發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及用于制備應(yīng)用于治療肌酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白缺乏的環(huán)肌酸和相關(guān)環(huán)狀肌酸類似物的化學(xué)方法。以下引用或依托的所有文獻(xiàn)通過(guò)引用明確并入本文。
背景技術(shù)：
：環(huán)肌酸((2-亞氨基咪唑啉-1-基)乙酸)用于治療肌酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白缺陷。在該基因疾病中，突變影響肌酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，從而阻止肌酸穿越血腦屏障(bbb)，導(dǎo)致腦中該重要氨基酸的缺乏。肌酸是一種極性小分子且需要主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)以穿越bbb。相反，環(huán)肌酸由于其兩個(gè)額外的亞甲基而更為親脂，且能夠通過(guò)被動(dòng)擴(kuò)散穿越bbb，因此用作肌酸替代物。首先在rowley，g.l.；greenleaf，a.l.；kenyon，g.l.j.am.chem.soc.1971，93，5542-5551中報(bào)道了環(huán)肌酸的合成。隨后在wo2006/073923中描述了使用藥學(xué)上可接受酸的環(huán)肌酸鹽的合成和表征。環(huán)肌酸的rowley合成起始自n-羧甲基-1,2-乙二胺的鈉鹽。將該中間體維持在溶液中并與溴化氰的甲醇溶液反應(yīng)以提供粗產(chǎn)物，通過(guò)過(guò)濾將其從反應(yīng)混合物中分離。進(jìn)行最終的從水中重結(jié)晶以提供純化產(chǎn)物。然而，rowley合成受限于低的總產(chǎn)率。此外，在規(guī)模化生產(chǎn)中使用溴化氰(一種高毒性以及反應(yīng)性化合物)需要嚴(yán)格的工藝控制。更具體地，溴化氰是一種具有顯著蒸汽壓的低熔點(diǎn)固體(mp＝50-53℃，bp＝61-62℃)，并具有吸入、皮膚暴露和口服毒性。事實(shí)上，2.5μg/ml的血漿水平在小鼠中引起抽搐和死亡。因此，在本領(lǐng)域中存在對(duì)于具有更低毒性并以更高產(chǎn)率提供產(chǎn)物以及具有更低商業(yè)成本的環(huán)肌酸及其類似物的新合成方法的需求。發(fā)明概述本發(fā)明涉及用于制備式(i)化合物：或其藥學(xué)上可接受的鹽的方法，其包括使式(ii)化合物：與式(iii)化合物：反應(yīng)的步驟，其中：y是ch2co2h、ch2conr1r2或ch2co2r1；r1、r2各自獨(dú)立地是氫、低級(jí)烷基、c7-c12烷基或低級(jí)環(huán)烷基；且n是1、2、3、4或5。發(fā)明詳述本發(fā)明涉及以更高的總產(chǎn)率和改善的安全性制備環(huán)肌酸和其它環(huán)狀肌酸類似物的改善的合成方法。氰胺是易于獲得的化學(xué)商品，且毒性顯著低于溴化氰。以下隨附說(shuō)明中描述了本發(fā)明的細(xì)節(jié)。雖然描述了示例性的方法和材料，但在實(shí)踐或測(cè)試本發(fā)明時(shí)可使用與本文所述那些相似或等同的方法和材料。本發(fā)明的其它特征、目標(biāo)和優(yōu)點(diǎn)將通過(guò)說(shuō)明書和權(quán)利要求書體現(xiàn)出來(lái)。在說(shuō)明書和所附權(quán)利要求書中，除非上下文另有明確指出，否則單數(shù)形式也包括復(fù)數(shù)。除非另有定義，否則本文使用的技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的相同的含義。本發(fā)明中使用以下定義：本公開中使用的冠詞“一”和“一個(gè)”(“a”和“an”)是指一個(gè)或多于一個(gè)(即，至少一個(gè))的冠詞語(yǔ)法對(duì)象。舉例來(lái)說(shuō)，“一個(gè)元素”是指一個(gè)元素或多于一個(gè)元素。