專利名稱：制備n6－取代的脫氮雜一腺苷衍生物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種制備N6-取代的腺苷衍生物的方法，用于該方法的中間體以及制備這些中間體的方法。
制備這些化合物和其中間體的方法公開于美國專利5,364,862和5,561,134以及國際專利申請?zhí)朠CT/US97/11320、PCT/US97/15729和PCT/US97/21439中。
Y為NR4、O或S；a＝0或1；Z為下式基團 或 Z1為N、CR5、(CH)m-CR5或(CH)m-N，m為1或2；Z2為N、NR6、O或S；n為0或1；R1，R2，R3，R4，R5和R6獨立地為H、烷基、芳基或雜環(huán)基；R7和R8獨立地為H、烷基、芳烷基、氨基甲酰基、烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、酰基、烷氧基羰基、芳烷氧基羰基或芳氧基羰基；或R7和R8一起可以形成 其中Rc為氫或烷基， 其中Rd和Re獨立地為氫或烷基，或Rd和Re與它們所連接的碳原子一起形成1，1-環(huán)烷基；和Ra和Rb獨立地為H、OH、烷基、羥基烷基、烷基巰基、硫代烷基、烷氧基、烷氧基烷基、氨基、烷基氨基、羧基、?；?、鹵素、氨基甲?；?、烷基氨基甲?；?、芳基或雜環(huán)基，該方法包括使下式的4-N-保護的-2，3，4-三氨基吡啶化合物 與甲酸衍生物反應(yīng)。
相對于以前公開的制備方法，本發(fā)明的方法提供了改進的產(chǎn)率、純度、中間體和最終產(chǎn)物制備和/或分離的容易性，并提供更為工業(yè)有用的反應(yīng)條件和可操作性。發(fā)明詳述術(shù)語定義除非另有指明，本發(fā)明上文以及整個描述中所用的下列術(shù)語具有下列含義“酰基”指直鏈或支鏈烷基-C＝O基團?！傲虼；敝钢辨溁蛑ф溚榛?C＝S基團。優(yōu)選的酰基和硫代?；窃谕榛芯哂?-約6個碳原子的低級鏈烷?；偷图壛虼溚轷；?br> “烷基”指可以是直鏈或支鏈且在鏈中具有1-約20個碳原子的飽和脂族烴基。優(yōu)選的烷基可以是直鏈或支鏈的且在鏈中具有1-約10個碳原子。支鏈指低級烷基如甲基、乙基或丙基連接于線性烷基鏈上。
“低級烷基”指具有1-約6個碳原子的烷基。
“環(huán)烷基”指在環(huán)中具有3-約10碳原子的脂族環(huán)。優(yōu)選的環(huán)烷基在環(huán)中具有4-約7個碳原子。
“氨基甲?；敝?基團。烷基氨基甲?；投榛被柞；赴被柞；牡謩e被一個或兩個烷基取代。
“羧基”指COOH基團。
“烷氧基”指烷基-O-基團，其中“烷基”如前所述。低級烷氧基是優(yōu)選的。例舉基團包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基和正丁氧基。
“烷氧基烷基”指被如前所述的烷氧基取代的如前所述的烷基。
“烷氧基羰基”指烷氧基-C＝O基團。
“芳烷基”指被芳基取代的烷基，其中“芳基”指苯基或萘基?！叭〈姆纪榛焙汀叭〈姆蓟敝阜蓟蚍纪榛姆蓟灰粋€或多個取代基取代，其中取代基包括烷基、烷氧基、氨基、硝基、羧基、烷酯基、氰基、烷基氨基、鹵素、羥基、羥基烷基、巰基、烷基巰基、三鹵代烷基、羧基烷基或氨基甲?；?br> “芳烷氧基羰基”指芳烷基-O-C＝O基團。
“芳氧基羰基”指芳基-O-C＝O基團。
“烷酯基”指用式CnH2n+1OH的醇酯化的羧基取代基，其中n為1-約6。
“鹵素”(或“鹵代”)指氯(氯代)、氟(氟代)、溴(溴代)或碘(碘代)。
“雜環(huán)基”指約4-約10元環(huán)結(jié)構(gòu)，其中一個或多個環(huán)原子為碳以外的元素，如N、O或S。雜環(huán)基可以是芳族的或非芳族的，即可以是飽和的、部分或完全不飽和的。優(yōu)選的雜環(huán)基包括吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、異喹啉基、喹啉基、喹唑啉基、咪唑基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、苯并噻唑基、哌啶基、吡咯烷基、四氫呋喃基、四氫吡喃基和嗎啉基。
“取代的雜環(huán)基”指雜環(huán)基被一個或多個取代基取代，其中取代基包括烷氧基、烷基氨基、芳基、烷酯基、氨基甲?；?、氰基、鹵代、雜環(huán)基、三鹵代甲基、羥基、巰基、烷基巰基或硝基。
“羥基烷基”指被羥基取代的烷基。羥基低級烷基是優(yōu)選的。例舉的優(yōu)選基團包括羥基甲基、2-羥基乙基、2-羥基丙基和3-羥基丙基。
“氮保護基團”指易于除去的基團，其在本領(lǐng)域已知保護氨基以防在合成程序過程中發(fā)生不希望的反應(yīng)并可選擇性除去。N-保護基團的使用在本領(lǐng)域眾所周知用于保護基團以防在合成程序過程中發(fā)生不希望的反應(yīng)并且許多這類保護基團是已知的，例如參見T.H.Greene和P.G.M.Wuts，有機合成中的保護基團，第二版，John Wiley & Sons，紐約(1991)，其在此引作參考。代表性N-保護基團包括磺酰胺如甲磺?；?Ms)、三氟甲磺?；?Tf)、苯磺酰基(或苯基磺?；?、對甲苯磺酰基(Ts)、對甲氧基苯磺酰基、苯甲酰甲基磺?；?；氨基甲酸酯如甲氧基羰基、乙氧基羰基、2，2，2-三氯乙氧基羰基(Troc)、2-三甲基甲硅烷基乙氧基羰基(Teoc)、叔丁氧基羰基(Boc)等；酰胺如甲?；?、乙?；?、苯甲酰基、三氟乙?；?；N-烷基衍生物如芐基；以及N-氧膦基衍生物如二苯基膦?；?phosphinoyl)。
在特殊的實施方案中，術(shù)語“約”或“大約”指給定值或范圍的20％以內(nèi)，優(yōu)選10％以內(nèi)，更優(yōu)選5％以內(nèi)。
該反應(yīng)優(yōu)選使用叔丁醇鉀在四氫呋喃中于約65℃下完成。產(chǎn)物優(yōu)選通過用甲醇和庚烷洗滌而提純。
另外，可以使用式P-NM-X-(Y)a-Z的被保護胺(III)的金屬取代(metalated)形式，其中M為金屬陽離子如Li+，此時不必使用額外的堿。
2-鹵代-3-硝基-4-N-保護的氨基吡啶化合物(IV)然后與保護的二羥基氨基環(huán)戊烷化合物(V)在無機碳酸氫鹽堿如碳酸氫鉀；叔胺或芳族胺堿如4-甲基嗎啉；醇鹽如叔丁醇鉀或叔戊醇鉀等；無機碳酸鹽堿如碳酸鉀；金屬氫化物堿如氫化鈉或氫化鉀；烷基鋰堿如丁基鋰；或氟化物堿如氟化鉀存在下在酯類溶劑如乙酸乙酯；醚類溶劑如四氫呋喃，叔丁基甲基醚等；芳族烴溶劑如甲苯；或極性非質(zhì)子傳遞溶劑如二甲基甲酰胺，1-甲基-2-吡咯烷酮，二甲亞砜等中于約室溫至溶劑的回流溫度的溫度下反應(yīng)，形成4-N-保護的-2，4-二氨基-3-硝基吡啶化合物(VI)。該反應(yīng)優(yōu)選使用碳酸鉀在乙酸乙酯中于約80℃下進行。
保護的二羥基氨基環(huán)戊烷化合物(V)可以以游離堿使用或以酸加成鹽使用。優(yōu)選的酸加成鹽是三氟乙酸鹽或苯甲酸鹽。
將4-N-保護的-2，4-二氨基-3-硝基吡啶化合物(VI)還原形成4-N-保護的-2，3，4-三氨基吡啶化合物(VII)使用還原芳族硝基化合物領(lǐng)域眾所周知的方法進行，例如使用過渡金屬催化劑如鉑的催化氫化。還原也可以使用金屬如鋅、鐵或錫在質(zhì)子源如乙酸銨存在下進行。溶劑通常是醇，或非質(zhì)子有機溶劑如乙酸乙酯或甲苯與醇如甲醇的混合物。還原優(yōu)選通過在碳載鉑存在下在乙酸乙酯和甲醇的混合物中于室溫和約50psi氫氣下催化氫化而進行。
4-N-保護的-2，3，4-三氨基吡啶化合物(VII)然后通過與甲酸衍生物如原甲酸三乙酯、乙酸二乙氧基甲基酯或甲脒乙酸鹽等在極性非質(zhì)子傳遞溶劑如二甲基甲酰胺；高沸點醇如正丁醇；酯如乙酸正丁酯；酐如乙酸酐；或芳族烴如甲苯中反應(yīng)而轉(zhuǎn)化為N-保護的N6-取代的腺苷衍生物(VIII)。另外，試劑本身(例如原甲酸三乙酯)可以用作該反應(yīng)的溶劑。該反應(yīng)任選由酸如鹽酸或?qū)妆交撬岽呋?。該反?yīng)在約室溫至溶劑的回流溫度的溫度下進行。優(yōu)選的反應(yīng)條件是原甲酸三乙酯在乙酸酐中于約120℃下。
胺保護基團P的除去使用除去氮保護基團領(lǐng)域已知的試劑進行。當(dāng)P為磺酰氨基如對甲苯磺酰基時，使用強酸如甲磺酸、鹽酸、三氟乙酸等或強路易斯酸如三氟甲磺酸三甲基甲硅烷基酯在極性質(zhì)子溶劑如乙酸、三氟乙酸或水等中裂解保護基團。通常也使用陽離子清除劑如茴香硫醚，使得最終產(chǎn)物的純度增加。在前述方法的優(yōu)選方面，基團R7和R8一起形成二甲基丙酮化物，此時上面對P的除去所描述的強酸性條件通常也導(dǎo)致丙酮化物的水解。除去氮保護基團P的優(yōu)選條件是三氟乙酸三甲基甲硅烷基酯與茴香硫醚在三氟乙酸中于約70℃。
另外，甲苯磺?；部赏ㄟ^使用金屬如鋰、鈉、鈉-汞配對、鎂等由還原方法選擇性除去。對于鋰和鈉，通常將氨用作溶劑(溶解金屬還原)。鎂還原通常在醇如甲醇中進行。甲苯磺?；部捎脷浠镌噭┤缛一饸浠囋诜琴|(zhì)子傳遞溶劑如THF中除去或電解除去。
在氮保護基團P被選擇性除去時，基團R7和R8隨后使用除去羥基保護基團領(lǐng)域已知的技術(shù)除去。當(dāng)R7和R8一起形成二甲基丙酮化物時，該丙酮化物使用酸如鹽酸或三氟乙酸在質(zhì)子溶劑如水或醇中水解；或也可使用有機溶劑如四氫呋喃。丙酮化物水解優(yōu)選使用含水濃鹽酸和四氫呋喃的混合物在室溫至約35℃的溫度下進行。
在前述方法的優(yōu)選方面，Q為CH2；T為 X為直鏈或支鏈亞烷基；a＝0；Z為 Z1為N、CR5、(CH)m-CR5或(CH)m-N，m為1或2；Z2為N、NR6、O或S；n為0或1；R1，R2，R3，R4，R5和R6獨立地為H或烷基；R7和R8獨立地為H或烷基，或R7和R8一起可以形成 其中Rd和Re獨立地為氫或烷基，或與它們所連接的碳原子一起形成1，1-環(huán)烷基；和Ra和Rb獨立地為H、OH、烷基、羥基烷基、烷基巰基、硫代烷基、烷氧基、烷氧基烷基、氨基、烷基氨基、羧基、?；?、鹵素、氨基甲?；?、烷基氨基甲酰基、芳基或雜環(huán)基。
在前述方法的更優(yōu)選方面，P選自磺酰胺、氨基甲酸酯、酰胺、N-烷基衍生物和N-氧膦基衍生物。
在前述方法的進一步優(yōu)選方面，P為磺酰胺衍生物。
在前述方法的尤為優(yōu)選方面，P為對甲苯磺?；?br> 制備[1S-[1α，2 β，3β，4α(S*)]]-4-[7-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]氨基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-基]N-乙基2，3-二羥基環(huán)戊烷羧酰胺(XV)的方法如方案2所示。
