本發(fā)明涉及化合物及其治療用途，尤其是用于改善哺乳動物的肌肉質(zhì)量的治療用途。更具體地，本發(fā)明允許改善肥胖哺乳動物的肌肉質(zhì)量。本發(fā)明還允許改善患肌少癥的哺乳動物的肌肉質(zhì)量。本發(fā)明還涉及這些化合物在治療和/或預(yù)防哺乳動物的肥胖的用途。
背景技術(shù)：
：肌肉萎縮可能由多種不同原因?qū)е拢籂I養(yǎng)不良、不使用肌肉(例如骨折后固定)、癌癥或誘導(dǎo)惡病質(zhì)或由個體衰老而自然產(chǎn)生(肌少癥)的其它嚴重疾病(心臟衰竭或腎衰竭)。這種萎縮可以由蛋白合成的減少或/和蛋白水解的增加而引起，視情況可能伴隨有纖維化和/或脂肪組織浸潤。因此，控制肌肉蛋白合成和蛋白水解的因子和機制的鑒定是用于設(shè)計這些病理的合適的治療的先決條件。圖1屬于現(xiàn)有技術(shù)，顯示了肌肉中蛋白合成和蛋白水解的主要途徑(根據(jù)Zhaoetal.,2008和Littleetal.,2009重編)。肌肉蛋白合成是必需的，并且基本上受控于翻譯水平。顯然，肌肉蛋白合成需要足夠的氨基酸的營養(yǎng)攝入。肌肉蛋白合成由身體活動刺激并受許多因子調(diào)節(jié)，最值得注意的是IGF-1和雄激素(Littleetal.,2009)。表1：作用于肌肉中蛋白合成和蛋白水解的因子和分子肌原纖維的蛋白水解通過蛋白酶體進行，而線粒體被自噬作用破壞(Zhaoetal.,2008)。衛(wèi)星細胞凋亡的機制也被描述(Murphyetal.,2010)。由肌肉自身通過自分泌方式產(chǎn)生的肌肉生長抑制素是特別重要的因子，因為它通過同時刺激蛋白水解和抑制蛋白合成來起作用。肌肉生長抑制素也刺激纖維化(Lietal.,2008)。衰老伴隨著各種調(diào)節(jié)因子的改變(Walstonetal.,2012)：身體活動通常減少，蛋白質(zhì)/維生素營養(yǎng)可能不足，并且在餐后，循環(huán)的氨基酸含量(其增加對于刺激蛋白合成是必需的)顯示增加降低，這可能是由于內(nèi)臟隔離(séquestrationsplanchnique)(Boirieetal.,1997)。此外，衰老伴隨著重要的激素變化：尤其注意到肌生成抑制素的增加(Légeretal.,2008)，雄激素的減少(Seidman,2007)，生長激素增加(Macelletal.,2001；Sattler,2013)，以及炎癥標記物的增加(IL-6、TNF-α...Schaapetal.,2009；Vergheseetal.,2011)。這些不同的改變不利于蛋白合成，而其有利于蛋白水解，因此肌肉尺寸逐漸減少(肌少癥)。這些改變還導(dǎo)致對快肌纖維(fibresrapides)有損害的肌肉纖維類型分布的變化，這導(dǎo)致肌肉力量的降低(動力學(xué)減弱(dynapénie))。最后，有助于肌肉內(nèi)的結(jié)締組織的發(fā)育(纖維化)。在肥胖的背景下，情況由于多個互補的原因而加重：肌肉的脂肪浸潤加重了炎癥狀況，胰島素抗性降低IGF-1對蛋白合成的影響，此外，活動性(mobilité)由于超重而減少(Stenholmetal.,2009)。圖2屬于現(xiàn)有技術(shù)，示出在肥胖的背景下肌少癥的加重(根據(jù)Quillotetal.,2013)。在所有情況下，在沒有治療的情況下，肌少癥是一種只能加重的過程，直到完全喪失活動性。然而，肌少癥不是導(dǎo)致骨骼肌萎縮的唯一過程。萎縮還發(fā)生在固定期間(例如在骨折之后)，在延長的禁食(或節(jié)食)期間，或在導(dǎo)致惡病質(zhì)的嚴重病狀(例如癌癥，艾滋病)期間。還可以提及遺傳起源的各種肌肉營養(yǎng)不良。這些不同的情況與肌少癥具有許多共同的特征，但具有不同權(quán)重的觸發(fā)因子(Tisdale,2007；Sainietal.,2009)。已知可能的治療因此已經(jīng)考慮和測試了不同的預(yù)防/治療肌少癥的方法。首先涉及體育鍛煉，其有效性已被確立(Bonnefoyetal,2000；Bonnefoy,2008；Ryanetal.,2013)。因此，在8周的持續(xù)時間內(nèi)進行的鍛煉后觀察到肌肉力量增加180％，肌肉重量增加11％(Fiataroneetal.1990)。然而，最佳效果將需要每天幾個小時的體育鍛煉，因此，在一個長時間段內(nèi)，很難考慮這種方法。通過提供快速消化蛋白質(zhì)并根據(jù)優(yōu)化的時間順序(etal.,2009；Ausseletal.,2013)以及某些氨基酸補充物或其代謝物(亮氨酸、HMB[β-羥基-β-甲基丁酸酯]、瓜氨酸、鳥氨酸)來增加蛋白質(zhì)合成底物的供應(yīng)可以增加肌肉蛋白合成(Li&Heber，2011)。各種藥物治療旨在糾正與衰老相關(guān)的激素環(huán)境的變化(Crenn,2013)。這些藥物治療包括：-性激素如睪酮(Whiteetal.,2013)或其變體，SARM(選擇性雄激素受體調(diào)節(jié)劑)，或非性激素如生長激素(Liuetal.,2003)以及IGF-1、生長素釋放肽或顆粒體蛋白前體，或維生素D-肌生成抑制素的抑制劑(針對分子或其受體的抗體或肌生成抑制素前體肽)(Murphyetal.,2010；Han&Mitch,2011)-靶向腎素-血管緊張素系統(tǒng)的分子，如ACE抑制劑或血管緊張素1-7(DallaLiberaetal.,2001；Shiuchietal.,2004；Kalupahana&Moustaid-Moussa,2012；Allenetal.,2013)-β-腎上腺素能受體激動劑(Ryalletal.,2004,2007)-各種天然物質(zhì)，甚至更復(fù)雜的植物來源的提取物(例如異黃酮：Aubertin-Leheudreetal.,2007；橄欖油提取物：Piernoetal.,2014；白藜蘆醇：Shadfaretal.,2001；Bennettetal.,2013)。這些治療的巨大多樣性證明了治療多因素病理的困難性，其中多因素病理觸發(fā)因素沒有完全確定。此外，一些候選分子具有副作用(例如性激素、SARM或β-激動劑的情況)或這些候選分子僅在動物模型中進行研究。所有這一切解釋了市場上沒有可用的藥品的原因。到目前為止，研究更具體地集中在肌生成抑制素，并且在研究中抑制肌生成抑制素與例如抗肌生成抑制素抗體或抗受體抗體的作用(Dumonceauxetal.,2010；Greenberg,2012；Sakuma&Yamaguchi,2012；Arounleutetal.,2013；Buehring&Binkley,2013；Collins-Hooperetal.,2014；White&LeBrasseur,2014)。植物蛻皮激素，更具體是20-羥基蛻皮甾酮(20E)，已經(jīng)是許多藥理學(xué)研究的主題，研究開始于日本，然后在烏茲別克斯坦，然后在不同的其他國家進行。這些研究突出了這種分子的抗糖尿病和合成代謝性質(zhì)。在大鼠體內(nèi)(Syrov,2000；Tóthetal.,2008；Lawrence,2012)和體外的鼠科動物C2C12肌管(Gorelick-Feldmanetal.,2008)觀察到其對肌肉中蛋白質(zhì)合成的刺激作用。這涉及翻譯水平上的效應(yīng)，其意味著在Akt/PkB蛋白激酶涉及的級聯(lián)之后的核糖體蛋白p70S6K的磷酸化，這也是IGF-1用于刺激蛋白合成的途徑。借助于相同的C2C12細胞，Zubeldiaetal.(2012)已另外表明富含植物蛻皮激素(20-羥基蛻皮甾酮和土克甾酮)的新疆筋骨草(Ajugaturkestanica)的提取物抑制肌生成抑制素和半胱天冬酶3(參與凋亡過程的蛋白質(zhì))的轉(zhuǎn)錄。另外，20-羥基蛻皮甾酮具有抗纖維化性質(zhì)，其未在肌肉上證實，但在腎臟中證實，其中纖維化的機制以非常相似的方式進行(Hungetal.,2012)。因此，纖維化的機制對TGF-β(一種接近于肌生成抑制素的蛋白質(zhì))的作用起阻抑作用，特別是對引起該物質(zhì)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白Smad2，Smad3的引起的刺激起阻抑作用。因此，可以認為20-羥基蛻皮甾酮可以對肌肉(或心臟)具有類似的作用。20-羥基蛻皮甾酮減少用富含脂肪的餐食喂養(yǎng)的小鼠(Kizelszteinetal.,2009；Foucaultetal.,2012)中或在切除卵巢的大鼠(一種更年期模型)(Seidlova-Wuttkeetal.,2010)中的脂肪量的累積。在臨床研究中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了上述動物模型中的某些作用，但仍不是太多。因此，20-羥基蛻皮甾酮增加了體力(Azizovetal.,1995；Gadhzievaetal.,1995)和肌肉質(zhì)量(Simakinetal.,1988)，并引起肥胖和超重志愿者的腹部脂肪量減少(Wuttkeetal.,2013；Foucaultetal.,2014；專利申請PCTWO2013/068704)。然而，20E及其代謝物在小鼠中(Dzhukharovaetal.,1987；Hikinoetal.,1972)、在大鼠(Kapuretal.,2010和Seidlova-Wuttkeetal.,2010)以及在人類(Brandt2003；Bolduc,2006)中具有很差的生物利用度。它們的整體性能在用于改善肌肉質(zhì)量的應(yīng)用方面并不完全令人滿意。多項研究已經(jīng)表明，20E衍生的代謝物土克甾酮(11α，20-二羥基蛻皮酮)在體內(nèi)顯示出比20E更大的活性(Syrovetal.,2001:Bathorietal.,2008)。對于旨在改善肥胖哺乳動物和患肌少癥的哺乳動物中肌肉質(zhì)量的治療應(yīng)用，現(xiàn)今仍然需要具有良好生物利用度的新化合物，所述生物利用度特別以高血漿暴露系數(shù)表示，同時在改善肌肉質(zhì)量方面表現(xiàn)出比20E更大的總體活性，這種總體活性以肌生成抑制素的基因表達的抑制結(jié)合哺乳動物中蛋白質(zhì)合成的增加的性能來表示。技術(shù)實現(xiàn)要素：發(fā)明人現(xiàn)在已非常意外地發(fā)現(xiàn)，具有特定通式的類固醇家族的某些化合物(其結(jié)構(gòu)與20E及其代謝物的結(jié)構(gòu)不同)具有比20E更高的血漿暴露系數(shù)，和等于或大于20羥基蛻皮酮(20E)的通過S6K1蛋白的磷酸化抑制肌生成抑制素和刺激蛋白合成的作用效果。這些作用效果允許改善患肌少癥和肌少性肥胖的哺乳動物中的肌肉質(zhì)量和/或肌肉強度。本發(fā)明的化合物不與性激素受體(雄激素和雌激素的受體)相互作用。本發(fā)明的化合物在血漿和微粒體中顯示出良好的化學(xué)穩(wěn)定性。其中幾個最終具有相比20-羥基蛻皮甾酮明顯改善的藥代動力學(xué)性質(zhì)。本發(fā)明的化合物還誘導(dǎo)更好地抑制肌生成抑制素的基因表達和更好地改善蛋白質(zhì)合成。