本發(fā)明涉及藥物化學領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及糖肽類抗生素的還原烷基化方法。

背景技術(shù)：

糖肽類抗生素是由各種各樣的微生物產(chǎn)生的具有復雜的多環(huán)肽結(jié)構(gòu)的抗生素，提供對于大部分革蘭氏陽性菌有效的抗菌藥。近年來，市場上出現(xiàn)多個糖肽類抗生素，例如萬古霉素、替考拉寧、奧利萬星等。

已經(jīng)對天然存在的糖肽類抗生素進行了許多修飾，一個重要的修飾是將糖肽中的反應性氨基進行還原烷基化。例如奧利萬星即是由A82846B(也稱為氯東方菌素A，Chloroorienticin A)的N⁴位氨基被4-(4-氯苯基)苯甲醛還原烷基化獲得。

奧利萬星由Eli Lilly&Co公司原研，現(xiàn)由Medicines公司開發(fā)的一種糖肽類抗生素，其結(jié)構(gòu)如下式所示。美國FDA于2014年8月批準該藥用于治療急性皮膚和皮膚結(jié)構(gòu)感染(ABSSSI)。

奧利萬星由A82846B(也稱為氯東方菌素A，Chloroorienticin A)與側(cè)鏈化合物4-(4-氯苯基)苯甲醛反應制得：

該步反應為A82846B與4-(4-氯苯基)苯甲醛發(fā)生還原胺化反應，反應包括兩個步驟：1)A82846B二糖上的氨基(N⁴位)與4-(4-氯苯基)苯甲醛的醛基形成希夫堿；2)該希夫堿被還原成所需結(jié)構(gòu)。

A82846B除了N⁴位的氨基，還存在單糖上的氨基(N⁶位)和亮氨酸上的氨基(N¹位)可與4-(4-氯苯基)苯甲醛發(fā)生反應，生成N⁶-單取代、N¹-單取代、N⁴,N⁶-二取代、N⁴,N¹-二取代或N⁴,N⁶,N¹-三取代的副產(chǎn)物。因此，奧利萬星的制備中，希望該步反應有良好的選擇性，使反應集中或者僅發(fā)生在N⁴位的氨基。

現(xiàn)有技術(shù)中，CN1119649A(實施例4)公開了用氰基硼氫化鈉作為還原劑的方法。該方法收率低，存在較多副產(chǎn)物；氰基硼氫化鈉與酸或水接觸會生成劇毒的氰化物，不滿足工業(yè)生產(chǎn)和環(huán)保標準。

CN1244802A公開了用氰基硼氫化鈉或吡啶-硼烷配合物作為還原劑，同時加入可溶性銅化合物以形成銅配合物的方法。經(jīng)試驗發(fā)現(xiàn)，氰基硼氫化鈉或吡啶-硼烷作為還原劑產(chǎn)物收率低，并且有較多N⁴,N⁶-二取代副產(chǎn)物生成，不能達到該專利公開的技術(shù)效果。

CN1432023A公開了氰基硼氫化鈉作為還原劑，加入二異丙基乙基胺和三氟乙酸的方法。該方法以萬古霉素作為原料，因為萬古霉素僅存在一個副反應位點，即亮氨酸上的氨基(N¹位)，所以理論上僅存在N¹位-取代一個副產(chǎn)物；發(fā)明人試驗發(fā)現(xiàn)，以A82846B作為原料時，產(chǎn)率低，N⁴,N⁶-二取代雜質(zhì)較多。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供一種在N⁴位有氨基糖的糖肽類抗生素的還原烷基化方法，包括在含所述糖肽 類抗生素與可溶性銅化合物的溶液中，在醛和叔丁胺硼烷存在下進行反應，其中所述還原烷基化反應優(yōu)先在糖肽類抗生素的N⁴位進行。

作為本發(fā)明的一種實施方式，上述方法中，叔丁胺硼烷與糖肽類抗生素的摩爾比為0.4-3.0：1，優(yōu)選為0.8-2.0：1，更優(yōu)選為1.6：1。

