專利名稱：一種高抗FXa、低抗FIIa低分子肝素鈉的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種低分子肝素鈉(Low Molecular WeightH印arin，LMWH)的制備方法，具體涉及ー種高抗FXa、低抗FIIa低分子肝素鈉的生產(chǎn)エ藝。
背景技術(shù)：
肝素是ー種從動(dòng)物腸黏膜、肺等器官中提取出來的黏多糖，其在醫(yī)學(xué)上用來預(yù)防和治療手術(shù)引起的血栓塞、靜脈栓塞等栓塞性疾病，具有廣泛的用途。低分子肝素是從普通肝素降解而來的，其平均分子量小于8000Da，分子量小于SOOODa的組分含量不得低于 60%，按干燥品計(jì)算，抗)(a效價(jià)彡70IU/mg，抗Xa/抗IIa彡1. 5。低分子肝素具有生物利用率高、血漿半衰期長等優(yōu)點(diǎn)，特別是其引起的出血副作用大幅降低，因而大量的從普通肝素到低分子肝素的降解方法被不斷發(fā)現(xiàn)。目前采用的降解方法主要有亞硝酸降解、β -消除降解法、過氧化物降解法以及肝素酶降解。在美國專利 US5389618A中記述的肝素降解方法就是利用在水溶液中用堿進(jìn)行β -消除，從而得到平均分子量在3500 5500Da，抗FXa在50 120IU/mg的低分子肝素，由于降解是在水溶液中進(jìn)行，在降解過程中使用的堿可能使較多的磺酸基從肝素上脫落，從而造成產(chǎn)物的抗凝活性降低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種在有機(jī)溶劑中對(duì)普通肝素進(jìn)行β -消除降解的方法，以解決在水溶液進(jìn)行降解時(shí)產(chǎn)物抗凝活性降低的技術(shù)問題，從而提供一種降解條件溫和、產(chǎn)物抗凝活性高的低分子肝素鈉的制備方法。本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下一種高抗FXa、低抗FIIa低分子肝素鈉的制備方法，包括如下步驟(1)、取精品肝素配成10%的水溶液，室溫下邊攪拌邊加入季銨鹽如芐索氯銨， 1 2小時(shí)后停止攪拌，沉降、傾倒、洗滌沉淀物，最后過濾、干燥，得到白色肝素季銨鹽固體；(2)、將(1)中的肝素季銨鹽固體溶解于有機(jī)溶劑中配成5 10%的溶液，再加入 0. 05 0.2摩爾濃度的堿如芐基三甲基氫氧化銨、DBU (ニ氮雜ニ環(huán))、甲醇鈉、氫氧化鈉，在溫度為0 50°C (優(yōu)選10 40° )下反應(yīng)4 M小時(shí)(優(yōu)選8 12小時(shí))進(jìn)行β -消除降解；(3)、將⑵反應(yīng)結(jié)束后的降解物，在室溫下加入兩倍體積的10%的醋酸鈉的甲醇溶液，攪拌1 2小時(shí)后，在0 4°C下沉降、過濾、甲醇洗滌，在25 35°C下真空干燥，得到低分子肝素鈉的粗品；(4)、上述(3)中的低分子肝素鈉粗品配成10%的溶液，加IM氫氧化鈉溶液，調(diào)pH 值為9 10，加入30%的過氧化氫攪拌6小時(shí)后，滴加IM的鹽酸至中性，然后加入5 10% 的氯化鈉，再用2. 5 3倍的甲醇沉淀低分子肝素鈉；過濾，用甲醇洗滌后干燥制得低分子肝素鈉的精品；(5)、將上述的精品低分子肝素鈉溶解于去離子水配成10%的溶液，用0.2 微米的膜過濾后，冷凍干燥，最終得到低分子肝素鈉，其抗Ffe效價(jià)在120 160IU/mg，抗 FIIa效價(jià)在10 30IU/mg，平均分子量在;3500-5000Da，大于8000Da的片段不大于10%， 小于2500Da的片段不大于30%，2500Da到8000Da的片段在65 80%。作為本發(fā)明的ー種改迸，上述低分子肝素鈉制備方法中步驟( 所述有機(jī)溶劑可為ニ氯甲烷或ニ甲基甲酰胺。本發(fā)明的有益效果在于將普通肝素在有機(jī)溶劑中進(jìn)行消除降解，減少了磺酸基從肝素上脫落，從而提供一種降解條件溫和、產(chǎn)物抗凝活性高的低分子肝素鈉的制備方法。另外，按照本方法制備的低分子肝素鈉的抗Ffe效價(jià)在120 160IU/mg、抗FIIa效價(jià)在10 30IU/mg，平均分子量在3500-5000Da。