因此，本發(fā)明提供了以下通式(I)的化合物：其中：V-U是碳-碳單鍵，且Y是羥基或氫，或者V-U是烯鍵C＝C；X選自：氧原子；N-OR5基團，R5選自：氫原子；鏈上具有或不具有不飽和度的C1-C6烷基；(C1-C6)CO2R6基，其中R6可以是氫或C1-C6基；(C1-C6)OR7基，R7是被烷基或烷氧基、CF3、Cl單取代或多取代的或未取代的芳環(huán)或雜芳環(huán)；(C1-C6)NR8R9基，R8和R9是C1-C6基，或(C1-C6)N(C1-C6)基或(C1-C6)N(C1-C6)OR6基，其中R6如上所定義，NR8R9也可以是雜環(huán)；并且其中：Q是羰基；并且R1選自：(C1-C6)W(C1-C6)基；(C1-C6)W(C1-C6)W(C1-C6)基；(C1-C6)W(C1-C6)CO2(C1-C6)基；(C1-C6)A，A代表可選地被OH、OMe、(C1-C6)、N(C1-C6)、CO2(C1-C6)類基團取代的雜環(huán)；CH2Br基團；W是選自N、O和S的雜原子；或，Q是CHOH基；并且，R1選自：(C1-C6)W(C1-C6)基；(C1-C6)W(C1-C6)W(C1-C6)基；(C1-C6)W(C1-C6)CO2(C1-C6)基；W是選自N和S的雜原子；或，Q選自：C＝NOR5基，R5如上述定義；CHNR2R3基，并且，R1是(C1-C6)烷基；并且，R2和R3是相同的或不同的，各選自：氫原子；(C1-C6)烷基；(C1-C6)W(C1-C6)基；環(huán)烷基；(C1-C6)CHF2基；(C1-C6)A基，其中A代表如上定義的雜環(huán)；COR4類基團；R4選自：可選地不飽和的(C1-C6)烷基或環(huán)烷基；如上所述的A類雜環(huán)基，被OH、OMe、(C1-C6)、N(C1-C6)、CO2(C1-C6)、CF3、OCF3、CN、Cl、F類基團取代的或未取代的芳香基或雜芳基；(C1-C6)W(C1-C6)基；W是選自N、O和S的雜原子；所述化合物為對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體、水合物、溶劑化物、互變異構(gòu)體、外消旋混合物或藥學(xué)上可接受的鹽的形式。本發(fā)明的另一具體形式是實現(xiàn)上述通式(I)的化合物，其中Q代表羰基。本發(fā)明的另一具體形式是實現(xiàn)上述通式(I)的化合物，其中：X是氧原子；V-U是碳-碳單鍵；Y是羥基；Q是羰基；R1選自：(C1-C6)W(C1-C6)基；(C1-C6)W(C1-C6)W(C1-C6)基；(C1-C6)W(C1-C6)CO2(C1-C6)基；(C1-C6)A基，A代表可選地被OH、OMe、(C1-C6)、N(C1-C6)、CO2(C1-C6)類基團取代的雜環(huán)；W是選自N、O和S的雜原子。本發(fā)明的另一具體形式是實現(xiàn)上述通式(I)的化合物，其中Q代表CHNR2R3基，R2和R3選自：氫原子；(C1-C6)烷基；(C1-C6)W(C1-C6)基；環(huán)烷基；(C1-C6)CHF2基；(C1-C6)A基，其中A代表如上定義的雜環(huán)；COR4類基團，R4選自：可選地不飽和的(C1-C6)烷基或環(huán)烷基；如上定義的A類雜環(huán)基，被OH、OMe、(C1-C6)、N(C1-C6)、CO2(C1-C6)、CF3、OCF3、CN、Cl、F類基團取代的或未取代的芳香基或雜芳基；(C1-C6)W(C1-C6)基。本發(fā)明的另一具體形式是實現(xiàn)上述通式(I)的化合物，其中：X是氧原子；V-U是碳-碳單鍵；Y是羥基；R1是甲基；Q是CHNR2R3基，R2和R3選自：氫原子；(C1-C6)烷基；(C1-C6)W(C1-C6)基；環(huán)烷基；(C1-C6)CHF2基；(C1-C6)A基，其中A代表如上定義的雜環(huán)；COR4類基團，R4選自：可選地不飽和的(C1-C6)烷基或環(huán)烷基；如上定義的A類雜環(huán)基，被OH、OMe、(C1-C6)、N(C1-C6)、CO2(C1-C6)、CF3、OCF3、CN、Cl、F類基團取代的或未取代的芳香基或雜芳基；(C1-C6)W(C1-C6)基；W是選自N、O和S的雜原子。本發(fā)明的另一具體形式是實現(xiàn)上述通式(I)的化合物，其中，Q代表C＝NOR5基，R5如上定義。本發(fā)明的另一具體形式是實現(xiàn)上述通式(I)的化合物，其中：X是氧原子；V-U是碳-碳單鍵；Y是羥基；R1是甲基；Q是C＝NOR5基，R5如上定義。本發(fā)明的另一具體形式是實現(xiàn)上述通式(I)的化合物，其中V-U是烯鍵C＝C。本發(fā)明的另一具體形式是實現(xiàn)上述通式(I)的化合物，其中X是N-OR5基，R5如上定義。本發(fā)明的另一具體形式是實現(xiàn)上述通式(I)的化合物，其選自以下化合物：-第28號：(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17-(N-丁-3-烯氧基-C-甲基-碳亞氨基)-2,3,14-三羥基-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮-第32號：(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17-(N-(2-二乙基氨基乙氧基)-C-甲基-碳亞氨基)-2,3,14-三羥基-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮-第41號：2-甲氧基-N-(2-甲氧基乙基)-N-[1-[(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-10,13-二甲基-6-氧代-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基]乙基]乙酰胺-第42號：(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-17-[1-(2-甲氧基乙基氨基)乙基]-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮-第43號：(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-10,13-二甲基-17-[1-(3-吡啶基甲基氨基)乙基]-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮-第46號：(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-10,13-二甲基-17-[1-(四氫呋喃-2-基甲基氨基)乙基]-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮-第51號：2-乙基-N-(2-甲氧基乙基)-N-[1-[(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-10,13-二甲基-6-氧代-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基]乙基]丁酰胺-第62號：2-甲氧基-N-(四氫呋喃-2-基甲基)-N-[1-[(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-10,13-二甲基-6-氧代-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基]乙基]乙酰胺-第63號：N-(四氫呋喃-2-基甲基)-N-[1-[(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-10,13-二甲基-6-氧代-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基]乙基]呋喃-2-甲酰胺-第67號：N-(2,2-二氟乙基)-N-[1-[(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-10,13-二甲基-6-氧代-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基]乙基]呋喃-2-甲酰胺-第76號：(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-17-[1-(2-甲氧基乙基(甲基)氨基)乙基]-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮-第81號：(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-10,13-二甲基-17-(2-嗎啉代乙?；?-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮-第86號：(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-17-[2-(3-羥基吡咯烷-1-基)乙酰基]-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮-第88號：(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-17-[2-(4-羥基-1-哌啶基)乙?；鵠-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮-第89號：(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-17-[2-[4-(2-羥基乙基)-1-哌啶基]乙酰基]-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮-第91號：(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17-[2-(3-二甲基氨基丙基(甲基)氨基)乙?；鵠-2,3,14-三羥基-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮-第92號：2-[2-氧代-2-[(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-10,13-二甲基-6-氧代-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基]乙基]硫基乙酸乙酯-第93號：(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17-(2-乙基硫基乙?；?-2,3,14-三羥基-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮-第94號：(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-17-[2-(2-羥基乙基硫基)乙?；鵠-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮；本發(fā)明的另一目的涉及通式(I)的化合物用作藥物、尤其是作為在藥學(xué)上可接受的載體中的藥物的用途。本發(fā)明的另一目的是實現(xiàn)通式(I)的化合物，其用于治療和/或預(yù)防哺乳動物的肌少癥和肌少性肥胖、其并發(fā)癥和/或相關(guān)病理癥狀，如肌肉強度、肌肉量、身體性能和體力以及活動性的損失。身體性能和體力可以通過步行測試和體能來表征。本發(fā)明的另一目的是實現(xiàn)通式(I)的化合物，其用于治療和/或預(yù)防哺乳動物的肥胖及其并發(fā)癥和/或相關(guān)病理癥狀，有利地治療和/或預(yù)防2型糖尿病或代謝綜合征。附圖說明圖1屬于現(xiàn)有技術(shù)，示出了肌肉中蛋白合成和蛋白水解的主要途徑(根據(jù)Zhaoetal.,2008和Littleetal.,2009編寫)。圖2屬于現(xiàn)有技術(shù)，示出了在肥胖情況下肌少癥的加重(根據(jù)Quillotetal.,2013)。圖3A示出了20E(比較化合物)和根據(jù)本發(fā)明的化合物第51和93號對經(jīng)歷6周的高脂餐食的C57BL/6小鼠的重量的作用。圖3B示出了20E(比較化合物)和根據(jù)本發(fā)明的化合物第51和93號對經(jīng)歷6周的高脂餐食的C57BL/6小鼠的比目魚肌(Soleus)的蛋白質(zhì)量的作用。圖4示出了20E(比較化合物)和根據(jù)本發(fā)明的化合物第51和93號對經(jīng)歷6周的高脂餐食的C57BL/6小鼠的比目魚肌的肌生成抑制素的轉(zhuǎn)錄物的作用。圖5A示出了20E(比較化合物)和根據(jù)本發(fā)明的化合物第51和93號對經(jīng)歷6周的高脂餐食的C57BL/6小鼠的MyoD轉(zhuǎn)錄物的作用。圖5B示出了20E(比較化合物)和根據(jù)本發(fā)明的化合物第51和93號對經(jīng)歷6周的高脂餐食的C57BL/6小鼠的肌細胞生成蛋白轉(zhuǎn)錄物的作用。