本發(fā)明屬于醫(yī)藥和有機(jī)化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種瑞普拉生雜質(zhì)及其制備方法。

背景技術(shù)：

瑞普拉生，又名鹽酸洛氟普啶、鹽酸瑞伐拉贊，化學(xué)名為：5,6-二甲基-2-(4-氟苯胺基)-4-(1-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉)嘧啶鹽酸鹽，結(jié)構(gòu)式如i所示。

瑞普拉生是目前上市的唯一一個酸泵拮抗劑，又稱為可逆性質(zhì)子泵抑制劑、鉀競爭性酸阻滯劑(p-cabs)。與傳統(tǒng)的苯并咪唑類質(zhì)子泵抑制劑(ppis)不同，p-cabs是通過競爭性抑制質(zhì)子泵(即h⁺/k⁺-atp酶)中的k⁺而起作用，是一種可逆的k⁺拮抗劑。由于瑞普拉生抑酸效果和質(zhì)子泵活化情況無關(guān)，臨床上可明顯減少夜間酸突破的發(fā)生。p-cabs具有親脂性、弱堿性、解離常數(shù)高和在低ph值時穩(wěn)定的特點(diǎn)。在酸性環(huán)境下，p-cabs立刻離子化，離子化形式通過離子型結(jié)合抑制h⁺/k⁺-atp酶，迅速升高胃內(nèi)ph值，不需要集中于胃壁細(xì)胞的微囊和微管并依賴酸的激活；p-cabs與酶離解后，酶活性恢復(fù)。人和動物口服后能吸收迅速，達(dá)到血漿濃度的峰值。臨床和動物試驗(yàn)表明，p-cabs比ppis或h2受體阻滯劑起效更快，升高ph的作用更強(qiáng)。瑞普拉生對h+/k+-atp酶的選擇性比na+/k+-atp酶高100倍以上，因此在治療劑量時,該品對其他的酶影響很小，對機(jī)體生理功能影響小。

目前，瑞普拉生的合成主要通過以下步驟進(jìn)行：

(1)以對氟苯胺(iia)與氨基腈為原料，通過加成反應(yīng)縮合成n-(4-氟苯基)胍碳酸鹽(iii)；

(2)將n-(4-氟苯基)胍碳酸鹽(iii)與α-甲基乙酰乙酸乙酯(iib)發(fā)生環(huán)合反應(yīng)，得到4-羥基-2-(4-氟苯胺)-5,6-二甲基嘧啶(iv)；

(3)將4-羥基-2-(4-氟苯胺)-5,6-二甲基嘧啶(iv)氯化得到4-氯-2-(4-氟苯胺)-5,6-二甲基嘧啶(v)；

(4)4-氯-2-(4-氟苯胺)-5,6-二甲基嘧啶(v)與1-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉(iic)反應(yīng)得到瑞普拉生游離堿，經(jīng)鹽酸酸化成鹽得到瑞普拉生(i)。

上述反應(yīng)路線如下：

由于瑞普拉生自身化學(xué)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及受到合成過程中工藝條件的影響，很可能會產(chǎn)生一些雜質(zhì)，從而降低了瑞普拉生的質(zhì)量并可能影響其療效。因此，有必要對瑞普拉生相關(guān)雜質(zhì)進(jìn)行研究，進(jìn)而加以分離和制備，為其質(zhì)量控制奠定基礎(chǔ)。

現(xiàn)有技術(shù)中，對瑞普拉生的合成工藝多有研究，如孫政進(jìn)等(鹽酸瑞伐拉贊的合成.《中國醫(yī)藥工業(yè)雜志》.2008,第39卷(第5期)：321-324.)、蔣軍榮等(revaprazan的合成.《合成化學(xué)》.2008,第16卷(第4期)：490-492.)都先后報道了瑞普拉生的制備方法。授權(quán)公告號cn102993173b(授權(quán)公告日2014年9月3日)的中國發(fā)明專利也公開了一種洛氟普啶的制備方法。但是，現(xiàn)有技術(shù)對瑞普拉生合成過程中可能產(chǎn)生的雜質(zhì)及其制備方法鮮有報道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提供兩種瑞普拉生雜質(zhì)及其制備方法。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用了如下的技術(shù)方案：

