專利名稱：與人g蛋白偶聯(lián)的孤兒受體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本專利申請(qǐng)文件中所公開(kāi)的發(fā)明涉及跨膜受體，進(jìn)一步地講，涉及與人G蛋白偶聯(lián)的內(nèi)源孤兒受體(GPCR)。
背景技術(shù)：
盡管在人體內(nèi)有很多種類的受體，但到目前為止最豐富和最與治療有關(guān)的是G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)。據(jù)估計(jì)，在人類基因組內(nèi)有大約100,000個(gè)基因，它們中的大約2％即2,000個(gè)基因被估計(jì)用來(lái)編碼GPCR。包括GPCR在內(nèi)，其內(nèi)源配體已被認(rèn)識(shí)的受體被稱為“已知”受體，內(nèi)源配體尚不知曉的受體被稱為“孤兒”受體。GPCR代表著藥物產(chǎn)品開(kāi)發(fā)的一個(gè)重要領(lǐng)域60％的處方藥物開(kāi)發(fā)自100個(gè)已知GPCR中的大約20個(gè)。這種區(qū)別并不僅是語(yǔ)義上的，尤其是對(duì)GPCR來(lái)說(shuō)。因此，孤兒GPCR對(duì)于制藥工業(yè)來(lái)說(shuō)就象金子對(duì)于19世紀(jì)晚期的加利福尼亞州一樣，是一個(gè)驅(qū)動(dòng)成長(zhǎng)、擴(kuò)張、提高和發(fā)展的機(jī)會(huì)。
GPCR都具有一個(gè)相同的基元(motif)。所有這些受體具有七個(gè)由22到24個(gè)疏水氨基酸組成的序列，它們組成七個(gè)α螺旋，每個(gè)α螺旋都跨過(guò)膜(每個(gè)跨度都以數(shù)字表示，例如，跨膜-1(TM-1)、跨膜-2(TM-2)等)?？缒ぢ菪ㄟ^(guò)氨基酸鏈連接，在細(xì)胞膜的外部即“細(xì)胞外”一邊的氨基酸鏈分別在跨膜-2和跨膜-3、跨膜-4和跨膜-5、跨膜-6和跨膜-7之間(這些分別被稱為“細(xì)胞外”區(qū)1、2和3(EC-1、EC-2和EC-3))。在細(xì)胞膜內(nèi)部即“細(xì)胞內(nèi)”一邊，跨膜螺旋也通過(guò)氨基酸鏈進(jìn)行連接，這些氨基酸鏈分別在跨膜-1和跨膜-2、跨膜-3和跨膜-4、跨膜-5和跨膜-6之間(這些分別被稱為“細(xì)胞內(nèi)”區(qū)1、2和3(IC-1、IC-2和IC-3))。受體的“羧基”(“C”)端是在細(xì)胞內(nèi)的區(qū)域，受體的“氨基”(“N”)端在細(xì)胞外的區(qū)域。
一般來(lái)說(shuō)，當(dāng)內(nèi)源配體與受體結(jié)合時(shí)(經(jīng)常被稱為受體的“活化”)，細(xì)胞內(nèi)區(qū)域的構(gòu)象發(fā)生變化，以容許細(xì)胞內(nèi)區(qū)域和細(xì)胞內(nèi)“G-蛋白”進(jìn)行偶聯(lián)。據(jù)報(bào)道，GPCR對(duì)于G蛋白而言是“混雜的”，也就是說(shuō)，可與不只一個(gè)G蛋白相互作用。參見(jiàn)，Kenakin，T.，43，生活科學(xué)(LifeSciences)1095(1988)。盡管存在其他G蛋白，但當(dāng)前已被識(shí)別的G蛋白是Gq、Gs、Gi和Go。內(nèi)源配體活化的GPCR與G-蛋白的偶聯(lián)引發(fā)一個(gè)信號(hào)級(jí)聯(lián)過(guò)程(被稱為“信號(hào)傳導(dǎo)”)。在通常情形下，信號(hào)傳導(dǎo)最終導(dǎo)致細(xì)胞活化或細(xì)胞抑制。據(jù)認(rèn)為，受體的IC-3環(huán)與羧基端都和G蛋白相互作用。
