一種羧基化的熒光微球、制備方法及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種羧基化的熒光微球、制備方法及其應(yīng)用。采用水解反應(yīng)方法制備得到側(cè)鏈帶有羧基的聚亞芳香基乙炔撐聚合物，經(jīng)N-(3-二甲氨基丙基)-N'-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀酰亞胺將羧基活化后，以5μm單分散性氨基改性的多孔聚甲基丙烯酸縮水甘油酯APGMA微球為基質(zhì)球，熒光聚合物將以共價鍵結(jié)合在APGMA微球上，從而制備得到基于共軛聚合物的羧基化的熒光微球，該熒光微球具有生物反應(yīng)位點。本發(fā)明提供的熒光微球具有良好的生物偶聯(lián)性能，可檢測到生物分子BSA。若將所需的抗體通過聚合物側(cè)鏈上的羧基偶聯(lián)微球上，得到具有抗體標記的熒光微球，可用于相應(yīng)抗原的檢測。
【專利說明】
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及熒光共軛聚合物傳感材料【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及一種基于共軛聚合物的 具有用于生物偶聯(lián)的反應(yīng)位點的熒光微球、制備方法及其應(yīng)用。 -種羧基化的熒光微球、制備方法及其應(yīng)用

【背景技術(shù)】
[0002] 在提高整個人類社會公眾健康的良好愿景下，高通量技術(shù)診斷檢測在學術(shù)和臨床 領(lǐng)域已引起研究者極大的關(guān)注。與基于如平面陣列等常規(guī)方法的測定法相比，新出現(xiàn)的基 于微球的懸浮陣列具有許多優(yōu)點。通常，懸浮陣列技術(shù)由于球體的高流動性可以達到更 快的檢測速度；由于可以與分析物在三維空間中結(jié)合因而具有高靈敏性；檢測結(jié)果是基于 超過10, 000個微球的統(tǒng)計信息的特點也使懸浮陣列技術(shù)的精度更高；此外由于便利的洗 滌和分離步驟使得懸浮陣列技術(shù)也更易操作i/? 2002，％，9; Lab on a Chip 2003, 3, 60N; Journal of biomolecular screening 2004, 9, 173; Angewandte Chemie International Edition 2006, 45, 6104; Science 2007, 315, 1393; 2007, 7, 527 )。突光微球是懸浮陣列最常用 也至關(guān)重要的載體。這些微球必須具備一些便于信號讀取和分析的特性，如尺寸在微米級 別上并且具有單分散性，均勻穩(wěn)定的發(fā)光性，最好具有羧基或氨基的基團可以直接與生物 分子結(jié)合以便檢測的進行等。目前適合于這種技術(shù)的商業(yè)可用的熒光微球數(shù)量有限且非常 昂貴。因此非常迫切需要發(fā)展新的方法以可接受的成本來制造足夠的具有所需性能的熒光 微球并使最普通的人受益。
[0003] 共軛聚合物（CPs)作為熒光團，擁有許多獨特的優(yōu)點：如耐光漂白性，結(jié)構(gòu)易于 調(diào)整，和高的熱 / 機械穩(wěn)定性 7/?temaiio/? 2001，必， 2591; 2009，7你，897)。然而，盡管有許多報道采用有機染料或量子 點制備熒光微球，但由于共軛聚合物的制備過程比較復(fù)雜，有關(guān)共軛聚合物應(yīng)用于熒光微 球的技術(shù)方案較少見報道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，提供一種制備工藝簡單，基于共軛聚合物的，具 有用于生物偶聯(lián)的反應(yīng)位點的，可用于生物檢測的熒光微球、制備方法及其應(yīng)用。
[0005] 實現(xiàn)本發(fā)明目的的技術(shù)方案是提供一種羧基化的熒光微球的制備方法，包括如下 步驟： 1、采用水解反應(yīng)制備得到側(cè)鏈帶有羧基或羧酸鹽的聚亞芳香基乙炔撐聚合物CP1和 CP2 ； 所述CP1的結(jié)構(gòu)式為：

【權(quán)利要求】
1. 一種羧基化的熒光微球的制備方法，其特征在于包括如下步驟： (1) 采用水解反應(yīng)制備得到側(cè)鏈帶有羧基的聚亞芳香基乙炔撐聚合物CP1或CP2 ; 所述CP1的結(jié)構(gòu)式為：
所述CP2的結(jié)構(gòu)式為：
(2) 制備濃度為1?20 μΜ的CP1或CP2溶液，加入羧基活化劑N-(3-二甲氨基丙 基）-Ν' -乙基碳二亞胺鹽酸鹽和Ν-羥基琥珀酰亞胺，對側(cè)鏈帶有羧基的聚亞芳香基乙炔撐 聚合物CP1或CP2的側(cè)鏈羧基進行活化處理，得到CP1或CP2的羧基活化溶液； (3) 以直徑為5 μ m的單分散性氨基改性的多孔聚甲基丙烯酸縮水甘油酯APGMA微球 為基質(zhì)球，將APGMA微球置于步驟（2 )得到的CP1或CP2的羧基活化溶液中，常溫下避光振 蕩處理3?6小時，經(jīng)洗滌、干燥，得到羧基化的熒光微球APGMA-CP1或APGMA-CP2。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種羧基化的熒光微球的制備方法，其特征在于：步驟（2)中 制備CP1溶液的方法為：將CP1溶于pH 5?6的混合溶劑中；所述的混合溶劑包括四氫呋 喃和緩沖溶液，所述緩沖溶液為摩爾濃度〇. 01?1M的無機鉀鹽或無機鈉鹽的水溶液。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種羧基化的熒光微球的制備方法，其特征在于：步驟（2)中 制備CP2溶液的方法為：將CP2溶于pH 5?6的緩沖溶液中，所述緩沖溶液為摩爾濃度 0. 01?1M的無機鉀鹽或無機鈉鹽的水溶液。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的一種羧基化的熒光微球的制備方法，其特征在于：所述 的無機鈉鹽為 Na2HP04、NaH2P04、NaCl、Na2S04、NaHS0 4、NaHS03、Na2S03、Na2C0 3、NaHC03、Na2B407 中的一種，或它們的任意組合。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的一種羧基化的突光微球的制備方法，其特征在于：所述 的無機鉀鹽為 K2HP04、KH2P04、KC1、K 2S04、KHS04、K2C03、khco 3、KHS03、K2S03 中的一種，或它們 的任意組合。
6. 按權(quán)利要求1所述的制備方法得到的羧基化的熒光微球。
7. -種如權(quán)利要求6所述的羧基化的突光微球的應(yīng)用，其特征在于：將突光微球與生 物分子進行共價結(jié)合，用于生物分子的檢測。
【文檔編號】C08G81/02GK104119540SQ201410327407
【公開日】2014年10月29日 申請日期:2014年7月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月10日
【發(fā)明者】范麗娟, 許海波 申請人:蘇州大學