專利名稱：右旋糖酐生產(chǎn)新工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬醫(yī)藥原料技術(shù)領(lǐng)域和化學(xué)原料領(lǐng)域。具體涉及一種右旋糖酐生產(chǎn)新工藝。
現(xiàn)行傳統(tǒng)生產(chǎn)工藝為發(fā)酵(生物轉(zhuǎn)化)→乙醇沉淀粗酐→乙醇捏洗→粗酐溶解→酸水解→乙醇分級(jí)沉淀(五級(jí)劃分)→乙醇脫水成粉→干燥。傳統(tǒng)工藝的缺陷表現(xiàn)在以下方面1.各工序均需要使用大量乙醇，酒精占據(jù)了原料成本的60％以上，且安全問(wèn)題始終成為隱患。
2.因工藝本身的局限性，按傳統(tǒng)工藝，純度質(zhì)量要達(dá)到《英國(guó)藥典》(BP)和《美國(guó)藥典》(USP)的質(zhì)量水平還必須要進(jìn)一步精制。
3.傳統(tǒng)工藝中，各工序物料都為凝膠狀體或固體，都無(wú)法進(jìn)行管道輸送，只能用人力搬運(yùn)，且這些工序均為開口操作，又需用大量酒精，這給實(shí)現(xiàn)GMP要求造成很大困難。
4.占原料白砂糖投料量一半數(shù)量的副產(chǎn)品果糖無(wú)法低成本提純回收，不僅造成資源浪費(fèi)，而且造成高成本的廢水處理或嚴(yán)重的環(huán)境污染。
由于膜的制備技術(shù)日趨成熟，使得在右旋糖酐生產(chǎn)中采用膜分離技術(shù)成為可能。膜分離技術(shù)原理為利用各種規(guī)格膜的透過(guò)物質(zhì)分子量大小不一，通過(guò)超濾、納濾，用物理方法實(shí)現(xiàn)不同分子量物質(zhì)的分離。非聚合物物質(zhì)和聚合物右旋糖酐的分子量差異較大，可以選擇適當(dāng)?shù)哪?shí)現(xiàn)分離，實(shí)現(xiàn)提取純化目的。原料藥右旋糖酐允許的分子量分布范圍藥典有所規(guī)定，選擇適當(dāng)?shù)哪た蓪?shí)現(xiàn)分子量分布分級(jí)，可得到所需分子量分布范圍的右旋糖酐產(chǎn)品。
P.E.Barker.、A.Till等人曾進(jìn)行了凝膠層析結(jié)合超濾膜對(duì)右旋糖酐水解液進(jìn)行右旋糖酐分子量分級(jí)的研究，先采用凝膠層析法分離除較大分子部分，然后采用4組5×103分子量串級(jí)超濾膜組，其中截留液與濾出液傳送方向相反，用于除去較小分子部分，如此處理后僅獲得單一規(guī)格的右旋糖酐40產(chǎn)品。但凝膠層析法分離方法在工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)實(shí)施不經(jīng)濟(jì)，而獲得右旋糖酐水解液以前的工藝方法仍為傳統(tǒng)工藝。
郭振友等人曾進(jìn)行過(guò)超濾技術(shù)代替乙醇沉淀粗右旋糖酐工藝的研究，采用中空纖維膜對(duì)發(fā)酵液進(jìn)行處理，代替?zhèn)鹘y(tǒng)工藝中乙醇沉淀粗酐工序，而其它工序不變，包括醇沉分級(jí)。此研究只改革了傳統(tǒng)工藝中的一個(gè)步驟，未曾涉及全部工藝不用酒精的問(wèn)題，分離得到的粗酐不能直接達(dá)到后工序超濾分級(jí)的質(zhì)量要求。
本發(fā)明克服了傳統(tǒng)醇沉分級(jí)工藝的各種缺陷，產(chǎn)品質(zhì)量同時(shí)符合2000版《中國(guó)藥典》和2000版《英國(guó)藥典》、《美國(guó)藥典》的規(guī)定。
本發(fā)明區(qū)別于傳統(tǒng)工藝和郭振友、Barker.R.E等人研究的工藝的主要不同點(diǎn)在于本發(fā)明應(yīng)用膜分離技術(shù)在發(fā)酵液分離、分子量分離分級(jí)、精制濃縮、高濃度果糖回收等工序上整體予以實(shí)施，生產(chǎn)全過(guò)程不用酒精及其他有機(jī)溶劑。產(chǎn)品包括分子量3×103-20×104各種規(guī)格。本發(fā)明與之區(qū)別的不同點(diǎn)還在于本發(fā)明的膜分離方法不僅適用于傳統(tǒng)工藝得到的右旋糖酐發(fā)酵液，而且適用于各類控制分子量的發(fā)酵法、酶工程方法等得到的右旋糖酐發(fā)酵液。