圖6以表格形式示出在肌生成抑制素和蛋白質(zhì)合成的基因表達的分析實驗中獲得的本發(fā)明化合物的結(jié)果。具體實施方式本發(fā)明的目的是開發(fā)特別應(yīng)對上述目的的與用于治療和/或預(yù)防哺乳動物的肥胖癥和/或肌少癥的治療應(yīng)用有關(guān)的新的化合物。這些后文中的化合物是新的化合物，因為其不存在于化學(xué)數(shù)據(jù)庫中。這些化合物可以有利地根據(jù)工業(yè)化方法合成，即以最少的合成步驟和最佳產(chǎn)率合成。這些化合物具有優(yōu)于20E的通過S6K1蛋白質(zhì)的磷酸化抑制肌生成抑制素、刺激蛋白合成的作用。這些化合物在血漿和微粒體中顯示出良好的化學(xué)穩(wěn)定性。這些化合物具有改善的藥代動力學(xué)特征和確定的劑量。這些化合物刺激C2C12細胞中的肌肉合成代謝并顯示抗高血糖作用。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語“芳基”是指具有5至8個碳原子的芳環(huán)或具有5至14個碳原子的多個稠合芳環(huán)。特別地，芳基可以是單環(huán)或雙環(huán)基團，優(yōu)選苯基或萘基。有利地，該芳基是苯基(Ph)。在本發(fā)明的上下文中，“雜芳基”應(yīng)理解為是指含有3至9個原子的任何芳香族烴基，其含有一個或多個雜原子，例如硫原子、氮原子或氧原子。根據(jù)本發(fā)明的雜芳基可以由一個或多個稠環(huán)構(gòu)成。雜芳基的實例是呋喃基、異惡唑基、吡啶基、噻唑基、嘧啶基、苯并咪唑、苯并惡唑、苯并噻唑。有利地，雜芳基選自呋喃基、吡啶基和噻唑基。有利地，該雜芳基是呋喃基。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語“鹵原子”是指任何鹵原子，有利地選自Cl、Br、I或F，特別是選自F、Cl或Br，特別是F或Cl。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語“C1-C6烷基”應(yīng)理解為是指1-6個碳原子的任何直鏈或支鏈烷基，特別是甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正己基。有利地，“C1-C6烷基”是甲基、乙基、異丙基或叔丁基，特別是甲基或乙基，更特別是甲基。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語“C3-C6環(huán)烷基”應(yīng)理解為是指包含3至6個碳原子的任何飽和烴環(huán)，特別是環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基。有利地，“C3-C6環(huán)烷基”是環(huán)丙基或環(huán)己基。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語“(C1-C6烷基)芳基”應(yīng)理解為是指通過如上所定義的C1-C6烷基鍵合的如上定義的任何芳基。特別地，(C1-C6烷基)芳基的實例是芐基或-(CH2)2苯基。在本發(fā)明的上下文中，“藥學(xué)上可接受的”是指可用于制備藥物組合物的物質(zhì)，該物質(zhì)通常是安全無毒的，無論在生物學(xué)及其它方面均不是不適當(dāng)?shù)模⑶覍τ谂c人類藥物相同的獸醫(yī)用途是可接受的。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語“化合物的藥學(xué)上可接受的鹽”是指如本文所定義的藥學(xué)上可接受的鹽，其具有母體化合物所需的藥理活性。這種鹽包括：(1)與無機酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等形成的酸加成鹽；或與有機酸如乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙磺酸、富馬酸、葡庚糖酸、葡糖酸、谷氨酸、乙醇酸、羥基萘甲酸、2-羥基乙磺酸、乳酸、馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘康酸、2-萘磺酸、丙酸、水楊酸、琥珀酸、二苯甲?；?L-酒石酸、酒石酸、對甲苯磺酸、三甲基乙酸、三氟乙酸等形成的酸加成鹽；或(2)當(dāng)母體化合物中存在的酸性質(zhì)子被金屬離子例如堿金屬離子、堿土金屬離子或鋁離子替代；與有機堿或無機堿配位時形成的鹽?？山邮艿挠袡C堿包括二乙醇胺、乙醇胺、N-甲基葡糖胺、三乙醇胺、氨基丁三醇等?？山邮艿臒o機堿包括氫氧化鋁、氫氧化鈣、氫氧化鉀、碳酸鈉和氫氧化鈉。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語“化合物的溶劑化物”應(yīng)理解為是指通過將惰性溶劑分子添加到根據(jù)本發(fā)明的化合物而獲得的任何化合物，由于其相互的吸引力而形成溶劑化物。溶劑化物是例如化合物的醇化物。水合物是其中使用的惰性溶劑是水的溶劑化物。該水合物可以是單水合物、二水合物或三水合物。在本發(fā)明的上下文中，“互變異構(gòu)體”應(yīng)理解為是指根據(jù)本發(fā)明的化合物的任何構(gòu)成的異構(gòu)體，其通過稱為互變異構(gòu)化的可逆化學(xué)反應(yīng)可互相轉(zhuǎn)化。在大多數(shù)情況下，反應(yīng)通過氫原子的遷移伴隨著雙鍵位置的變化而發(fā)生。在能夠互變異構(gòu)化的化合物的溶液中，在2種互變異構(gòu)體之間建立平衡。互變異構(gòu)體之間的比例因此取決于溶劑、溫度和pH。因此，互變異構(gòu)現(xiàn)象是一個官能團向另一個官能團的轉(zhuǎn)化，最常見的是通過氫原子和π鍵(雙鍵或三鍵)的同時置換。常見的互變異構(gòu)體是例如以下的成對互變異構(gòu)體：醛/酮-醇，或更精確地是烯醇；酰胺-亞胺酸；內(nèi)酰胺-內(nèi)酰亞胺；亞胺-烯胺；烯胺-烯胺。特別地，該互變異構(gòu)體可以包括一個環(huán)-鏈互變異構(gòu)體，其中當(dāng)質(zhì)子的移動伴隨有開放結(jié)構(gòu)向環(huán)的轉(zhuǎn)化時該環(huán)-鏈互變異構(gòu)體形成。合成描述與一般方案通式(I)的化合物可以通過應(yīng)用或適用本領(lǐng)域技術(shù)人員本身已知的和/或后者能力范圍內(nèi)的任何方法來制備，尤其是通過Larock(1989)描述的方法，或通過應(yīng)用或適用以下方案中描述的方法。不同的基團參考上面給出的定義。方案A：如在Zhuetal.(2002)中所述，通過乙酸中鋅的作用可將20-羥基蛻皮甾酮A1還原為化合物A2。該化合物A2可以通過吡啶中PCC的反應(yīng)在鏈的C20-C22上進行氧化裂解，得到化合物A3。R5ONH2型烷基肟與C20上的羰基反應(yīng)，得到相應(yīng)的亞胺A4以及在C20和C6上進行雙重反應(yīng)的化合物A5。方案B：R5ONH2型烷基肟與化合物A1的C6羰基反應(yīng)，得到肟B1以及可選的消除C14-C15上的羥基的化合物B2(構(gòu)象異構(gòu)體Z)和B′2(構(gòu)象異構(gòu)體E)。這3種化合物可以如方案A中所述獨立地進行鏈斷裂，得到化合物B3和B4，化合物(Z)-肟B′3作為副產(chǎn)物。R5ONH2型烷基肟在化合物B3或B4的C6羰基上反應(yīng)，得到化合物B5和B6。方案C：化合物A1可以如方案A中所述進行氧化裂解，得到化合物C1。該化合物在文獻中命名為坡斯特甾酮，其可以進行R5ONH2型烷基肟在C20羰基上的作用，這允許獲得化合物C2、在C6和C20上有雙重反應(yīng)的化合物C3和在C14-C15上消除羥基的化合物C4。方案D：構(gòu)象異構(gòu)體(E)和(Z)的混合物，即來自方案B的B3和B′3的混合物與氯化鈦反應(yīng)，其中氯化鈦具有使化合物(Z)即B′3脫水的作用以獲得D1。在前一步驟分離的化合物B3的C17羰基在氰基硼氫化鈉的存在下與R3NH2進行還原胺化，得到化合物D2，其可以通過酰氯R4COCl?；试S得到化合物D3。方案E：坡斯特甾酮C1進行還原胺化，然后進行與方案D中所述相同類型的?；?，并允許獲得化合物E1，然后是E2。方案F：用溴代烷基化合物將來自方案F的化合物E1的仲胺烷基化，得到叔胺F2。方案G：用溴可以將坡斯特甾酮C1在C21溴化，得到溴化物G1，溴化物G1可以通過親核試劑WR(W可以是胺或硫醇)烷基化，得到化合物G2。方案H：在方案G中獲得的溴化物G1可以與OR型醇化物化合物反應(yīng)，以獲得醚化物H1。方案I：來自方案G的化合物G2可以用硼氫化鈉進行C20羰基的還原，得到醇I2。方案J：由方案G得到的化合物G2可以如方案C中所述在R5ONH2型烷基肟的C20上進行反應(yīng)，并且允許獲得化合物J1。實施例：材料與方法在BrukerAvanceDPX300(300.16MHz)設(shè)備上進行質(zhì)子(1H)核磁共振(NMR)光譜?；瘜W(xué)位移(δ)以百萬分之一(ppm)測量。根據(jù)所使用的氘代溶劑的化學(xué)位移校準光譜。偶合常數(shù)(J)以赫茲(Hz)表示，多重性以下列方式表示：單峰(s)、雙峰(d)、雙二重峰(dd)、三重峰(t)，三二重峰(td)、四重峰(q)、多重峰(m)。質(zhì)譜(SM)通過AgilentTechnologiesMSD光譜儀G1946A型進行，樣品通過“大氣壓化學(xué)電離”(APCI)源離子化?？s寫TBAF四丁基氟化銨THF四氫呋喃DMF二甲基甲酰胺CDCl3氘化氯仿CD3OD氘代甲醇DMSO-d6氘代二甲亞砜PyBop(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基鏻六氟磷酸鹽Boc叔丁氧羰基mmol毫摩(s)μM微摩mL毫升(s)g克(s)M摩爾/升N標準(e)nm納米(s)min分鐘(s)h小時(s)j日(s)t.a.室溫UV紫外ctrl對照PM分子量SM質(zhì)譜作為本發(fā)明的說明性示例，合成表2所示的化合物。表2：其中例示合成的化合物的列表。實施例1：方案A；第1號和第2號化合物的制備：(2S,3R,5R,10R,13S,14S,17S)-17-(N-丁-3-烯氧基-C-甲基-碳亞胺酰基)-2,3-二羥基-10,13-二甲基-1,2,3,4,5,9,11,12,14,15,16,17-十二氫環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮和(2S,3R,5R,10R,13S,14R,17S)-17-(N-丁-3-烯氧基-C-甲基-碳亞胺?；?-2,3-二羥基-10,13-二甲基-1,2,3,4,5,9,11,12,14,15,16,17-十二氫環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮步驟1：(2S,3R,5R,10R,13S,17S)-2,3-二羥基-10,13-二甲基-17-[(1R,2R)-1,2,5-三羥基-1,5-二甲基-己基]-1,2,3,4,5,9,11,12,14,15,16,17-十二氫環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮的制備將20g(41.6mmol)20-羥基蛻皮甾酮(市售)溶解在280mL醋酸中，并將溶液加熱至67℃。按份加入27.2g(416mmol)鋅粉，并將反應(yīng)介質(zhì)加熱至67℃，持續(xù)18h。然后，在20℃下通過用50mL甲醇潤洗的硅藻土濾餅過濾溶液。蒸發(fā)濾液，得到33.7g棕色油狀物，通過在硅膠柱上用快速色譜法(二氯甲烷/甲醇，90/10)將其純化，得到9.52g呈黃色粉末的(2S,3R,5R,10R,13S,17S)-2,3-二羥基-10,13-二甲基-17-[(1R,2R)-1,2,5-三羥基-1,5-二甲基-己基]-1,2,3,4,5,9,11,12,14,15,16,17-十二氫環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮(收率：49％)。