除非另有說(shuō)明，否則在本公開中使用術(shù)語(yǔ)“和/或”表示“和”或者“或”?！暗图?jí)烷基”或“c1-c6烷基”是指包含1-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈飽和烴。低級(jí)烷基基團(tuán)的實(shí)例包括但不限于，甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、異丙基、異丁基、仲丁基、叔丁基、異戊基和新戊基?！癱7-c12烷基”是指包含7-12個(gè)碳原子的直鏈或支鏈飽和烴。術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”是指包含3-6個(gè)碳原子的環(huán)狀烴。環(huán)烷基基團(tuán)的實(shí)例包括但不限于，環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基。應(yīng)當(dāng)理解，低級(jí)烷基、c7-c12烷基或環(huán)烷基上的任意可取代氫可獨(dú)立地被一個(gè)或多個(gè)取代基(例如1個(gè)、2個(gè)或3個(gè)取代基)所取代。取代基的實(shí)例包括但不限于，鹵素、c1-c3烷基、羥基、烷氧基、氧代和氰基。“患者”是哺乳動(dòng)物，例如人、小鼠、大鼠、豚鼠、狗、貓、馬、奶牛、豬或非人靈長(zhǎng)類，例如猴、黑猩猩、狒狒或獼猴，且術(shù)語(yǔ)“患者”和“受試者”在本文中可互換使用。代表性的“藥學(xué)上可接受的鹽”包括例如，水溶性和非水溶性鹽、例如醋酸鹽、氨芪磺酸鹽(4,4-二氨基芪-2,2–二磺酸鹽)、苯磺酸鹽、安息香酸鹽、碳酸氫鹽、硫酸氫鹽、酒石酸氫鹽、硼酸鹽、溴化物、丁酸鹽、鈣鹽、依地酸鈣鹽、樟腦磺酸鹽、碳酸鹽、氯化物、檸檬酸鹽、克拉維酸鹽、二鹽酸鹽、依地酸鹽、乙二磺酸鹽、丙酸酯月桂硫酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡糖酸鹽、谷氨酸鹽、對(duì)羥乙酰氨基苯胂酸鹽、六氟磷酸鹽、己基間苯二酸鹽、海巴鹽、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、羥基萘甲酸鹽、碘化物、異硫代硫酸鹽、乳酸鹽、乳糖醛酸鹽、月桂酸鹽、鎂鹽、蘋果酸鹽、馬來(lái)酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、甲基溴化物、甲基硝酸鹽、甲基硫酸鹽、粘酸鹽、萘磺酸鹽、硝酸鹽、n-甲基葡糖胺鹽、3-羥基-2-萘甲酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽(1,1-亞甲基-雙-2-羥基-3-萘甲酸鹽，einbonate)、泛酸鹽、磷酸鹽/二磷酸鹽、苦味酸鹽、聚半乳糖醛酸鹽、丙酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、次醋酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、磺基水楊酸鹽、蘇拉明酸鹽(suramate)、單寧酸鹽、酒石酸鹽、茶氯酸鹽、甲苯磺酸鹽、三乙基碘和戊酸鹽。羧酸鹽功能的另外的藥學(xué)上可接受的鹽形式包括鋰鹽、鈉鹽和鉀鹽。當(dāng)“治療有效量”與環(huán)肌酸一同使用時(shí)，其是有效治療或預(yù)防環(huán)肌酸調(diào)控的疾病或紊亂的量。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將會(huì)理解，關(guān)于包含一個(gè)或多個(gè)取代基的任何基團(tuán)，此類基團(tuán)無(wú)意引入任何空間上不現(xiàn)實(shí)、合成上不可行和/或內(nèi)在不穩(wěn)定的取代或取代模式。此外，本文呈現(xiàn)的任何公式內(nèi)的取代和/或變量的組合是允許的，只要此類組合得到穩(wěn)定的化合物或有用的合成中間體，其中“穩(wěn)定的”意味著生理?xiàng)l件下合理的藥理相關(guān)性半衰期。方案1如以上方案i中所見(jiàn)，本發(fā)明提供了用于制備肌酸(7)各種環(huán)狀類似物的方法，通過(guò)在適當(dāng)溶劑中縮合二胺或其鹽(6)和氰胺以得到7和氨或其鹽。