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允許產(chǎn)生螨的番茄植物的制作方法

文檔序號:11528785閱讀:315來源:國知局
允許產(chǎn)生螨的番茄植物的制造方法與工藝
發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及一種具有異常腺毛表型的番茄(solanumlycopersicum)植物。本發(fā)明還涉及此類植物的種子和后代并且涉及用于獲得此類植物的繁殖材料。此外,本發(fā)明涉及賦予番茄植物異常腺毛表型的植物、種子和繁殖材料的用途。本發(fā)明還涉及用于鑒定異常腺毛表型的序列以及序列的用途。發(fā)明背景番茄種植物(番茄(tomato))屬于茄科(nightshadefamily,也稱為solanaceae)。在該科中,番茄如今被分組為茄屬(solanum),茄屬不僅包括番茄,還包括重要的糧食作物馬鈴薯和茄子。番茄是原產(chǎn)于南美洲的多年生草本開花植物。在茄屬植物中與番茄相關(guān)的其他種是例如醋栗番茄(solanumpimpinellifolium)、智利番茄(solanumchilense)、秘魯番茄(solanumperuvianum)和多毛番茄(solanumhabrochaites)。盡管已知雜交可能相當(dāng)困難,這物種仍被用來獲得在培育番茄植物中有價值的性狀。在最近的歷史中,番茄育種的進步已經(jīng)使得番茄品種具有例如更高的產(chǎn)量、更高的抗病性和增加的保質(zhì)期。包括番茄生產(chǎn)在內(nèi)的商業(yè)蔬菜生產(chǎn)受到許多條件的影響。種植者對于某個品種的選擇是決定因素,并為可能實現(xiàn)的結(jié)果形成遺傳基礎(chǔ)。此外,還存在影響結(jié)果的許多外部因素。培育條件如氣候、土壤和投入物(如化肥)的使用發(fā)揮著重要作用。種植番茄及其它作物的方式多種多樣,其中最常見的是:露天田、溫室和遮蔭棚生產(chǎn)。盡管該種可以在各種氣候條件下生長,但在干燥和溫暖的條件下其生長最為成功。除此之外,害蟲和疾病的存在也會影響其可能達到的總產(chǎn)量??梢愿鶕?jù)植物生長方式的不同以若干方式完成番茄和其它作物生產(chǎn)中的害蟲和疾病的管理。一方面,育種重點在于為植物的性狀組合添加對害蟲和疾病的抗性。某些種的野生近緣種通常形成了這種抗性種質(zhì)的有用來源。或者,可以通過選擇溫度、濕度水平或光強度的方式來修改培育條件以產(chǎn)生對疾病和害蟲的發(fā)展不太有利的設(shè)置。通常,有利于成功生產(chǎn)植物和/或果實的溫度也有利于重要害蟲諸如粉虱。第三,除草劑或殺蟲劑可分別用來根除雜草和害蟲。然而,此類化學(xué)化合物的使用尚在討論中,因為它可能在植物和果實上留下殘余物,當(dāng)所述植物和/或果實被消費時,這些殘留物可能危及消費者的健康。當(dāng)蔬菜在溫室中生長時,種植者可以獲得被稱為生物害蟲防治的第四種害蟲管理可選方案。通過釋放發(fā)揮其捕食、寄生和/或食草能力的活生物體再加上積極的人工管理作用,天敵可用于防治某些害蟲。已知在本領(lǐng)域中各種各樣的昆蟲被商業(yè)飼養(yǎng)用于溫室之中。在這方面其中一個重要的昆蟲家族由廣泛用于生物防治粉虱、蜘蛛螨和薊馬的植綏螨科(phytoseiidae)形成。此外,wo06/057552描述了通過利用捕食性植綏螨斯氏鈍綏螨(amblyseiusswirskii)用于生物害蟲防治的方法。然而,這些螨不能在番茄植物上自我產(chǎn)生,這意味著它們不能生存和繁殖。這使得它們不適于用作有效的生物害蟲防治。因為針對昆蟲、特別是對于粉虱的良好抗性尚未在番茄品種中出現(xiàn),缺乏這樣的生物害蟲防治會給番茄種植者帶來妨礙。如果溫室被粉虱侵染,則一整批植物可能無法用于高產(chǎn)量和高質(zhì)量的蔬菜生產(chǎn),因為這些植物可能受到嚴(yán)重影響。這同樣適用于捕食性植綏螨amblydromaluslimonicus,其也不能在番茄植物上產(chǎn)生。對于捕食性螨智利小植綏螨(phytoseiuluspersimilis)而言,已知它可以用于抗擊番茄上的二斑葉螨(tetranychusurticae(紅蜘蛛螨)),但該捕食性螨僅以葉螨(tetranychus)種為食,因此不能用于抗擊其他種的侵染。對于另一種捕食性螨加州新小綏螨(neoseiuluscalifornicus)而言,在對于葉螨種侵染的防治中顯示出對番茄植物非常低的作用。因此,對于番茄植物,存在允許通過適當(dāng)產(chǎn)生螨(特別是捕食性螨斯氏鈍綏螨和/或amblydromaluslimonicus)來應(yīng)用生物害蟲防治的需要。成功產(chǎn)生后,螨可以發(fā)揮它們預(yù)期的作用:在抗擊粉虱和薊馬的侵染中起到生物害蟲防治的功能。在得到本發(fā)明的研究中,開發(fā)了新的番茄植物,其包含能夠賦予異常腺毛表型的修飾的slmyc2基因,并且允許螨的產(chǎn)生(特別是捕食性螨斯氏鈍綏螨和/或amblydromaluslimonicus)。更詳細(xì)地,可以確定的是捕食性螨會被番茄植物的莖葉中特定類型的毛狀體或腺毛的存在和/或出現(xiàn)和/或在腺毛細(xì)胞中產(chǎn)生的揮發(fā)物所妨礙。番茄和其他作物的各種植物部分的表面都覆蓋有毛狀體,非腺毛狀體和腺毛狀體兩種。非腺毛狀體通常被認(rèn)為是“毛”,并且不產(chǎn)生、儲存或分泌特定的生化化合物。腺毛狀體通常由一個或多個細(xì)胞組成的莖和在形成腺體頭部的莖的尖端處的一個或多個腺細(xì)胞組成。在番茄和相關(guān)茄種中鑒定出四種不同類型的腺毛狀體,即i、iv、vi和vii型。這些類型在莖的尺寸和長度以及形成腺體頭部的分泌細(xì)胞的數(shù)目方面都有所不同。在腺毛狀體中產(chǎn)生了番茄中各式各樣的生化化合物(mcdowell等人,plantphysiologyvol.155,524-539(2011))。由番茄中的各種腺毛狀體產(chǎn)生的生化化合物包括萜烯、萜類、類黃酮、脂肪酸、生物堿類和?;?諸如?;咸烟呛王;崽?。已知這些化合物在吸引和排斥各種昆蟲和確定對某些疾病的易感性方面起重要作用。然而,這些代謝物的作用的許多方面仍不清楚,并且正在進行充分的研究以更精密地確定腺毛狀體和它們分泌的物質(zhì)的功能。因此,本發(fā)明涉及修飾的slmyc2基因,其與seqidno.5的野生型基因組序列相比包含至少一個修飾,所述修飾導(dǎo)致slmyc2蛋白活性的降低或不存在,其中所述修飾的slmyc2基因能夠賦予番茄植物異常腺毛表型。修飾的slmyc2基因在本文中也稱為“本發(fā)明的基因”或“本發(fā)明的修飾的slmyc2基因”。這些術(shù)語在本文中可互換使用。在實施方案中,得到修飾的slmyc2基因的修飾選自,與野生型slmyc2基因相比,降低slmyc2基因的mrna水平的修飾;降低slmyc2蛋白水平的修飾;和/或降低slmyc2蛋白活性的修飾。在進一步的實施方案中,得到修飾的slmyc2基因的修飾導(dǎo)致編碼序列內(nèi)存在提前終止密碼子。在優(yōu)選的實施方案中,得到修飾的slmyc2基因的修飾導(dǎo)致在編碼序列(cds)內(nèi)存在提前終止密碼子,特別是包含作為編碼序列的seqidno.2的1477位置上單核苷酸多態(tài)性(snp)的修飾。cds是基因的由外顯子組成的編碼蛋白質(zhì)的部分。seqidno.2包含從核苷酸g(野生型)到t的snp的存在。該snp與其為相應(yīng)基因組序列的seqidno.1的4124位置上的snp相同。該snp在seqidno.3的氨基酸位置493處產(chǎn)生終止密碼子,而野生型氨基酸序列(seqidno.7)在該位置包含甘氨酸殘基。