本發(fā)明提供了一種右旋糖酐原料藥生產(chǎn)新工藝。該工藝為發(fā)酵→一級(jí)超微濾膜或超濾膜處理(右酐透過(guò))→二級(jí)超濾膜或納濾膜分離(右酐截留)→分子量降解處理→脫色純化→三級(jí)超濾膜分離分級(jí)→四級(jí)超濾膜分離分級(jí)→五級(jí)超濾膜分離分級(jí)→離交脫鹽純化→精濾→噴霧干燥。對(duì)用各種控制分子量發(fā)酵法得到的發(fā)酵液或酶工程方法或其他方法得到的發(fā)酵液，如果分子量及分布符合目標(biāo)產(chǎn)品要求的可不進(jìn)行降解處理，也可減少膜分離次數(shù)。二級(jí)膜分離濾出液經(jīng)納濾膜處理回收濃縮后得到果糖糖漿。
本發(fā)明的具體方案如下新工藝中發(fā)酵(生物轉(zhuǎn)化)工藝采用的菌種為右旋糖酐生產(chǎn)菌種L.N.1226-a；發(fā)酵工藝采用蔗糖、磷酸鹽、蛋白胨、水等原料，可按傳統(tǒng)發(fā)酵工藝也可按各種控制分子量發(fā)酵得到發(fā)酵液或酶工程得到發(fā)酵液。
(1)一級(jí)膜分離方法與目的用超微濾膜或超濾膜對(duì)經(jīng)預(yù)處理過(guò)的發(fā)酵液進(jìn)行處理，除去菌絲體及所有顆粒物質(zhì)，使料液澄清，得到濾出液，適當(dāng)分子量的右旋糖酐以及所有較小分子的溶解性物質(zhì)透過(guò)規(guī)格相對(duì)應(yīng)的膜；而不溶解物質(zhì)、菌體細(xì)胞以及分子量大于膜規(guī)格的右酐等物質(zhì)被截留，起到分離純化作用。
技術(shù)條件膜分離是采用的是切向過(guò)濾，即料液流動(dòng)方向和濾膜面成切向方向，濾出方向與膜成垂直方向。膜的規(guī)格為0.05μ-1.0μ。膜的形式可以是中空纖維、管式或者卷式，材料可以是聚砜、改良聚砜、聚醚砜等。中空纖維的操作壓力較低，選用0.1-0.3Mpa；卷式和管式膜的操作壓力可較高，選用0.7-1.5Mpa，分離效率較高。操作溫度為10℃-80℃，一般選用30℃-50℃。
技術(shù)要求及控制要點(diǎn)濾液澄清。
(2)二級(jí)膜分離方法與目的用超濾膜或納濾膜對(duì)上述一級(jí)超濾膜處理濾出液進(jìn)行右旋糖酐和果糖等單、寡糖及其它非聚合物分離，同時(shí)進(jìn)行分離透析，得到“濾出液”和“截留液”。果糖等單、寡糖及其它非聚合物物質(zhì)存在于濾出液中，右旋糖酐存在于截留液中，通過(guò)此工序，含右旋糖酐的“截留液”得到純化。
技術(shù)條件膜分離是采用切向過(guò)濾方式，膜的規(guī)格根據(jù)發(fā)酵液中右旋糖酐的平均分子量而選擇，相應(yīng)可以選用的膜規(guī)格可以是分子量1×103-20×104的超濾膜，也可以是分子量＞200的納濾膜。膜的形式可以是管式或者卷式或中空纖維，材料可以是聚砜、改良聚砜、聚醚砜等，選用0.1-3.5Mpa操作壓力。操作溫度為10℃-80℃，一般選用40℃-60℃。
技術(shù)要求及控制要點(diǎn)截留液中果糖等單、寡糖相對(duì)含量達(dá)到0.5％以下。
上述(1)、(2)二步操作也可以按相反次序進(jìn)行，分離效率相同。但超濾濾出液經(jīng)過(guò)濃縮后進(jìn)行下一步處理為宜。
(3)分子量降解處理方法與目的用適當(dāng)?shù)柠}酸加熱緩和水解方法，或硫酸、硝酸、檸檬酸等其他酸對(duì)含右旋糖酐的溶液進(jìn)行分子量降解處理，跟蹤檢測(cè)分子量及其分布，得到所要求的分子量調(diào)整處理液。使右旋糖酐分子量分布在一個(gè)理想的范圍內(nèi)，便于后工序進(jìn)行分子量范圍分級(jí)。
技術(shù)要求及控制要點(diǎn)根據(jù)目標(biāo)產(chǎn)品的規(guī)格進(jìn)行調(diào)整。一般來(lái)說(shuō)，分子量與分子量分布范圍為Mw＝1×104～7×104，M10＝2×104～20×104，M90＝1×103～2×104，都可以進(jìn)行分級(jí)分離。對(duì)于目標(biāo)產(chǎn)品是右旋糖酐40的，其平均分子量最好是Mw＝2.5×104～3.5×104；對(duì)于目標(biāo)產(chǎn)品是右旋糖酐20的，其平均分子量最好是Mw＝1.6×104～2.3×104。在此范圍內(nèi)，目標(biāo)產(chǎn)品的收得率相對(duì)較高，否則雖然也可得到目標(biāo)產(chǎn)品，但要影響目標(biāo)產(chǎn)品收得率。
