本發(fā)明涉及一種復(fù)合微生物菌劑的制備方法，屬于復(fù)合微生物菌劑制備技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

隨著科學(xué)技術(shù)和生產(chǎn)工藝的不斷發(fā)展，大量的人工化合物進(jìn)入環(huán)境中，由于其結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性和生物陌生性，在短時(shí)間內(nèi)很難被微生物分解利用而進(jìn)入物質(zhì)循環(huán)。對這類污染物具有高效降解能力的微生物在自然環(huán)境中的種類和數(shù)量都較少，在種間競爭中處于劣勢。生物強(qiáng)化技術(shù)可以充分發(fā)揮微生物的潛力，改善難降解有機(jī)物的生物處理效果。目前國內(nèi)微生物菌劑發(fā)展迅速，用以做復(fù)合肥、有機(jī)肥、沖施肥等的功能菌，可有效提高肥料利用率，防治細(xì)菌真菌病害感染，見效快，收益高。復(fù)合微生物菌劑，由兩種或兩種以上且互不拮抗的微生物菌種制成的微生物制劑。此類菌劑一般具有種類全、配伍合理、功能性強(qiáng)、經(jīng)濟(jì)效益高等優(yōu)良特點(diǎn)。菌種培養(yǎng)，直接從被污染的環(huán)境或污泥中富集、篩選。由于石油污染、海上油輪事故或者來源于大氣沉降的多環(huán)芳烴，海底沉積了大量的石油組分，成為天然的富集馴化場所，因此可從海底沉積物中篩選到降解石油組分特別是多環(huán)芳烴的高效降解菌株；通過較長時(shí)間的馴化，誘導(dǎo)出自然界中已經(jīng)存在的微生物，產(chǎn)生能對特定化合物進(jìn)行降解的代謝途徑和代謝酶類，從而獲得這些物質(zhì)的降解菌種；通過基因改良技術(shù)改造微生物的降解特性，可使其降解性能得到顯著提高或者獲得新的降解性能。但目前方法制備微生物菌劑，普遍存在生產(chǎn)周期長，分離過程復(fù)雜，生物利用率低，導(dǎo)致其活性低，抑菌效果差，持效時(shí)間短問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題：針對目前方法制備微生物菌劑，生產(chǎn)周期長，分離過程復(fù)雜，生物利用率低，導(dǎo)致其活性低，抑菌效果差，持效時(shí)間短的弊端，提供了一種取氧化鐵磁性粒子與乙醇溶液超聲分散處理，過濾得濾渣，加入過氧化月桂酰等攪拌反應(yīng)，超聲分散，過濾、洗滌制得復(fù)合微生物菌劑載體備用，再取牛肉膏、蛋白胨等加入培養(yǎng)皿中混合均勻，殺菌消毒得發(fā)酵培養(yǎng)基，與牛糞培養(yǎng)所得的混合菌落混合發(fā)酵，過濾得濾液，浸泡備用的復(fù)合微生物菌劑載體，再過濾得濾渣風(fēng)干制得復(fù)合微生物菌劑的方法。本發(fā)明制備步驟簡單，生產(chǎn)周期短，所得產(chǎn)品生物利用度高，有效解決了其活性低，抑菌效果差，持效時(shí)間短問題。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下所述的技術(shù)方案是：

（1）稱取3～5g氧化鐵磁性粒子加入到燒杯中，向燒杯中加入100～200mL質(zhì)量濃度為75%乙醇溶液，將燒杯置于超聲波分散儀中，超聲處理2～3h，靜置20～30min，過濾，得到濾渣，得預(yù)處理后的磁性氧化鐵；