LC-MS:m/z＝465.3(MH+)；254nmUV下的純度＝99％。RMN1H(300MHz,DMSO-d6)δ5.72-5.43(m,1H(C7)),4.42-4.32(m,2H),4.13(s,1H),3.76-2.62(m,2H),3.2-3.1(m,2H),2.21-2.14(m,2H),1.90-1.02(m,28H),1.03-0.77(m,6H).步驟2：(2S,3R,5R,10R,13S,17S)-17-乙?；?2,3-二羥基-10,13-二甲基-1,2,3,4,5,9,11,12,14,15,16,17-十二氫環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮的制備將9.52g(20.28mmol)(2S,3R,5R,10R,13S,17S)-2,3-二羥基-10,13-二甲基-17-[(1R,2R)-1,2,5-三羥基-1,5-二甲基-己基]-1,2,3,4,5,9,11,12,14,15,16,17-十二氫環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮溶解在46mL吡啶和276mL二氯甲烷中。在10分鐘內(nèi)按份加入6.69g(30.4mmol)氯鉻酸吡啶，將反應(yīng)介質(zhì)在20℃下振蕩2h30。然后真空下蒸發(fā)吡啶和二氯甲烷，通過在硅膠柱上用快速色譜法(二氯甲烷/甲醇，95/5)純化殘余物，得到4g呈米色粉末的(2S,3R,5R,10R,13S,17S)-17-乙?；?2,3-二羥基-10,13-二甲基-1,2,3,4,5,9,11,12,14,15,16,17-十二氫環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮(收率：56％)。LC-MS:m/z＝347.2(MH+)254nmUV下的純度＝99％。RMN1H(300MHz,DMSO-d6)δ5.68-5.46(m,1H(C7)),4.41-4.37(m,2H),3.76-3.55(m,2H),2.83-2.54(m,2H),2.33-1.95(m,6H),1.90-1.30(m,10H),1.28-1.18(m,1H),0.88-0.42(m,6H).步驟3：差向異構(gòu)體(2S,3R,5R,10R,13S,14S,17S)-17-(N-丁-3-烯氧基-C-甲基-碳亞胺?；?-2,3-二羥基-10,13-二甲基-1,2,3,4,5,9,11,12,14,15,16,17-十二氫環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮和(2S,3R,5R,10R,13S,14R,17S)-17-(N-丁-3-烯氧基-C-甲基-碳亞胺?；?-2,3-二羥基-10,13-二甲基-1,2,3,4,5,9,11,12,14,15,16,17-十二氫環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮的制備將步驟2中制備的328mg(0.947mmol)(2S,3R,5R,10R,13S,17S)-17-乙?；?2,3-二羥基-10,13-二甲基-1,2,3,4,5,9,11,12,14,15,16,17-十二氫環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮(14-脫氧-睪酮)溶于1.2mL乙醇并按份加入200mg(0.994mmol)2,2,2-三氟乙酸丁-3-烯氧基銨。反應(yīng)介質(zhì)回流20h。蒸發(fā)溶劑并在C18柱上通過制備型色譜(乙腈/水，60/40)純化殘余物，得到24mg呈米色粉末的第1號化合物(2S,3R,5R,10R,13S,14S,17S)-17-(N-丁-3-烯氧基-C-甲基-碳亞胺?；?-2,3-二羥基-10,13-二甲基-1,2,3,4,5,9,11,12,14,15,16,17-十二氫環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮(收率：6％)和57mg呈米色粉末的第2號化合物(2S,3R,5R,10R,13S,14R,17S)-17-(N-丁-3-烯氧基-C-甲基-碳亞胺?；?-2,3-二羥基-10,13-二甲基-1,2,3,4,5,9,11,12,14,15,16,17-十二氫環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮(收率：14％)。第1號化合物：LC-MS:m/z＝416.2(MH+)；254nmUV下的純度＝99％。RMN1H(300MHz,DMSO-d6)-C14位β差向異構(gòu)體-δ5.83-5.72(m,1H),5.70(s,1H(C7)),5.1-5(m,2H),4.40-4.36(m,2H),4(t,2H),3.77-3.71(m,2H),2.80-2.60(m,1H),2.40-1.20(m,20H),0.82-0.74(m,6H).第2號化合物：LC-MS:m/z＝416.2(MH+)；254nmUV下的純度＝99％。RMN1H(300MHz,DMSO-D6)-C14位α差向異構(gòu)體-δ5.87-5.72(m,1H),5.48(s,1H(C7)),5.1-4.9(m,2H),4.40-4.36(m,2H),4(t,2H),3.77-3.71(m,2H),2.80-2.60(m,1H),2.44-1.23(m,20H),0.83(s,3H),0.47(s,3H).根據(jù)相同方案制備C14α和C14β差向異構(gòu)體混合物形式的第3至6號化合物。1純度LCMS,254nmUV實施例2：方案B；第7號化合物[1-[(2S,3R,5R,6Z,10R,13R,17S)-2,3-二羥基-6-甲氧基亞氨基-10,13-二甲基-1,2,3,4,5,9,11,12,16,17-十氫環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基]乙酮肟]和第19號化合物[(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-17-(N-(2-甲氧基乙氧基)-C-甲基-碳亞胺酰基)-6-甲氧基亞氨基-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-2,3,14-三醇]的制備第7號化合物的制備步驟1：化合物(a)[(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-6-甲氧基亞氨基-10,13-二甲基-17-[(1R,2R)-1,2,5-三羥基-1,5-二甲基-己基]-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-2,3,14-三醇]和化合物(b)[(2R,3R)-2-[(2S,3R,5R,6Z,10R,13R,17S)-2,3-二羥基-6-甲氧基亞氨基-10,13-二甲基-1,2,3,4,5,9,11,12,16,17-十氫環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基]-6-甲基-庚烷-2,3,6-三醇]的制備根據(jù)方案A的步驟3所述的同一操作方式，由20-羥基蛻皮甾酮和O-甲基羥胺鹽酸鹽制備788mg呈米色粉末的化合物(a)[(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-6-甲氧基亞氨基-10,13-二甲基-17-[(1R,2R)-1,2,5-三羥基-1,5-二甲基-己基]-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-2,3,14-三醇](收率：37％)。還可分離667mg(收率：32％)消除化合物(b)[(2R,3R)-2-[(2S,3R,5R,6Z,10R,13R,17S)-2,3-二羥基-6-甲氧基亞氨基-10,13-二甲基-1,2,3,4,5,9,11,12,16,17-十氫環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基]-6-甲基-庚烷-2,3,6-三醇]，并且還可分離34mg(收率：2％)消除化合物(c)[(2R,3R)-2-[(2S,3R,5R,6E,10R,13R,17S)-2,3-二羥基-6-甲氧基亞氨基-10,13-二甲基-1,2,3,4,5,9,11,12,16,17-十氫環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基]-6-甲基-庚烷-2,3,6-三醇]?；衔?a):LC-MS:m/z＝510.2(MH+)；254nmUV下的純度＝99％。RMN1H(300MHz,DMSO-d6)δ6.25(s,1H(C7)),4.45-4.35(m,3H),4.31-4.29(m,1H),4.14(s,1H),3.74-3.69(m,4H),3.6-3.5(m,1H),3.17-3.08(m,1H),2.87-2.75(m,1H),2.26-2.20(m,2H),2.05-1.1(m,15H),1.1-0.98(m,11H),0.73(s,6H).化合物(b):LC-MS:m/z＝492.2(MH+)；254nmUV下的純度＝99％。RMN1H(300MHz,DMSO-d6)δ6.04(s,1H),5.77(s,1H),4.45-4.30(m,2H),4.25(s,1H),4.11(s,1H),3.75-3.65(m,5H),3.63-3.55(m,1H),3.20-3.08(m,2H),2.17-1.90(m,3H),1.70-1.20(m,11H),1.15-0.93(m,14H),0.74(s,3H).化合物(c):LC-MS:m/z＝492.2(MH+)；254nmUV下的純度＝99％。RMN1H(300MHz,DMSO-d6)δ6.55(s,1H),5.81(s,1H),4.44-4.26(m,3H),4.09(s,1H),3.79-3.67(m,5H),3.62-3.54(m,1H),3.16-3.08(m,1H),2.30-1.90(m,4H),1.70-1.20(m,11H),1.15-0.92(m,14H),0.73(s,3H).從分離的化合物(b)出發(fā)：步驟2a:化合物(d):[1-[(2S,3R,5R,6Z,10R,13R,17S)-2,3-二羥基-6-甲氧基亞氨基-10,13-二甲基-1,2,3,4,5,9,11,12,16,17-十氫環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基]乙酮]的制備根據(jù)方案A的步驟2所述的同一操作方式，由化合物(b)制備267mg呈米色粉末的化合物(d)[1-[(2S,3R,5R,6Z,10R,13R,17S)-2,3-二羥基-6-甲氧基亞氨基-10,13-二甲基-1,2,3,4,5,9,11,12,16,17-十氫環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基]乙酮](收率：55％)?；衔?d)：LC-MS:m/z＝374.2(MH+)；254nmUV下的純度＝99％.RMN1H(300MHz,DMSO-d6)δ6.09(s,1H),5.81-5.75(m,1H),4.39-4.37(m,1H),4.30-4.26(m,1H),3.76(s,3H),3.72-3.68(m,1H),3.65-3.55(m,1H),3.2-3(m,2H),2.75-2.60(m,1H),2.29-2.10(m,5H),1.74-1.23(m,8H),0.74-0.70(m,6H).步驟3a:第7號化合物:[1-[(2S,3R,5R,6Z,10R,13R,17S)-2,3-二羥基-6-甲氧基亞氨基-10,13-二甲基-1,2,3,4,5,9,11,12,16,17-十氫環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基]乙酮肟]的制備根據(jù)方案A的步驟3所述的同一操作方式，由化合物(d)制備81mg呈白色粉末的-[(2S,3R,5R,6Z,10R,13R,17S)-2,3-二羥基-6-甲氧基亞氨基-10,13-二甲基-1,2,3,4,5,9,11,12,16,17-十氫環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基]乙酮肟(收率：71％)。