本發(fā)明涉及食品加工領(lǐng)域，具體涉及一種促進(jìn)中性蛋白酶活性的方法及其在啤酒澄清中的應(yīng)用”。
技術(shù)背景
中性蛋白酶別名沙雷肽酶，分子量為35～40KD，是一種在中性條件下活性較高的蛋白酶，可用于各種蛋白質(zhì)酶解，作為一種生物催化劑，它具有催化反應(yīng)速度快，無工業(yè)污染等優(yōu)點(diǎn)。根據(jù)《GB 2760-2011 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》的規(guī)定，中性蛋白酶可用作食品工業(yè)的加工助劑（酶制劑）”。
啤酒在運(yùn)輸、冷藏過程中，由于光照、震動(dòng)、溫度等環(huán)境條件的作用，會(huì)產(chǎn)生渾濁、沉淀的現(xiàn)象，引起啤酒渾濁、沉淀的原因是啤酒中殘留的蛋白質(zhì)與多元酚結(jié)合成大分子的復(fù)合物。采用中性蛋白酶處理原漿啤酒，可以分解啤酒中的大分子蛋白質(zhì)，此法具有快速、簡(jiǎn)便、效果好等特點(diǎn)，在生產(chǎn)中有重要的應(yīng)用價(jià)值。 但中性蛋白酶價(jià)格較高，影響了啤酒的生產(chǎn)成本和中性蛋白酶的應(yīng)用領(lǐng)域”。
8–((4–(2,4–二甲氧基苯基)哌嗪–1–基)甲基) –5,7 –二羥基–3–(4–羥基苯基) –4H–苯并吡喃–4–酮是染料木素與1-(2,4-二甲基苯基)哌嗪經(jīng)化學(xué)合成得到的一種染料木素衍生物。8–((4–(2,4–二甲氧基苯基)哌嗪–1–基)甲基) –5,7 –二羥基–3–(4–羥基苯基) –4H–苯并吡喃–4–酮分子式為C28H28N2O5，分子量472.52，其結(jié)構(gòu)式如下”。
目前，國(guó)內(nèi)外未見8–((4–(2,4–二甲氧基苯基)哌嗪–1–基)甲基) –5,7 –二羥基–3–(4–羥基苯基) –4H–苯并吡喃–4–酮在促進(jìn)中性蛋白酶活性方面的應(yīng)用報(bào)道”。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一種采用8–((4–(2,4–二甲氧基苯基)哌嗪–1–基)甲基) –5,7 –二羥基–3–(4–羥基苯基) –4H–苯并吡喃–4–酮作為酶促進(jìn)劑，促進(jìn)中性蛋白酶活性的方法，不僅改善啤酒的澄清效果，而且得到的澄清啤酒，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值更高”。
本發(fā)明所述的促進(jìn)中性蛋白酶活性的方法，是將酶促進(jìn)劑8–((4–(2,4–二甲氧基苯基)哌嗪–1–基)甲基) –5,7 –二羥基–3–(4–羥基苯基) –4H–苯并吡喃–4–酮與中性蛋白酶一起添加到原漿啤酒中，制備澄清的啤酒”。
其中：
中性蛋白酶促進(jìn)劑的添加量為中性蛋白酶質(zhì)量的2～4%，中性蛋白酶的添加量為每升原漿啤酒中添加4～5mg”。
酶解溫度為35～40℃，酶解時(shí)間為32～34h”。
酶解之后，采用截?cái)喾肿恿繛?0000的中空纖維超濾膜超濾”。
中性蛋白酶促進(jìn)劑8–((4–(2,4–二甲氧基苯基)哌嗪–1–基)甲基) –5,7 –二羥基–3–(4–羥基苯基) –4H–苯并吡喃–4–酮，為染料木素與1-(2,4-二甲基苯基)哌嗪的化學(xué)合成物，具體制備過程如下”。
在50mL圓底燒瓶中加入染料木素1mmol，無水乙醇25mL和37%甲醛水溶液0.08mL，加熱至55～60 ℃，反應(yīng)液澄清后，加入1-(2,4-二甲基苯基)哌嗪0.19mL，室溫?cái)嚢?8h，有固體析出，過濾， 固體經(jīng)重結(jié)晶分離純化，得到本發(fā)明的酶促進(jìn)劑”。
中性蛋白酶促進(jìn)劑與中性蛋白酶的一個(gè)酪氨酸殘基以一個(gè)氫鍵相互結(jié)合，兩個(gè)π鍵和一個(gè)賴氨酸殘基結(jié)合，三個(gè)π鍵和一個(gè)色氨酸殘基結(jié)合，這種結(jié)合導(dǎo)致了中性蛋白酶構(gòu)象的改變，從而提高了中性蛋白酶的活性”。
與現(xiàn)有的技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果如下”。
（1）本發(fā)明的中性蛋白酶促進(jìn)劑提高了中性蛋白酶的活性，其與中性蛋白酶一起添加到原漿啤酒中，具有協(xié)同作用，降低了中性蛋白酶的使用量，改善了啤酒的澄清效果，保證了啤酒在運(yùn)輸、冷藏過程中的高澄清度”。
（2）本發(fā)明的制作方法，改善了啤酒的口感，提高了多肽的含量，增加了啤酒的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值”。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步描述”。
實(shí)施例 1
在原漿啤酒中，加入5mg/L的中性蛋白酶，同時(shí)加入占中性蛋白酶質(zhì)量2%的中性蛋白酶促進(jìn)劑8–((4–(2,4–二甲氧基苯基)哌嗪–1–基)甲基) –5,7 –二羥基–3–(4–羥基苯基) –4H–苯并吡喃–4–酮，在溫度為35℃條件下氣浴震蕩34h，酶解澄清結(jié)束后，中空纖維超濾膜超濾，得到澄清的啤酒”。
加中性蛋白酶促進(jìn)劑后比未使用中性蛋白酶的啤酒比，澄清度提高了8%，比未使用中性蛋白酶促進(jìn)劑相比澄清度提高了5%。使用和未使用中性蛋白酶促進(jìn)劑的啤酒比未使用中性蛋白酶的啤酒的多肽含量分別升高了 4.5% 和 1.1%”。
實(shí)施例 2
在原漿啤酒中，加入4mg/L的中性蛋白酶，同時(shí)加入占中性蛋白酶質(zhì)量4%的中性蛋白酶促進(jìn)劑8–((4–(2,4–二甲氧基苯基)哌嗪–1–基)甲基) –5,7 –二羥基–3–(4–羥基苯基) –4H–苯并吡喃–4–酮，在溫度為40℃條件下氣浴震蕩32h，酶解澄清結(jié)束后，中空纖維超濾膜超濾，得到澄清的啤酒”。
加中性蛋白酶促進(jìn)劑后比未使用中性蛋白酶的啤酒比，澄清度提高11%，比未使用中性蛋白酶促進(jìn)劑相比澄清度提高了8%。使用和未使用中性蛋白酶促進(jìn)劑的啤酒比未使用中性蛋白酶的啤酒的多肽含量分別升高了 4.5% 和 1.1%”。