(4)脫色純化方法與目的在脫色容器中加入活性炭，加熱，實(shí)施對(duì)“分子量調(diào)整處理液”進(jìn)行脫色，然后進(jìn)行過(guò)濾，除去游離蛋白質(zhì)等含氮類雜質(zhì)以及可被活性炭吸附的其他雜質(zhì)，得到“脫色濾液”。
技術(shù)要求及控制要點(diǎn)濾液澄清無(wú)色，含氮類雜質(zhì)含量達(dá)到成品要求，即含氮量達(dá)到50ppm(干物質(zhì)計(jì))以下。
(5)三、四、五級(jí)膜分離分級(jí)方法與目的用三級(jí)超濾膜對(duì)脫色后的分子量調(diào)整處理液進(jìn)行分子量分級(jí)，使其中相對(duì)大分子部分在三級(jí)和五級(jí)分離中分二次被截留，相對(duì)小分子部分濾過(guò)，以除去大分子部分，而相對(duì)小分子部分用第四級(jí)膜進(jìn)行分級(jí)，以除去小分子。
技術(shù)條件膜分離是采用切向過(guò)濾。膜的規(guī)格根據(jù)分子量調(diào)整處理液右旋糖酐的平均分子量和目標(biāo)產(chǎn)品兩個(gè)因素而選擇。
膜的形式可以是中空纖維、平板、管式或者卷式，材料可以是聚砜、改良聚砜、聚醚砜等，選用0.5-3.5Mpa操作壓力。操作溫度為10℃-80℃，一般選用40℃-60℃。
三級(jí)膜分離分級(jí)可采用2×104～20×104的超濾膜進(jìn)行分子量分級(jí)處理，對(duì)于目標(biāo)產(chǎn)品是右旋糖酐40，選用5×104～10×104規(guī)格較為合適；對(duì)于目標(biāo)產(chǎn)品是右旋糖酐20，選用2×104～5×104規(guī)格較為合適；四級(jí)膜分離分級(jí)可采用超濾膜分子量規(guī)格1×103～1×104，進(jìn)行分子量分級(jí)處理，對(duì)于目標(biāo)產(chǎn)品是右旋糖酐40，選用3×103～1×104規(guī)格較為合適，對(duì)于目標(biāo)產(chǎn)品是右旋糖酐20，選用1×103～5×103規(guī)格較為合適。
五級(jí)膜分離分級(jí)可采用超濾膜分子量規(guī)格1×104～7×104，進(jìn)行分子量分級(jí)處理，對(duì)于目標(biāo)產(chǎn)品是右旋糖酐40，選用3×104～5×104規(guī)格較為合適，對(duì)于目標(biāo)產(chǎn)品是右旋糖酐20，選用1×104～2×104規(guī)格較為合適。
技術(shù)要求及控制要點(diǎn)三級(jí)膜分離分級(jí)濾出液平均分子量Mw＝1×104～7×104，濾出液中右旋糖酐的總量可以達(dá)到55％-95％。對(duì)于目標(biāo)產(chǎn)品是右旋糖酐40，濾出液Mw在2.8×104-3.8×104之間比較合適；對(duì)于目標(biāo)產(chǎn)品是右旋糖酐20濾出液Mw在1.5×104-2.5×104之間比較合適；
四級(jí)膜分離分級(jí)截留液平均分子量Mw＝1×104～7×104，截留液中右旋糖酐的總量可以達(dá)到58％-99％。對(duì)于目標(biāo)產(chǎn)品是右旋糖酐40，截留液Mw在4.2×104-5.0×104之間比較合適；對(duì)于目標(biāo)產(chǎn)品是右旋糖酐20，截留液Mw在2.0×104-2.6×104之間比較合適；五級(jí)膜分離分級(jí)截留液平均分子量Mw＝2.5×104～20×104，濾出液平均分子量Mw＝1×104～7×104，濾出液中右旋糖酐的總量可以達(dá)到50％-95％。對(duì)于目標(biāo)產(chǎn)品是右旋糖酐40濾出液Mw在32000-42000之間符合藥典之要求(或35000-45000之間符合BP之要求)，同時(shí)截留液Mw可以調(diào)整到64000-76000之間符合藥典右旋糖酐70之要求；對(duì)于目標(biāo)產(chǎn)品是右旋糖酐20濾出液Mw在16000-24000之間符合藥典之要求，同時(shí)截留液Mw可以調(diào)整到32000-42000之間符合藥典右旋糖酐40之要求。五級(jí)膜分離主要作用是對(duì)三、四級(jí)膜分離所得得到的中間體的分子量及分布進(jìn)行調(diào)整。
以上三、四、五級(jí)膜分離分級(jí)操作順序也可以按四、三、五或三、五、四膜分離分級(jí)次序進(jìn)行，分離分級(jí)效率基本不變。也可以按三、四級(jí)兩極膜分離進(jìn)行，但收得率相對(duì)偏低。