作為本發(fā)明的一種實施方式，上述方法中，還原烷基化反應在DIEA和三氟乙酸存在下進行。DIEA、三氟乙酸與糖肽類抗生素的摩爾比為5-15：0-18：1，優(yōu)選為6-12：10-13：1。

作為本發(fā)明的一種實施方式，上述方法中，所述糖肽類抗生素與可溶性銅化合物在溶液中形成糖肽類抗生素的銅配合物，再進行還原烷基化反應。

作為本發(fā)明的一種實施方式，上述方法中，溶劑為甲醇或甲醇與其它溶劑的混合溶劑，優(yōu)選為甲醇。

作為本發(fā)明的一種實施方式，上述方法中，在N⁴位有氨基糖的糖肽類抗生素為A82846B。

作為本發(fā)明的一種實施方式，上述方法中，醛為4-(4-氯苯基)苯甲醛。

作為本發(fā)明的一種實施方式，上述方法中，可溶性銅化合物為乙酸銅、氯化銅、或硫酸銅，優(yōu)選為乙酸銅。

作為本發(fā)明的一種實施方式，上述方法中，進一步包括從反應溶液中回收烷基化的糖肽類抗生素的銅配合物的步驟。

作為本發(fā)明的一種實施方式，上述方法中，進一步包括從銅配合物中回收烷基化的糖肽類抗生素的步驟。

本發(fā)明的方法反應結(jié)果收率高，有效控制副產(chǎn)物的生成，N⁴,N⁶-二取代雜質(zhì)少，并且避免使用氰基硼氫化鈉，滿足了環(huán)保標準，特別適合工業(yè)化生產(chǎn)。

本發(fā)明采用下述縮略詞：TBAB代表叔丁胺硼烷；STAB代表三乙酰氧硼氫化鈉；PYB代表吡啶-硼烷；NaBH₃CN代表氰基硼氫化鈉；TFA代表三氟乙酸；DIEA代表二異丙基乙基胺；eq代表當量。

本發(fā)明中，A82846B根據(jù)中國專利申請CN87106483A制備。

具體實施方式

為了更好的理解本發(fā)明的內(nèi)容，下面結(jié)合具體實施例來做進一步的說明，但具體的實施方式并不是對本發(fā)明的內(nèi)容所做的限制。

實施例1

將A82846B(0.446g，0.28mmol)加入到45ml無水甲醇中，室溫攪拌0.5h，加入DIEA (550ul，3.3mmol，11.9eq)，室溫攪拌0.5h,加入乙酸銅單水合物(56mg，0.28mmol，1eq)繼續(xù)攪拌2h,加入4′-氯-4-聯(lián)苯基甲醛(212.3mg，0.98mmol，3.5eq)，繼續(xù)攪拌反應24h。氮氣保護下，體系降溫至0-10℃，加三氟乙酸(278.9ul，3.64mmol，13eq)，控溫攪拌反應1h后，將TBAB(40mg，0.46mmol，1.6eq)分4次加入到反應液中(0.4eq/次/小時)，加畢反應1h。取反應液進行HPLC檢測。反應結(jié)束后，滴加1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)體系pH＝9.0，減壓濃縮約剩余15ml，滴加15ml乙腈進體系攪拌析晶1h，抽濾，40℃真空烘干得紫色銅配合物固體0.518g，收率71.6％。

HPLC檢測圖譜中，產(chǎn)物(奧利萬星銅配合物)為71.87％，N⁴,N⁶-二取代雜質(zhì)為1.508％。(4′-氯-4-聯(lián)苯基甲醛及其還原雜質(zhì)不計入總雜)。

實施例2

將A82846B(0.43g，0.27mmol)加入到43ml無水甲醇中，室溫攪拌0.5h，加入DIEA(267ul，1.62mmol,6eq)，室溫攪拌0.5h,加入乙酸銅單水合物(53.9mg，0.27mmol，1eq)繼續(xù)攪拌2h,加入4′-氯-4-聯(lián)苯基甲醛(204.75mg，0.945mmol，3.5eq)，繼續(xù)攪拌反應24h。氮氣保護下，體系降溫至0-10℃，加三氟乙酸(206.9ul，2.7mmol，10eq)，控溫攪拌反應1h后，將TBAB(37.57mg，0.432mmol，1.6eq)分4次加入到反應液中(0.4eq/次/小時)，加畢反應1h。取反應液進行HPLC檢測。反應結(jié)束后，滴加1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)體系pH＝9.0，減壓濃縮約剩余15ml，滴加15ml乙腈進體系攪拌析晶1h，抽濾，40℃真空烘干得紫色銅配合物固體0.50g，收率77.5％。