方案2
如前述方案2所示，使2，4-二鹵代-3-硝基吡啶(II)(X1＝F，X2＝Cl或F)與(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-4-甲基苯磺酰胺化合物(IX)反應(yīng)形成(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-N-(2-鹵代-3-硝基吡啶-4-基)-4-甲基苯磺酰胺化合物(X)(X2＝Cl或F)。
當(dāng)P’為H時，該反應(yīng)通過與堿，優(yōu)選叔丁醇鉀在四氫呋喃中于約0℃至室溫的溫度下反應(yīng)，然后加入2，4-二鹵代-3-硝基吡啶化合物并在約65℃加熱而由仲胺的脫質(zhì)子進行。當(dāng)P’為Li時，不要求額外的堿且(II)和(IX)的反應(yīng)優(yōu)選在回流的1-甲基-2-吡咯烷酮或甲苯中進行。
在前述的一個優(yōu)選方面，2，4-二鹵代-3-硝基吡啶化合物(II)是2，4-二氟-3-硝基吡啶，其通過2，4-二氯-3-硝基吡啶與親核性氟化物試劑，優(yōu)選KF反應(yīng)制備。2，4-二氯-3-硝基吡啶與該親核性氟化物試劑的不完全反應(yīng)導(dǎo)致形成2，4-二氟-3-硝基吡啶和2-氯-4-氟-3-硝基吡啶的混合物。使用該混合物與(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)]甲基]丙基]-4-甲基苯磺酰胺-化合物(IX)反應(yīng)導(dǎo)致形成(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-N-(2-鹵代-3-硝基吡啶-4-基)-4-甲基苯磺酰胺-化合物(X)，其中鹵代為Cl和F的混合物。
(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-N-(2-鹵代-3-硝基吡啶-4-基)-4-甲基苯磺酰胺-化合物(X)，然后與3aR-[3aα，4α，6a，6aα]-6-氨基-N-乙基四氫-3，3-二甲基-2，4-二氧雜雙環(huán)[3.3.0]辛烷-8-羧酰胺，苯甲酸鹽(XI)反應(yīng)，形成[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3-硝基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并(cyclopenta)-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺(XII)。該反應(yīng)優(yōu)選使用過量醇鹽堿，優(yōu)選碳酸鉀，在約80℃下于有機溶劑如乙酸乙酯或1-甲基-2-吡咯烷酮中進行。1-甲基-2-吡咯烷酮在鹵代為氯和氟的混合物時是優(yōu)選的溶劑。3aR-[3aα，4α，6a，6aα]-6-氨基-N-乙基四氫-3，3-二甲基-2，4-二氧雜雙環(huán)[3.3.0]辛烷-8-羧酰胺苯甲酸鹽的制備描述于美國專利5,808,093、5,670,649和5,684,159中，其內(nèi)容在此引作參考。
然后如上面的方案1所述將[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺酰基]氨基]-3-硝基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺(XII)還原形成[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3-氨基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺(XIII)，優(yōu)選通過在催化鉑/碳存在下在乙酸乙酯和甲醇的混合物中于約室溫和約50-55psi氫氣下的催化氫化。
然后如上面的方案1所述將[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3-氨基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺(XIII)環(huán)化形成[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[7-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺(XIV)。
通過如上面的方案1所述同時或依次除去甲苯磺?；投谆飳3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[7-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺(XIV)轉(zhuǎn)化為[1S-[1 α，2β，3β，4α(S*)]]-4-[7-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]氨基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-基]N-乙基2，3-二羥基環(huán)戊烷羧酰胺(XV)。
選擇性除去甲苯磺酰基優(yōu)選使用金屬鎂在甲醇和甲苯的混合物中于約40℃下進行或使用氫化物試劑如三乙基硼氫化鋰在四氫呋喃中于約0℃進行。然后使用酸如鹽酸或三氟乙酸在質(zhì)子溶劑如水或醇或有機溶劑如四氫呋喃中水解二甲基丙酮化物。丙酮化物水解優(yōu)選使用含水濃鹽酸和四氫呋喃的混合物在室溫至約35℃下進行。
使用強酸如甲磺酸、鹽酸、三氟乙酸等或強路易斯酸如三氟甲磺酸三甲基甲硅烷基酯在極性質(zhì)子溶劑如乙酸、三氟乙酸、水等中同時除去甲苯磺?；退獗?。通常也可以使用陽離子清除劑如茴香硫醚，導(dǎo)致最終產(chǎn)物的純度增加。通過將[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[7-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺和三氟乙酸三甲基甲硅烷基酯的混合物在三氟乙酸/甲苯中于約70℃下加熱或通過將[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[7-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺、甲磺酸和茴香硫醚的混合物在三氟乙酸中于約85℃加熱而同時除去甲苯磺酰基和二甲基丙酮化物。
另一方面，本發(fā)明涉及一種制備[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[7-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺酰基]氨基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺的方法，包括(i)使(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-N-(2-氟-3-硝基吡啶-4-基)-4-甲基苯磺酰胺與3aR-[3aα，4α，6a，6aα]-6-氨基-N-乙基四氫-3，3-二甲基-2，4-二氧雜雙環(huán)[3.3.0]辛烷-8-羧酰胺苯甲酸鹽反應(yīng)，形成[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3-硝基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺，(ii)將步驟(i)中制備的[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺酰基]氨基]-3-硝基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺還原，形成[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3-氨基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺，和(iii)使在上面步驟2中制備的[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺酰基]氨基]-3-氨基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺與原甲酸酯、甲脒乙酸鹽或二甲基甲酰胺縮二甲醇反應(yīng)，其中步驟(i)-(iii)以連續(xù)(concatenated)方式進行而不需提純中間體化合物[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3-硝基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺和[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3-氨基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺。
例如，將(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-N-(2-氟-3-硝基吡啶-4-基)-4-甲基苯磺酰胺與3aR-[3aα，4α，6a，6aα]-6-氨基-N-乙基四氫-3，3-二甲基-2，4-二氧雜雙環(huán)[3.3.0]辛烷-8-羧酰胺苯甲酸鹽和碳酸鉀在乙酸乙酯中加熱，形成[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3-硝基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺的乙酸乙酯溶液。該乙酸乙酯溶液用水和鹽水洗滌以除去水溶性雜質(zhì)，然后將該乙酸乙酯溶液用甲醇稀釋，加入鉑催化劑并在約50psi氫氣下氫化混合物，得到[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3-氨基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺的乙酸乙酯/甲醇溶液。濾除催化劑，濾液濃縮，并將原甲酸三乙酯和乙酸酐加入粗[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3-氨基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺中。加熱該混合物使其轉(zhuǎn)化為[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[7-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺，通過結(jié)晶，優(yōu)選使用2-丙醇而分離。