在生理?xiàng)l件下，GPCR存在于細(xì)胞膜上，并在“非活化”狀態(tài)和“活化”狀態(tài)這兩種不同構(gòu)象之間保持平衡。在非活性狀態(tài)下的受體不能與細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)途徑相偶聯(lián)以產(chǎn)生生物學(xué)反應(yīng)。受體構(gòu)象向活性狀態(tài)的轉(zhuǎn)變就使它與傳導(dǎo)途徑相偶聯(lián)(通過(guò)G-蛋白)并產(chǎn)生生物學(xué)反應(yīng)?？赏ㄟ^(guò)內(nèi)源配體或化合物如藥物將受體穩(wěn)定在其活性狀態(tài)。
發(fā)明概述這里公開(kāi)的是人與G蛋白偶聯(lián)的內(nèi)源孤兒受體。
附圖的簡(jiǎn)要描述

圖1A和1B提供的是本文提供的某些斑點(diǎn)印跡的參照“格柵”(分別參見(jiàn)圖2A和2B)。
圖2A和2B再現(xiàn)的是從hCHN3和hCHN8得到的某些斑點(diǎn)印跡分析的結(jié)果(分別參見(jiàn)圖1A和1B)。
圖3再現(xiàn)的是hRUP3的RT-PCR分析結(jié)果。
圖4再現(xiàn)的是hRUP4的RT-PCR分析結(jié)果。
圖5再現(xiàn)的是hRUP6的RT-PCR分析結(jié)果。
詳細(xì)描述本科學(xué)文獻(xiàn)涉及受體并采用一些術(shù)語(yǔ)來(lái)描述對(duì)受體具有不同作用的配體。為了清楚和前后一致，在本發(fā)明文獻(xiàn)中將由始至終使用下列定義。在這些定義與這些詞語(yǔ)的其他定義沖突時(shí)，選擇下列定義在此應(yīng)用的氨基酸縮寫(xiě)列于下表
組合物 是指至少包含一種成分的物質(zhì)。
內(nèi)源 意味著由物種的基因組天然產(chǎn)生的物質(zhì)。關(guān)于內(nèi)源的受體，意味著由哺乳動(dòng)物(例如但不限于人)或病毒天然產(chǎn)生的物質(zhì)，這些只作為例證但卻不是限制。與之相對(duì)比，術(shù)語(yǔ)“非內(nèi)源”在本文中意味著不是由哺乳動(dòng)物(例如但不限于人)或病毒天然產(chǎn)生的。
宿主細(xì)胞 意味著能在其中插入質(zhì)粒和/或載體的細(xì)胞。在原核宿主細(xì)胞情形下，當(dāng)宿主細(xì)胞復(fù)制時(shí)質(zhì)粒典型地以自主分子方式復(fù)制(在一般情況下，質(zhì)粒在復(fù)制后被分離出來(lái)以被引入真核宿主細(xì)胞中)；在真核宿主細(xì)胞情形下，質(zhì)粒被整合進(jìn)宿主細(xì)胞的細(xì)胞DNA中，因而，當(dāng)真核細(xì)胞復(fù)制時(shí)，質(zhì)粒復(fù)制。為在此公開(kāi)的本發(fā)明的目的，宿主細(xì)胞優(yōu)選是真核細(xì)胞，更優(yōu)選是哺乳動(dòng)物細(xì)胞，最優(yōu)選地是從293、293T和COS-7細(xì)胞中選擇出來(lái)的細(xì)胞。
配體 意味著對(duì)內(nèi)源的天然產(chǎn)生的受體特異的內(nèi)源的天然產(chǎn)生的分子。
非孤兒受體 是指天然存在的內(nèi)源分子，對(duì)天然存在的內(nèi)源配體表現(xiàn)出特異性，配體與受體的結(jié)合使胞內(nèi)信號(hào)途經(jīng)得以活化。
孤兒受體 意味著這樣的內(nèi)源受體，其特異的內(nèi)源配體尚未被識(shí)別或尚未知。
質(zhì)粒 意味著載體和cDNA的結(jié)合體。一般，為cDNA復(fù)制和/或表達(dá)蛋白質(zhì)的目的將質(zhì)粒引進(jìn)宿主細(xì)胞。
針對(duì)cDNA的載體 意味著能夠?qū)⒅辽僖粋€(gè)cDNA摻入其中且能導(dǎo)入到宿主細(xì)胞中的環(huán)形DNA。