（2）將上述預(yù)處理后的磁性氧化鐵加入到帶有溫度計(jì)和回流裝置的三口燒瓶中，將燒杯置于水浴鍋中，控制溫度為80～90℃，再依次加入0.3～0.5g過氧化月桂酰、10～20g甲基丙烯酸，攪拌4～5h，隨后加入5～7g甲基三氯硅烷，攪拌反應(yīng)2～3h，得到反應(yīng)物，向反應(yīng)物中加入200～300mL去離子水，并置于超聲波分散儀中，超聲分散20～30min，過濾，得到微球，將微球用去離子水洗滌3～5次，得到多孔聚合物微球，即復(fù)合微生物菌劑載體，備用；

（3）依次稱取20～30g牛肉膏、10～15g蛋白胨、3～5g氯化鈉、1～3g磷酸氫二鈉、1～3g磷酸二氫鈉加入到培養(yǎng)皿中，攪拌均勻，并置于紫外燈下消毒殺菌，得到發(fā)酵培養(yǎng)基；

（4）稱取10～20g牛糞加入到培養(yǎng)皿中，將培養(yǎng)皿置于搖床中，在40～42℃下，振蕩培養(yǎng)48～60h，用去離子水淋洗培養(yǎng)基，得到混合菌落，將菌落置于發(fā)酵罐中，并依次加入上述發(fā)酵培養(yǎng)基、200～300mL去離子水，控制溫度在35～45℃，發(fā)酵4～5天，待發(fā)酵結(jié)束，將發(fā)酵混合物進(jìn)行過濾，得到濾液；

（5）將步驟（2）備用的復(fù)合微生物菌劑載體放入上述所得濾液中，浸泡3～4h，過濾，得濾渣，將濾渣放入風(fēng)干機(jī)中風(fēng)干2～3h，即可得到一種復(fù)合微生物菌劑。

本發(fā)明的應(yīng)用方法：將本發(fā)明制得的復(fù)合微生物菌劑添加至肥料中，添加量為肥料的1.0～1.2%，混合均勻后，施肥即可?？捎行г黾臃市?，提高肥料的生物利用率，降解農(nóng)藥殘留和大分子有機(jī)物，增強(qiáng)了農(nóng)作物抗病性和免疫力；該復(fù)合微生物菌劑高活性，抑菌效果好，持效時(shí)間延長了15～20天。

本發(fā)明與其他方法相比，有益技術(shù)效果是：

（1）本發(fā)明制備步驟簡單，生產(chǎn)周期短，所得產(chǎn)品生物利用度高；

（2）高活性，抑菌效果好，持效時(shí)間延長了15～20天。

具體實(shí)施方式

首先稱取3～5g氧化鐵磁性粒子加入到燒杯中，向燒杯中加入100～200mL質(zhì)量濃度為75%乙醇溶液，將燒杯置于超聲波分散儀中，超聲處理2～3h，靜置20～30min，過濾，得到濾渣，得預(yù)處理后的磁性氧化鐵；然后將上述預(yù)處理后的磁性氧化鐵加入到帶有溫度計(jì)和回流裝置的三口燒瓶中，將燒杯置于水浴鍋中，控制溫度為80～90℃，再依次加入0.3～0.5g過氧化月桂酰、10～20g甲基丙烯酸，攪拌4～5h，隨后加入5～7g甲基三氯硅烷，攪拌反應(yīng)2～3h，得到反應(yīng)物，向反應(yīng)物中加入200～300mL去離子水，并置于超聲波分散儀中，超聲分散20～30min，過濾，得到微球，將微球用去離子水洗滌3～5次，得到多孔聚合物微球，即復(fù)合微生物菌劑載體，備用；再依次稱取20～30g牛肉膏、10～15g蛋白胨、3～5g氯化鈉、1～3g磷酸氫二鈉、1～3g磷酸二氫鈉加入到培養(yǎng)皿中，攪拌均勻，并置于紫外燈下消毒殺菌，得到發(fā)酵培養(yǎng)基；稱取10～20g牛糞加入到培養(yǎng)皿中，將培養(yǎng)皿置于搖床中，在40～42℃下，振蕩培養(yǎng)48～60h，用去離子水淋洗培養(yǎng)基，得到混合菌落，將菌落置于發(fā)酵罐中，并依次加入上述發(fā)酵培養(yǎng)基、200～300mL去離子水，控制溫度在35～45℃，發(fā)酵4～5天，待發(fā)酵結(jié)束，將發(fā)酵混合物進(jìn)行過濾，得到濾液；最后將備用的復(fù)合微生物菌劑載體放入上述所得濾液中，浸泡3～4h，過濾，得濾渣，將濾渣放入風(fēng)干機(jī)中風(fēng)干2～3h，即可得到一種復(fù)合微生物菌劑。