HPLC檢測圖譜中，產(chǎn)物(奧利萬星銅配合物)為77.54％，N⁴,N⁶-二取代雜質(zhì)為0.74％(4′-氯-4-聯(lián)苯基甲醛及其還原雜質(zhì)不計入總雜)。

參考實施例1 使用NaBH₃CN作為還原劑

將A82846B(0.334g，0.21mmol)加入到35ml無水甲醇，室溫攪拌并加入乙酸銅單水合物(42mg，0.21mmol，1eq)，室溫攪拌1h，加入4′-氯-4-聯(lián)苯基甲醛(59mg，1.3eq)和NaBH₃CN(17mg，1.3eq)，體系加熱攪拌回流過夜，補加NaBH₃CN(30mg，2.3eq)，繼續(xù)回流反應3小時，再次加入NaBH₃CN(54mg，4.1eq)，繼續(xù)加熱3小時。取反應液進行HPLC檢測，HPLC檢測圖譜中，產(chǎn)物為25.6％，原料剩余較多，N⁴,N⁶-二取代雜質(zhì)為1.2％(4′-氯-4-聯(lián)苯基甲醛及其還原雜質(zhì)不計入總雜)。

參考實施例2 PYB作為還原劑

將A82846B(0.468g，0.294mmol)加入到47ml無水甲醇，室溫攪拌并加入乙酸銅單水合物(52.9mg，0.265mmol,0.9eq)，室溫攪拌下加入4′-氯-4-聯(lián)苯基甲醛(101.83mg，0.47mmol，1.6eq)氮氣保護下，油浴加熱至62℃，加入PYB(17ul，0.17mmol，0.58eq)，體系于62℃加熱反應1小時，補加PYB(10ul，0.1mmol，0.58eq)，繼續(xù)反應1h,再次加入PYB(10ul，0.1mmol，0.58eq)反應3小時后。第四次加入PYB(10ul，0.1mmol，0.58eq)，反應15小時，第五次加入PYB(10ul，0.1mmol，0.58eq)反應3小時，取反應液進行HPLC檢測。HPLC檢測圖譜中，產(chǎn)物為29％(4′-氯-4-聯(lián)苯基甲醛及其還原雜質(zhì)不計入總雜)，原料剩余仍然較多，N⁴,N⁶-二取代雜質(zhì)為8.47％。

參考實施例3 STAB作為還原劑

將A82846B(0.446g，0.28mmol)加入到45ml無水甲醇，室溫攪拌并加入乙酸銅單水合物(50.4mg，0.252mmol，0.9eq)，室溫攪拌15分鐘，加入4′-氯-4-聯(lián)苯基甲醛(101.85mg，0.47mmol，1.6eq)和STAB(83mg，0.39mmol，1.3eq)，體系于63℃加熱反應6h，加入STAB(320mg，5eq)，63℃反應過夜，補加STAB(128mg，2eq)繼續(xù)反應24h。HPLC檢測圖譜中，產(chǎn)物僅為43.19％(4′-氯-4-聯(lián)苯基甲醛及其還原雜質(zhì)不計入總雜)，原料剩余仍然較多，N⁴,N⁶-二取代雜質(zhì)為7.38％。

HPLC檢測在如下條件進行：

儀器：Agilent 1260高效液相色譜儀

流動相：A：0.3％磷酸水:乙腈＝1000:5 B：乙腈

梯度條件：

色譜柱：Agilent SB-C18(3.5μm,4.6mm×150mm)

檢測波長：230nm

柱溫：30℃

流速：1ml/min

進樣量：10ul

樣品配制：取反應液0.1ml，流動相(A/B＝60/40)稀釋至1ml，進樣。