一種結(jié)構(gòu)式x的化合物或其互變異構(gòu)體、內(nèi)消旋體、外消旋體、對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體或其混合物形式，或結(jié)構(gòu)式i的化合物、其互變異構(gòu)體、內(nèi)消旋體、外消旋體、對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體的藥學(xué)上可以接受的鹽或溶劑化物，

其中，n＝0或1，r1＝h或甲基。

優(yōu)選的，n＝0時，r1＝甲基，所述化合物為結(jié)構(gòu)式x-1的瑞普拉生雜質(zhì)a，

還優(yōu)選的，n＝1時，r1＝h，所述化合物為結(jié)構(gòu)式x-2的瑞普拉生雜質(zhì)b，

本發(fā)明的另一個目的在于提供所述瑞普拉生雜質(zhì)a和瑞普拉生雜質(zhì)b的制備方法；所述制備方法包括：結(jié)構(gòu)式i的瑞普拉生在有機(jī)溶劑中，120～150℃和強(qiáng)酸反應(yīng)2～6天，分離純化后得到所述瑞普拉生雜質(zhì)a和瑞普拉生雜質(zhì)b。

優(yōu)選的，所述強(qiáng)酸選自質(zhì)量百分濃度30％～37％的鹽酸和硫酸中的一種或兩種。

更優(yōu)選的，所述強(qiáng)酸選自濃度32％～35％的鹽酸和硫酸中的一種或兩種。

優(yōu)選的，所述有機(jī)溶劑選自二甲基甲酰胺、二甲亞砜和甲基吡咯烷酮中的一種或多種。

還優(yōu)選的，所述反應(yīng)后分離純化的具體操作為：

反應(yīng)結(jié)束后，加堿調(diào)ph至8～9，乙酸乙酯萃取2～4次，合并乙酸乙酯萃取液，無水硫酸鈉或無水硫酸鎂干燥，濃縮至干，硅膠柱層析分離，體積比4:1～1:1的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，收集流份，濃縮有機(jī)溶劑至干，甲醇重結(jié)晶。

優(yōu)選的，所述堿為質(zhì)量百分濃度20％～30％的氫氧化鈉或氫氧化鉀水溶液。

上述由瑞普拉生制備所述瑞普拉生雜質(zhì)a和瑞普拉生雜質(zhì)b的反應(yīng)過程，如下反應(yīng)式所示：

本發(fā)明提供的上述瑞普拉生雜質(zhì)a和瑞普拉生雜質(zhì)b的制備方法操作簡便，制備的目標(biāo)產(chǎn)物純度高。

本發(fā)明所述的制備方法中，所述瑞普拉生通過如下方法制備：

1)結(jié)構(gòu)式iia的對氟苯胺與氨基氰在酸性條件下加熱反應(yīng)，tlc監(jiān)控反應(yīng)完全后，0～5℃下，反應(yīng)產(chǎn)物不經(jīng)分離與堿金屬碳酸鹽溶液成鹽，生成結(jié)構(gòu)式iii的n-(4-氟苯基)胍碳酸鹽，

其中，m＝堿金屬離子；

2)步驟1)得到的結(jié)構(gòu)式iii的n-(4-氟苯基)胍碳酸鹽在有機(jī)堿存在下與結(jié)構(gòu)式iib的α-甲基乙酰乙酸乙酯發(fā)生環(huán)化反應(yīng)，生成結(jié)構(gòu)式iv的4-羥基-2-(4-氟苯胺)-5,6-二甲基嘧啶，

3)步驟2)得到的結(jié)構(gòu)式iv的4-羥基-2-(4-氟苯胺)-5,6-二甲基嘧啶在極性溶劑中經(jīng)氯化試劑作用生成結(jié)構(gòu)式v的4-氯-2-(4-氟苯胺)-5,6-二甲基嘧啶，

4)步驟3)得到的結(jié)構(gòu)式v的4-氯-2-(4-氟苯胺)-5,6-二甲基嘧啶在高沸點(diǎn)極性溶劑中，在有機(jī)堿作用下與結(jié)構(gòu)式iic的1-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉發(fā)生取代反應(yīng)生成瑞普拉生游離堿，經(jīng)鹽酸酸化成鹽，生成結(jié)構(gòu)式i的瑞普拉生，

優(yōu)選的，所述步驟1)中，所述酸性條件是指對氟苯胺先與濃鹽酸成鹽并調(diào)ph至1.0～5.0，更優(yōu)選ph＝2.0～3.0；濃鹽酸的重量為對氟苯胺重量的5～15倍。