在另一方面，本發(fā)明涉及一種制備其中鹵代為氯或氟的(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-N-(2-鹵代-3-硝基吡啶-4-基)-4-甲基苯磺酰胺的方法，包括(i)使2，4-二氯-3-硝基吡啶與氟化劑反應(yīng)，形成2，4-二氟-3-硝基吡啶或2，4-二氟-3-硝基吡啶和2-氯-4-氟-3-硝基吡啶的混合物，和(ii)使步驟(i)的產(chǎn)物與(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-4-甲基苯磺酰胺鋰鹽或(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-4-甲基苯磺酰胺反應(yīng)，其中步驟(i)和(ii)以連續(xù)方式進行而不分離步驟(i)的產(chǎn)物。
例如在甲苯或甲苯/1-甲基-2-吡咯烷酮中加熱2，4-二氯-3-硝基吡啶與KF和催化四丁基溴化銨的混合物導(dǎo)致形成2，4-二氟-3-硝基吡啶的溶液。然后將(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-4-甲基苯磺酰胺鋰鹽加入該溶液中并將該混合物加熱以使其轉(zhuǎn)化為(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-N-(2-氟-3-硝基吡啶-4-基)-4-甲基苯磺酰胺，通過結(jié)晶，優(yōu)選通過反應(yīng)混合物的含水萃取，然后加入烴溶劑如庚烷于有機溶液中而分離。
在前述方法的另一方面，使用過量的KF，其用作第一步中的氟化劑和第二步中的堿，從而可以利用(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-4-甲基苯磺酰胺而不是其鋰鹽。
在另一方面，本發(fā)明涉及一種制備[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[7-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺的方法，包括(i)使2，4-二氯-3-硝基吡啶與氟化劑反應(yīng)形成2，4-二氟-3-硝基吡啶，(ii)使2，4-二氟-3-硝基吡啶與(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-4-甲基苯磺酰胺鋰鹽或(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-4-甲基苯磺酰胺反應(yīng)形成(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-N-(2-氟-3-硝基吡啶-4-基)-4-甲基苯磺酰胺，(iii)使(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-N-(2-氟-3-硝基吡啶-4-基)-4-甲基苯磺酰胺與3aR-[3aα，4α，6a，6aα]-6-氨基-N-乙基四氫-3，3-二甲基-2，4-二氧雜雙環(huán)[3.3.0]辛烷-8-羧酰胺苯甲酸鹽反應(yīng)，形成[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3-硝基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2--二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺，(iv)還原步驟(i)中制備的[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3-硝基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺，形成[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺酰基]氨基]-3-氨基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺，和(v)使[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺酰基]氨基]-3-氨基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺與原甲酸酯、甲脒乙酸鹽或二甲基甲酰胺縮二甲醇反應(yīng)，其中步驟(i)-(V)以連續(xù)方式進行而不提純中間體化合物2，4-二氟-3-硝基吡啶、(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-N-(2-鹵代-3-硝基吡啶-4-基)-4-甲基苯磺酰胺，[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3-硝基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺和[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3-氨基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺，其中該連續(xù)通過結(jié)合上面描述的連續(xù)方法進行。
在另一方面，本發(fā)明涉及式(XVI)化合物 其中A為NH2或NO2；P為氮保護基團；W為Cl、F或下式基團 Q為CH2或O；T為 或R3O-CH2；X為直鏈或支鏈亞烷基、亞環(huán)烷基或亞環(huán)烯基；Y為NR4、O或S；a＝0或1；Z為下式基團 或 Z1為N、CR5、(CH)m-CR5或(CH)m-N，m為1或2；Z2為N、NR6、O或S；n為0或1；R1，R2，R3，R4，R5和R6獨立地為H、烷基、芳基或雜環(huán)基；R7和R8獨立地為H、烷基、芳烷基、氨基甲?；⑼榛被柞；?、二烷基氨基甲?；Ⅴ；?、烷氧基羰基、芳烷氧基羰基或芳氧基羰基；或R7和R8一起可以形成 其中Rc為氫或烷基， 其中Rd和Re獨立地為氫或烷基，或Rd和Re與它們所連接的碳原子一起形成1，1-環(huán)烷基；和Ra和Rb獨立地為H、OH、烷基、羥基烷基、烷基巰基、硫代烷基、烷氧基、烷氧基烷基、氨基、烷基氨基、羧基、酰基、鹵素、氨基甲?；?、烷基氨基甲?；?、芳基或雜環(huán)基，該化合物是在使用本文所述方法制備N-保護的N6-取代的腺苷化合物時有用的中間體。
優(yōu)選的化合物具有式(XVI)，中P選自磺酰胺、氨基甲酸酯、酰胺、N-烷基衍生物和N-氧膦基衍生物。
更優(yōu)選的化合物具有式(XVI)，其中P為磺酰氨基。
進一步優(yōu)選的化合物具有式(XVI)，其中P為磺酰氨基；Q為CH2；T為 X為直鏈或支鏈亞烷基；a＝0；Z為 Z1為N、CR5、(CH)m-CR5或(CH)m-N，m為1或2；Z2為N、NR6、O或S；n為0或1；R1，R2，R5和R6獨立地為H或烷基；R7和R8為烷基，或R7和R8一起可以形成 其中Rd和Re獨立地為氫或烷基，或與它們所連接的碳原子一起形成1，1-環(huán)烷基；和
Ra和Rb獨立地為H、OH、烷基、羥基烷基、烷基巰基、硫代烷基、烷氧基、烷氧基烷基、氨基、烷基氨基、羧基、?；?、鹵素、氨基甲?；?、烷基氨基甲?；?、芳基或雜環(huán)基。
代表性的進一步優(yōu)選的化合物包括但不限于[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺酰基]氨基]-3-硝基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺；[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3-氨基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺；和[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[7-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺。
通過參考下列實施例可以更好地理解上面的描述，實施例用于說明的目的且并不意欲限制本發(fā)明的范圍。
實施例1制備(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-4-甲基苯磺酰胺 在0℃下用惰性氣氛保護的三頸圓底燒瓶中將5g3-氯-2-(2-氨基丁基)噻吩溶解于10ml二氯甲烷中。一次加入吡啶(2.2ml)，然后加入3.37ml苯磺酰氯。后一試劑的加入速率應(yīng)使二氯甲烷溶液溫?zé)嶂?5℃。溫?zé)嶂潦覝睾?，將混合物攪?小時，用100ml乙醚稀釋。將溶液傾入分液漏斗中并用水、稀1N HCl、飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌。有機相用硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮，得到(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-4-甲基苯磺酰胺(6.7g)，為橙色油。
1H NMR(200MHz；CDCl3)δ0.82(3H，t，CH3)，1.6(2H，m，CH2)，2.85(2H，d，CH2)，3.45(1H，m，CH)，6.8(1H，d，CH)，7.1(1H，d，CH)，7.4-8.2(5H，m，Ph)。