實(shí)例1

首先稱取3g氧化鐵磁性粒子加入到燒杯中，向燒杯中加入100mL質(zhì)量濃度為75%乙醇溶液，將燒杯置于超聲波分散儀中，超聲處理2h，靜置20min，過濾，得到濾渣，得預(yù)處理后的磁性氧化鐵；然后將上述預(yù)處理后的磁性氧化鐵加入到帶有溫度計(jì)和回流裝置的三口燒瓶中，將燒杯置于水浴鍋中，控制溫度為80℃，再依次加入0.3g過氧化月桂酰、10g甲基丙烯酸，攪拌4h，隨后加入5g甲基三氯硅烷，攪拌反應(yīng)2h，得到反應(yīng)物，向反應(yīng)物中加入200mL去離子水，并置于超聲波分散儀中，超聲分散20min，過濾，得到微球，將微球用去離子水洗滌3次，得到多孔聚合物微球，即復(fù)合微生物菌劑載體，備用；再依次稱取20g牛肉膏、10g蛋白胨、3g氯化鈉、1g磷酸氫二鈉、1g磷酸二氫鈉加入到培養(yǎng)皿中，攪拌均勻，并置于紫外燈下消毒殺菌，得到發(fā)酵培養(yǎng)基；稱取10g牛糞加入到培養(yǎng)皿中，將培養(yǎng)皿置于搖床中，在40℃下，振蕩培養(yǎng)48h，用去離子水淋洗培養(yǎng)基，得到混合菌落，將菌落置于發(fā)酵罐中，并依次加入上述發(fā)酵培養(yǎng)基、200mL去離子水，控制溫度在35℃，發(fā)酵4天，待發(fā)酵結(jié)束，將發(fā)酵混合物進(jìn)行過濾，得到濾液；最后將備用的復(fù)合微生物菌劑載體放入上述所得濾液中，浸泡3h，過濾，得濾渣，將濾渣放入風(fēng)干機(jī)中風(fēng)干2h，即可得到一種復(fù)合微生物菌劑。

將本發(fā)明制得的復(fù)合微生物菌劑添加至肥料中，添加量為肥料的1.0%，混合均勻后，施肥即可?？捎行г黾臃市?，提高肥料的生物利用率，降解農(nóng)藥殘留和大分子有機(jī)物，增強(qiáng)了農(nóng)作物抗病性和免疫力；該復(fù)合微生物菌劑高活性，抑菌效果好，持效時(shí)間延長了15天。