第7號化合物：LC-MS:m/z＝389.2(MH+)；254nmUV下的純度＝99％.RMN1H(300MHz,DMSO-d6)δ10.53(s,1H),6.09(s,1H),5.04(s,1H),4.37(d,1H),4.30-4.26(m,1H),3.77-3.67(m,4H),3.65-3.55(m,1H),3.15-3.03(m,1H),2.80-2.65(m,2H),2.25-2.12(m,1H),2.05-1.99(m,1H),1.79(s,3H),1.74-1.20(m,8H),0.76-0.66(m,6H).從分離的化合物(a)(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-6-甲氧基亞氨基-10,13-二甲基-17-[(1R,2R)-1,2,5-三羥基-1,5-二甲基-己基]-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-2,3,14-三醇出發(fā)制備第19號化合物步驟2b：化合物(e):[1-[(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-6-甲氧基亞氨基-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基]乙酮]和(f):[1-[(2S,3R,5R,6Z,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-6-甲氧基亞氨基-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基]乙酮]的制備。根據(jù)方案A的步驟2所述的同一操作方式，從3.5g分離的化合物(a)[2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-6-甲氧基亞氨基-10,13-二甲基-17-[(1R,2R)-1,2,5-三羥基-1,5-二甲基-己基]-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-2,3,14-三醇]分離得到891mg呈米色粉末的化合物(e)[1-[(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-6-甲氧基亞氨基-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基]乙酮](收率：36％)以及23mg化合物(f)：[1-[(2S,3R,5R,6Z,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-6-甲氧基亞氨基-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基]乙酮](收率：0.9％)?；衔?e):LC-MS:m/z＝392.2(MH+)；254nmUV下的純度＝99％。RMN1H(300MHz,DMSO-d6)δ6.28(s,1H(C7)),4.74(s,1H),4.42-4.36(m,1H),4.32-4.28(m,1H),3.76-3.70(m,4H),3.68-3.52(m,1H),3.20-3.12(m,1H),2.90-2.76(m,1H),2.30-2.00(m,5H),1.90-1.50(m,8H),1.49-1.24(m,3H),0.72(s,3H),0.45(s,3H).化合物(f):LC-MS:m/z＝392.2(MH+)；254nmUV下的純度＝99％。RMN1H(300MHz,DMSO-d6)δ5.71(s,1H(C7)),4.45(s,1H),4.45-4.41(m,1H),4.26-4.23(m,1H),3.76-3.70(m,4H),3.65-3.55(m,1H),3.18-3.09(m,1H),2.90-2.80(m,1H),2.22-2.00(m,5H),1.88-1.22(m,11H),0.73(s,3H),0.47(s,3H).步驟3b：第19號化合物:[(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-17-(N-(2-甲氧基乙氧基)-C-甲基-碳亞胺?；?-6-甲氧基亞氨基-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-2,3,14-三醇]的制備根據(jù)方案A的步驟3所述的同一操作方式，由233mg化合物(e)制備46mg呈白色粉末的第19號化合物[(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-17-(N-(2-甲氧基乙氧基)-C-甲基-碳亞胺酰基)-6-甲氧基亞氨基-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-2,3,14-三醇](收率：48％)。第19號化合物：LC-MS:m/z＝465.2(MH+)；254nmUV下的純度＝99％。RMN1H(300MHz,DMSO-d6)δ6.28(s,1H(C7)),4.66(s,1H),4.44-4.38(m,1H),4.34-4.28(m,1H),4.10-4.01(m,2H),3.75-3.70(m,4H),3.65-3.45(m,3H),3.24(s,3H),2.98-2.76(m,2H),2.30-1.90(m,4H),1.80-1.24(m,12H),0.73(s,3H),0.49(s,3H).根據(jù)同一方案制備第21號化合物。1純度LCMS,254nmUV實施例3：方案C；第23號化合物的制備：(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17-(N-乙氧基-C-甲基-碳亞胺?；?-2,3,14-三羥基-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮根據(jù)方案A的步驟3所述的同一操作方式，由坡斯特甾酮(根據(jù)方案B的步驟2所述的同一操作方式由20-羥基蛻皮甾酮的鏈的氧化斷裂獲得)制備64mg呈白色粉末的(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17-(N-乙氧基-C-甲基-碳亞胺?；?-2,3,14-三羥基-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮(收率：22％)。第23號化合物：LC-MS:m/z＝406.2(MH+)；254nmUV下的純度＝93％。RMN1H(300MHz,CD3OD)δ5.82(s,1H(C7)),4.04(q,2H),3.97-3.92(m,1H),3.89-3.80(m,1H),3.22-3.10(m,1H),3.04(t,1H),2.43-1.55(m,15H),1.45-1.37(m,1H),1.21(t,3H),0.96(s,3H),0.64(s,3H).根據(jù)同一方案制備第24-36號化合物。1純度LCMS,254nmUV實施例4：方案D；第37號化合物的制備：N-(2,2-二氟乙基)-N-[1-[(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-6-甲氧基亞氨基-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基]乙基]呋喃-2-甲酰胺步驟1：第39號化合物：[(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-17-[1-(2,2-二氟乙基氨基)乙基]-6-甲氧基亞氨基-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-2,3,14-三醇]的制備將方法B的步驟2b中獲得的180mg(0.46mmol)化合物(e)[1-[(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-6-甲氧基亞氨基-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基]乙酮]溶于5mL甲醇中，并在反應(yīng)介質(zhì)中加入0.21mL(2.76mmol)2,2-二氟乙胺。通過加入足量濃醋酸將溶液的pH增加至6。然后按份加入31.8mg(0.506mmol)氰基硼氫化鈉，將獲得的懸浮液加熱回流20h。蒸發(fā)溶劑，將獲得的殘余物再放入20mL水中，并通過碳酸氫鈉飽和溶液將pH增加至8。用15mL丁醇萃取該水相兩次，丁醇相用硫酸鹽干燥，過濾，并蒸發(fā)，得到黃色固體，將其再加入30mL異丙醚并過濾，干燥后得到134mg呈黃色粉末狀的第39號化合物(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-17-[1-(2,2-二氟乙基氨基)乙基]-6-甲氧基亞氨基-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-2,3,14-三醇(收率：62％)。第39號化合物：LC-MS:m/z＝457.4(MH+)；254nmUV下的純度＝97％。RMN1H(300MHz,DMSO-d6)δ6.30-6.23(m,1H),5.95-5.70(m,1H),4.43-4.25(m,3H),3.72(s,3H),3.65-3.55(m,1H),3.42-3.32(m,1H),2.88-2.76(m,2H),2.29-2.23(m,1H),1.99-1.15(m,16H),1.05-0.82(m,3H),0.73(s,3H),0.61-0.53(m,3H).步驟2：第37號化合物N-(2,2-二氟乙基)-N-[1-[(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-6-甲氧基亞氨基-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基]乙基]呋喃-2-甲酰胺的制備：將134mg(0.285mmol)第39號化合物[(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-17-[1-(2,2-二氟乙基氨基)乙基]-6-甲氧基亞氨基-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-2,3,14-三醇]溶于2mLTHF，并在氬氣環(huán)境下向反應(yīng)介質(zhì)中加入52mg(0.854mmol)碳酸氫鈉。加入30μL(0.299mmol)糠酰氯，并在20℃下將反應(yīng)介質(zhì)振蕩20h。然后將溶液傾倒至5mL水中，并用10mL丁醇萃取兩次。蒸發(fā)丁醇相得到118mg固體，在硅膠柱上用快速色譜法(二氯甲烷/MeOH,95/5)純化，得到100mg呈白色粉末的第37號化合物：N-(2,2-二氟乙基)-N-[1-[(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-6-甲氧基亞氨基-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基]乙基]呋喃-2-甲酰胺(收率：60％)。第37號化合物：LC-MS:m/z＝551.3(MH+)；254nmUV下的純度＝93％.RMN1H(300MHz,DMSO-d6)δ7.87(s,1H),7.03(s,1H),6.64(s,1H),6.25(s,1H),4.58(d,1H),4.43-4.27(m,3H),3.95-3.83(m,1H),3.75-3.65(m,4H),3.63-3.49(m,2H),2.85-2.68(m,1H),2.31-2.18(m,1H),2.01-1(m,17H),0.73-0.15(m,6H).