實施例2制備(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-4-甲基苯磺酰胺的 步驟1在室溫下于圓底燒瓶中將4g2-(R)-氨基丁醇和7.2gNaOH懸浮于甲苯中。在攪拌下一次加入苯磺酰氯(16.7g)。將所得白色懸浮液在62℃下加熱6小時。加入水(90ml)并分離各層。有機層用70ml水洗滌，用硫酸鎂干燥并濃縮，得到1-苯磺?；?2(R)-乙基氮丙啶(6.7g)，為無色油，通過在硅膠上的快速色譜提純。MSm/z(EI，70EV)212(20％)。
步驟2用2-鋰代-3-氯噻吩將1-苯磺?；?2(R)-乙基氮丙啶打開，產(chǎn)生苯磺?；Ｗo的氯噻吩基丁基胺，如PCT/US97/15729所述。1HNMR(200MHz；CDCl3)δ0.82(3H，t，CH3)，1.6(2H，m，CH2)，2.85(2H，d，CH2)，3.45(1H，m，CH)，6.8(1H，d，CH)，7.1(1H，d，CH)，7.4-8.2(5H，m，Ph)。
實施例3制備(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-4-溴苯磺酰胺 在0℃惰性氣氛保護的三頸圓底燒瓶中將5g3-氯-2-(2-氨基丁基)噻吩溶解于10ml二氯甲烷中。一次加入吡啶(2.2ml)，然后加入6.74g已預(yù)先溶解于10ml二氯甲烷中的4-溴苯磺酰氯。加入完成后，將混合物在室溫下攪拌3小時，然后在回流下攪拌2小時。加入2當(dāng)量的三乙胺并將混合物在室溫下攪拌14小時，然后用100ml乙醚稀釋。將溶液傾入分液漏斗中并用水、稀1N HCl、飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮，得到(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-4-溴苯磺酰胺(8.3g)，為橙色油，靜置時固化。MSm/z(EI，70EV)410(15％)。1H NMR(200MHz；CDCl3)δ0.9(3H，t，CH3)，1.6(2H，m，CH2)，2.85(2H，d，CH2)，3.45(1H，m，CH)，6.75(1H，d，CH)，7.1(1H，d，CH)，7.4-7.8(4H，m，Ph)。
實施例4制備(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-4-硝基苯磺酰胺 在0℃惰性氣氛保護的三頸圓底燒瓶中將6g3-氯-2-(2-氨基丁基)噻吩溶解于10ml二氯甲烷中。一次加入三乙胺(6.6ml)，然后加入7.8g已預(yù)先溶解于10ml二氯甲烷中的4-硝基苯磺酰氯。室溫攪拌1小時后，真空除去二氯甲烷并在溫?zé)嵯录尤?0ml甲醇以溶解所有固體。所得溶液傾入冷水中，攪拌30分鐘，過濾并用冷水洗滌，分離的物質(zhì)在真空烘箱中干燥，得到(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-4-硝基苯磺酰胺(11.3g)，為褐色固體。MSm/z(EI，70EV)375(10％)。1H NMR(200MHz；CDCl3)δ0.95(3H，t，CH3)，1.7(2H，m，CH2)，2.85(2H，m，CH2)，3.5(1H，m，CH)，6.65(1H，d，CH)，7.0(1H，d，CH)，7.9(2H，d，Ph)，8.2(2H，d，Ph)。
實施例5制備(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]甲磺酰胺 在0℃惰性氣氛保護的三頸圓底燒瓶中將5g3-氯-2-(2-氨基丁基)噻吩溶解于10ml二氯甲烷中。一次加入吡啶(2.2ml)，然后加入2.05ml甲磺酰氯。溫?zé)嶂潦覝睾?，將混合物攪?小時，然后用100ml乙醚稀釋。將溶液傾入分液漏斗中并用水、稀2N HCl、飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮，得到(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]甲磺酰胺(5.5g)，為橙色油，在冰箱中靜置過夜時固化。MSm/z(EI，70EV)267(5％)。1H NMR(200MHz；CDCl3)δ1.0(3H，t，CH3)，1.6(2H，m，CH2)，2.65(3H，s，CH3)，3.0(2H，m，CH2)，3.6(1H，m，CH)，6.9(1H，d，CH)，7.2(1H，d，CH)。
實施例6制備2，4-二氟-3-硝基吡啶2，4-二氟-3-硝基吡啶通過如下所述改變Kroon等的程序(Rel.Trav.Chim.Pays-Bas95127，1976)而制備。 方法A向反應(yīng)容器中加入1當(dāng)量2，4-二氯-3-硝基吡啶，3.5當(dāng)量KF，0.05當(dāng)量18-冠-6和1-甲基-2-吡咯烷酮。將混合物加熱至100℃并保持15小時，然后冷卻至22℃。將乙酸乙酯加入反應(yīng)容器中并將混合物攪拌15分鐘。將混合物用水洗滌，然后用鹽水洗滌。乙酸乙酯層用硫酸鎂干燥并在減壓下除去乙酸乙酯，得到標(biāo)題化合物。
方法B在攪拌下將300g(1.56mol，1當(dāng)量)2，4-二氯-3-硝基吡啶、1.0L1-甲基-2-吡咯烷酮、270.5g(4.65mol，2.97當(dāng)量)氟化鉀和66.0g(0.25mol，0.16當(dāng)量)18-冠-6的混合物在100℃下加熱2小時。將反應(yīng)混合物冷卻至20℃并加入1.75L水。攪拌混合物直至無機鹽溶解。加入1.75L叔丁基甲基醚(TMBE)。攪拌混合物并分離各層。有機層用300ml鹽水洗滌并用硫酸鎂干燥。然后減壓濃縮有機層。得到2，4-二氟-3-硝基吡啶(208g，83％產(chǎn)率)，為棕色油，純度為97A％(HPLC)。該油可以直接使用或蒸餾。在61-64℃和4.0乇下蒸餾42.61g2，4-二氟-3-硝基吡啶得到標(biāo)題化合物(38.15g，90％產(chǎn)率，99.6A％(HPLC))，無色油。1H-NMR(200MHz，CDCl3)δ8.45(1H，ap.t)，7.28(1H，dd)。MS(EI，70eV，相對強度)160(M+，75)，114(25)。
另外，該反應(yīng)可以用0.3當(dāng)量四丁基溴化銨代替18-冠-6在甲苯中于110℃下進行。
實施例7制備(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-4-甲基苯磺酰胺 在65℃和攪拌下加熱50.0g(0.143mol)(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-4-甲基苯磺酰胺鋰鹽(如PCT/US97/15729所述制備)在50g甲醇中的混合物，直到固體的溶解完成。將溶液冷卻至60℃并將85g水滴加入混合物中。將混合物攪拌1.5小時，然后冷卻至20℃。過濾分離固體。在氮氣保護下真空干燥得到46.6g(95％)游離堿(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-4-甲基苯磺酰胺。HPLC A％為99.74A％，水含量(由Karl Fisher分析)為0.2％，Mp68-70℃。MS(EI，70eV)344/346(M+，20)，212(100)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ7.71(d，2H)，7.23(d，2H)，7.08(d，1H)，6.75(d，1H)，4.74(寬d，1H)，3.42(6-線m，1H)，2.88(d，2H)，2.41(s，3H)，1.68-1.25(m，2H)，0.85(t，3H)。13C NMR(50MHz，CDCl3)δ143.8，137.69，132.12，129.56，127.43，126.96，123.63，123.34，55.88，32.66，27.33，21.50，9.79。C15H18ClNO2S2的分析計算值C，52.39；H，5.28；N，4.10。實測值C，52.25；H，4.99；N，3.87。
實施例8制備(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-N-(2-氟-3-硝基吡啶-4-基)-4-甲基苯磺酰胺和(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-N-(2-氯-3-硝基吡啶-4-基)-4-甲基苯磺酰胺方法A X＝Cl或F(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-N-(2-氟-3-硝基吡啶-4-基)-4-甲基苯磺酰胺將100g(0.52mol，1當(dāng)量)2，4-二氯-3-硝基吡啶、105g(1.81mol，3.48當(dāng)量)氟化鉀和11.73g(0.036mol，0.07當(dāng)量)四丁基溴化銨(TBAB)在500ml甲苯和330ml1-甲基-2-吡咯烷酮中的混合物在攪拌下于第一反應(yīng)容器中在115-120℃下加熱4.5小時。將反應(yīng)混合物冷卻至20℃并過濾進第二反應(yīng)容器中，使用170ml1-甲基吡咯烷酮轉(zhuǎn)移該批物料。然后在35℃下將160g(0.456mol，0.88當(dāng)量)(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-4-甲基苯磺酰胺鋰鹽加入混合物中。將反應(yīng)混合物在85℃下攪拌3.5小時，然后冷卻至20℃。將冷卻的混合物分配于500ml鹽水、1.6L叔丁基甲基醚和200ml甲苯之間。有機層用1 L水洗滌，用硫酸鎂干燥并減壓濃縮。將所得固體溶解于200ml乙酸乙酯中并用65ml庚烷研制。將混合物冷卻至-6℃并保持48小時，所得固體通過過濾分離并用乙酸乙酯/庚烷(4∶1v/v)的冷(-8℃)混合物洗滌。將固體在氮氣保護下于40-45℃真空干燥，得到(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-N-(2-氟-3-硝基吡啶-4-基)-4-甲基苯磺酰胺(138.7g，63％產(chǎn)率，95.4A％純度(HPLC))。