(6)離交脫鹽純化方法與目的上述目標(biāo)產(chǎn)品的三級(jí)濾出液可用納濾膜進(jìn)行濃縮，或者用蒸發(fā)濃縮至10％-30％濃度，然后通過(guò)陰、陽(yáng)離子交換柱，除去殘余鹽份和帶電荷的各類雜質(zhì)。得到“離交溶液”。
技術(shù)要求及控制要點(diǎn)離子交換后的“離交溶液”要求氯離子濃度在0.01％以下；PH＝6～7；重金屬0.8ppm以下。
(7)精濾方法與目的將“離交溶液”在相當(dāng)?shù)娜萜髦?，通過(guò)微孔膜精濾器除去微粒物質(zhì)。
技術(shù)要求及控制要點(diǎn)精濾液要求符合成品的有關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(8)噴霧干燥方法與目的通過(guò)噴霧干燥成粉。
技術(shù)要求及控制要點(diǎn)水份控制在5％以下。
(9)含果糖廢水處理及果糖回收方法與目的通過(guò)納濾膜對(duì)二級(jí)超濾膜或納濾膜分離除去非聚合物物質(zhì)的濾出液進(jìn)行膜分離，使果糖等單、寡糖截留，得到食品級(jí)果糖糖漿，含鹽等雜質(zhì)的廢水透過(guò)達(dá)標(biāo)排放。
技術(shù)條件納濾膜分離是采用切向過(guò)濾。用兩組納濾膜串聯(lián)使用，納濾膜分子量規(guī)格＜150。操作溫度為10℃-70℃，一般選用40℃-60℃。膜的形式可以是管式或者卷式，材料可以是聚砜、改良聚砜、聚醚砜等，可以選用1.5-3.5Mpa操作壓力。
技術(shù)要求及控制要點(diǎn)果糖等糖類物質(zhì)被截留，而更小分子的無(wú)機(jī)鹽等物質(zhì)透過(guò)膜，用適量純水漂洗截留液，可進(jìn)行果糖等糖類物質(zhì)的純化，并且可以進(jìn)行濃縮，得到截留液中果糖濃度最高可達(dá)到35％，經(jīng)減壓濃縮到70％后，符合食品要求；而濾出液中果糖濃度＜0.01％。
本發(fā)明工藝將膜分離技術(shù)應(yīng)用于右旋糖酐生產(chǎn)全過(guò)程分離純化國(guó)內(nèi)外未見報(bào)導(dǎo)，本技術(shù)屬產(chǎn)品工藝創(chuàng)新。新工藝可體現(xiàn)的先進(jìn)性在于1.全部工藝不用酒精或其他有機(jī)溶劑，同時(shí)提高收率可大幅提高，免除了原材料成本中的酒精費(fèi)用。車間無(wú)須采取防爆措施，節(jié)約了車間的造價(jià)，消除了安全隱患。
2.由于新工藝采用膜分離技術(shù)，全部過(guò)程在水溶液中進(jìn)行操作，可較容易實(shí)施脫色、離子交換、純水透析漂洗等純化精制手段，產(chǎn)品質(zhì)量比《中國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)有較大提高，達(dá)到了《英國(guó)藥典》、《美國(guó)藥典》等國(guó)外藥典標(biāo)準(zhǔn)。
3.本發(fā)明不僅可制備藥典規(guī)定的各種右旋糖酐原料藥規(guī)格產(chǎn)品，還可同法制備平均分子量3×103～30×104其他規(guī)格的右旋糖酐產(chǎn)品。
4.本發(fā)明可較容易地提取副產(chǎn)品果糖，不僅防止產(chǎn)生大量高營(yíng)養(yǎng)的工業(yè)廢水，而且制得食品級(jí)的果糖糖漿，既解決了環(huán)境保護(hù)問(wèn)題，又實(shí)現(xiàn)了綜合利用。
5.本發(fā)明全部工序都可實(shí)現(xiàn)管道化操作，容器均可密閉，精濾、噴霧干燥在凈化車間進(jìn)行，硬件上實(shí)現(xiàn)藥品生產(chǎn)GMP要求合理、可行。
2.上述濾出液置入超濾儲(chǔ)罐中進(jìn)行超濾處理，濾膜分子量規(guī)格2×104。膜的形式為卷式，材料是改良聚砜，操作溫度為40℃，操作壓力0.8Mpa，用適量純水漂洗截留液，得到截留液17.8L，右酐濃度為16.2％；得到濾出液113L。截留液HPLC檢測(cè)圖譜顯示無(wú)果糖及寡糖峰。濾出液中果糖等單、寡糖濃度3.2％。
3.上述2濾出液進(jìn)行二級(jí)串聯(lián)納濾處理，納濾膜分子量規(guī)格＜150。膜的形式為卷式，材料是改良聚砜，操作溫度為40℃，操作壓力2.5Mpa，用適量純水漂洗截留液，然后進(jìn)行濃縮，得到截留液14.2L截留液中果糖等單、寡糖濃度25.1％；濾出液134L，果糖濃度＜0.01％，棄去。