產(chǎn)生修飾的slmyc2基因的該snp可以在從種子培育的植物中發(fā)現(xiàn),其中種子的代表性樣品以登錄號ncimb42222保藏于ncimb。在另一實施方案中,本發(fā)明的修飾的slmyc2基因涉及在其為野生型cds的seqidno.6中出現(xiàn)的任何snp,其導(dǎo)致在該編碼序列內(nèi)存在提前終止密碼子。這樣的snp被稱為無義突變。任何這樣的snp將因此導(dǎo)致seqidno.6中出現(xiàn)提前終止密碼子。優(yōu)選地,本發(fā)明的修飾的slmyc2基因涉及在seqidno.6的1477位置之前出現(xiàn)的導(dǎo)致編碼序列中存在提前終止密碼子的任何snp。任何這樣的snp將因此導(dǎo)致在seqidno.7的氨基酸493位置之前的提前終止密碼子。snp也可以是編碼不同氨基酸而不是終止密碼子的突變。這種snp稱為錯義突變。本發(fā)明還涉及得到本發(fā)明的修飾的slmyc2基因的錯義突變??赡艿玫奖景l(fā)明的修飾的slmyc2基因的除了snp的修飾之外的在編碼序列中的修飾包括插入和/或缺失。一個或多個核苷酸的插入可能影響適當(dāng)?shù)膍rna剪接或?qū)е麻喿x框的移動。這些事件可能導(dǎo)致slmyc2蛋白水平降低和/或slmyc2蛋白活性水平降低。一個或多個核苷酸的缺失與插入一樣可能會導(dǎo)致閱讀框的移動。該事件可能導(dǎo)致slmyc2蛋白水平降低和/或slmyc2蛋白活性水平降低。本發(fā)明還涉及由seqidno.5表示的slmyc2的非編碼基因組序列中的修飾。非編碼序列中的修飾包括內(nèi)含子序列、上游和/或下游序列中的突變。上游序列(即本發(fā)明基因的起始密碼子之前的序列)包含啟動子和5'-非翻譯區(qū)(5'-utr),也稱為前導(dǎo)序列。由于這些區(qū)域參與mrna基因轉(zhuǎn)錄和隨后翻譯的調(diào)節(jié),因此在基因表達中,合適的修飾可能會通過slmyc2mrna水平和/或slmyc2蛋白水平的降低而導(dǎo)致表達降低。由本發(fā)明的基因引起的異常腺毛表型曾被深入研究。已確定的是針對vi型毛狀體特別觀察了異常腺毛表型,但也可能延伸到其它類型的腺毛。值得注意的是,本發(fā)明的植物上的vi型腺毛的異常腺毛表型以單萜和倍半萜特別是α-蒎烯、月桂烯、蒈烯、α-水芹烯、β-水芹烯、對傘花烴、檸烯、δ-欖香烯、β-石竹烯和/或α-葎草烯的減少以及優(yōu)選不存在為特征,和/或所述異常腺毛表型以變形的腺毛為特征。本發(fā)明的異常腺毛表型還以單萜化合物特別是馬鞭草烯的減少和優(yōu)選不存在為特征。其它揮發(fā)物諸如醛被發(fā)現(xiàn)存在于本發(fā)明的植物異常vi型腺毛中以及非突變體背景植物中(參見實施例5)。在本發(fā)明的植物上發(fā)現(xiàn)的vi型腺毛中,當(dāng)與非突變的vi型腺毛的相同細(xì)胞相比時,莖細(xì)胞以及由四個腺細(xì)胞組成的頭部顯得萎縮、不發(fā)達和/或干燥。這些變形的vi型腺毛似乎也比非突變的vi型腺毛更小。這種尺寸減小可能是萎縮、不發(fā)達和/或干燥特征的直接結(jié)果(參見圖5)。異常腺毛表型不吸引捕食性螨,但它使得并有利于螨在植株上自由地漫游。本文所稱的“捕食性螨”或“螨”屬于植綏螨科。本發(fā)明涉及該完整的科,其包括種斯氏鈍綏螨、amblydromaluslimonicus、智利小植綏螨和加州新小綏螨。因此,本發(fā)明涉及修飾的slmyc2基因,其與seqidno.5的野生型基因組序列相比包含至少一個修飾,所述修飾導(dǎo)致slmyc2蛋白活性的降低或不存在,其中所述修飾的slmyc2基因能夠賦予番茄植物異常腺毛表型,其中所述異常腺毛表型進一步以萜烯特別是α-蒎烯、月桂烯、蒈烯、α-水芹烯、β-水芹烯、對傘花烴、檸烯、δ-欖香烯、β-石竹烯和/或α-葎草烯的減少和優(yōu)選不存在為特征,和/或所述異常腺毛表型以變形的腺毛為特征。異常腺毛表型或本發(fā)明的性狀允許在番茄植物上產(chǎn)生捕食性螨(特別是捕食性螨斯氏鈍綏螨和/或amblydromaluslimonicus)。異常腺毛表型或允許產(chǎn)生捕食性螨(特別是捕食性螨斯氏鈍綏螨和/或amblydromaluslimonicus)的異常腺毛表型也在本文中稱作“性狀”或“本發(fā)明的性狀”。這些術(shù)語在本文中可互換使用。本發(fā)明所述的異常腺毛表型由修飾的slmyc2基因賦予,該slmyc2基因的遺傳與單基因性狀的遺傳一致。優(yōu)選地,所述遺傳與單基因中間體性狀的遺傳一致。在本文中,術(shù)語“中間體”意味著異常腺毛表型在包含純合以及雜合狀態(tài)的修飾的slmyc2基因的植物中是可觀察到的。修飾的slmyc2基因的實例可以在從種子生長的植物中發(fā)現(xiàn),其中所述種子的代表性樣品以登錄號ncimb42222保藏于ncimb。在實施方案中,本發(fā)明涉及包含本發(fā)明的修飾的slmyc2基因的番茄植物。本發(fā)明涉及包含修飾的slmyc2基因的番茄植物,其中所述修飾的slmyc2基因?qū)е庐惓O倜硇?,其允許在所述番茄植物上產(chǎn)生捕食性螨(特別是捕食性螨斯氏鈍綏螨和/或amblydromaluslimonicus)。該植物在本文中也稱為本發(fā)明的植物。在優(yōu)選的實施方案中,本發(fā)明的植物包含純合狀態(tài)的修飾的slmyc2基因。當(dāng)植物包含處于純合狀態(tài)的修飾的slmyc2基因時,本發(fā)明的性狀以萜烯特別是α-蒎烯、月桂烯、蒈烯、α-水芹烯、β-水芹烯、對傘花烴、檸烯和/或δ-欖香烯的減少和優(yōu)選不存在為特征,和/或所述性狀以變形的腺毛為特征。在實施方案中,本發(fā)明的植物包含處于雜合狀態(tài)的修飾的slmyc2基因。當(dāng)植物包含處于雜合狀態(tài)的修飾的slmyc2基因時,本發(fā)明的性狀以萜烯特別是α-蒎烯、月桂烯、蒈烯、α-水芹烯、β-水芹烯、對傘花烴、檸烯、δ-欖香烯、β-石竹烯和/或α-葎草烯的減少為特征,和/或所述性狀以變形的腺毛為特征。在該上下文中,術(shù)語“萜烯的減少”是指當(dāng)與包含野生型純合slmyc2基因的植物相比時,萜烯的水平降低但不是完全不存在。與包含野生型純合slmyc2基因的植物中的萜烯的水平相比較,萜烯的水平以優(yōu)選遞增順序10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%減少。本發(fā)明還涉及番茄植物,其中本發(fā)明的修飾的slmyc2基因與由種子培育的番茄植物的基因組中發(fā)現(xiàn)或可獲得的修飾的slmyc2基因一樣或等同,其中種子的代表性樣品以登錄號ncimb42222保藏于ncimb。一樣或等同是指在由作為本文所述的等位性測試的一部分的雜交產(chǎn)生的f2中沒有觀察到本發(fā)明的性狀分離。一樣或等同還指從番茄的野生近緣種獲得并經(jīng)修飾以賦予相同異常腺毛表型的myc2基因。在這方面,番茄的野生近緣種包括:s.arcanum、s.chmielewskii、s.neorickii、s.cheesmaniae、s.galapagense、s.pimpinellifolium、s.chilense、s.corneliomulleri、s.habrochaites、s.huaylasense、s.sisymbriifolium、s.peruvianum和s.pennellii。本發(fā)明還涉及包含純合或雜合的修飾的slmyc2基因(其為異常腺毛表型起因)的番茄植物,與不攜帶所述修飾的slmyc2基因的番茄植物相比,前者的番茄植物允許在番茄植物上產(chǎn)生螨,特別是捕食性螨斯氏鈍綏螨和/或amblydromaluslimonicus。