專利名稱：一種達(dá)替肝素生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生化藥品的制備方法，特別涉及一種達(dá)替肝素生產(chǎn)方法。
背景技術(shù)：
達(dá)替肝素是一種抗凝和抗血栓藥物，是低分子肝素的一種。達(dá)替肝素以肝素為原 料，通過酸性亞硝酸鈉的解聚，硼氫化鈉還原和紫外修飾，經(jīng)脫色生產(chǎn)得達(dá)替肝素。國際上 制備方法比較單一，均為亞硝酸水溶液降解，但以此為條件，產(chǎn)品內(nèi)部結(jié)構(gòu)破壞，結(jié)構(gòu)確認(rèn) 不合格。目前通常的生產(chǎn)方法是將肝素鈉原料溶于醋酸溶液中，加入一定量的亞硝酸 鈉溶液，控制pH值在2. 3 4. 0范圍內(nèi)，一定溫度下攪拌反應(yīng)1 4h。用5mol/L氫氧化鈉 溶液調(diào)pH至6. 5 7. 0，并加入反應(yīng)液2. 5倍體積的無水乙醇沉淀，于4°C左右放置12 16h，去上清液，沉淀中加入2 3倍體積丙酮脫水研磨2 3次，于P2O5真空干燥即得。傳 統(tǒng)方法只選擇了肝素可被亞硝酸降解而生產(chǎn)低分子，而產(chǎn)出物通過紅外光譜和核磁共振與 達(dá)替肝素標(biāo)準(zhǔn)品對比分析，前面缺少了甲基信號(hào)，且產(chǎn)品穩(wěn)定性差。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是針對現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷，提供一種達(dá)替肝素生產(chǎn)方法， 克服了傳統(tǒng)工藝生產(chǎn)產(chǎn)品結(jié)構(gòu)不合格，產(chǎn)品穩(wěn)定性差的缺陷，生產(chǎn)的產(chǎn)品有達(dá)替肝素歐洲 標(biāo)準(zhǔn)品結(jié)構(gòu)和性質(zhì)一致，且穩(wěn)定性好，產(chǎn)品收率高。本發(fā)明的技術(shù)方案是在肝素鈉溶液中加入含甲基的有機(jī)溶劑，在一定溫度和酸 性條件下，與亞硝酸反應(yīng)，引起N-硫酸基氨基葡糖殘基上的脫氨作用，進(jìn)而發(fā)生重排反應(yīng) 引起氨基葡糖和糖醛酸之間的糖苷鍵斷裂，形成2，5-脫水甘露糖末端殘基，然后進(jìn)一步處 理獲得穩(wěn)定的2，5-脫水甘露醇末端，得到分子量5600 6400道爾頓的達(dá)替肝素粗品，將 上述達(dá)替肝素粗品經(jīng)過氧化氫氧化脫色，乙醇沉淀、冷凍或真空干燥，得到達(dá)替肝素成品。本發(fā)明的具體生產(chǎn)步驟如下(按照重量百分比)將肝素鈉加入純化水溶解成 3% 10%濃度，用2 6mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH為1. 0 3. 0，然后加入0. 5 2. 0倍溶液 體積的含甲基信號(hào)有機(jī)類溶劑，調(diào)整溫度至10 30°C時(shí)，加入亞硝酸鈉，攪拌反應(yīng)30 90min，溫度控制在10 30°C ；降解完成后調(diào)節(jié)pH為8 10，然后加入硼氫化鈉，攪拌反應(yīng) 15h ；然后用鹽酸調(diào)節(jié)pH至3. 0 4. 0，反應(yīng)5 30min后再調(diào)節(jié)pH為6 8，加入乙醇沉 淀，放置6 24h ；將所得沉淀加入純化水溶解成5% 20%濃度，調(diào)節(jié)pH至6 8，用濾膜 過濾，濾液輸入紫外滅菌器中照射5 lOmin，加入1. 5 3倍量乙醇沉淀沉淀放置6 24 小時(shí)；將上述沉淀物加純化水溶解成10% 20%濃度，調(diào)pH至9 12，加入過氧化氫氧化 6 12小時(shí)，用濾膜過濾，加入乙醇沉淀沉淀放置6 12小時(shí)；沉淀物溶解成10% 15% 濃度，冷凍干燥或沉淀物經(jīng)乙醇脫水于50°C以下，真空度0. 095Mpa以下干燥得達(dá)替肝素成
P
ΡΠ O上述的亞硝酸鈉的用量為肝素鈉重量的1. 0% 3. 0%，為重量與重量比。上述的硼氫化鈉用量為肝素鈉重量的0. 5% 2%，為重量與重量比。
