1.一種水葫蘆葉蛋白的提取的方法,其特征在于,該方法包括以下步驟:
(1)原料預(yù)處理
將新鮮水葫蘆葉用自來水清洗數(shù)次,撈去雜物,瀝去水分;在4℃冰箱中預(yù)冷lh將95%乙醇放在-20℃冰箱中預(yù)冷至-20℃;
(2)粗蛋白的制取
將預(yù)冷的水葫蘆葉片放入打漿機(jī)中,迅速加入4倍重量的已預(yù)冷至-20℃的95%的食用乙醇,打漿30min,后將己打成漿狀的水葫蘆乙醇溶液過100目篩,除去粗纖維,得到的蛋白質(zhì)乙醇混合物,再經(jīng)濾紙過濾,濾紙上得到的便是水葫蘆葉粗蛋白,再將其反復(fù)醇洗至無綠色為止;
整個(gè)制取過程在-5℃的冰箱中進(jìn)行,得到的粗蛋白放在5℃的冰箱中自然揮發(fā)干燥;
(3)蛋白的純化
精確稱取經(jīng)低溫醇洗過的水葫蘆葉粗蛋白粉,按液料比25:l(V/W)分散于食鹽水中,用NaOH溶液調(diào)pH至12.0,于40℃下攪拌30min,在3500r/min下離心20min,殘?jiān)蒙戏ㄔ偬崛∫淮?合并兩次提取的上清液,取上清液加入硫酸銨至質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%,用HCl溶液調(diào)pH至5.5,有大量蛋白質(zhì)析出,過濾,將濾紙上的蛋白質(zhì)重新用pH12.0的NaoH溶液溶解,將此溶液裝入透析袋,置于蒸餾水中,于5℃下透析,每6h換水一次,透析三天后,將透析液倒出,加入-20℃的乙醇至乙醇含量為80%,置于-5℃下沉淀lh,后經(jīng)濾紙過濾,收集沉淀;
(4)干燥:將收集的沉淀采用低溫真空干燥,得水葫蘆分離葉蛋白。
2.根據(jù)權(quán)利要求1 所述的一種水葫蘆葉蛋白的提取的方法,其特征在于,所述步驟(3)中的食鹽水是0.4mol/L的NaCl溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1 所述的一種水葫蘆葉蛋白的提取的方法,其特征在于,所述步驟(3)中的NaOH溶液是0.5mol/L的NaOH溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1 所述的一種水葫蘆葉蛋白的提取的方法,其特征在于,所述步驟(3)中的HCl溶液是0.5mol/L的HCl溶液。