在一個實施方案中,本發(fā)明提供了表現(xiàn)出本發(fā)明性狀的番茄植物,所述性狀由修飾的slmyc2基因賦予,所述番茄植物可通過如下步驟得到:使包含所述修飾的slmyc2基因的番茄植物(其種子的代表性樣品以登錄號ncimb42222保藏于ncimb)與另一番茄植物雜交產(chǎn)生f1,隨后使f1自交以獲得f2,并選擇本發(fā)明的番茄植物。此外,在得到本發(fā)明的研究中發(fā)現(xiàn),本發(fā)明的修飾的slmyc2基因位于番茄的8號染色體上。更特別地,在保藏物ncimb42222中,本發(fā)明的修飾的slmyc2基因位于番茄的8號染色體上,其基因組序列由seqidno.1表示。本發(fā)明還涉及番茄植物,其包含本發(fā)明的修飾的slmyc2基因,其中所述修飾的slmyc2基因可通過從種子培育的番茄植物的漸滲得到,其中種子的代表性樣品以登錄號ncimb42222保藏于ncimb,并且其中種子保藏號ncimb42222的種子中的所述修飾的slmyc2基因(其基因組序列由seqidno.1表示)位于番茄的8號染色體上。通過由初始雜交和自交步驟后得到的種子培育f2植物,并且選擇表達異常腺毛表型性狀的植物,本發(fā)明的番茄植物可以適當(dāng)?shù)卦诓辉试S捕食性螨產(chǎn)生(特別是斯氏鈍綏螨和/或amblydromaluslimonicus)的番茄植物與攜帶修飾的slmyc2基因(優(yōu)選純合狀態(tài))的植物的雜交后代之中被鑒定出來。也可以通過基于如實施例2中所述的生物測定來確定表型或通過鑒定修飾的slmyc2基因(例如通過與seqidno.5或seqidno.6的比較或使用本文公開的標(biāo)記)來選擇植物。為了確定引起特定表型性狀的遺傳決定子的等價性,可以使用公知的等位性試驗,更具體地稱為互補試驗。為了確定植物是否顯示與本發(fā)明的植物相同的異常腺毛表型,可以進行等位性試驗,其中使對于本發(fā)明的修飾的slmyc2基因是純合的測交植物與對于其遺傳決定子也是純合的待測試的材料雜交。當(dāng)在雜交的f2中不存在異常腺毛表型性狀的分離時,則已證明遺傳決定子是等同或一樣的,并且該植物也因此是本發(fā)明的植物。測交植物適當(dāng)?shù)厥潜2匚飊cimb42222的植物,或者是顯示出允許在所述番茄植物上產(chǎn)生螨(特別是捕食性螨斯氏鈍綏螨和/或amblydromaluslimonicus)的異常腺毛表型的保藏物的后代植物。本發(fā)明的番茄植物可以來自以下的任何一種栽培番茄類型:櫻桃、梅、混合型(cocktail)、束(truss)、牛排、圓形、葡萄等。在另一實施方案中,本發(fā)明涉及包含本發(fā)明的修飾的slmyc2基因的番茄種子。該種子在本文中也稱為本發(fā)明的種子。在進一步的實施方案中,當(dāng)修飾的slmyc2基因處于雜合狀態(tài)(優(yōu)選純合狀態(tài))時,由本發(fā)明的種子培育的植物允許螨的產(chǎn)生(特別是捕食性螨斯氏鈍綏螨和/或amblydromaluslimonicus)。本發(fā)明還涉及包含所述修飾的slmyc2基因的番茄種子,所述種子能夠培育成表現(xiàn)本發(fā)明的性狀的植物。本發(fā)明還涉及本發(fā)明的番茄的后代植物、細(xì)胞、組織和種子,其中所述后代植物、細(xì)胞、組織和種子包含修飾的slmyc2基因。這樣的后代本身可以是植物、細(xì)胞、組織或種子。本文使用的術(shù)語“后代”意指與包含所述修飾的slmyc2基因的本發(fā)明的植物的雜交后得到的第一后代和所有后續(xù)后代。“后代”還包括以純合或雜合狀態(tài)攜帶本發(fā)明的修飾的slmyc2基因的植物和通過營養(yǎng)繁殖或增殖從本發(fā)明的其它植物或植物的后代中獲得的植物。本發(fā)明涉及以純合或雜合狀態(tài)包含本發(fā)明的修飾的slmyc2基因的番茄植物的后代植物。本發(fā)明還涉及本發(fā)明的番茄植物的后代植物,其表現(xiàn)出異常腺毛表型,并且允許在所述后代植物上產(chǎn)生螨(特別是捕食性螨斯氏鈍綏螨和/或amblydromaluslimonicus)。因此,該后代植物包含處于雜合(優(yōu)選純合)狀態(tài)的修飾的slmyc2基因。根據(jù)其另一方面,本發(fā)明涉及能夠發(fā)育成和/或衍生自番茄植物的繁殖材料,其包含處于純合或雜合狀態(tài)的本發(fā)明的修飾的slmyc2基因。該繁殖材料在本文中也稱為本發(fā)明的繁殖材料。在一個實施方案中,這樣的繁殖材料由本發(fā)明的番茄植物的種子形成,其中種子能夠發(fā)育成包含處于純合或雜合狀態(tài)的本發(fā)明的修飾的slmyc2基因的植物。在進一步的實施方案中,本發(fā)明的繁殖材料選自由小孢子、花粉、子房、胚珠、胚、胚囊、卵細(xì)胞、插條、根、根尖、下胚軸、子葉、莖、葉、花、花藥、種子、分生組織細(xì)胞、原生質(zhì)體和細(xì)胞組成的組。在另外的實施方案中,本發(fā)明涉及本發(fā)明的繁殖材料的組織培養(yǎng)物。在另一實施方案中,由繁殖材料發(fā)育成的植物包含在從種子培育的番茄植物中發(fā)現(xiàn)的修飾的slmyc2基因,其中種子的代表性種子以登錄號ncimb42222保藏于ncimb。本發(fā)明還涉及包含本發(fā)明的修飾的slmyc2基因的番茄植物的收獲部分。此外,本發(fā)明涉及包含一種或多種包含本發(fā)明的修飾的slmyc2基因的番茄植物的收獲部分的食品。收獲部分或食品可以是或者包含番茄植物的果實。包含本發(fā)明番茄植物的果實或其部分的優(yōu)選食品是沙拉,其中所述果實可任選地與例如萵苣、菠菜、苦苣、菊苣、甜菜、瑞士甜菜等的葉進行混合。食品或收獲的部分可能已經(jīng)歷了一個或多個加工步驟。這樣的加工步驟可包括但不限于以下處理中的任一種或其組合:切割、洗滌、烹調(diào)、蒸煮、烘焙、油炸、巴氏滅菌、冷凍、研磨、提取油、酸洗或發(fā)酵。所獲得的加工形式也是本發(fā)明的一部分。本發(fā)明的另一方面涉及本發(fā)明的修飾的slmyc2基因用于開發(fā)番茄植物的用途,在所述番茄植物上可以產(chǎn)生捕食性螨,特別是斯氏鈍綏螨和/或amblydromaluslimonicus。在實施方案中,本發(fā)明涉及本發(fā)明的修飾的slmyc2基因用于開發(fā)番茄植物的用途,在所述番茄植物上可以產(chǎn)生捕食性螨,特別是斯氏鈍綏螨和/或amblydromaluslimonicus,其中所述螨的產(chǎn)生是由異常腺毛表型允許的。在另一實施方案中,本發(fā)明涉及本發(fā)明的修飾的slmyc2基因用于開發(fā)番茄植物的用途,其中本發(fā)明的修飾的slmyc2基因能夠賦予所述番茄植物異常腺毛表型,其中所述異常腺毛表型以萜烯特別是α-蒎烯、月桂烯、蒈烯、α-水芹烯、β-水芹烯、對傘花烴、檸烯、δ-欖香烯、β-石竹烯和/或α-葎草烯的不存在為特征,和/或所述異常腺毛表型以變形的腺毛為特征。在另一實施方案中,本發(fā)明涉及本發(fā)明的植物與捕食性螨斯氏鈍綏螨組合來防治植物害蟲(特別是番茄刺皮癭螨(aculopslycopersici)、煙粉虱(bemisiatabaci)和/或西花薊馬(frankliniellaoccidentalis))的用途。在另一實施方案中,本發(fā)明涉及本發(fā)明的植物與amblydromaluslimonicus組合來防治植物害蟲(特別是番茄刺皮癭螨、煙粉虱和/或西花薊馬)的用途。在另一實施方案中,本發(fā)明涉及本發(fā)明的植物與捕食性螨斯氏鈍綏螨和amblydromaluslimonicus組合來防治植物害蟲(特別是番茄刺皮癭螨、煙粉虱和/或西花薊馬)的用途。在另一實施方案中,本發(fā)明涉及本發(fā)明的植物與捕食性螨智利小植綏螨組合來防治植物害蟲(特別是二斑葉螨)的用途。在另一實施方案中,本發(fā)明涉及本發(fā)明的植物與捕食性螨加州新小綏螨組合來防治植物害蟲(特別是二斑葉螨)的用途。