上述的過氧化氫用量為溶液體積的0. 2% 1%，為重量體積比。加入0. 5 2. 0倍溶液體積的含甲基信號(hào)有機(jī)類溶劑，含甲基信號(hào)有機(jī)類溶劑可 以采用二甲氧基乙烷。濾液在紫外滅菌器中照射5 lOmin，進(jìn)行產(chǎn)品結(jié)構(gòu)修飾。本發(fā)明的有益效果是在肝素鈉溶液一定溶液中，在特定溫度和酸性條件下，與亞 硝酸反應(yīng)，通過還原和紫外照射修飾，經(jīng)脫色凍干得到達(dá)替肝素產(chǎn)品，克服了傳統(tǒng)工藝生產(chǎn) 產(chǎn)品結(jié)構(gòu)不合格，產(chǎn)品穩(wěn)定性差的缺陷，生產(chǎn)的產(chǎn)品有達(dá)替肝素歐洲標(biāo)準(zhǔn)品結(jié)構(gòu)和性質(zhì)一 致，且穩(wěn)定性好，產(chǎn)品收率高。
四

附圖1是本發(fā)明的產(chǎn)品生產(chǎn)的流程圖。
五具體實(shí)施例方式結(jié)合附圖，對本發(fā)明作進(jìn)一步的描述實(shí)施例1 取精品肝素鈉，加入純化水溶解成3% 10%濃度，用2 6mol/L的鹽 酸調(diào)節(jié)pH為1. O 3. 0，然后加入0. 5 2. O倍溶液體積的二甲氧基乙烷，調(diào)整溫度至10 30°C時(shí)，加入1. 0% 3. O%的亞硝酸鈉，攪拌反應(yīng)30 90min，溫度控制在10 30°C;降解 完成后調(diào)節(jié)pH為8 10，然后加入0. 5% 2%硼氫化鈉，攪拌反應(yīng)15h。然后用鹽酸調(diào)節(jié) pH至3. O 4. 0，反應(yīng)5 30min后再調(diào)節(jié)pH為6 8，加入1. 5 3倍量92%乙醇沉淀， 放置6 24h。將所得沉淀加入純化水溶解成5% 20%濃度，調(diào)節(jié)pH6 8，用0. 65um濾 膜過濾，濾液輸入紫外滅菌器中照射5 lOmin，加入1. 5 3倍量92%乙醇沉淀沉淀放置 6 24小時(shí)。將上述沉淀物加純化水溶解成10% 20%濃度，調(diào)pH9 12，加入0. 2% 1 %的過氧化氫氧化6 12小時(shí)，用0. 22um濾膜過濾，加入2. 7倍量92%乙醇沉淀沉淀放 置6 12小時(shí)。沉淀物溶解成10% 15%濃度，冷凍干燥或沉淀物經(jīng)乙醇脫水于50°C以 下，真空度0. 095Mpa以下干燥得達(dá)替肝素成品。實(shí)施例2 達(dá)替肝素通過以下工藝實(shí)現(xiàn)的，將肝素鈉加入純化水溶解成3% 10% 濃度，用4mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH為1. O 3. 0，然后加入0. 5 2. O倍溶液體積的二甲氧基 乙烷，調(diào)整溫度至10 30°C時(shí)，加入1. O% 3%的亞硝酸鈉，攪拌反應(yīng)30 90min，溫度控 制在10 30°C ；降解完成后調(diào)節(jié)pH為8 10，然后加入0. 5% 2%硼氫化鈉，攪拌反應(yīng) 15h。然后用鹽酸調(diào)節(jié)pH至3. O 4. 0，反應(yīng)5 30min后再調(diào)節(jié)pH為6 8，加入1. 5 3 倍量濃度90 % 95 %乙醇沉淀，放置6 24h。將所得沉淀加入純化水溶解成5 % 20 %濃 度，調(diào)節(jié)pH6 8，用0. 65um濾膜過濾，濾液輸入紫外滅菌器中照射5 lOmin，加入1. 5 3倍量濃度90% 95%乙醇沉淀沉淀放置6 24小時(shí)。將上述沉淀物加純化水溶解成 10% 20%濃度，調(diào)pH9 12，加入0. 2% 的過氧化氫氧化6 12小時(shí)，用0. 22um 濾膜過濾，加入2 3倍量濃度90% 92%乙醇沉淀沉淀放置6 12小時(shí)。沉淀物溶解 成10% 15%濃度，冷凍干燥或沉淀物經(jīng)乙醇脫水于50°C以下，負(fù)壓狀態(tài)下干燥得達(dá)替肝 素成品。本發(fā)明符合歐洲藥典質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，與歐洲藥典標(biāo)準(zhǔn)品結(jié)構(gòu)一致，且穩(wěn)定性好，產(chǎn)品收 率高。
權(quán)利要求