4.上述2截留液加熱，加酸緩和降解，降解調(diào)整右旋糖酐分子量，用HPLC檢測(cè)跟蹤分子量及其分布，得到分子量Mw＝32000調(diào)整處理液，結(jié)束時(shí)用NaOH調(diào)節(jié)PH至6.5，加入3％(W/V)活性炭，過(guò)濾，得到澄清無(wú)色濾液。N含量＜50ppm。
5.上述4脫色后的分子量調(diào)整處理液進(jìn)行超濾分離分級(jí)處理，超濾膜分子量規(guī)格10×104，操作溫度為40℃，操作壓力0.9Mpa，超濾透析至89.5％的右旋糖酐干物質(zhì)濾出，得到截留液5.6L，右旋糖酐濃度5.2％；得到濾出液60.8L，右旋糖酐濃度4.1％；HPLC檢測(cè)顯示濾出液Mw＝29700；M10＝102000；M90＝4700。
6.上述5的濾出液進(jìn)行超濾分離分級(jí)處理，超濾膜分子量規(guī)格5×103，操作溫度為40℃，操作壓力0.5Mpa，超濾透析有25％的右旋糖酐干物質(zhì)濾出，得到截留液12.8L，右旋糖酐濃度14.6％，HPLC分析顯示截留液Mw＝43400；M10＝123000；M90＝9100；得到濾出液88.7L，右旋糖酐濃度0.7％。
7.上述6的截留液進(jìn)行超濾分離分級(jí)處理，超濾膜分子量規(guī)格5×104，超濾透析有87％的右旋糖酐干物質(zhì)濾出，得到截留液6.4L，右旋糖酐濃度3.7％，HPLC檢測(cè)顯示截留液Mw＝68200；M10＝176000；M90＝17300；得到濾出液36L，右旋糖酐濃度4.5％；HPLC檢測(cè)顯示濾出液Mw＝37400；M10＝108500；M90＝8900。
8.上述6的濾出液進(jìn)行超濾分離分級(jí)處理，超濾膜分子量規(guī)格1×103，超濾透析有21％的右旋糖酐干物質(zhì)濾出，得到截留液8.1L，右旋糖酐濃度5.9％，HPLC檢測(cè)顯示截留液Mw＝12400；M10＝36800；M90＝4100；濾出液86L。
9.上述7的透過(guò)液進(jìn)行離子交換柱脫鹽，微孔膜精濾處理，濃縮后進(jìn)行噴霧干燥，得到右旋糖酐40粉1510g。
有關(guān)本品質(zhì)量檢測(cè)分析

質(zhì)量分析符合《中國(guó)藥典》、BP、USP右旋糖酐40質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。樣品經(jīng)紅外光譜圖和核磁共振圖譜化學(xué)結(jié)構(gòu)分析，數(shù)據(jù)與傳統(tǒng)工藝產(chǎn)品的對(duì)照品一致。
10.上述7的截留液進(jìn)行離子交換柱脫鹽，微孔膜精濾處理后進(jìn)行噴霧干燥，得到右旋糖酐70粉217g。質(zhì)量分析符合《中國(guó)藥典》右旋糖酐70質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
11.上述8的截留液進(jìn)行離子交換柱脫鹽，微孔膜精濾處理后進(jìn)行噴霧干燥，得到右旋糖酐10粉435g。
實(shí)施例二1.實(shí)施例一2方法得到的截留液加熱，加酸緩和降解，降解調(diào)整右旋糖酐分子量，用HPLC檢測(cè)跟蹤檢測(cè)分子量及其分布，降解調(diào)整右旋糖酐分子量，結(jié)束時(shí)用NaOH調(diào)節(jié)PH至6.5，得到分子量Mw＝23000調(diào)整處理液，加入3％(W/V)活性炭，過(guò)濾，得到澄清無(wú)色濾液23L，右酐濃度12％。N含量＜50ppm。
2.上述1的脫色后的分子量調(diào)整處理液進(jìn)行超濾分級(jí)處理，超濾膜分子量規(guī)格5×104，超濾透析至90％的右旋糖酐干物質(zhì)濾出，得到截留液4.5L，右旋糖酐濃度6.2％；得到濾出液63.5L，右旋糖酐濃度3.9％；HPLC檢測(cè)分析顯示濾出液Mw＝21400；M10＝78000；M90＝3500。
