàn)工業(yè)化生產。
調查數(shù)據(jù)顯示，花旗松素的全球需求量每年50噸，但是花旗松素的全球年產量不足20噸，我國花旗松素產量不足5噸，面臨如此嚴峻的形勢下，提高花旗松素的產量顯得尤為重要。
技術實現(xiàn)要素：
針對上述問題，本發(fā)明提供一種從金合歡樹皮中提取花旗松素的方法，該方法具有提取率高的優(yōu)點。
為解決上述技術問題，本發(fā)明采用以下技術方案：一種從金合歡樹皮中提取花旗松素的方法，其特征在于包括如下步驟：
1）取巴氏芽孢桿菌菌株（Sporosarcina pasteurii；ATCC11859）2-3環(huán)，接種于每升水加入酪蛋白棟15.0 - 20.0 g、豆粕蛋白胨5.0 - 8.0 g、卡索瓊脂15 - 20 g/L、氯化鈉4.0 -7.0 g、尿素15 - 25 g的滅菌培養(yǎng)基上，滅菌培養(yǎng)基的pH 為7.0 - 7.3；置于搖床上，在25 - 32℃條件下，以100 - 150 r/min的振蕩速度培養(yǎng)12 - 24 h，得活性種子液，活性種子液中巴氏芽孢桿菌菌濃度為1×105 - 1×106 CFU/ml；
2）將金合歡樹皮，用蒸餾水洗凈，切至段長3 - 5 cm ，置于50℃烘箱中烘12 h，至水分含量低于3%，粉碎后過100目篩，避光存放于相對濕度65%環(huán)境下；稱取金合歡樹樹皮按照干重與水的質量比為1:3 - 1:5混合均勻，接入步驟1）所述活性種子液進行微生物發(fā)酵，接種量為體積比15 - 30%，溫度25 - 32℃，以100 - 150 r/min的振蕩速度培養(yǎng)12 - 24 h，控制pH 7.0 - 7.3，將發(fā)酵液干燥得到花旗松素提取物。所得花旗松素提取物可作為提取更高純度花旗松素的原料使用。
本發(fā)明所用巴氏芽孢桿菌（Sporosarcina pasteurii）購買于美國標準生物品收藏中心（ATCC），保藏編號ATCC11859；所述酪蛋白棟購于上海撫生實業(yè)有限公司；所述豆粕蛋白胨購于環(huán)凱微生物科技；所述卡索瓊脂購于德國Merck；所述搖床為DHA-DA 臥式恒溫搖床；所述金合歡樹樹皮購于西安瑞林生物科技；所述微生物發(fā)酵罐購于南京潤澤生物工程設備有限公司，型號RZY-XGX；所述HPD200A型大孔樹脂購于北京麥瑞博生物科技有限公司。
經計算，本發(fā)明制備的花旗松素提取物的提取率為40-50%，經HPLC測定花旗松素的純度為10-20%，即花旗松素的提取率為4-10%，相對于現(xiàn)有技術的1.5 - 2.5%，有顯著提高。
具體實施方式
實施例1：
一種從金合歡樹皮中提取花旗松素的方法，包括以下步驟：
1）取巴氏芽孢桿菌菌株2環(huán)，接種于每升水加入酪蛋白棟15.0 g，豆粕蛋白胨5.0 g，卡索瓊脂15 g/L，氯化鈉4.0 g，尿素15 g的滅菌培養(yǎng)基上；置于搖床上，在25℃條件下，以100 r/min的振蕩速度培養(yǎng)12 h，滅菌培養(yǎng)基的pH 為7.0，得到其活性種子液，活性種子液中巴氏芽孢桿菌菌濃度為1*105CFU/ml；
2）將金合歡樹皮，用蒸餾水洗凈，切至段長3 - 5 cm ，置于50℃烘箱中烘12 h，至水分含量低于3%，粉碎后過100目篩，避光存放于相對濕度65%條件。稱取5 g金合歡樹樹皮粉末，按照干重與水的質量比為1:3混合均勻，接入步驟1）中巴氏芽孢桿菌的種子液，進行微生物發(fā)酵，接種量15 %（體積比），溫度25℃，以100 r/min的振蕩速度培養(yǎng)12 h，控制pH 7.0，得到含有花旗松素的提取液，將發(fā)酵液干燥得到花旗松素提取物。經計算，所制備的花旗松素提取物的提取率為40%，經HPLC測定花旗松素的純度為10%，花旗松素的提取率為4%。
實施例2：
一種從金合歡樹皮中提取花旗松素的方法，包括以下步驟：
1）取巴氏芽孢桿菌菌株2環(huán)，接種于每升水加入酪蛋白棟16 g，豆粕蛋白胨5.50 g，卡索瓊脂16 g/L，氯化鈉4.0 g，尿素16 g的滅菌LB培養(yǎng)基上；置于搖床上，在26℃條件下，以110 r/min的振蕩速度培養(yǎng)13 h，滅菌培養(yǎng)基的pH為 7.1，得到其活性種子液，活性種子液中巴氏芽孢桿菌菌濃度為3*105 CFU/ml；