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1取1公斤的精品肝素鈉溶解于7升水，然后在快速攪拌下加入50% (W/V)的氯芐索銨的水溶液4. 5升，反應(yīng)2小時(shí)后，加入10升水，靜止沉降，傾倒去上部清夜，再加水洗滌，然后過濾，水洗滌，干燥，約得到2. 7公斤的肝素季銨鹽。取上述反應(yīng)得到的肝素季銨鹽10克溶解于30毫升的ニ氯甲烷中，室溫下加入5 毫升的DBU，反應(yīng)12小時(shí)后，加入60毫升的10%醋酸鈉甲醇溶液，攪拌1小時(shí)后，冷藏(0 40C )下沉降、過濾、甲醇洗滌、干燥，得到粗品低分子肝素鈉。將得到的粗品低分子肝素鈉溶于50毫升水，加IM的氫氧化鈉調(diào)pH到9. 5，加入 30%的過氧化氫至濃度為0. 5%，室溫下攪拌6小時(shí)后，用IM的鹽酸調(diào)溶液到中性，加入氯化鈉，使得氯化鈉的濃度為8%，用150毫升的甲醇沉淀。過濾，甲醇洗滌，45°C下真空干燥。干燥后的低分子肝素鈉溶于50毫升去離子水，用0. 2微米的膜過濾，冷凍干燥，最終得到2. 6克精品低分子肝素鈉。上述低分子肝素鈉的平均分子量為3750Da，分子量大于SOOODa的為2%，分子量小于 2500Da 的為 27%，2500 8000Da 的為 71%?？?FXa 值為 142IU/mg，抗 FIIa 值為 13IU/mg。實(shí)施例2重復(fù)實(shí)施例1，不同點(diǎn)為肝素季銨鹽溶解于30毫升的ニ甲基甲酰胺(DMF)中，在 45°C下加入2克的甲醇鈉，攪拌8小時(shí)后冷卻至室溫，再加入10%的醋酸鈉甲醇溶液。本實(shí)施例最終得到2. 5克精品低分子肝素鈉，其平均分子量為4700Da，分子量大于8000Da的為4. 5%，分子量小于2500Da的為18%, 2500-8000Da的為77. 5% ；抗FXa值為 151IU/mg，抗 FIIa 值為 27IU/mg。
權(quán)利要求
1.一種高抗FXa、低抗FIIa低分子肝素鈉的制備方法，其特征在于包括如下步驟(1)、取精品肝素的水溶液，加入季銨鹽，得到白色肝素季銨鹽固體；O)、上述(1)中的肝素季銨鹽固體溶解于有機(jī)溶劑中，在有機(jī)堿或無機(jī)堿作用下進(jìn)行 β-消除降解；(3)、上述O)中的降解物在醋酸鈉作用下轉(zhuǎn)化為鈉鹽，得到低分子肝素鈉的粗品；G)、上述(3)中低分子肝素鈉粗品通過氧化脫色精制、微膜過濾除菌、冷凍干燥得到低分子肝素鈉。
2.按照權(quán)利要求1所述高抗FXa、低抗FIIa低分子肝素鈉的制備方法，其特征在于制備步驟(1)中所述季銨鹽為芐索氯銨。
3.按照權(quán)利要求1所述高抗FXa、低抗FIIa低分子肝素鈉的制備方法，其特征在于制備步驟O)中所述有機(jī)溶劑為ニ氯甲烷或ニ甲基甲酰胺。
4.按照權(quán)利要求1所述高抗FXa、低抗FIIa低分子肝素鈉的制備方法，其特征在于制備步驟O)中所述有機(jī)堿為芐基三甲基氫氧化銨、DBU或甲醇鈉，所述無機(jī)堿為氫氧化鈉。
5.按照權(quán)利要求1所述高抗FXa、低抗FIIa低分子肝素鈉的制備方法，其特征在于按照本制備方法制得的低分子肝素鈉為抗FXa效價(jià)在120 160IU/mg，抗FIIa效價(jià)在10 30IU/mg,平均分子量在3500-5000Da，大于8000Da的片段不大于10 %，小于2500Da的片段不大于30 %，2500Da到8000Da的片段在65 80 %。
全文摘要
本發(fā)明提供一種高抗FXa、低抗FIIa低分子肝素鈉的制備方法，將普通肝素在有機(jī)溶劑中進(jìn)行β-消除降解，減少了磺酸基從肝素上脫落，從而提供一種降解條件溫和、產(chǎn)物抗凝活性高的低分子肝素鈉的制備方法。同時(shí)，按照本方法制備的低分子肝素鈉的抗FXa效價(jià)在120～160IU/mg、抗FIIa效價(jià)在10～30IU/mg，平均分子量在3500-5000Da。
文檔編號(hào)C08B37/10GK102558392SQ20111006203
公開日2012年7月11日 申請(qǐng)日期2011年3月1日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月14日
發(fā)明者王芃 申請(qǐng)人:王芃