根據(jù)同一方案制備第38和40號化合物。1純度LCMS,254nmUV實施例5：方案E；第41號化合物的制備：2-甲氧基-N-(2-甲氧基乙基)-N-[1-[(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-10,13-二甲基-6-氧代-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基]乙基]乙酰胺步驟1：第42號化合物的制備：(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-17-[1-(2-甲氧基乙基氨基)乙基]-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮將5g(13.8mmol)坡斯特甾酮(根據(jù)方案B的步驟2所述的同一操作方式由20-羥基蛻皮甾酮的鏈的氧化斷裂獲得)溶于250mL甲醇，并逐滴加入7.2mL(83mmol)2-甲氧基乙胺。然后，通過加入濃醋酸將溶液的pH調(diào)節(jié)至pH6，并加入250mLTHF。按份加入0.954g氰基硼氫化鈉，使反應(yīng)介質(zhì)回流20h。蒸發(fā)溶劑，將獲得的粗產(chǎn)物加入100mL水中，通過加入飽和碳酸氫鈉溶液將pH調(diào)節(jié)至8。用80mL丁醇將介質(zhì)萃取三次，蒸發(fā)丁醇相，得到紅棕色沫狀物，向其中加入5mL乙酸乙酯，過濾后干燥，得到3.32g呈灰色粉末狀的第42號化合物：(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-17-[1-(2-甲氧基乙基氨基)乙基]-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮(收率：57％)。第42號化合物：LC-MS:m/z＝422.2(MH+)；254nmUV下的純度＝95％。RMN1H(300MHz,DMSO-d6)δ5.70-5.60(m,1H(C7)),4.80-4.62(m,1H),4.55-4.47(m,1H),4.43-4.35(m,1H),3.78-3.70(m,2H),3.68-3.50(m,3H),3.30-3.18(m,5H),3.10-2.91(m,1H),2.30-0.9(m,18H),0.82(s,3H),0.59(s,3H).RMN13C(75MHz,DMSO-d6)δ202.9(C6),120.5,82.9,66.7,58.1,46.2,37.8,30.5,23.9,6.2.步驟2：第41號化合物的制備：2-甲氧基-N-(2-甲氧基乙基)-N-[1-[(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-10,13-二甲基-6-氧代-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基]乙基]乙酰胺根據(jù)與實施例5的步驟2相同的操作方式，由第42號化合物獲得89mg呈橙色粉末狀的第41號化合物[2-甲氧基-N-(2-甲氧基乙基)-N-[1-[(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-10,13-二甲基-6-氧代-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基]乙基]乙酰胺](收率：58％)。第41號化合物：LC-MS:m/z＝494.4(MH+)；254nmUV下的純度＝94％。RMN1H(300MHz,DMSO-d6)δ5.63(s,1H(C7)),4.88-4.7(m,1H),4.5-4.35(m,2H),4.2-3.9(m,2H),3.76(s,1H),3.68-3.52(m,1H),3.5-3.3(m,4H),3.28-3.18(m,6H),3.08-2.9(m,1H),2.3-0.95(m,18H),0.88-0.75(m,3H),0.7-0.42(m,3H).根據(jù)同一方案制備第43至75號化合物。1純度LCMS,254nmUV實施例6：方案F；第76號化合物的制備：(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-17-[1-(2-甲氧基乙基(甲基)氨基)乙基]-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮將根據(jù)實施例5的步驟1所述的技術(shù)制備的155mg(0.368mmol)第42號化合物[(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-17-[1-(2-甲氧基乙基氨基)乙基]-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮]溶于2.5mLDMF中，并將61.8mg(0.735mmol)碳酸氫鈉以及0.034mL(0.552mmol)碘代甲烷加入反應(yīng)介質(zhì)。獲得的懸浮液在20℃下振蕩20h。然后將溶液傾倒至15mL水中，并用15mL丁醇萃取三次。蒸發(fā)丁醇相，得到220mg粉末，其在硅膠柱上通過快速色譜法(二氯甲烷/MeOH,95/5)純化，得到40mg呈白色粉末狀的第76號化合物:(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-17-[1-(2-甲氧基乙基(甲基)氨基)乙基]-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮的白色粉末(收率：25％)。第76號化合物：LC-MS:m/z＝436.3(MH+)；254nmUV下的純度＝99％。RMN1H(300MHz,DMSO-d6)δ5.61(s,1H(C7)),4.64(s,1H),4.47-4.34(m,2H),3.75(s,1H),3.67-3.50(m,1H),3.25-3.16(m,5H),3.05-2.85(m,1H),2.27-1.15(m,20H),0.90-0.70(m,6H),0.59(s,3H).根據(jù)同一方案制備第77至80號化合物。1純度LCMS,254nmUV實施例7：方案G；第81號化合物的制備：(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-10,13-二甲基-17-(2-嗎啉代乙?；?-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮步驟1：第102號化合物:(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17-(2-溴代乙?；?-2,3,14-三羥基-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮的制備將1g(2.76mmol)坡斯特甾酮(根據(jù)方案B的步驟2所述的同一操作方式由20-羥基蛻皮甾酮的鏈的氧化斷裂獲得)溶于20mL甲醇。將溶液冷卻至0℃，并逐滴加入0.284mL(5.52mmol)溴，在該溫度下降反應(yīng)介質(zhì)振蕩1h，然后在室溫下放置16h。將反應(yīng)介質(zhì)傾倒至50mL飽和碳酸氫鈉溶液中，用100mL乙酸乙酯萃取3次。用50mL飽和碳酸氫鈉洗滌有機相，然后用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾，并蒸發(fā)溶劑，得到833mg粉末，將其在加入30mL二氯甲烷中，過濾并干燥后，得到412mg呈黃色粉末狀的第102號化合物:2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17-(2-溴代乙?；?-2,3,14-三羥基-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮(收率：31％)。第102號化合物：LC-MS:m/z＝443.1(MH+)；254nmUV下的純度＝91％。RMN1H(300MHz,DMSO-d6)δ5.69-5.63(m,1H(C7)),5.08(s,1H),4.42-4.35(m,3H),4.33-4.22(m,1H),3.77(s,1H),3.66-3.58(m,1H),3.39(t,1H),3.10-2.95(m,1H),2.25-1.20(m,13H),0.83(s,3H),0.51(s,3H).步驟2：第81號化合物的制備：(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-10,13-二甲基-17-(2-嗎啉代乙?；?-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮將50mg(0.103mmol)第102號化合物[(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17-(2-溴代乙?；?-2,3,14-三羥基-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮]溶于1mLDMF中，并加入42.7mg碳酸鉀以及10.78μl(0.124mmol)嗎啉。在20℃下振蕩18h后，將反應(yīng)介質(zhì)傾倒至10mL水中，用15mL丁醇萃取兩次。蒸發(fā)有機相，得到71mg粉末，將其硅膠柱上用快速色譜法(二氯甲烷/MeOH,90/10)純化，得到28mg呈白色粉末狀的第81號化合物：(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-10,13-二甲基-17-(2-嗎啉代乙酰基)-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮(收率：60％)。第81號化合物：LC-MS:m/z＝448.4(MH+)；254nmUV下的純度＝99％。RMN1H(300MHz,DMSO-d6)δ5.65(s,1H(C7)),5.02(s,1H),4.45(d,1H),4.40-4.37(m,1H),3.77(s,1H),3.68-3.53(m,5H),3.34-3.24(m,4H),3.08-2.95(m,1H),2.45-1.17(m,16H),0.82(s,3H),0.48(s,3H).根據(jù)同一方案制備第82至94號化合物。1純度LCMS,254nmUV實施例8：方案H；第95號化合物的制備：(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17-(2-乙氧基乙?；?-2,3,14-三羥基-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮將實施例7中步驟1中制備的100mg(0.227mmol)第102號化合物[2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17-(2-溴代乙?；?-2,3,14-三羥基-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮]溶于2mL乙醇，逐滴加入0.102mL(0.272mmol)稀釋在1mL乙醇中的在乙醇中21％的乙醇鈉溶液，并將獲得的溶液回流30min。冷卻至20℃的反應(yīng)介質(zhì)傾倒至25mL水中，并用20mL定的丁醇萃取兩次。蒸發(fā)有機相，得到30mg油狀物，經(jīng)在硅膠柱上用快速色譜法(二氯甲烷/MeOH,95/5)純化，得到13.5mg呈黃色油狀的第95號化合物：(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17-(2-乙氧基乙?；?-2,3,14-三羥基-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮(收率：14％)。第95號化合物：LC-MS:m/z＝407.2(MH+)；254nmUV下的純度＝93％。