在另一實施方案中,本發(fā)明涉及本發(fā)明的植物與捕食性螨智利小植綏螨和加州新小綏螨組合來防治植物害蟲(特別是二斑葉螨)的使用。本發(fā)明的性狀可以通過例如使用合適的標(biāo)記來鑒定。技術(shù)人員知道如何使用已知的基因、標(biāo)記、qtl、等位基因或與某種性狀相關(guān)的其它dna分子及其序列開發(fā)與性狀連鎖的新標(biāo)記。本文使用的術(shù)語“遺傳決定子”包括一個或多個qtl、基因或等位基因。這些術(shù)語可互換使用。遺傳決定子可以通過遺傳圖譜上的位置或通過連鎖群上位置或染色體上位置的指示來鑒定。當(dāng)遺傳決定子不再與特定分子標(biāo)記物連鎖時,但遺傳圖譜上定義的其在染色體上的位置未改變,該遺傳決定子仍與當(dāng)其與分子標(biāo)記物連鎖時相同。因此它賦予的性狀也仍相同。本發(fā)明進一步涉及本發(fā)明的番茄植物的細(xì)胞,所述細(xì)胞包含本發(fā)明的修飾的slmyc2基因。因此,所述細(xì)胞包含編碼所述異常腺毛表型的遺傳信息,特別是與編碼所述異常腺毛表型的遺傳信息基本相同(優(yōu)選完全相同)的遺傳信息,其中所述遺傳信息是與野生型序列seqidno.5相比包含至少一個修飾的修飾的slmyc2基因。優(yōu)選地,本發(fā)明的細(xì)胞是植物或植物部分的一部分,但該細(xì)胞也可以是分離的形式。本發(fā)明還涉及番茄植物的細(xì)胞,所述細(xì)胞包含本發(fā)明的修飾的slmyc2基因,并且所述植物通過將本發(fā)明的性狀轉(zhuǎn)移到農(nóng)學(xué)上有價值的番茄植物中獲得或可以獲得。本發(fā)明的性狀是由在種子中發(fā)現(xiàn)的本發(fā)明的修飾的slmyc2基因所引起的,其中種子的代表性樣品以登錄號ncimb42222保藏于ncimb。本發(fā)明還涉及包含本發(fā)明的修飾的slmyc2基因的番茄植物的種子用于將修飾的slmyc2基因轉(zhuǎn)移到另一種農(nóng)學(xué)上有價值的番茄植物中的用途。本發(fā)明還涉及其中種子的代表性樣品以登錄號ncimb42222保藏于ncimb的種子用于將本發(fā)明的修飾的slmyc2基因轉(zhuǎn)移到另一種農(nóng)學(xué)上有價值的番茄植物中的用途。本發(fā)明還涉及本發(fā)明的番茄植物用于培養(yǎng)和保存捕食性螨或來自其的集落的用途,目的是防治害蟲。本發(fā)明還涉及包含本發(fā)明的修飾的slmyc2基因的番茄植物作為農(nóng)作物的用途。本發(fā)明還涉及包含本發(fā)明的修飾的slmyc2基因的番茄植物作為種子來源的用途。本發(fā)明還涉及包含本發(fā)明的修飾的slmyc2基因的番茄植物作為繁殖材料來源的用途。本發(fā)明還涉及包含修飾的slmyc2基因的番茄植物用于消費的用途。在除番茄之外的植物種中,slmyc2的同源物可能影響腺毛表型。因此,本發(fā)明還涉及能夠賦予植物異常腺毛表型的修飾的myc2基因,所述修飾導(dǎo)致myc2蛋白活性降低或不存在,并且其中所述修飾選自,與未修飾的野生型myc2基因相比,降低myc2基因的mrna水平的修飾;降低myc2蛋白水平的修飾;和/或降低myc2蛋白活性的修飾。本發(fā)明還涉及導(dǎo)致植物中萜烯減少和/或不存在的修飾的myc2基因。修飾的myc2基因可以雜合或純合狀態(tài)存在??梢匀绫疚闹兴龅呐cslmyc2基因一樣或等同的方式修飾myc2基因。由修飾的myc2基因賦予的異常腺毛表型以萜烯特別是α-蒎烯、月桂烯、蒈烯、α-水芹烯、β-水芹烯、對傘花烴、檸烯、δ-欖香烯、β-石竹烯和/或α-葎草烯的不存在和/或減少為特征,和/或所述異常腺毛表型以變形的腺毛為特征。在這方面,萜烯的不存在是指通過目前可用的測量技術(shù)不可檢測的萜烯的水平,和/或至少以優(yōu)選遞增順序為95%、96%、97%、98%、99%或100%低于純合包含野生型myc2基因的植物中的萜烯的水平。術(shù)語“萜烯的減少”在該上下文中是指當(dāng)與包含野生型純合myc2基因的植物相比時,萜烯的水平降低但不是完全不存在。與純合包含野生型myc2基因的植物中的萜烯的水平相比較,萜烯的水平分別以優(yōu)選遞增順序10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%減少。在實施方案中,包含修飾的myc2基因的本發(fā)明的植物表現(xiàn)出本發(fā)明的異常腺毛表型,其允許在所述植物上產(chǎn)生捕食性螨,特別是斯氏鈍綏螨和/或amblydromaluslimonicus。在優(yōu)選的實施方案中,本發(fā)明的植物包含純合狀態(tài)的修飾的myc2基因。當(dāng)植物包含處于純合狀態(tài)的修飾的myc2基因時,允許在所述植物上產(chǎn)生捕食性螨(特別是斯氏鈍綏螨和/或amblydromaluslimonicus)的異常腺毛表型以萜烯特別是α-蒎烯、月桂烯、蒈烯、α-水芹烯、β-水芹烯、對傘花烴、檸烯、δ-欖香烯、β-石竹烯和/或α-葎草烯的不存在和/或減少為特征,和/或所述異常腺毛表型以變形的腺毛為特征。在實施方案中,本發(fā)明的植物包含處于雜合狀態(tài)的修飾的myc2基因。當(dāng)植物包含處于雜合狀態(tài)的修飾的myc2基因時,允許在所述植物上產(chǎn)生捕食性螨(特別是斯氏鈍綏螨和/或amblydromaluslimonicus)的異常腺毛表型以萜烯特別是α-蒎烯、月桂烯、蒈烯、α-水芹烯、β-水芹烯、對傘花烴、檸烯、δ-欖香烯、β-石竹烯和/或α-葎草烯的減少為特征。術(shù)語“萜烯的減少”如上定義。本發(fā)明進一步涉及此類修飾的myc2基因用于開發(fā)包含降低水平的萜烯的植物或顯示不存在萜烯的植物的用途。本發(fā)明進一步涉及此類修飾的myc2基因在開發(fā)表現(xiàn)出異常腺毛表型的植物中的用途,其中所述異常腺毛表型是由與未修飾的野生型myc2蛋白活性相比myc2蛋白活性的降低或不存在所引起的。可以使用修飾的myc2基因的一種方式是通過減少其表達。減少的表達可以通過,與未修飾的野生型myc2基因的mrna水平、蛋白水平或蛋白活性相比,myc2基因的mrna水平的降低、myc2蛋白水平的降低和/或myc2蛋白活性降低來實現(xiàn)。本發(fā)明的修飾的myc2基因可用于賦予植物異常腺毛表型,其中所述植物選自甜椒(capsicumannuum)、甜瓜(cucumismelo)、黃瓜(cucumissativus)和西瓜(citrulluslanatus)中的任何種。此外,修飾的myc2基因可用于減少或消除那些植物種中的萜烯。甜椒的myc2的野生型基因組序列、野生型cds和野生型氨基酸序列分別描述為seqidno.9、10和11。黃瓜的myc2的野生型基因組序列、野生型cds和野生型氨基酸序列分別描述為seqidno.12、13和14。甜瓜的myc2的野生型基因組序列、野生型cds和野生型氨基酸序列分別描述為seqidno.15、16和17。西瓜的myc2的野生型基因組序列、野生型cds和野生型氨基酸序列分別描述為seqidno.18、19和20。slmyc2和myc2基因都可以通過誘變進行修飾。誘變包括通過一種或多種化學(xué)化合物,諸如甲磺酸乙酯、亞硝基甲脲、羥胺、原黃素、n-甲基-n-亞硝基胍、n-乙基-n-亞硝基脲、n-甲基-n-硝基-亞硝基胍、硫酸二乙酯、乙烯亞胺、疊氮化鈉、福爾馬林、氨基甲酸乙酯、苯酚和環(huán)氧乙烷;和/或通過物理方法,諸如uv-輻照、快中子曝露、x-射線、γ輻照;和/或通過插入遺傳元件,諸如轉(zhuǎn)座子、t-dna、逆轉(zhuǎn)錄病毒元件的方法隨機引入至少一種修飾。