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，6(x＝h，y＝ch2co2h，n＝1)與氰胺在乙醇中于25-100℃下反應(yīng)以得到7(x＝h，y＝ch2co2h，n＝1)。二胺6可為純化物質(zhì)或者包含約20-95％6的混合物。在一些實(shí)施方式中，可通過(guò)從水或另一適當(dāng)溶劑中結(jié)晶而進(jìn)一步純化產(chǎn)物7以得到化學(xué)純度≥97％的7。7的替代實(shí)施方式可包括下式化合物：或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中r1、r2、r3、r4各自獨(dú)立地可為氫、低級(jí)烷基或環(huán)烷基。因此，在一個(gè)實(shí)施方式中，提供了用于制備式(i)化合物：或其藥學(xué)上可接受的鹽的方法，其包括使式(ii)化合物：與式(iii)化合物：反應(yīng)的步驟，其中：y是ch2co2h、ch2conr1r2或ch2co2r1；r1、r2各自獨(dú)立地是氫、低級(jí)烷基、c7-c12烷基或低級(jí)環(huán)烷基；且n是1、2、3、4或5。在本發(fā)明的另一實(shí)施方式中，提供了用于制備式(i)化合物的方法，其中式(i)化合物括號(hào)內(nèi)的碳任選被r3和r4取代，r3和r4各自獨(dú)立地是氫、低級(jí)烷基或環(huán)烷基。在本發(fā)明的另一實(shí)施方式中，提供了用于制備式(i)化合物的方法，其中n是1。在本發(fā)明的另一實(shí)施方式中，提供了用于制備式(i)化合物的方法，其中式(i)化合物是環(huán)肌酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。在本發(fā)明的另一實(shí)施方式中，提供了用于制備式(i)化合物的方法，其中所述化合物是式(ia)化合物：或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中：y是ch2co2h、ch2conr1r2或ch2co2r1；r1、r2、r3、r4各自獨(dú)立地是氫、低級(jí)烷基、c7-c12烷基或環(huán)烷基。在本發(fā)明的另一實(shí)施方式中，提供了用于制備式(i)化合物的方法，其進(jìn)一步包括使乙二胺與氯乙酸反應(yīng)以生產(chǎn)所述式(ii)化合物的前體步驟。在本發(fā)明的另一實(shí)施方式中，提供了用于制備式(i)化合物的方法，其中所述氰胺的濃度相對(duì)于氯乙酸的摩爾電荷為1-20摩爾當(dāng)量。實(shí)施例通過(guò)以下實(shí)施例進(jìn)一步描述本公開，其并非理解為將本公開的范圍或精神限制至本文描述的具體步驟。應(yīng)當(dāng)理解的是，提供所述實(shí)施例以描述某些實(shí)施方式，并無(wú)意于限制本公開的范圍。應(yīng)當(dāng)進(jìn)一步理解的是，可采用各種其它實(shí)施方式、修飾及其等同物，而本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠在不脫離本公開的精神和/或所附權(quán)利要求的范圍的情況下獲得這些其它的實(shí)施方式、修飾及其等同物。實(shí)施例1在mtbe中制備中間體3在500ml燒瓶中加入乙二胺(62.03g，1032mmol)。伴隨磁力攪拌在22℃下經(jīng)0.5小時(shí)加入氯乙酸(6.502g，68.80mmol)的甲基叔丁基醚(mtbe，30ml)溶液。加入期間內(nèi)部溫度升高至41℃。另外攪拌40分鐘后，加入甲苯(100ml)并通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮混合物；再進(jìn)行該程序兩次并在高真空下進(jìn)一步干燥所得殘留物以得到16.4g粗產(chǎn)物。通過(guò)hplc/ms評(píng)估，產(chǎn)物組成為3(37.3％)以及相應(yīng)的二酸(62.7％)。