3.上述2的濾出液進(jìn)行超濾分級(jí)處理，超濾膜分子量規(guī)格3.5×103，超濾透析有28％的右旋糖酐干物質(zhì)濾出，得到截留液10.2L，右旋糖酐濃度17.2％，HPLC檢測(cè)顯示截留液Mw＝24700；M10＝85000；M90＝4800；4.上述3的截留液進(jìn)行超濾分級(jí)處理，超濾膜分子量規(guī)格2×104，超濾透析有82％的右旋糖酐干物質(zhì)濾出，得到濾出液35L，右旋糖酐濃度4.1％，HPLC檢測(cè)及GPC軟件分析顯示濾出液Mw＝22100；M10＝65000；M90＝4200；得到截留液7.7L，右旋糖酐濃度4.0％；HPLC檢測(cè)顯示截留液Mw＝38200；M10＝103300；M90＝8300。
5.上述4的濾出液進(jìn)行離子交換柱脫鹽，微孔膜精濾處理，濃縮后進(jìn)行噴霧干燥，得到右旋糖酐粉1321g。質(zhì)量分析符合《中國(guó)藥典》右旋糖酐20質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
實(shí)施例三1.以蔗糖為底物，經(jīng)右旋糖酐菌種L.N.1226-a，用控制分子量發(fā)酵法得到發(fā)酵液，經(jīng)預(yù)先處理得到澄清液34.8L，其中右旋糖酐含量7.1％，果糖等單糖及寡糖含量7.9％，置納濾儲(chǔ)罐中。納濾膜規(guī)格1×103。膜的形式為卷式，材料為改良聚砜，操作溫度為60℃，操作壓力1.8Mpa，用適量純水漂洗截留液，得到截留液19.6L，右旋糖酐濃度12.4％，有99.9％的果糖等單糖及寡糖濾出。
2.上述1截留液經(jīng)脫色精制后置入超濾儲(chǔ)罐中進(jìn)行超濾處理，濾膜分子量規(guī)格10×104。膜的形式為卷式，材料是改良聚砜，操作溫度為50℃，操作壓力0.9Mpa，加入適當(dāng)水透析，得到濾出液45L，其中右旋糖酐濃度為濃度4.1％，HPLC檢測(cè)分析顯示Mw＝38200；M10＝108700；M90＝9200。
3.上述2的截留液進(jìn)行脫色、離子交換柱脫鹽，微孔膜精濾處理，濃縮后進(jìn)行噴霧干燥，得到右旋糖酐40粉1745g。質(zhì)量分析符合《中國(guó)藥典》右旋糖酐40質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
實(shí)施例四1.實(shí)施例一4方法的脫色后的分子量調(diào)整處理液22.5L右旋糖酐濃度12.2％進(jìn)行超濾分級(jí)處理，超濾膜分子量規(guī)格5×103，膜的形式為卷式，材料為改良聚砜，操作溫度為45℃，操作壓力0.8Mpa，超濾透析有20％的右旋糖酐干物質(zhì)濾出，得到截留液13.2L，右旋糖酐濃度16.6％，HPLC檢測(cè)顯示Mw＝47800；M10＝131000；M90＝10500，得到濾出液31.8L，右旋糖酐濃度1.7％。
2.上述1截留液進(jìn)行超濾分級(jí)處理，超濾膜分子量規(guī)格7×104，膜的形式為卷式，材料可以是改良聚砜，操作溫度為45℃，操作壓力M0.9pa，超濾透析至90％的右旋糖酐干物質(zhì)濾出，得到濾出液20.3L，右旋糖酐濃度9.6％；HPLC檢測(cè)顯示濾出液Mw＝42900；M10＝122000；M90＝8900。
3.上述2的濾出液進(jìn)行超濾分級(jí)處理，超濾膜分子量規(guī)格5×104，超濾透析有78％的右旋糖酐干物質(zhì)濾出，得到濾出液39.5L，右旋糖酐濃度3.8％，HPLC檢測(cè)顯示截留液Mw＝37900；M10＝107600；M90＝8300。
4.上述3的透過(guò)液進(jìn)行離子交換柱脫鹽，微孔膜精濾處理，濃縮后進(jìn)行噴霧干燥，得到右旋糖酐40粉1396g。質(zhì)量分析符合《中國(guó)藥典》右旋糖酐40質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
實(shí)施例五1.實(shí)施例一5方法的濾出液57L，右旋糖酐濃度4.1％進(jìn)行超濾分離分級(jí)處理，超濾膜分子量規(guī)格5×104，超濾透析至86％的右旋糖酐干物質(zhì)濾出，得到濾出液81L，右旋糖酐濃度2.4％；HPLC檢測(cè)顯示濾出液Mw＝30700；M10＝98000；M90＝4800。
2.上述1濾出液進(jìn)行超濾分離分級(jí)處理，超濾膜分子量規(guī)格5×103，超濾透析有27％的右旋糖酐干物質(zhì)濾出，得到截留液8.6L，右旋糖酐濃度16.2％，HPLC檢測(cè)顯示Mw＝38600；M10＝108500；M90＝7800。