下面部分的順序安排是為了表達(dá)效果，而不能被解釋為對(duì)下面的公開(kāi)或權(quán)利要求的限制。人GPCR的確認(rèn)人類基因組計(jì)劃的實(shí)施導(dǎo)致位于人類基因組內(nèi)有關(guān)核酸序列的大量信息的識(shí)別，經(jīng)過(guò)這種努力，事實(shí)上，我們無(wú)需了解或認(rèn)識(shí)任何特定的基因組序列是否包含翻譯人類蛋白的可讀框信息，即可獲得遺傳序列信息，幾種識(shí)別人類基因組中核酸序列的方法都是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟悉的，比如(但不限定)，此處公開(kāi)的大量人類GPCR，即是通過(guò)回顧GenBankTM數(shù)據(jù)庫(kù)而發(fā)現(xiàn)的，并通過(guò)應(yīng)用先前已測(cè)序的GPCR核酸序列，檢索BLASTTM的EST數(shù)據(jù)庫(kù)，發(fā)現(xiàn)了其他的GPCR。下面的表A，列出了幾個(gè)與GPCR各自的同源受體一道被我們發(fā)現(xiàn)的內(nèi)源GPCR。
表A公開(kāi)的人類 入藏登記可讀框與指明的GPCR 參考同源孤兒GPCR (堿基對(duì))同源性比率 GPCR(編號(hào))hARE-3 AL033379 1,260bp52.3％LPA-RU92642hARE-4 AC006087 1,119bp 36％P2Y5AF000546hARE-5 AC006255 1,104bp 32％OryziaslatipesD43633hGPR27 AA775870 1,128bphARE-1 AI090920 999bp 43％ D13626KIAA001hARE-2 AA359504 1,122bp53％GPR27hPPR1 H672241,053bp39％EBI1 L31581hG2A AA754702 1,113bp31％GPR4 L36148hRUP3 AI035423 1,005bp30％果蠅 2133653hRUP4 AI307658 1,296bp32％pNPGPR NP_004876
28％斑馬魚(yú)Ya AAC41276和29％斑馬魚(yú)Yb，AAB94616hRUP5AC0058491,413bp 25％DEZ Q9978823％FMLPR P21462hRUP6AC0058711,245bp 48％GPR66 NP_006047hRUP7AC0079221,173bp 43％H3R AF140538hCHN3EST365811,113bp 53％GPR27hCHN4AA8045311,077bp 32％凝血酶4503637hCHN6EST2134670 1,503bp 36％edg-1 NP_001391hCHN8EST764455 1,029bp 47％ D13626KIAA0001hCHN9EST1541536 1,077bp 41％LTB4R NM_000752hCHN10 EST1365839 1,055bp 35％P2Y NM_002563受體同源性對(duì)于進(jìn)一步了解受體在人體中的作用是有用的。另外，這種同源性可以用來(lái)洞察可能是本文公開(kāi)的孤兒GPCR的天然激活劑的可能的內(nèi)源配體。
B.受體篩選因?yàn)槭荏w的傳統(tǒng)研究一直是基于這樣的前置假定(基于歷史)，即內(nèi)源配體必須首先被識(shí)別，然后才能發(fā)現(xiàn)可以作用于受體的拮抗劑和其他分子，所以，在過(guò)去的幾年中，用于進(jìn)行內(nèi)源配體識(shí)別(該識(shí)別主要是為了提供進(jìn)行受體結(jié)合測(cè)定(該測(cè)定需要受體的內(nèi)源配體)的各種方法)的技術(shù)越來(lái)越容易找到。甚至在拮抗劑被首先發(fā)現(xiàn)的情況下，搜索的目光也立即延伸到查找內(nèi)源配體上去。即使在發(fā)現(xiàn)組成型活化受體之后，這種思維模式也一直在受體研究中持續(xù)。在此之前沒(méi)有被認(rèn)識(shí)到的是，是受體的活性狀態(tài)對(duì)發(fā)現(xiàn)受體的激活劑、部分激活劑和反激活劑是最有用的。