實(shí)施例2在甲苯中制備中間體3在具有塞子和磁力攪拌子的40ml小瓶中加入乙二胺(9.2g，153.7mmol)。在注射泵中加入氯乙酸(0.968g，10.24mmol)的phme溶液(總體積9.5ml)。將注射泵設(shè)置為以19.0ml/h的速率遞送。在鋁加熱塊中加熱包含乙二胺的小瓶至70℃并在此時(shí)開始加入。加入(～30分鐘)完成后，將小瓶自加熱塊移除并冷卻至室溫。通過(guò)移液管移除上清液并在高真空下蒸發(fā)殘留物。殘留物的hplc/ms分析顯示92.8％單酸3和7.2％二酸。實(shí)施例3由3和氰胺制備環(huán)肌酸將實(shí)施例1中所述的3的粗批次的一部分(5.32g)以h2o(7.6ml)溶液的形式加入到具有攪拌子的100ml圓底燒瓶中。以固體形式加入固體氰胺(1.447g，34.41mmol)并將燒瓶配上回流冷凝器，置于70℃油浴中。攪拌20小時(shí)后，將混合物冷卻至室溫并將固體過(guò)濾，用h2o(2ml)洗滌并在高真空下干燥以得到粗環(huán)肌酸(1.161g，～23.5％產(chǎn)率)。該固體的hplc/ms分析顯示99.3％的環(huán)肌酸、0.7％的單酸3且無(wú)二酸。將粗產(chǎn)物(1.009g)加入小瓶并加入h2o(4.147g)。將混合物加熱至沸騰，但這并未使得固體完全溶解。另外加入h2o(3.643g)并繼續(xù)加熱使其完全溶解(加入7.1ml/g水用于溶解)。加熱3小時(shí)后冷卻混合物并過(guò)濾所得固體，用h2o(2ml)洗滌。真空干燥得到純環(huán)肌酸(0.498g，10.1％產(chǎn)率)。實(shí)施例4經(jīng)由與氰胺反應(yīng)制備環(huán)肌酸在配有機(jī)械攪拌器的250ml燒瓶中加入乙二胺(28.08g，467.3mmol)并將燒瓶加熱至70℃。將氯乙酸(2.944g，31.15mmol)的甲苯(28ml)溶液經(jīng)30分鐘加至反應(yīng)。冷卻混合物至環(huán)境溫度并停止攪拌。移除包含甲苯和乙二胺的上層。將甲苯(15ml)加至反應(yīng)并攪拌混合物。停止攪拌并移除上層。加入甲苯(15ml)并濃縮反應(yīng)混合物。加入異丙醇(30ml)，將混合物冷卻至<0℃并維持3天。濃縮反應(yīng)混合物并加入乙醇(20ml)。過(guò)濾所得漿料并用乙醇洗滌燒瓶和固體。通過(guò)高真空干燥固體以得到3(1.286g，27％)1hnmr(400mhz，d2o)δ3.32(s，2h)，3.07(t，2h，j＝6hz)，2.95(t，2h，j＝6hz)。通過(guò)nmr未檢測(cè)到二酸異構(gòu)體。在具有磁力攪拌子的40ml小瓶中加入化合物3(1.224g，7.918mmol)和水(8.7ml)。加入固體形式的氰胺(0.333g，7.918mmol)。將混合物加熱至70℃并攪拌3.5小時(shí)。lcms分析顯示57％轉(zhuǎn)化。加入更多氰胺(0.266g，6.327mmol)并在70℃下攪拌混合物24小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至0℃并過(guò)濾。用水(1ml)洗滌小瓶和固體。干燥固體以得到環(huán)肌酸2(0.655g，58％產(chǎn)率)。實(shí)施例5[(2-氨乙基)氨基]乙酸(3)的制備和分離在配有磁力攪拌器、塞子和中隔的250ml三頸燒瓶中加入乙二胺(eda，67ml，1003mmol)。在30ml注射器中加入氯乙酸(csa，9.48g，100.3mmol)的dmso溶液(總體積為26ml)。將注射器置于注射泵上，設(shè)置遞送速度3.3ml/小時(shí)(總加入時(shí)間為8小時(shí))。將注射器針頭經(jīng)由中隔插入燒瓶并置于eda液面下。在環(huán)境溫度下進(jìn)行加入。完成加入后在環(huán)境溫度下攪拌反應(yīng)混合物10小時(shí)。將反應(yīng)混合物濃縮(60℃，～10毫巴)至47g。加入甲苯(50ml)并濃縮混合物以共沸eda。加入更多甲苯(50ml)并將混合物濃縮至41g。加入dmso(30ml)，并在冰/水浴中冷卻混合物30分鐘。移除冷卻浴并在環(huán)境溫度下攪拌混合物30分鐘。過(guò)濾混合物。相繼用dmso(50ml)、異丙醇(50ml)和甲基叔丁基醚(50ml)洗滌燒瓶和固體。