誘變還包括通過同源重組、基于寡核苷酸的突變誘導(dǎo)、鋅指核酸酶(zfn)、轉(zhuǎn)錄激活子樣效應(yīng)物核酸酶(talen)或成簇規(guī)律間隔短回文重復(fù)(crispr)系統(tǒng)更特異性地、靶向引入至少一種修飾?;蛘撸梢允褂眠z傳修飾將本發(fā)明的修飾的slmyc2或myc2基因?qū)胫参镏?。遺傳修飾包括使用來自不可雜交種或合成基因的基因的轉(zhuǎn)基因修飾(transgenicmodification)或轉(zhuǎn)基因作用(transgenesis),以及使用來自作物本身或來自性兼容的供體植物的(編碼(農(nóng)業(yè))性狀的)天然基因的同源轉(zhuǎn)基因修飾(cisgenicmodification)或同源轉(zhuǎn)基因作用(cisgenesis)。在一個實施方案中,修飾的slmyc2或myc2基因是外源slmyc2或myc2基因,其可通過轉(zhuǎn)基因方法或同源轉(zhuǎn)基因方法引入植物中。本發(fā)明還涉及修飾的重組slmyc2或myc2基因,其中所述修飾的重組slmyc2或myc2基因的表達由強啟動子驅(qū)動,所述啟動子與slmyc2或myc2基因序列可操作地連接,所述基因序列包括5'-utr、cds和/或3'-utr。強組成型啟動子的許多實例是本領(lǐng)域已知的,其中一些最常用是例如花椰菜花葉病毒35s-啟動子(pcamv35s)及其修飾形式、來自各種植物種的泛素啟動子、來自各種植物種的肌動蛋白啟動子和延伸因子1α(elf1α)的啟動子。在一個實施方案中,本發(fā)明涉及基因構(gòu)建體,所述基因構(gòu)建體包含可選擇標(biāo)記、啟動子序列、slmyc2或myc2基因序列和終止子序列。在一個方面,本發(fā)明涉及用于產(chǎn)生番茄植物的方法,所述植物包含能夠賦予異常腺毛表型的允許產(chǎn)生螨(特別是捕食性螨斯氏鈍綏螨和/或amblydromaluslimonicus)的修飾的slmyc2基因,該方法包括:a)使包含所述修飾的slmyc2基因的植物與另一植物雜交;b)自交所得f1植物以獲得f2植物;c)在f2中選擇表現(xiàn)出異常腺毛表型和/或包含修飾的slmyc2基因的植物;d)任選地額外進行一輪或多輪自交或雜交,并且隨后選擇包含本發(fā)明的性狀或修飾的基因的植物。在本申請上下文中,詞語“性狀”指植物的表型。特別地,詞語“性狀”是指本發(fā)明的性狀,更特別是指作為修飾的slmyc2基因存在的結(jié)果的允許產(chǎn)生螨(特別是捕食性螨斯氏鈍綏螨和/或amblydromaluslimonicus)的異常腺毛表型。術(shù)語“遺傳決定子”用于賦予本發(fā)明的性狀的植物基因組中的遺傳信息,遺傳信息是修飾的slmyc2基因。當(dāng)植物表現(xiàn)本發(fā)明的性狀時,其基因組包含賦予本發(fā)明的性狀的遺傳決定子。因此,該植物具有本發(fā)明的遺傳決定子。根據(jù)本發(fā)明,遺傳決定子包含修飾的slmyc2基因。顯然,提供本發(fā)明的性狀的親本植物不一定是直接從保藏的種子培育而來的植物。親本植物還可以來自通過其它方式鑒定為包含本發(fā)明的性狀的種子的后代植物。在一個方面,本發(fā)明涉及用于產(chǎn)生番茄植物的方法,所述植物包含能夠賦予異常表型腺毛的允許產(chǎn)生螨(特別是捕食性螨斯氏鈍綏螨和/或amblydromaluslimonicus)的修飾的slmyc2基因,該方法包括:a)使包含所述修飾的slmyc2基因的植物與另一植物雜交;b)任選地使得到的f1植物與優(yōu)選的親本植物回交;c)在f2中選擇表現(xiàn)出異常表型腺毛和/或包含修飾的slmyc2基因的植物;d)任選地額外進行一輪或多輪自交或雜交,并且隨后選擇表現(xiàn)出異常腺毛表型的植物作為包含修飾的slmyc2基因的植物。本發(fā)明另外提供了將另一所需性狀引入番茄植物中的方法,所述植物包含能夠賦予異常腺毛表型的允許產(chǎn)生螨(特別是捕食性螨斯氏鈍綏螨和/或amblydromaluslimonicus)的修飾的slmyc2基因,該方法包括:a)使包含修飾的slmyc2基因的番茄植物(其代表性種子以保藏號ncimb4222保藏)與展示所需性狀的第二番茄植物雜交以產(chǎn)生f1后代;b)選擇表現(xiàn)所述異常腺毛表型和/或包含修飾的slmyc2基因和所需性狀的f1后代;c)使選擇的f1后代與任一親本植物雜交,以產(chǎn)生回交后代;d)選擇表現(xiàn)出所需性狀和異常腺毛表型和/或包含修飾的slmyc2基因的回交后代;以及e)任選地連續(xù)重復(fù)步驟c)和d)一次或多次以產(chǎn)生表現(xiàn)出所需性狀和異常腺毛表型的所選第四或更高回交后代。本發(fā)明包括通過該方法產(chǎn)生的番茄植物。在一個實施方案中,優(yōu)選通過使用seqidno.1或2在f1或任何其他代中進行表現(xiàn)出本發(fā)明的異常腺毛表型的植物的選擇。在另一方面,本發(fā)明的性狀的選擇開始于雜交或備選地回交的f2。f2中植物的選擇可以通過表型以及通過使用直接或間接檢測性狀內(nèi)在遺傳決定子的所述序列進行。在一個實施方案中,對表現(xiàn)出異常腺毛表型的植物的選擇開始于f3或更晚的代。在一個實施方案中,包含遺傳決定子的植物是近交系、雜種、雙單倍體或分離群體的植物。本發(fā)明還提供了通過使用雙單倍體產(chǎn)生技術(shù)以產(chǎn)生包含修飾的slmyc2基因的雙單倍體系來產(chǎn)生包含本發(fā)明的修飾的slmyc2基因的番茄植物的方法。本發(fā)明還涉及可以培育成包含本發(fā)明的修飾的slmyc2基因的番茄植物的雜交種子,以及用于生產(chǎn)此類雜交種子的方法,該方法包括使第一親本植物與第二親本植物雜交并收獲所得雜交種子,其中所述第一親本植物和/或所述第二親本植物是本發(fā)明的植物。在一個實施方案中,本發(fā)明涉及用于產(chǎn)生包含本發(fā)明的修飾的slmyc2基因的雜交番茄植物的方法,該方法包括使包含本發(fā)明的修飾的slmyc2基因的第一親本番茄植物與第二親本番茄植物雜交并收獲所得的雜交種子,并將所述雜交種子培育成雜交植物。本發(fā)明還涉及通過使用包含用于培育所述番茄植物的本發(fā)明的修飾的slmyc2基因的種子來生產(chǎn)番茄植物的方法,所述植物包含能夠賦予允許產(chǎn)生螨(特別是捕食性螨斯氏鈍綏螨和/或amblydromaluslimonicus)的異常腺毛表型的修飾的slmyc2基因。種子是合適的種子,其中種子的代表性樣品以登錄號ncimb42222保藏于ncimb。本發(fā)明還涉及用于獲得表現(xiàn)出允許產(chǎn)生螨(特別是捕食性螨斯氏鈍綏螨和/或amblydromaluslimonicus)的異常腺毛表型的番茄植物的方法,該方法包括通過植物的slmyc2基因的突變來降低植物中slmyc2蛋白的內(nèi)源水平。本發(fā)明還涉及用于種子生產(chǎn)的方法,該方法包括將其代表性樣品以登錄號ncimb42222保藏于ncimb的種子培育成番茄植物,允許植物產(chǎn)生種子并收獲那些種子。種子的產(chǎn)生適當(dāng)?shù)赝ㄟ^雜交或自交來進行。在一個實施方案中,本發(fā)明涉及通過使用組織培養(yǎng)物產(chǎn)生包含本發(fā)明的修飾的slmyc2基因的番茄植物的方法。本發(fā)明還涉及通過使用營養(yǎng)繁殖產(chǎn)生包含本發(fā)明的修飾的slmyc2基因的番茄植物的方法。在一個實施方案中,本發(fā)明涉及通過使用遺傳修飾以將所述修飾的slmyc2基因漸滲入番茄植物中來生產(chǎn)包含本發(fā)明的修飾的slmyc2基因的番茄植物的方法。遺傳修飾包括使用來自不可雜交種或合成基因的基因的轉(zhuǎn)基因修飾或轉(zhuǎn)基因作用,以及使用來自作物本身或來自性兼容的供體植物的(編碼(農(nóng)業(yè))性狀的)天然基因的同源轉(zhuǎn)基因修飾或同源轉(zhuǎn)基因作用。