優(yōu)選的，所述步驟1)中，反應(yīng)溫度為85～95℃。

優(yōu)選的，所述步驟1)中，對氟苯胺與氨基腈的摩爾比為1:1.0～1:1.4。

優(yōu)選的，對氟苯胺與氨基氰反應(yīng)時間為3～5h。

優(yōu)選的，所述步驟1)中，所述堿金屬碳酸鹽選自碳酸鉀和碳酸鈉中的一種或兩種。

還優(yōu)選的，所述步驟2)中，所述有機(jī)堿選自甲醇鈉和乙醇鈉中的一種或兩種，n-(4-氟苯基)胍碳酸鹽與所述有機(jī)堿的摩爾比為1:1.0～1:1.4。

優(yōu)選的，所述步驟2)中，n-(4-氟苯基)胍碳酸鹽與α-甲基乙酰乙酸乙酯的摩爾比為1:1.1～1:1.2。

優(yōu)選的，所述步驟2)中，溶劑為吡啶。

還優(yōu)選的，所述步驟3)中，所述氯化試劑選自三氯氧磷和氯代丁二酰亞胺中的一種或兩種。

優(yōu)選的，所述步驟3)中，所述氯化試劑在2～3h內(nèi)分批加入。

優(yōu)選的，所述步驟3)中，所述極性溶劑選自n,n-二甲基甲酰胺和二甲亞砜中的一種或兩種。

優(yōu)選的，所述步驟3)中，反應(yīng)溫度為70～90℃，更優(yōu)選為80℃。

優(yōu)選的，所述步驟3)中，反應(yīng)時間為3～5h。

優(yōu)選的，所述步驟3)中，反應(yīng)結(jié)束后，加入質(zhì)量百分比濃度為5～20％的naoh或koh水溶液調(diào)ph＞9。

還優(yōu)選的，所述步驟4)中，4-氯-2-(4-氟苯胺)-5,6-二甲基嘧啶與1-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉的摩爾比為1:1.25～1:1.45。

優(yōu)選的，所述步驟4)中，所述高沸點(diǎn)極性溶劑選自正丁醇和乙二醇中的一種或兩種。

優(yōu)選的，所述步驟4)中，所述有機(jī)堿選自三乙胺、二乙胺和n,n-二異丙基乙胺中的一種或多種。

優(yōu)選的，所述步驟4)中，4-氯-2-(4-氟苯胺)-5,6-二甲基嘧啶與1-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉反應(yīng)的反應(yīng)溫度為所述高沸點(diǎn)有機(jī)溶劑常壓下回流的溫度，反應(yīng)時間為24～48h。

按照上述方法制備的瑞普拉生，經(jīng)上述嚴(yán)格的過程控制，能有效除去酰氯化反應(yīng)和縮合反應(yīng)過程中生成的副反應(yīng)雜質(zhì)，又能保證瑞普拉生的收率；所制備獲得的瑞普拉生原料藥純度≥99.5％，單個雜質(zhì)≤0.08％，產(chǎn)品外觀性狀好，環(huán)境效益好。本發(fā)明提供的制備方法簡單、快速，反應(yīng)條件溫和，有效避免了度他雄胺副產(chǎn)物的生成，降低了生產(chǎn)成本，環(huán)境效益好。

本發(fā)明還有一個目的，在于提供所述結(jié)構(gòu)式x的化合物在瑞普拉生有關(guān)物質(zhì)研究中的應(yīng)用。

特別是所述瑞普拉生雜質(zhì)a和瑞普拉生雜質(zhì)b作為對照品，定性和定量檢測瑞普拉生有關(guān)物質(zhì)。

具體實(shí)施方式

以下參照具體的實(shí)施例來說明本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，其不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。

下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的藥材原料、試劑材料等，如無特殊說明，均為市售購買產(chǎn)品。

實(shí)施例1n-(4-氟苯基)胍碳酸鹽(iii)的制備

向1l四口圓底燒瓶中，加入對氟苯胺250g，攪拌下滴加濃鹽酸調(diào)至ph＝2.0左右，升溫至85～95℃，加入質(zhì)量百分濃度50％氨基氰水溶液226g，滴畢保溫?cái)嚢杓s3h至原料反應(yīng)完全(tlc監(jiān)控反應(yīng))，冷卻至室溫，冰水浴下，緩慢滴加410g質(zhì)量百分濃度75％碳酸鈉水溶液，析出灰白色固體，抽濾，濾餅依次用360ml水和360ml乙酸乙酯洗滌，55℃鼓風(fēng)干燥至恒重得到標(biāo)題化合物(類白色固體)312g，收率124.8％，純度94.65％。