真空干燥固體以得到白色粉末狀的3(8.74g，62％)。1hnmr(400mhz，d2o)δ3.11(s，2h)，2.90-2.70(m，4h)。ms[m+h]+m/z119.1。實(shí)施例6由分離的3制備環(huán)肌酸2在配有磁力攪拌器、回流冷凝器和塞子的250ml三頸燒瓶中加入3(8.74g，74mmol)和水(10ml)。加入氰胺溶液(4.4ml，50wt％水溶液)并在油浴中加熱混合物至70℃4小時(shí)。停止加熱并在環(huán)境溫度下攪拌該混合物19小時(shí)。在冰/水浴中冷卻混合物并攪拌2小時(shí)。過(guò)濾混合物并用冷水(5ml)洗滌燒瓶和固體。高真空下干燥固體以得到白色粉末狀的2(2.88g，36％)。1hnmr(400mhz，d2o)δ3.78(s，2h)，3.66-3.60(m，2h)，3.57-3.51(m，2h)。ms[m+h]+m/z144.1。實(shí)施例7制備環(huán)狀肌酸類似物((2-亞氨基四氫嘧啶-1(2h)-基)乙酸)將氯乙酸(1當(dāng)量)的dmso溶液經(jīng)8小時(shí)時(shí)間加至丙-1,3–二胺(10當(dāng)量)。通過(guò)真空蒸餾濃縮反應(yīng)混合物并加入dmso。將混合物冷卻至0℃，然后加溫回至環(huán)境溫度。過(guò)濾所得漿料，并相繼用dmso、異丙醇和甲基叔丁基醚洗滌燒瓶和固體。干燥固體并將其溶入水中。加入氰胺(50wt％水溶液，1當(dāng)量)并將混合物加熱至70℃2小時(shí)。將反應(yīng)冷卻至0℃并過(guò)濾所得漿料。用水洗滌燒瓶和固體并干燥以得到8。實(shí)施例8替代實(shí)施方式除了最終純化以外，該合成與生產(chǎn)過(guò)程相似，其中進(jìn)行兩個(gè)額外的純化操作：額外的水性漿料以及從水中重結(jié)晶。在第一步中，將氯乙酸(caa，1)的dmso溶液加至10倍摩爾過(guò)量的乙二胺(eda，2)以得到單酸(3)，其作為游離堿(或兩性離子)被分離。在該縮合中產(chǎn)生一當(dāng)量的hcl。第二步是將氰胺水溶液加至中間體單酸(3)中以在失去氨后獲得環(huán)肌酸(5)。在生產(chǎn)過(guò)程中產(chǎn)物通過(guò)水漿料純化。方案1.制備環(huán)肌酸的參照標(biāo)準(zhǔn)步驟1，運(yùn)行1制備[(2-氨乙基)氨基]乙酸3在1l愛(ài)倫美氏燒瓶中加入caa(1)(500.7g，5.30mol，1.0當(dāng)量，sigma-aldrich)和dmso(520.7g)。通過(guò)間歇性旋動(dòng)燒瓶獲得溶液。在配有氮入口、機(jī)械攪拌器、熱電偶和蠕動(dòng)計(jì)量泵的5l燒瓶中加入eda(2，3182g，52.9mol)。開始冷卻5l燒瓶(冰/水)。經(jīng)由計(jì)量泵開始加入1的dmso溶液。細(xì)節(jié)見(jiàn)表1。表1.加入數(shù)據(jù)過(guò)夜加入后傳輸線中仍殘留一些溶液。將該溶液轉(zhuǎn)移至5l燒瓶。通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)(53至60℃，10至21托)濃縮反應(yīng)混合物以除去eda。收集的餾出物總量為2376g。使用dmso(3010g)作為洗液將殘留物(1800g)轉(zhuǎn)移回5l燒瓶。內(nèi)部溫度為27℃且該混合物變渾濁。開始冷卻5l燒瓶(冰/水)。將混合物攪拌過(guò)夜。通過(guò)濾紙真空過(guò)濾所得懸浮液。過(guò)濾花費(fèi)36分鐘。用dmso(507.6g，501.7g)洗滌燒瓶和固體兩次。用異丙醇(ipa，448.4g，430.1g)洗滌固體兩次。用甲基叔丁基醚(tbme，395.0g，406.3g)洗滌固體兩次。在低真空(housevacuum)下采用氮?dú)饬髟凇?5℃下干燥固體3天?；厥盏?(白色固體)為462.9g(3.92mol，74％)。1hnmr(400mhz，d2o)δ3.13(s，2h)，2.89(表觀t，2h，j＝6hz)，2.76(表觀t，2h，j＝6hz)。步驟1，運(yùn)行2制備[(2-氨乙基)氨基]乙酸3在1l愛(ài)倫美氏燒瓶中加入caa(1)(499.1g，5.28mol，1.0當(dāng)量，sigma-aldrich)和dmso(528.9g)。