本發(fā)明還涉及用于開發(fā)包含本發(fā)明的修飾的slmyc2基因的番茄植物的育種方法,其中使用了包含本發(fā)明的所述修飾的slmyc2基因的種質(zhì)。包含本發(fā)明的修飾的slmyc2基因并且是代表種質(zhì)的所述植物的代表性種子以保藏號ncimb42222保藏于ncimb。在進一步的實施方案中,本發(fā)明涉及用于產(chǎn)生包含本發(fā)明的修飾的slmyc2基因的番茄植物的方法,其中包含賦予本發(fā)明的性狀的修飾的slmyc2基因的植物的后代或繁殖材料被用作來源,以將所述性狀基因漸滲入另一種番茄植物中。包含本發(fā)明的修飾的slmyc2基因的植物的代表性種子以保藏號ncimb42222保藏于ncimb。本發(fā)明優(yōu)選提供包含能夠賦予允許產(chǎn)生螨(特別是捕食性螨斯氏鈍綏螨和/或amblydromaluslimonicus)的異常腺毛表型的修飾的slmyc2基因的番茄植物,該植物可通過任何本文所述的和/或技術(shù)人員熟悉的方法所得到。由本發(fā)明的修飾的slmyc2基因賦予的異常腺毛表型使得能夠在植物上產(chǎn)生捕食性螨(其通常不產(chǎn)生在具有非異常腺毛表型的番茄植物上),并且通過這些螨來允許生物害蟲防治。保藏包含本發(fā)明的修飾的slmyc2基因(其能夠賦予異常腺毛表型,其允許產(chǎn)生螨,特別是捕食性螨斯氏鈍綏螨和/或amblydromaluslimonicus)的代表性種子以登錄號ncimb42222于2014年2月24日保藏于英國國家工業(yè)、食品和海洋微生物保藏中心ncimbltd.(fergusonbuilding,craibstoneestate,bucksburn,aberdeen,ab219ya)。保藏的所有種子均純合包含修飾的slmyc2基因。由這些種子培育的植物因此允許產(chǎn)生螨,特別是捕食性螨斯氏鈍綏螨和/或amblydromaluslimonicus。保藏的種子不滿足獲得植物品種保護所需的dus標(biāo)準(zhǔn),因此不能被認(rèn)為是植物品種。本發(fā)明將在下列實施例中闡明。這些實施例僅用于說明性目的,而不應(yīng)被解釋為以任何方式限制本發(fā)明。附圖圖1:本發(fā)明的修飾的slmyc2基因的序列。seqidno.1描述了基因組dna序列。在seqidno.1中,起始密碼子的第一個堿基對(bp)位于位置2648處。終止密碼子的最后一個堿基對位于seqidno.1的位置4540處。seqidno.2反映了編碼序列(cds)。seqidno.3描述了蛋白質(zhì)序列。seqidno.4描述了基因內(nèi)標(biāo)記物sl06992的突變序列。圖2:野生型slmyc2基因的序列。seqidno.5描述了基因組dna序列。在seqidno.5中,起始密碼子的第一個堿基對(bp)位于位置2648處。終止密碼子的最后一個堿基對位于seqidno.5的位置4540處。seqidno.6反映了編碼序列(cds)。seqidno.7描述了蛋白質(zhì)序列。seqidno.8描述了基因內(nèi)標(biāo)記物sl06992的野生型序列。圖3:幾個番茄品種和甜椒對照的每周每片葉上的斯氏鈍綏螨的平均密度(數(shù)目±se)。圖4a:顯示包含純合突變(mo14/001-006)的植物和包含雜合突變(mo14/007-012)的植物以及野生型植物(mo14/013-018)以任意單位(a.u.)的選定的揮發(fā)物的水平的表格。醛:順式-3-己烯醛單萜烯:α-蒎烯、月桂烯、蒈烯、α-和β-水芹烯、對傘花烴、檸烯。倍半萜:δ-欖香烯、β-石竹烯、α-葎草烯。單萜類:馬鞭草烯。已針對檸烯校正也稱為α-石竹烯圖4b:顯示包含雜合突變(mo14/007-012)的植物和野生型植物(mo14/013-018)以任意單位(a.u.)測量的選定的揮發(fā)物的平均水平的表格;p值用學(xué)生t檢驗計算,并且顯示雜合和野生型植物之間的差異是否顯著(p<0.05)。圖5:腺毛表型的圖片。在圖5a中,用圓圈表示在本發(fā)明的番茄植物上發(fā)現(xiàn)的vi型毛狀體。在圖5b中,用圓圈表示在非突變體背景番茄植物上發(fā)現(xiàn)的vi型毛狀體。圖6:其他植物種的myc2氨基酸序列。seqidno.9至11分別描繪了甜椒的基因組dna序列、編碼dna序列和氨基酸序列。在seqidno.9中,起始密碼子的第一個堿基對(bp)位于位置2387處。終止密碼子的最后一個堿基對位于seqidno.9的位置4459處。seqidno.12至14分別描繪了黃瓜的基因組dna序列、編碼dna序列和氨基酸序列。在seqidno.12中,起始密碼子的第一個堿基對(bp)位于位置1578處。終止密碼子的最后一個堿基對位于seqidno.12的位置3563處。seqidno.15至17分別描繪了甜瓜的基因組dna序列、編碼dna序列和氨基酸序列。在seqidno.15中,起始密碼子的第一個堿基對(bp)位于位置2515處。終止密碼子的最后一個堿基對位于seqidno.15的位置4503處。seqidno.18至20分別描繪了西瓜的基因組dna序列、編碼dna序列和氨基酸序列。在seqidno.18中,起始密碼子的第一個堿基對(bp)位于位置2408處,終止密碼子的最后一個堿基對位于seqidno.18的位置4378處。圖7:萜烯合酶基因在本發(fā)明的純合和雜合植物和非突變體背景植物中的表達。圖8:包含修飾的slmyc2基因的植物(突變體)和razymo植物上每周每小葉各自的番茄刺皮癭螨的平均密度(數(shù)目±se)。評估恰好在斯氏鈍綏螨釋放(第0周)之前開始,其在番茄刺皮癭螨之后4周釋放。具有相同字母的圖例沒有顯著不同(glmm,p>0.05)。圖9:實驗過程中包含修飾的slmyc2基因的植物的每片葉片的煙粉虱若蟲的平均密度(數(shù)目±se)。具有相同字母的圖例沒有顯著不同(glmm,p>0.05)。圖10a:夏季實驗期間包含修飾的slmyc2的植物的每片葉片的西花薊馬的平均密度(數(shù)目±se)。具有相同字母的圖例沒有顯著不同(glmm,p>0.05)。圖10b:冬季實驗期間包含修飾的slmyc2的植物的每片葉片的西花薊馬的平均密度(數(shù)目±se)。具有相同字母的圖例沒有顯著不同(glmm,p>0.05)。實施例實施例1本發(fā)明的番茄植物的產(chǎn)生用ems(甲基磺酸乙酯)通過將大約10,000個種子在室溫下浸入0.5%(w/v)ems的充氣溶液中24小時來處理兩株番茄育種系(tr306和t029)的種子。在溫室中使處理的種子萌發(fā)并培育所得植物以產(chǎn)生m2種子。成熟后,收獲m2種子并將其混合在一個庫中。將得到的m2種子庫用作起始材料以鑒定顯示異常腺毛表型的個體m2植株。遺傳修飾過程的效力通過確定變淡(bleached)植物的出現(xiàn)來評估,其指示由于直接或間接參與葉綠素形成或積累的基因的修飾所造成的葉綠素?fù)p失。vi型毛狀體表型如圖5所描述。實施例2允許產(chǎn)生捕食性螨斯氏鈍綏螨的番茄植物的鑒定將兩株育種系(tr306和t029)、市售的雜種和來自實施例1所述實驗的三種突變體用于生物測定,以研究捕食性螨斯氏鈍綏螨是否能夠在這些番茄植物上產(chǎn)生。作為陽性對照,在該實驗中也包括甜椒品種compasrz。在表1中,給出了所述系和品種的概述。生物測定發(fā)生在西班牙地中海生長條件下的多通道溫室中。該溫室被分成4個隔室,其中之一被分成40個5×3.5×4米(l×w×h)的步入式籠,其中5個被實驗期間使用。在具有七個植物種的五個同樣的植株(replicate)的完全隨機區(qū)塊設(shè)計中比較處理的情況,所述七個植物種為六個番茄品種(5個選擇的+1個市售的[陰性對照])和1個甜椒(陽性對照)。每個同樣的植株由每個系或品種的兩個盆栽植株組成,兩個盆栽植株被使用盆上的粘性帶和頂部螺紋用于訓(xùn)練植株以避免捕食性螨在相鄰?fù)瑯拥闹仓曛g移動而分開。