(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-N-(2-氟-3-硝基吡啶-4-基)-4-甲基苯磺酰胺和(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-N-(2-氯-3-硝基吡啶-4-基)-4-甲基苯磺酰胺將150.0g(0.781mol)2，4-二氯-3-硝基吡啶、226.5g(3.9mol)氟化鉀(噴霧干燥)、75.0g(0.233mol)四丁基溴化銨(TBAB)和800ml甲苯的混合物加熱至回流，反應(yīng)容器上連有迪安-斯塔克阱。將約100ml甲苯蒸餾掉，之后將混合物冷卻至60℃并加入254.7g(0.741mol)(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-4-甲基苯磺酰胺鋰鹽。將混合物回流加熱4小時，然后冷卻至室溫。加入800ml水并將反應(yīng)混合物攪拌10分鐘。分離各層。有機層用800ml水洗滌兩次，通過過濾除去不溶性物質(zhì)并減壓濃縮濾液。用1L甲醇將結(jié)晶的固體在室溫下淤漿化1小時。過濾除去甲醇并將固體用1L庚烷淤漿化1小時。過濾除去庚烷并將固體用1L甲醇淤漿化1小時。將產(chǎn)物在過濾器上風(fēng)干，然后在氮氣保護下室溫真空干燥16小時，得到(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-N-(2-氟-3-硝基吡啶-4-基)-4-甲基苯磺酰胺(225.7g，60％產(chǎn)率，95A％純度(HPLC))。該產(chǎn)物含有約2A％(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-N-(2-氯-3-硝基吡啶-4-基)-4-甲基苯磺酰胺。
方法B 制備在71ml四氫呋喃(THF)中含有43.55g(0.127mol)(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-4-甲基苯磺酰胺的第一溶液并冷卻至4℃。將138ml(0.138mol)叔丁醇鉀的1.0M四氫呋喃溶液滴加至該第一溶液中。所得混合物在20℃下攪拌15分鐘。然后加入23.7g(0.149mol)2，4-二氟-3-硝基吡啶的10ml四氫呋喃溶液并將混合物在65℃下加熱1小時。將混合物冷卻至室溫并分配于150m1水和300ml乙酸乙酯之間。分離各層。有機層用150ml水洗滌兩次，用100ml鹽水洗滌一次，用無水硫酸鎂干燥并減壓濃縮。殘余物用100ml甲醇淤漿化，然后用150ml庚烷淤漿化，再用60ml甲醇淤漿化。在氮氣保護下將殘余物于室溫下真空干燥，得到(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-N-(2-氟-3-硝基吡啶-4-基)-4-甲基苯磺酰胺(51.1g，83.4％產(chǎn)率，97.6A％(HPLC))，為白色固體。MS(離子噴射)(相對強度)484/486(75)，312(100)。
少量粗產(chǎn)物樣品從THF/CH3CN/H20中重結(jié)晶。Mp139℃。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ8.30(1H，d寬)，7.73(2H，d寬)，7.38-7.15(3H，m)，7.16(1H，d)，6.82(1H，d)，3.95(1H，m)，3.27(1H，dd)，3.02(1H，dd)，2.45(3H，s)，1.6(2H，m寬)，0.70(3H，t寬)。13C NMR(50MHz，CDCl3)δ157.565，152.696，148.771，148.445，145.131，132.348，129.945，128.224，127.757，125.370，125.267，123.966，123.768，67.078，32.346，26.081，21.648，11.617。C20H19ClFN3O4S2的分析計算值C，49.64；H，3.96；N，8.68。實測值C，49.68；H，3.96；N，8.76。
實施例9制備[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[7-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺
方法A步驟1[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺酰基]氨基]-3-硝基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺在攪拌下將25.0g(0.052mol)(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-N-(2-氟-3-硝基吡啶-4-基)-4-甲基苯磺酰胺、19.9g(0.057mol)3aR-[3aα，4α，6a，6aα]-6-氨基-N-乙基四氫-3，3-二甲基-2，4-二氧雜雙環(huán)[3.3.0]辛烷-8-羧酰胺苯甲酸鹽、21.5g(0.155mol)碳酸鉀(325目)和200ml乙酸乙酯的混合物在80℃下加熱1.5小時。將混合物冷卻至20℃。加入100ml水并分離各層。有機層用100ml半飽和鹽水洗滌。PHLC顯示[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3-硝基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺的純度為94.9A％。該乙酸乙酯溶液“直接”用于下一步中。
將少量該溶液的樣品在真空下濃縮，然后通過快速色譜提純(SiO2，乙酸乙酯/庚烷1∶1)，得到淺黃色固體，HPLC顯示純度為98A％。C31H38ClN5O7S2的HRMS(FAB)計算值(M+H)+692.1979，實測值692.1931。1H NMR(500MHz，CDCl3)(構(gòu)象異構(gòu)體的混合物，比率為約7∶3，記錄所有信號)8.33(d)，8.25(d，少量構(gòu)象體(conformer))，7.94(d)，7.87(d)，7.76(d)，7.34(d)，7.30(d)，7.13(m)，6.81(m)，6.56(d)，6.47(d，少量構(gòu)象體)，5.66(m)，4.81(d，少量構(gòu)象體)，4.74(m)，4.58(d，少量構(gòu)象體)，4.56(d)，3.99(m)，3.87(m)，3.35(m)，3.21(dd，少量構(gòu)象體)，3.10(dd)，2.90(dd)，2.82(dd)，2.55(m)，2.41(s)，2.13(d)，1.96(d，少量構(gòu)象體)，1.64(m)，1.60(s)，1.52(s)，1.30(s)，1.22(s)，1.40-1.20(m)，1.15(t)，0.88(t)，0.64(t，少量構(gòu)象體)，0.51(t)。13C NMR(50MHz，CDCl3)(構(gòu)象異構(gòu)體的混合物，如上)173.781，151.181，144.504，139.049，135.972，133.204，129.715，128.772，128.089，127.654，123.64l，123.411，114.768，110.787，86.284，84.833，64.913，57.380，53.328，34.788，32.361，31.085，30.680，26.692，24.297，21.632，14.718，11.395。
步驟2[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺酰基]氨基]-3-氨基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺將前一步驟的[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3-硝基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺的乙酸乙酯溶液用220ml甲醇稀釋。然后在鉑/碳(3.5g，Degussa F101RA/W型，5％Pt，50％水)存在下在50-55psi氫下室溫氫化該溶液24小時。將混合物濾過玻璃微纖維過濾器并用100ml熱乙酸乙酯洗滌濾餅。真空濃縮合并的濾液，得到標(biāo)題化合物(90A％(HPLC))，為油狀物。
用Et2O研制少量油樣品，得到灰白色固體狀標(biāo)題化合物。Mp175-177℃。C31H41ClN5O5S2的HRMS(FAB)計算值(M+H)+662.2237，實測值662.2222。1H NMR(200MHz，CDCl3)(構(gòu)象異構(gòu)體的混合物，比率為約7∶3，記錄所有信號)δ7.75(d)，7.63(d)，7.54(d)，7.27(d)，7.21(s)，7.15(dd)，6.82(dd)，6.64(d)，6.48(d，少量構(gòu)象體)，5.95(d，少量構(gòu)象體)，5.83(d)，5.80(br.m)，4.78(m)，4.60(m)，4.39(m)，3.99(s)，3.75(s，少量構(gòu)象體)，3.27(dt)，3.12(dd，少量構(gòu)象體)，2.90-2.45(m)，2.42(s)，2.41(1s，少量構(gòu)象體)，2.04(表觀t)，1.81(s)，1.48(s)，1.47(s，少量構(gòu)象體)，1.55-1.22(m)，1.30(s)，1.29(s，少量構(gòu)象體)，1.16(t)，1.15(t，少量構(gòu)象體)，1.04(t)，0.73(t)。13C NMR(50MHz，CDCl3)(構(gòu)象異構(gòu)體的混合物，記錄所有信號)174.97，174.84，149.88，149.53，143.77，143.60，137.42，136.47，136.32，133.45，131.55，131.08，129.66，129.38，127.94，127.73，127.59，125.99，125.88，123.59，123.23，114.47，114.05，110.71，86.36，85.94，85.13，84.72，64.46，64.20，56.90，56.75，53.99，53.74，34.92，34.83，32.58，32.13，31.23，26.84，26.78，26.05，24.96，24.44，21.59，14.70，12.57，12.08。