實(shí)施例2n-(4-氟苯基)胍碳酸鹽(iii)的制備

向1l四口圓底燒瓶中，加入對氟苯胺250g，攪拌下滴加濃鹽酸調(diào)至ph＝2.0左右，升溫至85～95℃，加入質(zhì)量百分濃度50％氨基氰水溶液226g，滴畢保溫?cái)嚢杓s3h至原料反應(yīng)完全(tlc監(jiān)控反應(yīng))，冷卻至室溫，冰水浴下，緩慢滴加410g質(zhì)量百分濃度75％碳酸鉀水溶液，析出灰白色固體，抽濾，濾餅依次用360ml水和360ml乙酸乙酯洗滌，55℃鼓風(fēng)干燥至恒重得到標(biāo)題化合物(類白色固體)310g，收率124.0％，純度95.05％。

實(shí)施例34-羥基-2-(4-氟苯胺)-5,6-二甲基嘧啶(iv)的制備

向5l四口圓底燒瓶中依次加入乙醇鈉158g、l無水乙醇590m、實(shí)施例1制備的n-(4-氟苯基)胍碳酸鹽310g，升溫至40～45℃反應(yīng)1h。減壓蒸出低沸點(diǎn)有機(jī)溶劑，剩余物中加入吡啶890ml和α-甲基乙酰乙酸乙酯335g，升溫回流約0.5h至tlc監(jiān)測反應(yīng)完全，減壓蒸出溶劑，冷卻至室溫，加入1500ml水，滴加約156ml濃鹽酸調(diào)至中性析出類白色固體，抽濾，濾餅依次用300ml水和600ml丙酮洗滌，55℃鼓風(fēng)干燥至恒重得標(biāo)題化合物(類白色粉末狀固體)271g，收率：87.42％，純度95.33％。

實(shí)施例44-羥基-2-(4-氟苯胺)-5,6-二甲基嘧啶(iv)的制備

向5l四口圓底燒瓶中依次加入甲醇鈉129.3g、無水乙醇590ml、實(shí)施例2制備的n-(4-氟苯基)胍碳酸鹽310g，升溫至40～45℃反應(yīng)1h。減壓蒸出低沸點(diǎn)有機(jī)溶劑，剩余物中加入吡啶890ml和α-甲基乙酰乙酸乙酯335g，升溫回流約0.5h至原料基本反應(yīng)完。tlc顯示原料反應(yīng)完全后，減壓蒸出溶劑，冷卻至室溫，加入1500ml水，滴加約156ml濃鹽酸調(diào)至中性析出類白色固體，抽濾，濾餅依次用300ml水和600ml丙酮洗滌，55℃鼓風(fēng)干燥至恒重得標(biāo)題化合物(類白色粉末狀固體)273g，收率：88.06％，純度95.02％。

實(shí)施例54-氯-2-(4-氟苯胺)-5,6-二甲基嘧啶(v)的制備

向5l三口圓底燒瓶中依次加入實(shí)施例3制備的4-羥基-2-(4-氟苯胺)-5,6-二甲基嘧啶135g，dmf300ml，升溫至80℃，2h～3h內(nèi)向其中緩慢滴加pocl3107g，滴加完畢，保溫?cái)嚢杓s5h至tlc監(jiān)控反應(yīng)完全，冷卻至室溫，加入1500ml冰水混合物，滴加質(zhì)量百分濃度50％naoh水溶液約145g調(diào)至ph大于9。抽濾，濾餅用300ml甲醇/水(體積比2：1)洗滌。55℃鼓風(fēng)干燥24h至恒重得標(biāo)題化合物(類白色固體)106.5g，收率78.89％，純度94.71％。