在每個區(qū)塊(籠)中分配每個植物種的一個同樣的植株。這些植物的種子在2012年7月底播種,并且作為每個測試系/品種的一式兩份的重復(fù)(duplicate)放入總共6個籠中。通過以100只捕食性螨/植株的比例將包含螨的承載材料噴灑在所有植株上,將捕食性螨斯氏鈍綏螨釋放到6周齡植株上。每克承載材料上的螨數(shù)量用于估計釋放量。捕食性螨最初通過自由添加花粉給飼,并且在捕食性螨釋放后開始添加,并且此后每周持續(xù)進行3周。在捕食性螨釋放后1周開始,以每兩周一次對植物采樣6周。在每次采樣中,在每個實驗籠中隨機選擇5株植株,并從這5株隨機選擇的植株中的每株采樣5片葉。葉沿植株隨機進行選擇。在每片葉上,對植綏螨的未成熟階段(幼蟲、第一若螨和第二若螨)和成蟲進行計數(shù)。結(jié)果顯示在圖3中。變得清楚的是,包含本發(fā)明的修飾的slmyc2基因的系#6顯示了最大數(shù)量的螨的產(chǎn)生。它顯著多于在甜椒對照植物的葉上發(fā)現(xiàn)的數(shù)量。表1編號描述登錄號系#1雜種mecano系#2育種系tr306系#3ems突變體302系#4ems突變體304系#5育種系t029系#6ems突變體305甜椒甜椒compasrz實施例3qtl定位將包含本發(fā)明的修飾的slmyc2基因的番茄突變體與親本系tr306雜交。從該雜交產(chǎn)生f2定位群體,其用于群體特異性遺傳圖構(gòu)建和qtl定位??傆嬘?40個標(biāo)記用于分析86個后代個體。其中,241個是多態(tài)的、多信息的(足夠的分離)和有用的(不是很多u分?jǐn)?shù))。f2個體被評分成兩類:hl(具有本發(fā)明的性狀)、wt(野生型表型,包括不清楚的表型)。由于性狀被認(rèn)為是(單基因)隱性的,這應(yīng)該導(dǎo)致性狀的3:1分離。實際上,該翻譯中的性狀分布是wt:hl為61:25,其與預(yù)期的3:1的比例(卡方檢驗=0.38)沒有顯著不同。用mapqtl6.0進行連鎖分析。首先,進行區(qū)間作圖以鑒定與性狀連鎖的區(qū)域或標(biāo)記。第二,選擇輔因子,之后(作為第三步)進行mqm定位。多態(tài)性標(biāo)記對8號染色體的覆蓋度相當(dāng)?shù)?,因為只?個標(biāo)記被鑒定。由于性狀被作圖的區(qū)段相當(dāng)大(至少12cm),具有更多標(biāo)記的群體的分析對于性狀的良好作圖是必要的。然而,鑒于在該雜交中的8號染色體上的許多標(biāo)記似乎是非多態(tài)性的,這在標(biāo)記選擇中可能最初需要付出額外的努力。實施例4本發(fā)明的修飾的slmyc2基因的鑒定除了如實施例3中所述進行定位的qtl之外,還研究了是否可以鑒定本發(fā)明的性狀內(nèi)在的基因。進行本發(fā)明的植物和非突變體背景的植物的全基因組測序(wgs)。因為實施例3顯示8號染色體包含本發(fā)明的修飾的slmyc2基因,在該染色體上產(chǎn)生的所有25個純合snp標(biāo)記都被列入考慮范圍。在這25個標(biāo)記中,發(fā)現(xiàn)4個標(biāo)記無差別,因此在本發(fā)明的植物和非突變體背景之間沒有觀察到差異。對來自多個f4群體的總共227株植物進行表型分型,80株個體顯示出本發(fā)明的表型。值得注意的是,21個標(biāo)記中的一個對于本發(fā)明的所有80株植物是具有100%預(yù)測性的。對于這些植物中的21株,標(biāo)記sl06992給出了獨特的陽性得分。稱為sl06992(seqidno.4)的該snp標(biāo)記被進行了序列比對(blast),并發(fā)現(xiàn)其位于與如被注釋的augustus預(yù)測的基因sl2_40ch08.g6相同的8號染色體上的位置上。在該注釋中,基因組序列的位置4124的核苷酸在本發(fā)明的植物中從g改變?yōu)閠。這對應(yīng)于代表野生型序列的seqidno.8中的相同位置。所述核苷酸改變導(dǎo)致氨基酸的位置493處產(chǎn)生終止密碼子,從而產(chǎn)生截短形式的蛋白質(zhì)。實施例5測定本發(fā)明的植物中的萜烯水平為了測量本發(fā)明的植物(即包含修飾的slmyc2基因的植物)中的萜烯水平,使用已去頭的番茄植物。從自植物頂部的第一、第二和第三葉采樣。總共收集了0.71cm2的五片葉盤。將它們儲存在10ml小瓶中,并且加入1.0ml溶劑二氯甲烷。隨后,輕輕振蕩葉盤。45-90分鐘后,將溶劑轉(zhuǎn)移到另一小瓶中。直到分析之前,溶劑提取物儲存于-20℃下。在進行分析時,將200μl包含揮發(fā)物的溶劑與5μl內(nèi)標(biāo)乙酸壬酯混合。將1μl的該混合物注入氣相色譜-質(zhì)譜(gc-ms)儀器中。為了顯示本發(fā)明的植物和雜合以及野生型植物的揮發(fā)性量的比率,結(jié)果以任意單位顯示。圖4中給出的值已針對內(nèi)標(biāo)乙酸壬酯進行了標(biāo)準(zhǔn)化。從結(jié)果清楚可見,在本發(fā)明的植物中不存在單萜和倍半萜,而在不包含本發(fā)明的修飾的slmyc2的植物中,顯示萜的存在是顯著的(p<0.05)。實施例6測定本發(fā)明的植物中萜烯合酶(tps)基因的表達水平為了確定某些萜烯的不存在是否與tps基因的表達相關(guān),設(shè)計了qpcr實驗。對本發(fā)明的植物的三片頂葉進行采樣、合并,并且使用rneasy試劑盒(qiagen)、使用100mg植物組織分離rna。使用maximacdna合成試劑盒(thermoscientific)從總共1000ngrna開始合成cdna。檢測番茄中tps基因表達的引物組合來源于falara等人(plant.phys.157,770-789(2011))。使用rotor-geneqpcr循環(huán)儀(qiagen)來執(zhí)行qpcr的運行。如圖7所示,檢測了含有純合或雜合突變的本發(fā)明的植物和非突變體背景的12個tps基因的倍數(shù)變化規(guī)律。三種類型的表達模式能夠得到鑒定。在野生型植物中檢測到基因tps16、tps17和tps33的表達,而在本發(fā)明的純合植物和雜合植物中均未檢測到表達,因為其未達到熒光信號閾值水平。在本發(fā)明的純合以及雜合突變體植物中檢測到tps21和tps41的表達并且明顯下調(diào)。在純合突變體植物中沒有檢測到其他tps基因的表達,因為其未達到熒光信號閾值水平。當(dāng)與野生型表達模式相比時,觀察到雜合植物的下調(diào)。實施例7對包含修飾的slmyc2基因的植物對螨產(chǎn)生的影響和斯氏鈍綏螨抗番茄刺皮癭螨(aculopslycopersici)的有效性的評估實驗在位于vicar(almeria,andalusia,spain)的多通道溫室中進行。該實驗在包括總計16個5×3.5×4m(l×w×h)的步入式(實驗的)籠的溫室中進行。在具有四個同樣的植株的分區(qū)(splitplot)設(shè)計中,植物品種和捕食性螨兩個因素得到了評估。存在兩個植物種(包含修飾的slmyc2基因和razymo的植物)的四個主要區(qū)(四個籠子的組),每個分成兩個子區(qū)(實驗籠),每個隨機指定用于以下處理中的每一個:0或75個斯氏鈍綏螨/植株。從含有混有捕食性螨和承載材料(swirski-mitetm)的50,000個不同階段和卵的螨的瓶子中的科伯特生物系統(tǒng)(koppertbiologicalsystem)中獲得斯氏鈍綏螨。從在實驗開始之前從在番茄上保持幾個月的飼養(yǎng)集落獲得侵染植物的番茄刺皮癭螨trm(aculopslycopersici),并且最初收集于來自murcia(spain)的區(qū)域內(nèi)不同地點的番茄植物上。將番茄cv.razymo和包含修飾的slmyc2基因的植物的種子播種在泥炭蘚根立方體中。