步驟3[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[7-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺酰基]氨基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺將≤0.052mol前一步驟的粗[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺酰基]氨基]-3-氨基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺、74.0g(0.50mol)原甲酸三乙酯和100ml(108.2g，1.06mol)乙酸酐的混合物在100-105℃下加熱2小時。將混合物冷卻至室溫。用168ml2-丙醇稀釋冷卻的混合物并攪拌1小時，導(dǎo)致形成固體懸浮液。將混合物冷卻至4℃并通過過濾分離固體。通過將庚烷加入母液中并通過過濾分離固體而得到另外的產(chǎn)物。合并的濾餅用90ml冷2-丙醇洗滌，風(fēng)干，然后在氮氣保護下真空干燥2天，得到白色粉末狀標(biāo)題化合物(25.57g，95.82A％(HPLC))。對由(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-N-(2-氟-3-硝基吡啶-4-基)-4-甲基苯磺酰胺開始的三個步驟而言總收率為73％，對由2，4-二氟-3-硝基吡啶開始的總收率為61％。MS(離子噴射)672/674(100)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ8.38(1H，d)，8.15(1H，s)，7.85(2H，d)，7.25(1H，s)，7.22(1H，d)，7.15(2H，dd)，6.78(1H，d)，5.85(1H，t)，5.05(3H，m)，4.25(1H，m)，3.28(3H，m)，2.85(3H，m)，2.60(1H，q)，2.40(3H，s)，1.60(3H，s)，1.45(2H，q)，1.25(3H，s)，1.20(3H，t)，0.90(3H，t)。13C NMR(500MHz，CDCl3)δ171.36，149.04，144.51，143.53，142.90，137.70，136.37，135.34，133.86，129.45，128.11，127.46，123.39，123.21，121.08，114.22，83.86，81.88，64.99，60.69，50.24，34.63，34.38，33.35，27.45，25.26，25.07，21.58，14.81，11.64。
將粗產(chǎn)物的樣品從乙酸乙酯/CH3CN中重結(jié)晶。Mp197-199℃。[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[7-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺的結(jié)構(gòu)，包括絕對構(gòu)型，由單晶X-射線分析證實。
方法B步驟1[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3-硝基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺在攪拌下將123.0g(0.254mol)(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-N-(2-氟-3-硝基吡啶-4-基)-4-甲基苯磺酰胺、97.8g(0.279mol)3aR-[3aα，4α，6a，6aα]-6-氨基-N-乙基四氫-3，3-二甲基-2，4-二氧雜雙環(huán)[3.3.0]辛烷-8-羧酰胺苯甲酸鹽、105.3g(0.762mol)碳酸鉀(325目)和1L1-甲基-2-吡咯烷酮的混合物在85℃下加熱1.5小時。將混合物冷卻至室溫并在攪拌下傾入2.5L水中。通過過濾分離固體并用10L水洗滌濾餅。將濾餅在過濾器上風(fēng)干一夜，然后在氮氣保護下真空干燥4天，得到黃色固體狀標(biāo)題化合物(179g，98A％(HPLC))。
應(yīng)注意1-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)可以被乙酸乙酯(EtOAc)代替。溶劑體積、溫度和反應(yīng)時間(80℃)幾乎相同。處理包括水洗以除去剩余的3aR-[3aα，4α，6a，6aα]-6-氨基-N-乙基四氫-3，3-二甲基-2，4-二氧雜雙環(huán)[3.3.0]辛烷-8-羧酰胺苯甲酸鹽。NMP溶劑促進氯代化合物即(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-N-(2-氟-3-硝基吡啶-4-基)-4-甲基苯磺酰胺的反應(yīng)活性，后者在乙酸乙酯中的反應(yīng)非常緩慢。
步驟2[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺酰基]氨基]-3-氨基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺將[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3-硝基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺(90.0g，0.13mol)在1.1L乙酸乙酯中的溶液用500ml水洗滌3次。然后將該溶液用300ml甲醇稀釋并在鉑/碳(8.8g，Degussa F101RA/W型，5％Pt，50％水)存在下在50-55psi氫下室溫氫化24小時。將反應(yīng)混合物濾過玻璃微纖維過濾器并用300ml熱乙酸乙酯洗滌過濾器。減壓蒸發(fā)合并的濾液得到固體，后者然后用800ml庚烷淤漿化并通過過濾分離。在氮氣保護下真空干燥濾餅2天，得到標(biāo)題化合物(94.5g，89A％(HPLC))。
步驟3[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[7-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺酰基]氨基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺將94.5g(0.13mol)前一步驟的[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3-氨基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺、141.0ml(0.85mol)原甲酸三乙酯和114.0ml(1.21mol)乙酸酐的混合物在100-105℃下加熱2小時。將混合物冷卻至室溫。用1L庚烷稀釋冷卻的反應(yīng)混合物并攪拌1小時。形成的固體通過過濾分離，用500ml冷庚烷洗滌并在氮氣保護下真空干燥2天，得到標(biāo)題化合物(65.0g，75％產(chǎn)率，97.0A％(HPLC))。
實施例10制備[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[7-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]氨基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺 方法A在氮氣下將1-2粒碘的小晶體加入3.9g(0.16mol)鎂屑在30ml甲醇中的機械攪拌懸浮液中。隨著混合物開始溫?zé)岫^察到氣泡從鎂中放出。經(jīng)20分鐘加入在65ml甲醇和55ml甲苯的混合物中含有20.0g(0.03mol)[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[7-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺的溶液，同時維持反應(yīng)溫度為約40℃。將混合物在約40℃下攪拌約3小時。然后將混合物冷卻至室溫，濃縮至原始體積的1/2并濾過約50g硅藻土。過濾器用150ml乙酸乙酯洗滌并將合并的濾液用150ml水和150ml鹽水洗滌。有機相用硫酸鎂干燥并減壓濃縮，得到標(biāo)題化合物(15.4g，85A％(HPLC))。
方法B在約4℃氮氣下將三乙基硼氫化鋰的溶液(1.0N，在THF中，18.6ml，1.86mmol，2.5當(dāng)量)滴加入在66mlTHF中含有5.0g(7.43mmol)[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[7-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺的機械攪拌溶液中。加入完成后，將混合物在室溫下攪拌2小時。HPLC顯示≤3A％的原料和約90A％的[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[7-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]氨基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺。
加入30ml水和20ml乙酸乙酯并分離各相。有機相用水和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥并減壓濃縮，得到標(biāo)題化合物(3.7g，85A％(HPLC))，為淺黃色固體。
實施例11制備[1S-[1α，2β，3β，4α(S*)]]-4-[7-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]氨基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-基]N-乙基2，3-二羥基環(huán)戊烷羧酰胺 方法A在攪拌下將5.0g(0.0074mol)[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[7-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺、8.88g(6.0ml，0.0778mol，10.5當(dāng)量)三氟乙酸(TFA)和4.42g(3.6ml，0.0186mol，2.51當(dāng)量)三氟甲磺酸三甲基甲硅烷基酯在15ml甲苯中的混合物在70℃加熱2小時。將混合物冷卻至20℃并加入50ml甲苯，然后加入50ml濃鹽酸。將混合物攪拌45分鐘，然后分離各層。水層用20ml四氫呋喃萃取，然后用65ml甲苯萃取。丟棄合并的有機層。