對(duì)于那些因?yàn)槭荏w的過(guò)度活化和不夠活化而導(dǎo)致的疾病來(lái)說(shuō)，希望得到的治療藥物是能分別用來(lái)減少受體的活性狀態(tài)或增強(qiáng)受體活性的化合物，而并不需要是對(duì)抗內(nèi)源配體的拮抗劑。這是因?yàn)椋粋€(gè)降低或增強(qiáng)活化態(tài)受體活性的化合物并不需要結(jié)合在和內(nèi)源配體一樣的位點(diǎn)上。因而，正如本發(fā)明的一個(gè)方法所說(shuō)的那樣，對(duì)治療性化合物的任何搜索可通過(guò)篩選針對(duì)配體非依賴性活性態(tài)的化合物而開(kāi)始。
如在本領(lǐng)域已知的情形，GPCR即使是在沒(méi)有該受體的內(nèi)源配體與之結(jié)合的情況下，在其內(nèi)源狀態(tài)GPCR也可能是“活化的”。這種天然活化的受體可被直接識(shí)別(即，不需要受體的內(nèi)源配體存在)、特別是反激活劑的直接識(shí)別所篩選。另外，該受體也可通過(guò)例如受體的突變以建立該受體的非內(nèi)源形式來(lái)進(jìn)行活化，所述非內(nèi)源形式在沒(méi)有受體的內(nèi)源配體存在下也處于活性狀態(tài)。
對(duì)應(yīng)于此處公開(kāi)的人孤兒GPCR的內(nèi)源或非內(nèi)源組成型活化形式的候選化合物進(jìn)行篩選，可直接識(shí)別在細(xì)胞表面受體上起作用的候選化合物，而不需要使用受體的內(nèi)源配體。通過(guò)確定此處公開(kāi)的人GPCR的內(nèi)源形式在體內(nèi)表達(dá)或過(guò)表達(dá)的區(qū)域，有可能確定與受體表達(dá)或過(guò)表達(dá)關(guān)聯(lián)的相關(guān)疾病/紊亂，這種方法在本專利申請(qǐng)文件中得以公開(kāi)。
制造可以證明此處公開(kāi)的人孤兒GPCR組成型活化的突變的技術(shù)，是基于與脯氨酸殘基的距離，據(jù)估計(jì)此殘基位于GPCR的TM6內(nèi)部，通常在TM6/IC3交界處附近(該脯氨酸殘基看起來(lái)非常保守)。通過(guò)使距該殘基16個(gè)氨基酸殘基處的氨基酸殘基(估計(jì)位于受體的IC3區(qū))發(fā)生突變，最好是突變?yōu)橘嚢彼幔梢垣@得這種活化。其他氨基酸在此位置上的突變可用來(lái)達(dá)到此目的。
C.疾病/紊亂識(shí)別和/或選擇優(yōu)選人孤兒GPCR的DNA序列被用來(lái)制作探針，用于進(jìn)行(a)針對(duì)組織mRNA的斑點(diǎn)印跡和(b)組織樣品中所述受體表達(dá)的RT-PCR識(shí)別。在組織或疾病組織中受體的存在，或者與正常組織相比在疾病組織中受體的濃度提高，可被優(yōu)選地用來(lái)識(shí)別治療方法(包括但不限于)與那種疾病的關(guān)聯(lián)。用這種方法也可很好地把受體定位于器官的區(qū)域?；谑荏w被定位于其中的特定組織的已知功能，受體假想的功能性角色可被推導(dǎo)出來(lái)。
D.候選化合物的篩選1.一般GPCR的篩選測(cè)定技術(shù)當(dāng)一種G蛋白受體變?yōu)榻M成型活化(即，在沒(méi)有內(nèi)源配體與之結(jié)合的情況下活化)時(shí)，它與G蛋白(例如，Gq、Gs、Gi、Go)偶聯(lián)并刺激GTP與G蛋白結(jié)合。接著，借助受體在正常情況下失活，G蛋白作為GTP酶慢慢地把GTP水解為GDP，然而，組成型活化的受體繼續(xù)把GDP轉(zhuǎn)化為GTP。GTP非可水解的類似物[35S]GTPγS，可被用來(lái)監(jiān)測(cè)與表達(dá)組成型活化受體的膜的結(jié)合。據(jù)報(bào)道，[35S]GTPγS可被用來(lái)監(jiān)測(cè)在配體存在或不存在的情形下G蛋白與膜的偶聯(lián)。在本領(lǐng)域中著名和可行的其他例證中有此種監(jiān)測(cè)的一個(gè)例證，它由Traynor和Nahorski在1995年所報(bào)道。