RMN1H(300MHz,DMSO-d6)δ5.65-5.59(m,1H(C7)),4.96(s,1H),4.46(d,1H),4.41-4.36(m,1H),4.03(q,2H),3.77(s,1H),3.68-3.55(m,1H),3.08-2.90(m,1H),2.75-2.62(m,1H),2.3-2.15(m,2H),1.92-1.42(m,13H),1.18(t,3H),0.83(s,3H),0.58-0.49(m,3H).根據(jù)同一方案制備第96號化合物。1純度LCMS,254nmUV實施例9：方案I；第97號化合物的制備：(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-17-[1-羥基-2-(2-羥基乙基(甲基)氨基)乙基]-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮將根據(jù)實施例7的步驟2的方法獲得的157mg(0.360mmol)第87號化合物[(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-17-[2-(2-羥基乙基(甲基)氨基)乙?；鵠-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮]溶于7.5mL乙醇中，并按份加入21.14mg(0.559mmol)硼氫化鈉。在20℃振蕩16h后，將反應(yīng)介質(zhì)傾倒至20mL水中，并用15mL丁醇萃取三次。蒸發(fā)有機相，得到粉末，經(jīng)在硅膠柱上用快速色譜法(二氯甲烷/MeOH/NH4OH,85/14/1)純化，得到96mg呈白色粉末狀的第97號化合物：(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-17-[1-羥基-2-(2-羥基乙基(甲基)氨基)乙基]-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮(收率：60％)。第97號化合物：LC-MS:m/z＝438.2(MH+)；254nmUV下的純度＝99％。RMN1H(300MHz,DMSO-d6)δ5.6(s,1H(C7)),5.32-5.2(m,2H),4.77(s,1H),4.47(d,1H),4.42-4.38(m,1H),3.92-3.57(m,4H),3.3-2.95(m,4H),2.82(s,3H),2.31-1.18(m,16H),0.85(s,3H),0.69(s,3H).RMN13C(75MHz,DMSO-d6)δ203.2,164.9,121.0,82.8,66.9,59.0,55.6,50.6,46.9,40.7,37,34,31.9,31.1,30.3,24.5,23.2,20.4,16.3.根據(jù)同一方案制備第98至100號化合物。1純度LCMS,254nmUV實施例10：方案J；第101號化合物的制備：(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-6-甲氧基亞氨基-17-(N-甲氧基-C-(嗎啉代甲基)碳亞胺?；?-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-2,3,14-三醇將30μl(0.301mmol)甲氧基胺鹽酸鹽溶于0.6mL吡啶，并按份加入實施例7的步驟2中制備的136mg(0.301mmol)第81號化合物[(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-三羥基-10,13-二甲基-17-(2-嗎啉代乙?；?-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-6-酮]。在20℃振蕩36h后，將反應(yīng)介質(zhì)加至10mL二氯甲烷中，該溶液在鹽水中洗滌兩次，用硫酸鈉干燥，過濾，并蒸發(fā)，得到粉末，經(jīng)在硅膠柱上用快速色譜法(二氯甲烷/MeOH,90/10)純化，得到81mg呈黃色粉末狀的第101號化合物：(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-6-甲氧基亞氨基-17-(N-甲氧基-C-(嗎啉代甲基)碳亞胺酰基)-10,13-二甲基-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-十氫-1H-環(huán)戊二烯并[a]菲-2,3,14-三醇(收率：53％)。第101號化合物：LC-MS:m/z＝506.2(MH+)；254nmUV下的純度＝99％。RMN1H(300MHz,DMSO-d6)δC6位構(gòu)象異構(gòu)體(Z)和(E)的混合物：6.28(s,0.45H(C7-構(gòu)象異構(gòu)體E),5.72(s,0.55H(C7-構(gòu)象異構(gòu)體Z),4.62(s,0.45H-構(gòu)象異構(gòu)體E),4.53(s,0.55H-構(gòu)象異構(gòu)體Z),4.47-4.35(m,1H),4.33-4.21(m,1H),3.77-3.70(m,7H),3.60-3.48(m,5H),3.16-3.06(m,1H),2.90-2.70(m,2H),2.45-1.20(m,18H),0.72(s,3H),0.64-0.57(m,3H).20-羥基蛻皮甾酮的篩選級聯(lián)和生物效應(yīng)的表征篩選試驗的發(fā)展是從文獻工作開始，并基于肌少癥的病理特征。在病理生理學(xué)水平，該疾病的特征在于蛋白質(zhì)合成的減少和蛋白水解的增加。因此，應(yīng)針對與這兩種現(xiàn)象相關(guān)的分子因素來篩選未來藥物的發(fā)展。在細胞水平上，在來自C2C12鼠系的肌細胞培養(yǎng)物上，Gorelick-Feldmanetal.(2008)示出用植物蛻皮激素處理增加平均20％的蛋白合成。早期開展的研究依賴于在參考產(chǎn)物(IGF-1和20-羥基蛻皮甾酮或20E)的存在下由Gorelick-Feldman描述的培養(yǎng)和處理條件。進行氚標記亮氨酸摻入這些細胞的測量，以評價蛋白質(zhì)的從頭合成。這些初步結(jié)果允許確定用于觀察植物蛻皮激素對蛋白質(zhì)合成的影響的最佳順序是將細胞分化5天，然后在IGF-1或20E的存在下將氚標記亮氨酸放置2h30。文獻分析表明，IGF-1等分子僅使蛋白質(zhì)合成增加20％，同時以更持續(xù)的方式激活該信號傳導(dǎo)途徑的靶并能夠達到約200％的刺激[Kazietal.,2010]。這些靶包括蛋白例如Akt或S6激酶的激活磷酸化。另一方面，在相同的C2C12細胞系統(tǒng)中，Zubeldiaetal.(2012)分析了凋亡和蛋白水解的現(xiàn)象。在他們的研究中，他們特別報道了含有植物蛻皮激素如土克甾酮或20E的植物提取物在分化的C2C12細胞處理24小時后能夠抑制肌生成抑制素和半胱天冬酶3的基因表達4倍和2倍[Zubeldiaetal.,2012]。在多項實驗中，其中分化成肌管的C2C12細胞在IGF-1或20E的存在下孵育2h30或6h，開展了兩項篩選試驗。因此，研究了S6激酶蛋白的磷酸化和肌生成抑制素基因的表達，以便通過生長激素或蛻皮激素確定它們的調(diào)節(jié)，并從統(tǒng)計學(xué)角度對這些調(diào)節(jié)特征化。方案抑制C2C12細胞中肌生成抑制素的表達：將C2C12成肌細胞(ATCCCRL-1772)以每孔30000個細胞的密度接種在24孔板中，并在含有4.5g/L葡萄糖并補充有胎牛血清(10％)和抗生素(青霉素和鏈霉素)的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)。48小時后，通過部分血清剝奪(2％代替10％)5天誘導(dǎo)成肌細胞分化。然后將細胞置于缺乏葡萄糖的培養(yǎng)基(含有1g/L葡萄糖的DMEM)中，并在待測試分子或參照物(IGF-1100ng/mL或20E10μM)的存在下去除血清6H。在實驗結(jié)束時，使用基于苯酚和氯仿的常規(guī)方法提取信使RNA(mRNA)。簡言之，將細胞在含有強酸和苯酚的trizol溶液(SigmaT9424)中裂解。通過加入氯仿，然后離心，將mRNA從蛋白質(zhì)中分離。然后將其在異丙醇中沉淀，然后以1μg/μL的濃度懸浮在不含RNA酶和DNA酶的超純水中。然后根據(jù)供應(yīng)商(AppliedBiosystems4368814)給出的方案，在引物和核苷酸混合物的存在下通過AMV酶經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄將1μgmRNA轉(zhuǎn)錄為互補DNA。通過在定量條件下由聚合酶引發(fā)的通常稱為PCR的鏈式反應(yīng)研究基因表達，其精確命名為qPCR。qPCR在7900HTFastReal-TimePCR檢測系統(tǒng)(AppliedBiosystems)上進行。編程條件是標準的，由以下組成：在95℃下15min的1個循環(huán)，隨后在95℃下15s和在60℃下1min的40個循環(huán)，以及在60℃和95℃之間的熔解曲線階段結(jié)束。分析的樣品包含全部100ngcDNA，包括酶、寡核苷酸混合物和嵌入劑(sybergreen或SYBRgreen)的qPCR緩沖液，以及對所研究基因具有特異性的引物對，其在兩個外顯子序列之間戰(zhàn)略性選擇，并且最終濃度為200nM。熒光探針與雙鏈DNA結(jié)合，并且一旦與DNA連接就發(fā)熒光。熒光閾值由機器的程序建立。當(dāng)DNA的量允許熒光探針超過該閾值時，獲得對于“循環(huán)閾值”或閾值循環(huán)的稱為“Ct“的PCR循環(huán)數(shù)。該值是基于用于相對地量化DNA的計算。建立了樣品的起始DNA量與未經(jīng)歷處理的對照(即R＝2-(Ct樣品-Ct對照))的量之間的比率R，并且該測量相對于已知的當(dāng)家基因(gèneménage)以便不受治療調(diào)節(jié)(即R＝2-ΔΔCt)。使用的引物在下表中給出：表3：用于評價基因表達變化的引物S6激酶的磷酸化：將C2C12成肌細胞(ATCCCRL-1772)以每孔170000個細胞的密度接種在6孔板中，并在含有4.5g/L葡萄糖并補充有胎牛血清(10％)和抗生素(青霉素和鏈霉素)的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)。48小時后，通過部分血清剝奪(2％代替10％)5天誘導(dǎo)成肌細胞分化。然后將細胞置于缺乏葡萄糖的培養(yǎng)基(含有1g/L葡萄糖的DMEM)中，并在待測試分子或參照物(IGF-1100ng/mL或20E10μM)的存在下除去血清2h。在實驗結(jié)束時，將細胞在補充有市售的抗蛋白酶混合物(Roche05056489001)的市售裂解緩沖液(InvitrogenFNN0011)中裂解。離心后，保留含有可溶性蛋白的細胞質(zhì)級分，并使用商用試劑盒(Biorad500-0114)測定蛋白質(zhì)的濃度，該試劑盒的原理基于Lowry方法的化合物測定。S6激酶磷酸化測定使用市售的ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)(細胞信號傳導(dǎo)7063)進行。簡言之，將50μg蛋白質(zhì)裂解物沉積在96孔微孔板的孔中，并在4℃下用pS6激酶抗體蘇氨酸389的特異性抗體溶液孵育過夜?？乖c孔底部的結(jié)合是靜電地進行的。然后將待測定的抗體溶液(pS6KT389)在37℃下在孔中孵育2小時?？贵w特異性結(jié)合在抗原上。然后洗滌孔以用洗滌緩沖液除去過量的待測定抗原的特異性一級抗體。第三步在于固定檢測抗體。在37℃下將檢測抗體溶液在孔中孵育1小時。然后洗滌孔以除去過量的檢測抗體。應(yīng)當(dāng)注意，檢測抗體與酶結(jié)合，所述酶在其底物的存在下將其轉(zhuǎn)化為通過出現(xiàn)著色可檢測和可測量的反應(yīng)產(chǎn)物。最后一步在于顯影所固定的抗體。在37℃和黑暗中將含有酶的底物的顯影溶液(在我們的情況下，是TMB(3,3′,5,5′-四甲基聯(lián)苯胺)孵育30分鐘。