將50ml乙酸正丁酯(n-BuOAc)加入水層中。將混合物冷卻至約4℃并用約37g碳酸鈉堿化。分離各層并用50ml乙酸正丁酯萃取水層兩次。合并有機層并用50ml水洗滌兩次。將有機層濃縮至約為原始體積的40％并用[1S-[1α，2β，3β，4α(S*)]]-4-[7-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]氨基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-基]N-乙基2，3-二羥基環(huán)戊烷羧酰胺晶體接種。將混合物冷卻至約4℃并在該溫度下維持到結(jié)晶完全。過濾分離固體并在氮氣保護下真空干燥至恒重，得到標(biāo)題化合物(2.51g，70％產(chǎn)率)，為半水合物。C22H28ClN5O3Sx0.5(H2O)的分析計算值C，54.26；H，6.00；N，14.38；Cl，7.28。實測值C，54.06；H，5.94；N，14.38；Cl，7.28。MS(離子噴射)478/480(M+H)+，100)，346(55)。1H NMR(200MHz，DMSO-D6)δ8.23(1H，s)，8.06(1H，t)，7.84(1H，d)，7.42(1H，d)，6.96(1H，d)，6.63(1H，寬d)，6.34(1H，d)，5.16(1H，寬d)，4.94(1H，d)，4.76(1H，q)，4.33(1H，m)，4.11(1H，q)，3.12(2H，q)，3.07(2H，m)，2.73(1H，m)，2.51(1H，m)，2.39(1H，dt)，2.09(1H，dt)，1.63(2H，m)，1.05(3H，t)，0.92(3H，t)。13C NMR(50MHz，DMSO-D6)δ172.73(C)，147.42(C)，146.12(C)，144.37(CH)，138.74(CH)，134.079(C)，126.671(CH)，124.516(C)，122.779(C)，121.626(CH)，96.938(CH)，75.073(CH)，73.07(CH)，58.61(CH)，54.20(CH)，48.81(CH)，33.45(CH2)，32.19(CH2)，30.06(CH2)，27.23(CH2)，14.66(CH3)，10.40(CH3)。
方法B在氮氣下將0.0146mol甲磺酸加入0.0074mol[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[7-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺在10ml三氟乙酸(TFA)和0.0146mol茴香硫醚中的機械攪拌混合物中。將反應(yīng)混合物在85℃下加熱3小時。真空除去溶劑。加入25ml甲苯并在減壓下除去(共沸物)。所得褐色油狀固體分配于乙酸乙酯和175ml冷1N含水NaOH之間。水相用100ml乙酸乙酯萃取，合并的有機萃取液用100ml鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥并減壓濃縮，得到3.4g褐色固體。
將粗產(chǎn)物溶解于25ml乙酸乙酯中。攪拌該溶液并在1分鐘內(nèi)滴加2.0ml濃HCl。膠狀固體沉淀并在5分鐘內(nèi)固化。加入25ml乙酸乙酯并將懸浮液在室溫下攪拌一夜。通過過濾分離所得灰白色固體，用20ml冷乙酸乙酯洗滌并在40-50℃下減壓干燥，得到標(biāo)題化合物(2.4g，58％產(chǎn)率)，為雙HCl鹽。游離堿可以使用下面的“水解”程序的第二部分釋放出來。
另外，將1當(dāng)量[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[7-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺酰基]氨基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺、2.1當(dāng)量甲磺酸和2當(dāng)量水在三氟乙酸中的混合物在60℃下加熱。然后將反應(yīng)混合物用庚烷洗滌(4×)，用碳酸鈉/乙酸乙酯/水堿化并真空濃縮。將殘余物溶解于乙酸正丁酯中并通過加入甲基叔丁基醚結(jié)晶標(biāo)題化合物(73％產(chǎn)率，96％純度(HPLC))。通過用乙酸正丁酯(含2當(dāng)量水)重結(jié)晶而進一步提純該物質(zhì)，得到標(biāo)題化合物(97％純度(HPLC))。
實施例12制備[1S-[1α，2β，3β，4α(S*)]]-4-[7-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]氨基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-基]N-乙基2，3-二羥基環(huán)戊烷羧酰胺 在10分鐘內(nèi)將9.4ml濃(37％)HCl加入14.2g(約0.027mol)粗[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[7-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]氨基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺在32ml四氫呋喃中的機械攪拌混合物中，同時維持反應(yīng)溫度低于35℃。加入結(jié)束后，將混合物在室溫下攪拌3小時，然后通過過濾分離沉淀。用冷(5-10℃)乙酸乙酯洗滌固體并干燥至恒重，得到標(biāo)題化合物(8.0g)，為其雙HCl鹽。
將HCl鹽分配于100ml乙酸正丁酯和50ml飽和碳酸鈉水溶液之間。有機相用水和鹽水洗滌，冷卻至室溫并攪拌16小時。過濾反應(yīng)混合物并將固體在40-50℃下減壓干燥，得到標(biāo)題化合物(10g，75％產(chǎn)率)。
盡管本發(fā)明已經(jīng)結(jié)合被認(rèn)為是最實際和優(yōu)選的實施方案進行了描述，但應(yīng)理解本發(fā)明并不限于公開的實施方案，相反意欲覆蓋包括在所附權(quán)利要求書的要旨和范圍內(nèi)的各種變化和等價排列。
因此，應(yīng)理解可以在不背離權(quán)利要求書所定義的本發(fā)明新穎方面的情況下對本發(fā)明進行改變。本文所引用的所有專利和文章在此以其整體引作參考。
權(quán)利要求
1.一種制備下式的N-保護的N6-取代的腺苷化合物的方法 其中P為氮保護基團；Q為CH2或O；T為 或R3O-CH2；X為直鏈或支鏈亞烷基、亞環(huán)烷基或亞環(huán)烯基；Y為NR4、O或S；a＝0或1；Z為下式基團 或 Z1為N、CR5、(CH)m-CR5或(CH)m-N，m為1或2；Z2為N、NR6、O或S；n為0或1；R1，R2，R3，R4，R5和R6獨立地為H、烷基、芳基或雜環(huán)基；R7和R8獨立地為H、烷基、芳烷基、氨基甲?；⑼榛被柞；⒍榛被柞；Ⅴ；⑼檠趸驶?、芳烷氧基羰基或芳氧基羰基；或R7和R8一起可以形成 其中Rc為氫或烷基， 其中Rd和Re獨立地為氫或烷基，或Rd和Re與它們所連接的碳原子一起形成1，1-環(huán)烷基；和Ra和Rb獨立地為H、OH、烷基、羥基烷基、烷基巰基、硫代烷基、烷氧基、烷氧基烷基、氨基、烷基氨基、羧基、酰基、鹵素、氨基甲?；⑼榛被柞；?、芳基或雜環(huán)基，該方法包括使下式的4-N-保護的-2，3，4-三氨基吡啶化合物 與甲酸衍生物反應(yīng)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中P選自磺酰胺、氨基甲酸酯、酰胺、N-烷基衍生物和N-氧膦基衍生物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中P為磺酰胺。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中Q為CH2；T為 X為直鏈或支鏈亞烷基；a＝0；Z為 Z1為N、CR5、(CH)m-CR5或(CH)m-N，m為1或2；Z2為N、NR6、O或S；n為0或1；R1，R2，R5和R6獨立地為H或烷基；R7和R8為烷基，或R7和R8一起可以形成 其中Rd和Re獨立地為氫或烷基，或與它們所連接的碳原子一起形成1，1-環(huán)烷基；和Ra和Rb獨立地為H、OH、烷基、羥基烷基、烷基巰基、硫代烷基、烷氧基、烷氧基烷基、氨基、烷基氨基、羧基、酰基、鹵素、氨基甲?；?、烷基氨基甲?；?、芳基或雜環(huán)基。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，進一步包括除去氮保護基團P。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，進一步包括還原下式的4-N-保護的3-硝基-2，4-二氨基吡啶化合物 形成下式的4-N-保護的-2，3，4-三氨基吡啶化合物
7.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，進一步包括使式P-NH-X-(Y)a-Z的N-保護的氨基化合物與下式的2，4-二鹵代-3-硝基吡啶化合物反應(yīng) 其中X1和X2獨立地為Cl或F，形成下式的2-鹵代-3-硝基-4-N-保護的氨基吡啶化合物
8.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中4-N-保護的2，3，4-三氨基吡啶化合物為[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3-氨基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺。
9.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中4-N-保護的3-硝基-2，4-二氨基吡啶化合物為[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺酰基]氨基]-3-硝基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺。
10.根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中式P-NH-X-(Y)a-Z的N-保護的氨基化合物為(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-4-甲基苯磺酰胺或(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-4-甲基苯磺酰胺鋰鹽。