3.上述2的截留液進(jìn)行離子交換柱脫鹽，微孔膜精濾處理，濃縮后進(jìn)行噴霧干燥，得到右旋糖酐粉1298g。質(zhì)量分析符合《中國(guó)藥典》右旋糖酐40質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
參照具體的材料、步驟，實(shí)施例已對(duì)本發(fā)明作了較詳細(xì)的說(shuō)明。但應(yīng)認(rèn)為本發(fā)明并不局限于上述實(shí)施例所述內(nèi)容，所有的具體物質(zhì)、物質(zhì)組合及步驟可依照本發(fā)明思想根據(jù)不同的目的產(chǎn)品規(guī)格作變化。本技術(shù)領(lǐng)域中熟練技術(shù)人員可以理解、使用這些細(xì)節(jié)作相應(yīng)的調(diào)整。
權(quán)利要求
1.一種右旋糖酐生產(chǎn)新工藝，其特征在于該工藝為發(fā)酵→一級(jí)超微濾膜或超濾膜處理，右酐透過(guò)→二級(jí)超濾膜或納濾膜分離，右酐截留→分子量降解處理→脫色純化→三級(jí)超濾膜分離→四級(jí)超濾膜分離→五級(jí)超濾膜分離→離交脫鹽純化→精濾→噴霧干燥；二級(jí)超濾膜或納濾膜分離，果糖濾出→納濾膜濃縮果糖回收。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種右旋糖酐生產(chǎn)新工藝，其特征在于對(duì)預(yù)處理的各類右旋糖酐發(fā)酵液進(jìn)行超微濾膜或超濾膜分離，這種膜分離是采用切向過(guò)濾方法，膜的規(guī)格為0.05μ-1.0μ，膜的形式為中空纖維、管式或者卷式；材料為聚砜、改良聚砜或聚醚砜等；操作溫度為10℃-70℃；適當(dāng)分子量的右旋糖酐分子以及所有較小分子的溶解性物質(zhì)透過(guò)規(guī)格對(duì)應(yīng)的膜，得到透過(guò)液；而不溶解物質(zhì)等被截留，起到分離純化作用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種右旋糖酐生產(chǎn)新工藝，其特征在于對(duì)用權(quán)利要求2所述超濾處理而得到的含右旋糖酐的濾出液進(jìn)行膜分離處理，所用的膜為分子量1×103-20×104的超濾膜或分子量＞200的納濾膜；膜的形式為管式、中空纖維或者卷式；材料為聚砜、改良聚砜或聚醚砜等；操作溫度為10℃-70℃，右旋糖酐分子被截留，而其它單糖、寡糖等較小分子的溶解性物質(zhì)透過(guò)膜，起到分離作用；用純水進(jìn)行漂洗截留液起到右旋糖酐的純化作用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種右旋糖酐生產(chǎn)新工藝，其特征在于可以先用超濾膜、納濾膜對(duì)預(yù)處理的各類右旋糖酐發(fā)酵液進(jìn)行膜分離處理，而得到含右旋糖酐的截留液，所用的膜為分子量1×103-20×104的超濾膜或分子量＞200的納濾膜，膜的形式為管式、中空纖維或者卷式；材料為聚砜、改良聚砜或聚醚砜等；操作溫度為10℃-70℃。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種右旋糖酐生產(chǎn)新工藝，其特征在于用權(quán)利要求4所述的截留液用權(quán)利要求2所述的超微濾膜或超濾膜進(jìn)行分離處理，這種膜分離是采用切向過(guò)濾方法，膜的規(guī)格為0.05μ-1.0μ，膜的形式為中空纖維、管式或者卷式；材料為聚砜、改良聚砜或聚醚砜等；操作溫度為10℃-70℃。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種右旋糖酐生產(chǎn)新工藝，其特征在于用權(quán)利要求3所述的方法得到的含右旋糖酐的截留液、或權(quán)利要求4所述的方法得到的截留液、或權(quán)利要求5所述的方法得到的含右旋糖酐的透過(guò)液濃縮后不符和分子量及分布要求的進(jìn)行分子量降解和調(diào)整處理，得到分子量調(diào)整處理液，該分子量調(diào)整處理液用不同規(guī)格的超濾膜進(jìn)行不同分子量及分布的分離分級(jí)處理，膜的規(guī)格為分子量103～20×104；膜的形式為中空纖維、平板、管式或者卷式；材料是聚砜或改良聚砜、聚醚砜；操作溫度為10℃-70℃，分子量調(diào)整處理液的右旋糖酐分子量與分子量分布為Mw＝0.5×104～8×104，M10＝2×104～20×104，M90＝1×103～2×104，經(jīng)過(guò)膜分離后得到右旋糖酐70；右旋糖酐40；右旋糖酐20；或其它規(guī)格右旋糖酐。