2）將金合歡樹皮，用蒸餾水洗凈，切至段長3 - 5 cm ，置于50℃烘箱中烘12 h，至水分含量低于3%，粉碎后過100目篩，避光存放于相對濕度65%條件；稱取8 g金合歡樹樹皮粉末，按照干重與水的質量比為1:3.5混合均勻，接入步驟1）中巴氏芽孢桿菌的種子液，進行微生物發(fā)酵，接種量16%（體積比），溫度26，以120 r/min的振蕩速度培養(yǎng)14 h，控制pH 7.1，得到含有花旗松素的提取液，將發(fā)酵液干燥得到花旗松素提取物。經計算，所制備的花旗松素提取物的提取率為43%，經HPLC測定花旗松素的純度為12%，花旗松素的提取率為5.5%。
實施例3：
1）取巴氏芽孢桿菌菌株2環(huán)，接種于每升水加入酪蛋白棟17 g，豆粕蛋白胨6.5 g，卡索瓊脂17 g/L，氯化鈉5.0 g，尿素16 g的滅菌LB培養(yǎng)基上；置于搖床上，在28℃條件下，以130 r/min的振蕩速度培養(yǎng)16 h，滅菌培養(yǎng)基的pH為7.2，得到其活性種子液，活性種子液中巴氏芽孢桿菌菌濃度為4*105 CFU/ml；
2）將金合歡樹皮，用蒸餾水洗凈，切至段長3 - 5 cm ，置于50℃烘箱中烘12 h，至水分含量低于3%，粉碎后過100目篩，避光存放于相對濕度65%條件；稱取100 g金合歡樹樹皮粉末，按照干重與水的質量比為1:4混合均勻，接入步驟1）中巴氏芽孢桿菌的種子液，進行微生物發(fā)酵，接種量18 %（體積比），溫度28℃，以130 r/min的振蕩速度培養(yǎng)18 h，控制pH 7.2，得到含有花旗松素的提取液，將發(fā)酵液干燥得到花旗松素提取物。經計算，所制備的花旗松素提取物的提取率為45%，經HPLC測定花旗松素的純度為15%，花旗松素的提取率為7%。
實施例4：
一種從金合歡樹皮中提取花旗松素的方法，包括以下步驟：
1）取巴氏芽孢桿菌菌株3環(huán)，接種于每升水加入酪蛋白棟18 g，豆粕蛋白胨7.0 g，卡索瓊脂18 g/L，氯化鈉6.0 g，尿素20 g的滅菌LB培養(yǎng)基上；置于搖床上，在29℃條件下，以125 r/min的振蕩速度培養(yǎng)18 h，滅菌培養(yǎng)基的pH為7.2，得到其活性種子液，活性種子液中巴氏芽孢桿菌菌濃度為1*106 CFU/ml；
2）將金合歡樹皮，用蒸餾水洗凈，切至段長3 - 5 cm ，置于50℃烘箱中烘12 h，至水分含量低于3%，粉碎后過100目篩，避光存放于相對濕度65%條件；稱取500 g金合歡樹樹皮粉末，按照干重與水的質量比為1:4混合均勻，接入步驟1）中巴氏芽孢桿菌的種子液，進行微生物發(fā)酵，接種量25%（體積比），溫度28℃，以130 r/min的振蕩速度培養(yǎng)19 h，控制pH 7.2，得到含有花旗松素的提取液，將發(fā)酵液干燥得到花旗松素提取物。經計算，所制備的花旗松素提取物的提取率為50%，經HPLC測定花旗松素的純度為20%，花旗松素的提取率為10%。
實施例5：
一種從金合歡樹皮中提取花旗松素的方法，包括以下步驟：
1）取巴氏芽孢桿菌菌株3環(huán)，接種于每升水加入酪蛋白棟20.0 g，豆粕蛋白胨8.0 g，卡索瓊脂20 g/L，氯化鈉7.0 g，尿素25 g的滅菌LB培養(yǎng)基上；置于搖床上，在32℃條件下，以150 r/min的振蕩速度培養(yǎng)24 h，滅菌培養(yǎng)基的pH為7.3，得到其活性種子液，活性種子液中巴氏芽孢桿菌菌濃度為8*105 CFU/ml；
2）將金合歡樹皮，用蒸餾水洗凈，切至段長3 - 5 cm ，置于50℃烘箱中烘12 h，至水分含量低于3%，粉碎后過100目篩，避光存放于相對濕度65%條件；稱取2 kg金合歡樹樹皮粉末，按照干重與水的質量比為1:5混合均勻，接入步驟1）中巴氏芽孢桿菌的種子液，進行微生物發(fā)酵，接種量30%（體積比），溫度32℃，以150 r/min的振蕩速度培養(yǎng)24 h，控制pH 7.3，得到含有花旗松素的提取液，將發(fā)酵液干燥得到花旗松素提取物。經計算，所制備的花旗松素提取物的提取率為48%，經HPLC測定花旗松素的純度為18%，花旗松素的提取率為8.5%。
以上所述僅為本發(fā)明的實施例，并非因此限制本發(fā)明的專利范圍，凡是利用本發(fā)明說明書內容所做的等效結構或等效流程變換，或直接或間接運用在其他相關的技術領域，均同理包括在本發(fā)明的專利保護范圍內。