11.一種制備[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[7-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺酰基]氨基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺的方法，包括(i)使(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-N-(2-氟-3-硝基吡啶-4-基)-4-甲基苯磺酰胺與3aR-[3aα，4α，6a，6aα]-6-氨基-N-乙基四氫-3，3-二甲基-2，4-二氧雜雙環(huán)[3.3.0]辛烷-8-羧酰胺苯甲酸鹽反應(yīng)，形成[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺酰基]氨基]-3-硝基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺，(ii)將步驟(i)中制備的[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3-硝基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺還原，形成[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺酰基]氨基]-3-氨基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺，和(iii)使在上面步驟2中制備的[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3-氨基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺與原甲酸酯、甲脒乙酸鹽或二甲基甲酰胺縮二甲醇反應(yīng)，其中步驟(i)-(iii)以連續(xù)方式進行而不需提純中間體化合物[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3-硝基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺和[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺酰基]氨基]-3-氨基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺。
12.一種制備(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-N-(2-氟-3-硝基吡啶-4-基)-4-甲基苯磺酰胺的方法，包括(i)使2，4-二氯-3-硝基吡啶與氟化劑反應(yīng)，形成2，4-二氟-3-硝基吡啶，和(ii)使步驟(i)的產(chǎn)物與(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-4-甲基苯磺酰胺鋰鹽或(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-4-甲基苯磺酰胺反應(yīng)，其中步驟(i)和(ii)以連續(xù)方式進行而不分離步驟(i)的產(chǎn)物。
13.一種制備[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[7-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺的方法，包括(i)使2，4-二氯-3-硝基吡啶與氟化劑反應(yīng)形成2，4-二氟-3-硝基吡啶，(ii)使2，4-二氟-3-硝基吡啶與(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-4-甲基苯磺酰胺鋰鹽或(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-4-甲基苯磺酰胺反應(yīng)形成(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-N-(2-氟-3-硝基吡啶-4-基)-4-甲基苯磺酰胺，(iii)使(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-N-(2-氟-3-硝基吡啶-4-基)-4-甲基苯磺酰胺與3aR-[3aα，4α，6a，6aα]-6-氨基-N-乙基四氫-3，3-二甲基-2，4-二氧雜雙環(huán)[3.3.0]辛烷-8-羧酰胺苯甲酸鹽反應(yīng)，形成[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3-硝基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺，(iv)還原步驟(iii)中制備的[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3-硝基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺，形成[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺酰基]氨基]-3-氨基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺，和(v)使[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺酰基]氨基]-3-氨基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺與原甲酸酯、甲脒乙酸鹽或二甲基甲酰胺縮二甲醇反應(yīng)，其中步驟(i)-(v)以連續(xù)方式進行而不提純中間體化合物2，4-二氟-3-硝基吡啶、(R)-N-[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基]-N-(2-鹵代-3-硝基吡啶-4-基)-4-甲基苯磺酰胺、[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺酰基]氨基]-3-硝基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺和[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3-氨基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺。
14.下式化合物 其中A為NH2或NO2；P為氮保護基團；W為Cl、F或下式基團 Q為CH2或O；T為 或R3O-CH2；X為直鏈或支鏈亞烷基、亞環(huán)烷基或亞環(huán)烯基；Y為NR4、O或S；a＝0或1；Z為下式基團 或 Z1為N、CR5、(CH)m-CR5或(CH)m-N，m為1或2；Z2為N、NR6、O或S；n為0或1；R1，R2，R3，R4，R5和R6獨立地為H、烷基、芳基或雜環(huán)基；R7和R8獨立地為H、烷基、芳烷基、氨基甲?；?、烷基氨基甲?；?、二烷基氨基甲酰基、酰基、烷氧基羰基、芳烷氧基羰基或芳氧基羰基；或R7和R8一起可以形成 其中Rc為氫或烷基， 其中Rd和Re獨立地為氫或烷基，或Rd和Re與它們所連接的碳原子一起形成1，1-環(huán)烷基；和Ra和Rb獨立地為H、OH、烷基、羥基烷基、烷基巰基、硫代烷基、烷氧基、烷氧基烷基、氨基、烷基氨基、羧基、?；?、鹵素、氨基甲?；?、烷基氨基甲?；?、芳基或雜環(huán)基。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的化合物，其中P選自磺酰胺、氨基甲酸酯、酰胺、N-烷基衍生物和N-氧膦基衍生物。
16.根據(jù)權(quán)利要求14的化合物，其中P為磺酰胺。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的化合物，其中Q為CH2；T為 X為直鏈或支鏈亞烷基；a＝0；Z為 Z1為N、CR5、(CH)m-CR5或(CH)m-N，m為1或2；Z2為N、NR6、O或S；n為0或1；R1，R2，R5和R6獨立地為H或烷基；R7和R8為烷基，或R7和R8一起可以形成 其中Rd和Re獨立地為氫或烷基，或與它們所連接的碳原子一起形成1，1-環(huán)烷基；和Ra和Rb獨立地為H、OH、烷基、羥基烷基、烷基巰基、硫代烷基、烷氧基、烷氧基烷基、氨基、烷基氨基、羧基、?；?、鹵素、氨基甲?；⑼榛被柞；?、芳基或雜環(huán)基。
18.選自如下的化合物[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺酰基]氨基]-3-硝基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺；[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[4-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3-氨基吡啶-2-基氨基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺；和[3aR-[3aα，4α，6a(R*)，6aα]]-6-[7-[[1-[(3-氯噻吩-2-基)甲基]丙基][4-甲基苯磺?；鵠氨基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-基]N-乙基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酰胺。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種制備N6－取代的腺苷衍生物的方法,用于該方法的中間體以及制備這些中間體的方法。
文檔編號C07D471/04GK1383427SQ99815953
公開日2002年12月4日 申請日期1999年12月15日 優(yōu)先權(quán)日1998年12月31日
發(fā)明者A·W·斯萊德斯基, L·格朗達德, M·R·鮑爾斯, T·H·鮑納, M·K·奧布賴恩, C·T·特蘇伊, P·里昂, G·G·庫別克, L·帕勒里斯－哈博特, B·維格爾 申請人:阿溫蒂斯藥物公司