本發(fā)明涉及農(nóng)作物深加工領(lǐng)域，尤其涉及一種水葫蘆葉蛋白的提取的方法。

背景技術(shù)：

水葫蘆是單子葉植物，雨久花科鳳眼蘭屬。原產(chǎn)南美洲，在氣溫13℃開始繁殖，氣溫39℃時(shí)仍能繁殖，是世界上生長、繁殖最快的水草之一。水葫蘆已在我國南方17 個(gè)省( 市、自治區(qū)) 泛濫成災(zāi)，是目前世界上危害最嚴(yán)重的多年生水生雜草之一。據(jù)報(bào)道，我國每年人工打撈水葫蘆花費(fèi)至少超過1 億元。

水葫蘆的生長相當(dāng)迅速，其倍增長周期為7天左右，據(jù)報(bào)道其最高產(chǎn)量可達(dá)到日產(chǎn)1800kg/公頃(干重)左右，一般情況下，水肥充足時(shí)，其年畝產(chǎn)干物質(zhì)量達(dá)5000一7500kg，水肥不足時(shí)，亦有1000一200 kg ，甚至可達(dá)到畝年產(chǎn)量60噸以上，而且水葫蘆的蛋白質(zhì)含量高，粗蛋白質(zhì)含量一般占其鮮重的1.2%左右，是其主要的有機(jī)營養(yǎng)成分以畝產(chǎn)5萬公斤的新鮮水葫蘆計(jì)算，能生產(chǎn)出600公斤的葉蛋白，如果能開發(fā)利用，其產(chǎn)生的經(jīng)濟(jì)效益非常高，一般農(nóng)作物包括大豆難以與之匹敵。

水葫蘆所含的有機(jī)營養(yǎng)成分中，蛋白質(zhì)的含量高，為19%一26%，它最具開發(fā)潛力，在水葫蘆的開發(fā)利用研究中應(yīng)該將其作為重點(diǎn)。然而，目前有關(guān)如何利用水葫蘆為原料生產(chǎn)蛋白的研究尚少見報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是，克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種水葫蘆葉蛋白的提取的方法。

為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案：

一種水葫蘆葉蛋白的提取的方法，其特征在于，操作步驟如下：

（1）原料預(yù)處理

將新鮮水葫蘆葉用自來水清洗數(shù)次，撈去雜物，瀝去水分;在4℃冰箱中預(yù)冷lh將95%乙醇放在-20℃冰箱中預(yù)冷至-20℃；

（2）粗蛋白的制取

將預(yù)冷的水葫蘆葉片放入打漿機(jī)中，迅速加入4倍重量的已預(yù)冷至-20℃的95%的食用乙醇，打漿30min，后將己打成漿狀的水葫蘆乙醇溶液過100目篩，除去粗纖維，得到的蛋白質(zhì)乙醇混合物，再經(jīng)濾紙過濾，濾紙上得到的便是水葫蘆葉粗蛋白，再將其反復(fù)醇洗至無綠色為止；

整個(gè)制取過程在-5℃的冰箱中進(jìn)行，得到的粗蛋白放在5℃的冰箱中自然揮發(fā)干燥，測(cè)粗蛋白中各組分的含量。

（3）蛋白的純化

精確稱取經(jīng)低溫醇洗過的水葫蘆葉粗蛋白粉，按液料比25:l(V/W)分散于食鹽水中，用NaOH溶液調(diào)pH至12.0，于40℃下攪拌30min，在3500r/min下離心20min，殘?jiān)蒙戏ㄔ偬崛∫淮危喜纱翁崛〉纳锨逡?，取上清液加入硫酸銨至質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%，用HCl溶液調(diào)pH至5.5，有大量蛋白質(zhì)析出，過濾，將濾紙上的蛋白質(zhì)重新用pH12.0的NaoH溶液溶解，將此溶液裝入透析袋，置于蒸餾水中，于5℃下透析，每6h換水一次，透析三天后，將透析液倒出，加入-20℃的乙醇至乙醇含量為80%，置于-5℃下沉淀lh，后經(jīng)濾紙過濾，收集沉淀；

（4）干燥：將收集的沉淀采用低溫真空干燥，得水葫蘆分離葉蛋白。

步驟（3）中的食鹽水是0.4mol/L的NaCl溶液。

步驟（3）中的NaOH溶液是0.5mol/L的NaOH溶液。

步驟（3）中的HCl溶液是0.5mol/L的HCl溶液。

本發(fā)明的制備工藝得到的水葫蘆葉蛋白含量高達(dá)91.4%，屬于優(yōu)質(zhì)的植物蛋白源。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容作進(jìn)一步詳細(xì)的描述。

實(shí)施例1

（1）原料預(yù)處理

將新鮮水葫蘆葉用自來水清洗數(shù)次，撈去雜物，瀝去水分;在4℃冰箱中預(yù)冷lh將95%乙醇放在-20℃冰箱中預(yù)冷至-20℃；

（2）粗蛋白的制取

將預(yù)冷的水葫蘆葉片200g放入打漿機(jī)中，迅速加入4倍重量的已預(yù)冷至-20℃的95%的食用乙醇，打漿30min，后將己打成漿狀的水葫蘆乙醇溶液過100目篩，除去粗纖維，得到的蛋白質(zhì)乙醇混合物，再經(jīng)濾紙過濾，濾紙上得到的便是水葫蘆葉粗蛋白，再將其反復(fù)醇洗至無綠色為止；

整個(gè)制取過程在-5℃的冰箱中進(jìn)行，得到的粗蛋白放在5℃的冰箱中自然揮發(fā)干燥，得4.98g水葫蘆粗蛋白，經(jīng)檢測(cè)蛋白含量為41.61%，蛋白質(zhì)的得率為82.1%。

（3）蛋白的純化

精確2.00g稱取經(jīng)低溫醇洗過的水葫蘆葉粗蛋白粉，按液料比25:l(V/W)分散于0.4mol/L食鹽水中，用0.5mol/L NaOH溶液調(diào)pH至12.0，于40℃下攪拌30min，在3500r/min下離心20min，殘?jiān)蒙戏ㄔ偬崛∫淮?，合并兩次提取的上清液，取上清液加入硫酸銨至質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%，用0.5mol/L HCl溶液調(diào)pH至5.5，有大量蛋白質(zhì)析出，過濾，將濾紙上的蛋白質(zhì)重新用pH12.0的NaoH溶液溶解，將此溶液裝入透析袋，置于蒸餾水中，于5℃下透析，每6h換水一次，透析三天后，將透析液倒出，加入-20℃的乙醇至乙醇含量為80%，置于-5℃下沉淀lh，后經(jīng)濾紙過濾，收集沉淀；

（4）干燥：將收集的沉淀采用低溫真空干燥，得水葫蘆分離葉蛋白0.5893g。

經(jīng)檢測(cè)蛋白質(zhì)純度為91.2%(干基)。