通過(guò)間歇性旋動(dòng)燒瓶獲得溶液。在配有氮入口、機(jī)械攪拌器、熱電偶和蠕動(dòng)計(jì)量泵的5l燒瓶中加入eda(2，3186g，53.0mol)。開始冷卻5l燒瓶(冰/水)。經(jīng)由計(jì)量泵開始加入1的dmso溶液。細(xì)節(jié)見(jiàn)表2。表2.加入數(shù)據(jù)記錄時(shí)間加入量，g溫度，℃加入速率，g/hr11343014.6na213584012.4160314179210.01644145820811.1170515403269.7169616104049.515670839(第二天)98822.2na過(guò)夜加入后傳輸線中仍殘留一些溶液。將該溶液轉(zhuǎn)移至5l燒瓶。通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)(53至60℃，10至21托)濃縮反應(yīng)混合物以除去eda。使用dmso(3002g)作為洗液將殘留物(2106g)轉(zhuǎn)移回5l燒瓶。內(nèi)部溫度為26℃且該混合物變渾濁。開始冷卻5l燒瓶(冰/水)。將混合物攪拌過(guò)夜。通過(guò)濾紙真空過(guò)濾所得懸浮液。過(guò)濾花費(fèi)22分鐘。用dmso(498g，498g)洗滌燒瓶和固體兩次。用ipa(384g，400g)洗滌固體兩次。用tbme(360g，300g)洗滌固體兩次。在低真空(housevacuum)下采用氮?dú)饬髟凇?0℃下干燥固體22小時(shí)。回收的3(白色固體)為454g(3.84mol，73％)。1hnmr(400mhz，d2o)δ3.13(s，2h)，2.89(表觀t，2h，j＝6hz)，2.76(表觀t，2h，j＝6hz)。步驟2制備(2-亞氨基咪唑啉-1-基)乙酸(5)在配有氮噴霧、回流冷凝器、機(jī)械攪拌器、熱電偶和加熱罩的5l燒瓶中加入化合物3(916g，7.75mol，1.00當(dāng)量)和去離子水(918g)。加熱所得漿料，目標(biāo)溫度為60℃。根據(jù)表3加入氰胺(4，50wt％水溶液，656g，7.80mol，1.01當(dāng)量)。表3.加入數(shù)據(jù)60℃下攪拌反應(yīng)3小時(shí)。lcms分析顯示消耗了3且不存在質(zhì)量為160的中間體。關(guān)掉加熱并允許反應(yīng)伴隨攪拌冷卻過(guò)夜。通過(guò)濾紙真空過(guò)濾混合物。過(guò)濾花費(fèi)1.3小時(shí)。用去離子水(302g)洗滌燒瓶和固體。將濕固體轉(zhuǎn)移至潔凈的5l燒瓶。加入去離子水(917.4g)并在環(huán)境溫度下攪拌稠漿料2小時(shí)。通過(guò)濾紙真空過(guò)濾混合物(過(guò)濾花費(fèi)45分鐘)。用ipa(696.1g)洗滌燒瓶和固體。將濕固體轉(zhuǎn)移至潔凈的5l燒瓶用于第二漿料。加入去離子水(916g)并在環(huán)境溫度下攪拌稠漿料2小時(shí)。通過(guò)濾紙真空過(guò)濾混合物(過(guò)濾花費(fèi)1.3小時(shí))。用ipa(380g)洗滌燒瓶和固體。在濾器上晾干產(chǎn)物1小時(shí)，然后在真空干燥箱(45℃，25hg，2天)中干燥以得到白色固體狀的5(543.9g，3.80mol，49％)。1hnmr(400mhz，d2o)δ3.53(s，2h)，3.62-3.55(m，2h)，3.53-3.46(m，2h)。重結(jié)晶(2-亞氨基咪唑啉-1-基)乙酸(5)在配有回流冷凝器、機(jī)械攪拌器、熱電偶和加熱罩的5l燒瓶中加入兩次重懸的化合物5(141.8g)和去離子水(1414.5g)。加熱所得漿料，目標(biāo)溫度為100℃。當(dāng)溫度達(dá)到99.1℃時(shí)，所有固體看起來(lái)已溶解。通過(guò)濾紙真空過(guò)濾所得熱溶液。約5分鐘后濾液中開始形成固體。經(jīng)23.5小時(shí)將所得懸浮液冷卻至環(huán)境溫度。通過(guò)濾紙真空過(guò)濾懸浮液。用去離子水(104.7g)洗滌燒瓶和固體。在真空干燥箱(～40℃，～27hg)中干燥固體21.2小時(shí)，直至達(dá)到恒定重量?