實(shí)施例64-氯-2-(4-氟苯胺)-5,6-二甲基嘧啶(v)的制備

向5l三口圓底燒瓶中依次加入實(shí)施例4制備的4-羥基-2-(4-氟苯胺)-5,6-二甲基嘧啶135g，dmf300ml，升溫至65℃，2～3h內(nèi)向其中分批加入ncs105g，加畢，保溫約6h至原料反應(yīng)完全。tlc顯示原料反應(yīng)完全后，冷卻至室溫，加入1500ml冰水混合物，滴加質(zhì)量百分濃度50％naoh水溶液約100g調(diào)至ph大于9以上。抽濾，濾餅用210ml甲醇/水(體積比2:1)洗滌。55℃鼓風(fēng)干燥24h至恒重得標(biāo)題化合物(類白色固體)102.5g，收率75.96％，純度94.88％。

實(shí)施例74-氯-2-(4-氟苯胺)-5,6-二甲基嘧啶(v)的制備

向5l三口圓底燒瓶中依次加入4-羥基-2-(4-氟苯胺)-5,6-二甲基嘧啶135g，thf200ml，升溫至65℃，2～3h內(nèi)向其中分批加入ncs105g，加畢，保溫約6h至tlc監(jiān)控反應(yīng)完全，冷卻至室溫，加入1500ml冰水混合物，滴加質(zhì)量百分濃度50％naoh水溶液約100g調(diào)至ph大于9以上。抽濾，濾餅用210ml甲醇/水(體積比2:1)洗滌。55℃鼓風(fēng)干燥24h至恒重得標(biāo)題化合物(類白色固體)206g，收率76.30％，純度94.98％。

實(shí)施例84-氯-2-(4-氟苯胺)-5,6-二甲基嘧啶(v)的制備

向5l三口圓底燒瓶中依次加入4-羥基-2-(4-氟苯胺)-5,6-二甲基嘧啶150g，dmso300ml，升溫至65℃，2～3h內(nèi)向其中分批加入107gpocl3，加畢，保溫約6h至tlc監(jiān)控反應(yīng)完全，冷卻至室溫，加入1500ml冰水混合物，滴加質(zhì)量百分濃度50％naoh水溶液約150g調(diào)至ph大于9以上。抽濾，濾餅用300ml甲醇/水(體積比2:1)洗滌。55℃鼓風(fēng)干燥24h至恒重得標(biāo)題化合物(類白色固體)102g，收率68.00％，純度95.08％。

實(shí)施例9瑞普拉生(i)的制備

向2l三口圓底燒瓶中依次加入實(shí)施例5制備的4-氯-2-(4-氟苯胺)-5,6-二甲基嘧啶50g，1-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉37.5g，乙二醇375ml，二乙胺50g，升溫回流24～48h至tlc監(jiān)控反應(yīng)完全；將反應(yīng)體系冷卻至室溫，轉(zhuǎn)移至5l三口圓底燒瓶中，向其中滴加158ml濃鹽酸?？販?0℃內(nèi)滴加2000ml水，緩慢冷卻至室溫后攪拌2h析晶，抽濾，濾餅用150ml丙酮/水(體積比1:2)洗滌，55℃鼓風(fēng)干燥至恒重,得到白色固體即瑞普拉生(ⅰ)71.6g，收率143.2％，純度99.83％。

經(jīng)hplc-uv檢測，保留時間在31.1min的色譜峰為瑞普拉生的吸收峰，經(jīng)峰面積歸一化法計(jì)算，瑞普拉生含量為99.83％；保留時間36.4min和41.1min各出現(xiàn)兩個雜質(zhì)的吸收峰，分別為瑞普拉生雜質(zhì)b(含量0.048％)和瑞普拉生雜質(zhì)a(含量0.018％)的吸收峰。

實(shí)施例10瑞普拉生(i)的制備

向2l三口圓底燒瓶中依次加入實(shí)施例6制備的4-氯-2-(4-氟苯胺)-5,6-二甲基嘧啶50g，1-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉37.5g，乙二醇375ml，n、n-二異丙基乙胺50g，升溫回流24～48h至tlc監(jiān)控反應(yīng)完全；將反應(yīng)體系冷卻至室溫，轉(zhuǎn)移至5l三口圓底燒瓶中，向其中滴加158ml濃鹽酸?？販?0℃內(nèi)滴加2000ml水，緩慢冷卻至室溫后攪拌2h析晶，抽濾，濾餅用150ml丙酮/水(體積比1:2)洗滌，55℃鼓風(fēng)干燥至恒重,得到白色固體即瑞普拉生(ⅰ)71.8g，收率143.6％，純度99.85％。