實(shí)例2

首先稱取4g氧化鐵磁性粒子加入到燒杯中，向燒杯中加入150mL質(zhì)量濃度為75%乙醇溶液，將燒杯置于超聲波分散儀中，超聲處理3h，靜置25min，過濾，得到濾渣，得預(yù)處理后的磁性氧化鐵；然后將上述預(yù)處理后的磁性氧化鐵加入到帶有溫度計(jì)和回流裝置的三口燒瓶中，將燒杯置于水浴鍋中，控制溫度為85℃，再依次加入0.4g過氧化月桂酰、15g甲基丙烯酸，攪拌5h，隨后加入6g甲基三氯硅烷，攪拌反應(yīng)3h，得到反應(yīng)物，向反應(yīng)物中加入250mL去離子水，并置于超聲波分散儀中，超聲分散25min，過濾，得到微球，將微球用去離子水洗滌4次，得到多孔聚合物微球，即復(fù)合微生物菌劑載體，備用；再依次稱取25g牛肉膏、13g蛋白胨、4g氯化鈉、2g磷酸氫二鈉、2g磷酸二氫鈉加入到培養(yǎng)皿中，攪拌均勻，并置于紫外燈下消毒殺菌，得到發(fā)酵培養(yǎng)基；稱取15g牛糞加入到培養(yǎng)皿中，將培養(yǎng)皿置于搖床中，在41℃下，振蕩培養(yǎng)54h，用去離子水淋洗培養(yǎng)基，得到混合菌落，將菌落置于發(fā)酵罐中，并依次加入上述發(fā)酵培養(yǎng)基、250mL去離子水，控制溫度在40℃，發(fā)酵5天，待發(fā)酵結(jié)束，將發(fā)酵混合物進(jìn)行過濾，得到濾液；最后將備用的復(fù)合微生物菌劑載體放入上述所得濾液中，浸泡4h，過濾，得濾渣，將濾渣放入風(fēng)干機(jī)中風(fēng)干3h，即可得到一種復(fù)合微生物菌劑。

將本發(fā)明制得的復(fù)合微生物菌劑添加至肥料中，添加量為肥料的1.1%，混合均勻后，施肥即可?？捎行г黾臃市В岣叻柿系纳锢寐?，降解農(nóng)藥殘留和大分子有機(jī)物，增強(qiáng)了農(nóng)作物抗病性和免疫力；該復(fù)合微生物菌劑高活性，抑菌效果好，持效時(shí)間延長了18天。

實(shí)例3

首先稱取5g氧化鐵磁性粒子加入到燒杯中，向燒杯中加入200mL質(zhì)量濃度為75%乙醇溶液，將燒杯置于超聲波分散儀中，超聲處理3h，靜置30min，過濾，得到濾渣，得預(yù)處理后的磁性氧化鐵；然后將上述預(yù)處理后的磁性氧化鐵加入到帶有溫度計(jì)和回流裝置的三口燒瓶中，將燒杯置于水浴鍋中，控制溫度為90℃，再依次加入0.5g過氧化月桂酰、20g甲基丙烯酸，攪拌5h，隨后加入7g甲基三氯硅烷，攪拌反應(yīng)3h，得到反應(yīng)物，向反應(yīng)物中加入300mL去離子水，并置于超聲波分散儀中，超聲分散30min，過濾，得到微球，將微球用去離子水洗滌5次，得到多孔聚合物微球，即復(fù)合微生物菌劑載體，備用；再依次稱取30g牛肉膏、15g蛋白胨、5g氯化鈉、3g磷酸氫二鈉、3g磷酸二氫鈉加入到培養(yǎng)皿中，攪拌均勻，并置于紫外燈下消毒殺菌，得到發(fā)酵培養(yǎng)基；稱取20g牛糞加入到培養(yǎng)皿中，將培養(yǎng)皿置于搖床中，在42℃下，振蕩培養(yǎng)60h，用去離子水淋洗培養(yǎng)基，得到混合菌落，將菌落置于發(fā)酵罐中，并依次加入上述發(fā)酵培養(yǎng)基、300mL去離子水，控制溫度在45℃，發(fā)酵5天，待發(fā)酵結(jié)束，將發(fā)酵混合物進(jìn)行過濾，得到濾液；最后將備用的復(fù)合微生物菌劑載體放入上述所得濾液中，浸泡4h，過濾，得濾渣，將濾渣放入風(fēng)干機(jī)中風(fēng)干3h，即可得到一種復(fù)合微生物菌劑。

將本發(fā)明制得的復(fù)合微生物菌劑添加至肥料中，添加量為肥料的1.2%，混合均勻后，施肥即可?？捎行г黾臃市В岣叻柿系纳锢寐?，降解農(nóng)藥殘留和大分子有機(jī)物，增強(qiáng)了農(nóng)作物抗病性和免疫力；該復(fù)合微生物菌劑高活性，抑菌效果好，持效時(shí)間延長了20天。