底物中藍色的出現(xiàn)表明存在待測定的抗體。為了避免任何飽和現(xiàn)象，加入終止液(通常含有氫氧化鈉)并引起顏色變化，其由藍色變?yōu)辄S色。其強度與存在的酶的量成比例，因此與所研究的抗體的濃度成比例。信號的強度通過分光光度法在450nm的波長下測量。評價在經(jīng)受高脂餐食的小鼠模型中分子的作用將作為比較化合物的20E和根據(jù)本發(fā)明的化合物(第51和93號)以5mg/kg體重的劑量口服投予12周齡的C57BL/6J小鼠，所述小鼠經(jīng)受了高脂餐食6周。評價化合物對比目魚肌的蛋白質(zhì)的重量和量以及參與肌肉生成的基因的轉(zhuǎn)錄物的影響。肌生成是肌肉組織形成的過程，由多個肌源轉(zhuǎn)錄因子控制，所述多個肌源轉(zhuǎn)錄因子作為信號級聯(lián)的終末效應(yīng)子參與并產(chǎn)生涉及發(fā)育的各個階段的轉(zhuǎn)錄物。轉(zhuǎn)錄因子的作用已經(jīng)在不同期刊(Sabourin和Rudnicki2000)和(LeGrand和Rudnicki2007)中有很好的描述。Pax7蛋白(配對盒蛋白7)保持處于靜止期的衛(wèi)星細胞群，并且與Myf5(肌源性因子5)在激活的成肌細胞的擴增中起作用。MyoD蛋白(成肌細胞測定蛋白)似乎決定了激活的成肌細胞的分化潛力，并與肌細胞生成素和MEF2蛋白(肌細胞增強因子2)協(xié)作來控制和引起分化。最后，MRF4(肌肉特異性調(diào)節(jié)因子4)是肥大所需的，盡管它可能起其他作用。顯然，這些轉(zhuǎn)錄因子不單獨作用，而是存在于控制肌生成的每個階段的復(fù)雜信號級聯(lián)中(Knight和Kothary,2011)。通過首先使用FastPrep技術(shù)在0.1NNaOH溶液中裂解攝取的肌肉來測定蛋白質(zhì)的量。通過由Lowry方法衍生的比色測定法進行蛋白質(zhì)的定量。為了進行基因表達分析，在Trizol溶液(500μl)中將肌肉組織勻漿，并使用苯酚/氯仿方法提取和純化RNA。使用寡核苷酸(dT)作為引物和如制造商描述的酶AMV逆轉(zhuǎn)錄酶(AppliedBiosystems4368814)，將1pg量的RNA用作cDNA第一鏈合成的模板。然后使用裝配有PCR實時快速檢測系統(tǒng)和標準qPCR程序(95℃15min的1個循環(huán)、95℃15s和60℃1min的40個循環(huán)，對于Sybergreen探針的60-95℃解鏈曲線)的7900HT裝置(AppliedBiosystems)來進行Q-PCR。在SybergreenSYBR主混合物(AppliedBiosystems)中進行實驗，該混合物含有100ngcDNA樣品和一組在2個不同外顯子水平結(jié)合的引物，終濃度為200nM。處理之間基因表達的相對差異表示為與對照組相比循環(huán)時間數(shù)目[Ct]的增加或減少。每個基因的[Ct]值已經(jīng)用β肌動蛋白基因標準化。大鼠中分子的口服藥代動力學(xué)使用雄性Wistar大鼠(CharlesRiver)通過口服評價化合物的藥代動力學(xué)。作為比較化合物的20E以50mg/kg體重的劑量投予。根據(jù)本發(fā)明的新化合物以10mg/kg體重的劑量以4至6種產(chǎn)品的混合物的形式投予。給藥后，在t＝0.25h、0.5小時、1h、3h、6h和8h時從尾部取血。離心血液樣品并取出血漿。血漿樣品的測定允許確定藥物動力學(xué)參數(shù)，即Cmax(其對應(yīng)于分子給藥后觀察到的最大濃度)，Tmax(其為在分子給藥后達到最大濃度所需的時間)和AUC：在不同采樣時間下由不同濃度的化合物組成的曲線下面積。結(jié)果·對肌生成抑制素的表達的影響表4：對肌生成抑制素表達的影響。結(jié)果表示為與涉及對照細胞中表達的化合物接觸的細胞中肌生成抑制素的基因表達的百分比。A表示小于70％的百分比，B表示介于71％和85％之間的百分比。以10μM的濃度測試化合物。以下38種化合物：4、5、7、21、25、27-29、31-33、38、41、43、46、47、51-54、62-65、67、68、71、75、76、79、81、86、89、92-94、99和101非常顯著地抑制肌肉細胞中肌生成抑制素的表達。以下化合物：19、23、30、35-37、48、56、57、60、73、83、85、88和91顯著抑制肌肉細胞中肌生成抑制素的表達?！ねㄟ^S6K1磷酸化對蛋白質(zhì)合成的影響。表5：對蛋白質(zhì)合成的影響。結(jié)果表示為肌肉細胞中S6K磷酸化的增加百分比。A表示大于130％的值，B表示介于110％和129％之間的值。以10μM的濃度測試化合物。編號蛋白質(zhì)合成編號蛋白質(zhì)合成28A67A32B76B41B81B42A86A43B88B46B89A51B91B52B92B62A93A63B94A以下8種化合物：28、42、62、67、86、89、93和94在等同于IGF-1(130％-140％)的水平下非常顯著地刺激S6K1的磷酸化。以下12種化合物：32、41、43、46、51、52、63、76、81、88、91和92在等同于20E的水平(120％)的水平上顯著地刺激S6K1的磷酸化?！そ?jīng)受高脂餐食的小鼠模型中分子的研究通過評價以5mg/kg體重的劑量對經(jīng)受高脂餐食6周的C57BL/6小鼠口服投予的作為比較化合物的20E和根據(jù)本發(fā)明的分子(第51和93號)的作用來進行體內(nèi)研究。評價了分子對比目魚肌的蛋白質(zhì)的重量和量以及參與肌生成的基因的轉(zhuǎn)錄物的影響。作為比較化合物的20E和根據(jù)本發(fā)明第51和93號的化合物對肌肉重量的影響在圖3A中示出，20E和第51和93號化合物對比目魚肌的蛋白質(zhì)的量的影響在圖3B中示出。以5mg/kg投予的20E和化合物都導(dǎo)致與對照組相比增加了比目魚肌的蛋白質(zhì)的重量和量。根據(jù)本發(fā)明的化合物顯示出與20E一樣大的效率。甚至注意到用第93號化合物時蛋白質(zhì)含量顯著增加。作為比較化合物的20E和施用的根據(jù)本發(fā)明的第51和93號化合物對比目魚肌的肌生成抑制素的轉(zhuǎn)錄物的影響示于圖4中。20E和第51和93號化合物類似地抑制了比目魚肌中肌生成抑制素的表達。這些分子還在C2C12細胞系的體外研究中抑制肌生成抑制素轉(zhuǎn)錄物，如上表4所示。作為比較化合物的20E和根據(jù)本發(fā)明的第51和93號化合物對MyoD和肌細胞生成素的轉(zhuǎn)錄物(參與比目魚肌的肌生成的基因)的影響分別示于圖5A和5B中。20E和第51和93號化合物導(dǎo)致決定分化潛能的MyoD和參與肌細胞增殖的Myf5的基因轉(zhuǎn)錄物的增加。它們還導(dǎo)致參與肌細胞早期分化的肌細胞生成素基因的轉(zhuǎn)錄物的增加?！ご笫笾蟹肿拥乃幋鷦恿W(xué)研究在大鼠中通過口服給藥評價20E和根據(jù)本發(fā)明的化合物的藥代動力學(xué)，在化合物的情況下以10mg/kg的劑量給藥，在20E的情況下以50mg/kg的劑量給藥。表6：在Wistar大鼠中測試的20E和化合物的主要藥代動力學(xué)參數(shù)(Tmax、Cmax和AUC)考慮到比根據(jù)本發(fā)明的化合物(10mg/kg)高5倍的劑量(50mg/kg)，暴露系數(shù)Cexp[Cexp＝(Dose20E×AUC化合物):(劑量化合物×AUC20E)]表明所有測試化合物相對于20E的藥代動力學(xué)曲線的改善。因此，在大鼠中的該研究顯示第31、46、51和93號化合物具有與20E相比更好的血漿暴露?！た偨Y(jié)另外，圖6示出的表格展示了在肌生成抑制素基因表達和蛋白質(zhì)合成的分析實驗中獲得的本發(fā)明化合物的結(jié)果。關(guān)于肌生成抑制素的基因表達，結(jié)果表示為與涉及在對照細胞中表達的化合物接觸的細胞中肌生成抑制素的基因表達的百分比。A表示小于70％的百分比，B表示介于71％和85％之間的百分比。關(guān)于蛋白質(zhì)合成的分析，結(jié)果表示為肌細胞中S6K磷酸化增加的百分比。A表示大于130％的值，B表示介于110％和129％之間的值。表7：圖6所示結(jié)果的總結(jié)最有吸引力的產(chǎn)品是AA類或AB類，即在蛋白質(zhì)合成中與A類或B類相關(guān)的肌生成抑制素上的其基因表達的A類。參考文獻ArounleutP,BialekP,LiangLF,etal.2013.Amyostatininhibitor(propeptide-Fc)increasesmusclemassandmusclefibersizeinagedmicebutdoesnotincreasebonedensityorbonestrength.ExperGerontol48:898-904.Aubertin-LeheudreM,LordC,KhalilA,DionneIJ.2007.Sixmonthsofisoflavonesupplementincreasesfat-freemassinobese-sarcopenicpostmenopausalwomen:arandomizeddouble-blindcontrolledtrial.EurJClinNutr61:1442-1444.AusselC,WoelffleE,LemoigneP,DepaillerL,BouillanneO.2013.Unenouvellestratégienutritionnellepourluttercontreladénutritionetlasarcopénie:lerégimeprotéiquepulsé.CahiersNutritionDiététique48:33-40.AzizovAP,SeifullaRD,AnkudinovaIA,Kondrat′evaII,BorisovaIG.1998.Effectoftheantioxidantseltonandlevetononthephysicalworkcapacityofathletes.EkspKlinFarmakol61(1):60-62.BaptistaIL,LealML,ArtioliGG,etal.2010.Leucineattenuatesskeletalmusclewastingviainhibitionofubiquitinligases.MuscleNerve41(6):800-808.BáthoriM,TóthN,HunyadiA,MárkiA,ZadorE.(2008).Phytoecdysteroidsandanabolic-androgenicsteroids–StructureandeffectsonHumans.CurrentMedicinalChemistry15:75-91.BennettBT,MohamedJS,AlwaySE.2013.Effectsofresveratrolontherecoveryofmusclemassfollowingdisuseintheplantarismuscleofagedrats.PLoSOne8(12):e83518.BoirieY,GachonP,BeaufrèreB.1997.Splanchnicandwholebodyleucinekineticsinyoungandelderlymen.AmJClinNutr.65:489-495.BonnefoyM,ConstansT,FerryM.2000.DénutritiondusujetInfluencedelanutritionetdel′activitéphysiquesurlemuscleaugrandPresseMed29:2177-2182.BonnefoyM.2008.InterventionspourrestaurerlamassemusculairechezlesujetNutrClinMetab22:80-83.BuehringB,BinkleyN.2013.Myostatin-theholygrailformuscle,bone,andfat？CurrOsteoporosRep11(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