；厥盏?為113.9g(80.3％)。實(shí)施例9制備環(huán)肌酸的替代實(shí)施方式制備[(2-氨乙基)氨基]乙酸3通過(guò)將1(500.0g，5.29mol，1.0當(dāng)量)溶解在dmso(515.6g)中制備氯乙酸(1)的溶液。在配有氮入口、機(jī)械攪拌器、熱電偶和蠕動(dòng)計(jì)量泵的5l燒瓶中加入乙二胺(2，eda，3537ml，52.9mol)。開始冷卻(冰/水)。經(jīng)由計(jì)量泵開始加入1的dmso溶液。加入時(shí)間、溫度和殘留體積見(jiàn)表1。表1記錄時(shí)間溫度，℃1的殘留體積110:5117211:2818312:1816720413:3811625514:3512550615:1710490716:08842088:59(第二天)190通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)(50至60℃，14至21托)濃縮反應(yīng)混合物以除去eda。收集的餾出物總量為2400ml。將甲苯(900ml)加至殘留物并通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)(60℃，30托)濃縮混合物以共沸任何殘留的eda。使用dmso(3kg)作為洗液將殘留物轉(zhuǎn)移回5l燒瓶。內(nèi)部溫度為28℃且該混合物變渾濁。開始冷卻(冰/水)。將混合物攪拌過(guò)夜。通過(guò)濾紙過(guò)濾所得懸浮液。過(guò)濾花費(fèi)25分鐘。用dmso(2x500ml)洗滌燒瓶和固體。用異丙醇(ipa，2x500ml)洗滌固體。用甲基叔丁基醚(tbme，2x500ml)洗滌固體。在高真空和環(huán)境溫度下干燥固體18小時(shí)?；厥盏?(白色固體)為480.4g(59％)。nmr分析顯示92.4mol％3、6.4mol％eda和1.1mol％eda的n,n'-二乙酸。1hnmr(400mhz，d2o)δ3.13(s，2h)，2.89表觀t(2h，j＝6hz)，2.76(表觀t，2h，j＝6hz)。制備(2-亞氨基咪唑啉-1-基)乙酸(5)在配有氮入口、回流冷凝器、機(jī)械攪拌器、熱電偶和加熱罩的5l燒瓶中加入化合物3(478.4g，4.05mol，1.00當(dāng)量)和去離子水(484.5g)。在環(huán)境溫度(22℃)下攪拌所得漿料。一次性加入氰胺(4，50wt％水溶液，340.5g，4.05mol，1.00當(dāng)量)。加入冷溶液使得內(nèi)部溫度降低至15℃。反應(yīng)混合物變?yōu)槿芤?。開始加熱。目標(biāo)溫度為40℃。22分鐘后內(nèi)部溫度升至62℃。停止加熱。表2顯示了放熱和反應(yīng)的進(jìn)展。表2記錄時(shí)間溫度，℃19:281529:506239:5670410:0180510:0884611:4871713:0570lcms分析顯示消耗了3且不存在質(zhì)量為160的中間體。關(guān)掉加熱并在冰/水浴中冷卻反應(yīng)。將混合物攪拌過(guò)夜。通過(guò)濾紙過(guò)濾混合物。過(guò)濾花費(fèi)25分鐘。用去離子水(150ml)洗滌燒瓶和固體。將濕固體轉(zhuǎn)移至配有機(jī)械攪拌器的2l燒瓶。加入去離子水(450ml)并在環(huán)境溫度下攪拌稠漿料3小時(shí)。通過(guò)濾紙過(guò)濾混合物(過(guò)濾花費(fèi)45分鐘)。用ipa(450ml)洗滌燒瓶和固體。在濾器上晾干產(chǎn)物1小時(shí)，然后在真空干燥箱(40℃，25hg，3天)中干燥以得到白色固體狀的5(248.9g，56％)。1hnmr(400mhz，d2o)δ3.53(s，2h)，3.62-3.55(m，2h)，3.53-3.46(m，2h)。***應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明不限于以上所述的本發(fā)明特定實(shí)施方式，因?yàn)榭蛇M(jìn)行特定實(shí)施方式的變化，并仍落入所附權(quán)利要求的范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)12