一種達(dá)替肝素生產(chǎn)方法，其特征是在肝素鈉溶液中加入含甲基的有機(jī)溶劑，在一定溫度和酸性條件下，與亞硝酸反應(yīng)，引起N 硫酸基氨基葡糖殘基上的脫氨作用，進(jìn)而發(fā)生重排反應(yīng)引起氨基葡糖和糖醛酸之間的糖苷鍵斷裂，形成2，5 脫水甘露糖末端殘基，然后進(jìn)一步處理獲得穩(wěn)定的2，5 脫水甘露醇末端，得到分子量5600～6400道爾頓的達(dá)替肝素粗品，將上述達(dá)替肝素粗品經(jīng)過氧化氫氧化脫色，乙醇沉淀、冷凍或真空干燥，得到達(dá)替肝素成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的達(dá)替肝素生產(chǎn)方法，其特征是生產(chǎn)步驟如下將肝素鈉加入純化水溶解成3% 10%濃度，為重量體積比；用2 6mol/L的鹽酸調(diào) 節(jié)pH為1. 0 3. 0，然后加入含甲基信號(hào)有機(jī)類溶劑，調(diào)整溫度至10 30°C時(shí)，加入亞硝 酸鈉，攪拌反應(yīng)30 90min，溫度控制在10 30°C ；降解完成后調(diào)節(jié)pH為8 10，然后加 入硼氫化鈉，攪拌反應(yīng)15h ；然后用鹽酸調(diào)節(jié)pH至3. 0 4. 0，反應(yīng)5 30min后再調(diào)節(jié)pH 為6 8，加入乙醇沉淀，放置6 24h ；將所得沉淀加入純化水溶解成5% 20%濃度，調(diào) 節(jié)pH至6 8，用濾膜過濾，濾液輸入紫外滅菌器中照射，加入1. 5 3倍量乙醇沉淀沉淀 放置6 24小時(shí)；將上述沉淀物加純化水溶解成10% 20%濃度，調(diào)pH至9 12，加入 過氧化氫氧化6 12小時(shí)，用濾膜過濾，加入乙醇沉淀沉淀放置6 12小時(shí)；沉淀物溶解 成10% 15%濃度，冷凍干燥或沉淀物經(jīng)乙醇脫水于50°C以下，負(fù)壓狀態(tài)下干燥得達(dá)替肝 素成品。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的達(dá)替肝素生產(chǎn)方法，其特征是所述的亞硝酸鈉的用量為肝 素鈉重量的1.0% 3.0%，為重量與重量比。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的達(dá)替肝素生產(chǎn)方法，其特征是所述的硼氫化鈉用量為肝素 鈉重量的0. 5% 2%，為重量與重量比。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的達(dá)替肝素生產(chǎn)方法，其特征是所述的過氧化氫用量為溶液 體積的0. 2 % 1 %，為重量體積比。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的生產(chǎn)方法，其特征是加入0.5 2. 0倍溶液體積的含甲基 信號(hào)有機(jī)類溶劑，含甲基信號(hào)有機(jī)類溶劑可以采用二甲氧基乙烷。
7 .根據(jù)權(quán)利要求2所述的生產(chǎn)方法，其特征是濾液在紫外滅菌器中照射5 lOmin， 進(jìn)行產(chǎn)品結(jié)構(gòu)修飾。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種達(dá)替肝素生產(chǎn)方法。其技術(shù)方案是在肝素鈉溶液中加入含甲基的有機(jī)溶劑，在特定溫度和酸性條件下，與亞硝酸反應(yīng)，引起N-硫酸基氨基葡糖殘基上的脫氨作用，進(jìn)而發(fā)生重排反應(yīng)引起氨基葡糖和糖醛酸之間的糖苷鍵斷裂，形成2，5-脫水甘露糖末端殘基，然后進(jìn)一步處理獲得穩(wěn)定的2，5-脫水甘露醇末端，得到分子量5600～6400道爾頓的達(dá)替肝素粗品，將上述達(dá)替肝素粗品經(jīng)過氧化氫氧化脫色，乙醇沉淀、冷凍或真空干燥，得到達(dá)替肝素成品。其有益效果是克服了傳統(tǒng)工藝生產(chǎn)產(chǎn)品結(jié)構(gòu)不合格，產(chǎn)品穩(wěn)定性差的缺陷，生產(chǎn)的產(chǎn)品有達(dá)替肝素歐洲標(biāo)準(zhǔn)品結(jié)構(gòu)和性質(zhì)一致，且方法操作簡單，可實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，穩(wěn)定性好，產(chǎn)品收率高。
文檔編號(hào)C08B37/10GK101942038SQ20101028712
公開日2011年1月12日 申請日期2010年9月16日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月16日
發(fā)明者喬德強(qiáng), 劉偉, 李加耀, 李艷敏 申請人:山東?？苹ぜ瘓F(tuán)有限公司