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的分子量調(diào)整處理液，其特征在于該分子量調(diào)整處理液可以用分子量2×104～20×104的超濾膜進(jìn)行分子量分級(jí)處理，膜的材料形式和操作條件同權(quán)利要求6所述，可將右旋糖酐溶液分成兩部分，截留液平均分子量Mw＝2×104～～20×104，濾出液平均分子量Mw＝0.5×104～7×104，濾出液中右旋糖酐的總量為55％-95％。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的濾出液，其特征在于所述的濾出液可以用分子量1×103～1×104的超濾膜進(jìn)行分子量分級(jí)處理，膜的材料形式和操作條件同權(quán)利要求6所述，可將右旋糖酐溶液分成兩部分，截留液平均分子量Mw＝1×104～7×104，濾出液平均分子量Mw＝1×103～1×104，濾出液中右旋糖酐的總量為1％-40％。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的濾出液，其特征還在于權(quán)利要求8所述的截留液可以用分子量1×104～7×104的超濾膜進(jìn)行分子量及分布調(diào)整，使濾出液中右旋糖酐的分子量及分布可以符合右旋糖酐40或右旋糖酐20的要求，膜的材料形式和操作條件同權(quán)利要求6所述。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種右旋糖酐生產(chǎn)新工藝，其特征在于權(quán)利要求7～9所述的用超濾膜進(jìn)行右旋糖酐分子量分級(jí)處理，也可以按8、7、9或7、9、8的次序進(jìn)行，也可以按7、8兩級(jí)膜分離，膜的材料形式和操作條件同權(quán)利要求6所述，其特征與權(quán)利要求7～9所述相對(duì)應(yīng)。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種右旋糖酐生產(chǎn)新工藝，其特征在于右旋糖酐發(fā)酵液為傳統(tǒng)工藝得到的發(fā)酵液，或?yàn)楦鞣N控制分子量發(fā)酵法得到的發(fā)酵液及酶工程方法得到的發(fā)酵液，發(fā)酵液中分子量與分布符合目標(biāo)產(chǎn)品要求的可不進(jìn)行降解處理，同時(shí)可減少膜分離次數(shù)。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種右旋糖酐生產(chǎn)新工藝，其特征在于對(duì)權(quán)利要求3所述的濾出液或?qū)?quán)利要求4所述的濾出液進(jìn)行二級(jí)串聯(lián)納濾膜處理，納濾膜分子量規(guī)格＜150，膜的形式是卷式，材料可以是聚砜、改良聚砜、聚醚砜等；操作溫度為10C-70C，果糖等糖類物質(zhì)被截留，而更小分子的無(wú)機(jī)鹽等物質(zhì)透過(guò)膜，用適量純水漂洗截留液，可進(jìn)行果糖等糖類物質(zhì)的純化，并且可以進(jìn)行濃縮，得到截留液糖濃度可達(dá)35％；而濾出液中果糖濃度＜0.01％。
全文摘要
本發(fā)明屬醫(yī)藥原料技術(shù)領(lǐng)域和化學(xué)原料技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明提供了一種在水溶液中用超濾膜、納濾膜提取、純化和不同分子量組分的分級(jí)制備右旋糖酐的方法，用超濾膜方法制備的右旋糖酐溶液可經(jīng)進(jìn)一步純化、干燥后可得到右旋糖酐原料藥。整個(gè)過(guò)程不用乙醇及其他任何有機(jī)溶劑，而用超濾、納濾膜分離技術(shù)，從右旋糖酐發(fā)酵液制備各種規(guī)格的右旋糖酐。
文檔編號(hào)C08B37/00GK1415631SQ0113204
公開日2003年5月7日 申請(qǐng)日期2001年10月30日 優(yōu)先權(quán)日2001年10月30日
發(fā)明者曾和, 花逾冬 申請(qǐng)人:曾和, 花逾冬