經(jīng)hplc-uv檢測，保留時間在31.2min的色譜峰為瑞普拉生的吸收峰，經(jīng)峰面積歸一化法計(jì)算，瑞普拉生含量為99.85％；保留時間36.6min和40.9min各出現(xiàn)兩個雜質(zhì)的吸收峰，分別為瑞普拉生雜質(zhì)b(含量0.044％)和瑞普拉生雜質(zhì)a(含量0.016％)的吸收峰。

實(shí)施例11瑞普拉生(i)的制備

向2l三口圓底燒瓶中依次加入實(shí)施例8制備的4-氯-2-(4-氟苯胺)-5,6-二甲基嘧啶50g，1-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉37.5g，乙二醇375ml，三乙胺50g，升溫回流24～48h至tlc監(jiān)控反應(yīng)完全。將反應(yīng)體系冷卻至室溫，轉(zhuǎn)移至5l三口圓底燒瓶中，向其中滴加158ml濃鹽酸?？販?0℃內(nèi)滴加2000ml水，緩慢冷卻至室溫后攪拌2h析晶，抽濾，濾餅用150ml丙酮/水(體積比1:2)洗滌，55℃鼓風(fēng)干燥至恒重,得到白色固體即瑞普拉生(ⅰ)70.8g，收率141.6％，純度99.87％。

經(jīng)hplc-uv檢測，保留時間在31.2min的色譜峰為瑞普拉生的吸收峰，經(jīng)峰面積歸一化法計(jì)算，瑞普拉生含量為99.87％；保留時間36.5min的吸收峰為瑞普拉生雜質(zhì)b(含量0.046％)的吸收峰。

實(shí)施例12瑞普拉生雜質(zhì)a和雜質(zhì)b的制備

向500ml單口瓶中加入實(shí)施例9制備的10g瑞普拉生，100ml濃鹽酸，140mldmf加熱至150℃，反應(yīng)5天。加稀氫氧化鈉水溶液至ph＝8～9，用各50ml乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯萃取液，無水硫酸鎂干燥，旋干溶劑，使用梯度溶劑法硅膠柱層析(展開劑：石油醚/乙酸乙酯＝4/1～1/1)，分離完畢后，濃縮有機(jī)溶劑至干，甲醇重結(jié)晶。得到0.73g雜質(zhì)a，收率7.3％。同時得到1.2g雜質(zhì)b，收率12.0％。

實(shí)施例13瑞普拉生雜質(zhì)a和雜質(zhì)b的制備

向500ml單口瓶中加入實(shí)施例10制備的10g瑞普拉生，100ml35％硫酸，140mldmso加熱至140℃，反應(yīng)5天。加稀氫氧化鉀水溶液至ph＝8～9，用各50ml乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯萃取液，無水硫酸鈉干燥，旋干溶劑，使用梯度溶劑法硅膠柱層析(展開劑：石油醚/乙酸乙酯＝4/1～1/1)，分離完畢后，濃縮有機(jī)溶劑至干，甲醇重結(jié)晶。得到0.52g雜質(zhì)a，收率5.2％。同時得到1.1g雜質(zhì)b，收率11.0％。

實(shí)施例14瑞普拉生雜質(zhì)a和雜質(zhì)b的制備

向500ml單口瓶中加入實(shí)施例11制備的10g瑞普拉生，100ml濃鹽酸，140mlnmp加熱至145℃，反應(yīng)5天。加稀氫氧化鈉水溶液至ph為8～9，用各50ml乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯萃取液，無水硫酸鎂干燥，旋干溶劑，使用梯度溶劑法柱層析(展開劑：石油醚/乙酸乙酯＝4/1～1/1)，分離完畢后，濃縮有機(jī)溶劑至干，甲醇重結(jié)晶。得到1.25g雜質(zhì)a，收率12.5％。同時得到1.5g雜質(zhì)b，收率15.0％。

總之，本發(fā)明提供了一種瑞普拉生合成過程中可能代入的雜質(zhì)及其制備方法，為進(jìn)一步完善瑞普拉生質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，尤其是有關(guān)物質(zhì)研究奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)，從而可以更好地保障臨床用藥安全。

以上對本發(fā)明具體實(shí)施方式的描述并不限制本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)本發(fā)明作出各種改變或變形，只要不脫離本發(fā)明的精神，均應(yīng)屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求的范圍。