當(dāng)幼苗達到五葉期時,將它們以每籠10株幼苗移植到放置在指定的步入式籠內(nèi)的25l可可泥炭纖維袋中。移植后兩周,用約250個活動期的trm接種每株番茄植株。在立體顯微鏡下計數(shù)螨,以選擇含有約50個螨的小葉的片,并將其中的5片小葉放置在每株植物的不同葉上。同時收集所有侵染植物并來自植株的同一部分的螨,以確保齡期和性別比的均勻性。番茄刺皮癭螨釋放后4周,在指定的籠中立即釋放捕食性螨。通過以75個捕食性螨/植株的比率將承載材料噴灑在所有植株上來分布斯氏鈍綏螨。每克底物的螨數(shù)量用于計算釋放量。評估剛好在捕食性螨釋放前開始,之后每周持續(xù)直到實驗結(jié)束。為了評估trm的密度,在每個采樣中,在每個步入式籠中隨機選擇四株植株,并且從每株選擇的植株的3片不同葉取3個葉盤(一個葉盤/葉)。一片葉隨機選自植株的上部,一片葉隨機選自植株的中部,并且第三片葉隨機選自植株的底部。葉盤樣品被帶到實驗室進入冷藏冷箱,然后使用立體顯微鏡計數(shù)trm(活動期)的數(shù)目。通過計數(shù)存在于相同的上述葉中但在挑選葉盤以計數(shù)trm數(shù)目之前的捕食性螨(活動形式)的數(shù)量,原位評估捕食性螨群體。來自該實驗的結(jié)果顯示在圖8中。除了含有包含修飾的slmyc2基因并接受斯氏鈍綏螨的植物的那些(其中trm的平均值總是處于低于7.5個螨/小葉的值,為實驗結(jié)束時的其它處理的1/20),trm的數(shù)目在整個實驗期間逐漸增加并且在所有區(qū)中具有相似的平均數(shù)。因此,在包含修飾的slmyc2基因的植物上,trm的豐度對于斯氏鈍綏螨的響應(yīng)較低(f3,45=17.640;p<0.001)。實施例8對包含修飾的slmyc2基因的植物上斯氏鈍綏螨和amblydromaluslimonicus抗煙粉虱(bemisiatabaci)(粉虱)的有效性的評估實驗在位于vicar(almeria,andalusia,spain)的多通道溫室中進行。該實驗在包括總計16個5×3.5×4m(l×w×h)的步入式(實驗的)籠的溫室中進行。在夏季和冬季實驗期間,在具有每個實驗中4個同樣的植株的完全隨機區(qū)塊設(shè)計中比較三種處理。處理為:1)煙粉虱;2)煙粉虱+斯氏鈍綏螨;3)煙粉虱+a.limonicus。在兩個實驗中,均從保持在煙草植物上的群體飼養(yǎng)集落中收集侵染植物的煙粉虱成蟲。從含有混有捕食性螨和承載材料(swirski-mitetm)的50,000個不同階段和卵的捕食性螨的瓶子中的科伯特生物系統(tǒng)中獲得斯氏鈍綏螨。從含有混有捕食性螨和承載材料(limonicatm)的10,000個不同階段和卵的螨的瓶子中的科伯特生物系統(tǒng)中獲得a.limonicus。將包含修飾的slmyc2基因的番茄植物的種子播種在泥炭蘚根立方體中。當(dāng)幼苗達到五葉期時,將它們以每籠10株幼苗移植到放置在指定的步入式籠內(nèi)的25l可可泥炭纖維袋中。將成蟲在8℃的冷室中短暫冷卻以計數(shù),然后連續(xù)三周以每周10個成蟲/植株和5個雌蟲/植株的比率釋放到所有籠中,總共30個粉虱成蟲/植株。在移植后即釋放第一只粉虱成蟲。這個釋放時間表用來模擬害蟲逐步但巨大的遷移進入溫室。對于所有籠子每周的侵染,從大規(guī)模飼養(yǎng)中同時收集成年粉虱并屬于同一組群以確保齡期和性別比的均勻性。在第一次成年害蟲釋放后一周,通過以75個捕食性螨/植株的比率將承載材料噴灑在所有植株上釋放斯氏鈍綏螨和a.limonicus。每克底物的螨數(shù)量用于計算釋放量。在實驗中,在每個周采樣中,在每個實驗籠中隨機選擇四株植株,并從四株隨機選擇的植株中的每一株中采樣三片葉。一片葉隨機選自植株的上部,一片葉隨機選自植株的中部,并且第三片葉隨機選自植株的底部。在每片葉上,對煙粉虱若蟲和成蟲以及植綏螨的未成熟階段(幼蟲、第一若蟲和第二若蟲)和成蟲進行計數(shù)。粉虱侵染實驗的結(jié)果顯示在圖9中。粉虱若蟲的群體類似地被斯氏鈍綏螨和a.limonicus所抑制。而且,在接受捕食性螨的區(qū)的整個實驗過程中,每葉的粉虱若蟲數(shù)幾乎保持不變,并且從未超過每葉15個。實施例9在夏季和冬季條件下,對在包含修飾的slmyc2基因的植物上斯氏鈍綏螨和amblydromaluslimonicus抗西花薊馬(frankliniellaoccidentalis)(薊馬)的有效性的評估實驗在位于vicar(almeria,andalusia,spain)的多通道溫室中進行。該實驗在包括總計16個5×3.5×4m(l×w×h)的步入式(實驗的)籠的溫室中進行。在夏季和冬季實驗期間,在具有每個實驗中4個同樣的植株的完全隨機區(qū)塊設(shè)計中比較三種處理。處理為:1)西花薊馬;2)西花薊馬+斯氏鈍綏螨;3)f.西花薊馬+a.limonicus。在兩個實驗中,均從在綠豆莢上保持科伯特生物系統(tǒng)的飼養(yǎng)集落中獲得侵染植物的西花薊馬成蟲。由含有混有捕食性螨和承載材料(swirski-mitetm)的50,000個不同階段和卵的捕食性螨的瓶子中的科伯特生物系統(tǒng)提供斯氏鈍綏螨。從含有混有捕食性螨和承載材料(limonicatm)的10,000個不同階段和卵的螨的瓶子中的科伯特生物系統(tǒng)中獲得a.limonicus。夏季和冬季實驗的程序相同。將包含修飾的slmyc2基因的番茄植物種子播種在泥炭蘚根立方體中(夏季:1/7/2014;冬季:22/09/2014)。當(dāng)幼苗達到五葉期時,將它們以每籠10株幼苗移植到放置在指定的步入式籠內(nèi)的25l可可泥炭纖維袋中(夏季:5/8/2014;冬季:28/10/2014)。將成蟲在8℃的冷室中短暫冷卻以計數(shù),然后連續(xù)三周以每周10個成蟲/植株和5個雌蟲/植株的比率釋放到所有籠中,總共15只雌性薊馬/植株。在移植后即釋放第一只薊馬成蟲。這個釋放時間表用來模擬兩種害蟲逐步但巨大的遷移進入溫室。新出現(xiàn)的成年薊馬用于實驗,其于每個組群在每周的釋放之前收集,以確保齡期的均勻性。雌性薊馬與未知數(shù)量的雄性薊馬混合。在第一次成年害蟲釋放后一周(夏季:12/8/2014;冬季:4/11/2014),通過以75個捕食性螨/植株的比率將承載材料噴灑在所有植物上釋放斯氏鈍綏螨和a.limonicus。每克底物的螨數(shù)量用于計算釋放量。在夏季和冬季實驗中,在每個周采樣中,在每個實驗籠中隨機選擇四株植株,并從四株隨機選擇的植株中的每一株中采樣三片葉。一片葉隨機選自植株的上部,一片葉隨機選自植株的中部,并且第三片葉隨機選自植株的底部。在每片葉上,對薊馬成蟲和活動形式的薊馬和植綏螨的成蟲進行計數(shù)。薊馬侵染實驗的結(jié)果顯示在圖10中。a.limonicus和斯氏鈍綏螨能夠在夏季或冬季顯著減少薊馬群體,雖然在冬天a.limonicus比斯氏鈍綏螨更有效(夏季:f2,31=21.632;p<0.001;冬季:f2,45=48.789;p<0.001;圖10)。在夏季,在接受捕食性螨的籠子中,每片葉的薊馬捕食者數(shù)量在整個實驗期間逐漸減少,在結(jié)束時幾乎沒有記錄到薊馬(圖10a)。在冬季,兩種捕食性螨在第一周期間都類似地減少害蟲群體,但在實驗中途(大約當(dāng)平均每日溫度低于20℃時),由斯氏鈍綏螨處理的區(qū)的薊馬密度迅速增加,達到和實驗結(jié)束時未處理籠子相比的類似密度,這反映了害蟲不受捕食性螨的控制(圖10b)。已知斯氏鈍綏螨在低于20℃的溫度下活性較低。相反,在接受a.limonicus的籠子中,薊馬密度仍然保持恒定,并且平均總在3個以下,約為接受斯氏鈍綏螨的籠子的1/6。因此,a.limonicus仍然可以在斯氏鈍綏螨活性較低的溫度下成功使用。當(dāng)前第1頁12
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