本測(cè)定系統(tǒng)的一個(gè)優(yōu)選的應(yīng)用是為了初步篩選候選化合物，因?yàn)楸鞠到y(tǒng)對(duì)所有G蛋白-偶聯(lián)受體一般可行，而不考慮與受體的細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域相互作用的那一種特別的G蛋白。2.特定的GPCR篩選測(cè)定技術(shù)一旦應(yīng)用“一般”G蛋白偶聯(lián)的受體測(cè)定方法(即篩選是激活劑、部分激活劑或反激活劑的化合物的方法)識(shí)別出候選化合物，優(yōu)選進(jìn)一步篩選以確認(rèn)作用在受體位點(diǎn)的化合物。例如，應(yīng)用“一般”測(cè)定方法識(shí)別的化合物可以不與受體結(jié)合，但也可以僅僅從細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域與G蛋白“解偶聯(lián)”。a.Gs和GiGs刺激腺苷酸環(huán)化酶。另一方面，Gi(和Go)抑制該酶。腺苷酸環(huán)化酶催化ATP向cAMP的轉(zhuǎn)化；因此，與Gs蛋白偶聯(lián)的組成型活化的GPCR與升高的細(xì)胞內(nèi)cAMP水平相關(guān)聯(lián)。在另一方面，與Gi(或Go)蛋白偶聯(lián)的組成型活化的GPCR與降低的細(xì)胞內(nèi)cAMP水平相關(guān)聯(lián)。一般情況參見(jiàn)“突觸傳導(dǎo)的非直接機(jī)制(Indirect Mechanisms ofSynaptic Transmission)”，第8章，從神經(jīng)到大腦(From Neuron ToBrain)(第三版)，Nichols，J.G.等編，Sinauer Associates，Inc.(1992)。因此，檢測(cè)cAMP的方法可被用來(lái)確定一個(gè)競(jìng)爭(zhēng)性的化合物是否是受體的反激活劑(即這樣的一個(gè)化合物將能降低cAMP的水平)等。本領(lǐng)域已知的測(cè)定cAMP的不同方法可以被利用；最優(yōu)選的方法依賴于在基于ELISA的方法中應(yīng)用抗-cAMP的抗體。可被應(yīng)用的另一類測(cè)定方法是一種全細(xì)胞第二信使報(bào)告基因系統(tǒng)測(cè)定法?；蛏系膯?dòng)子驅(qū)動(dòng)由一個(gè)特別的基因所編碼的蛋白質(zhì)的表達(dá)。環(huán)AMP通過(guò)以下步驟促進(jìn)基因的表達(dá)，即它響應(yīng)促進(jìn)cAMP的DNA結(jié)合蛋白或轉(zhuǎn)錄因子(CREB)的結(jié)合，轉(zhuǎn)錄因子接著在被稱為cAMP效應(yīng)元件的特別位點(diǎn)與啟動(dòng)子結(jié)合并驅(qū)動(dòng)基因表達(dá)。報(bào)告基因系統(tǒng)可被構(gòu)建為具有一個(gè)啟動(dòng)子，該啟動(dòng)子在報(bào)告基因的前面含有多個(gè)cAMP效應(yīng)元件，例如β-半乳糖苷酶或熒光素酶。因而，一個(gè)被組成型活化的連接Gs的受體引起cAMP的積累，cAMP接著激活報(bào)告蛋白質(zhì)的基因和表達(dá)。β-半乳糖苷酶或熒光素酶等報(bào)告蛋白質(zhì)可用標(biāo)準(zhǔn)生化方法檢測(cè)到(Chen等，1995)。b.Go和GqGo和Gq與磷脂酶C的活化相聯(lián)系，磷脂酶隨后水解磷酸酯PIP2，并釋放兩種細(xì)胞內(nèi)信使二酰甘油(DAG)和肌醇-1，4，5-三磷酸(IP3)。積累增加的IP3與Gq-和Go-關(guān)聯(lián)的受體相關(guān)聯(lián)。一般情況參見(jiàn)“突觸傳導(dǎo)的非直接機(jī)制(Indirect Mechanisms of Synaptic Transmission)”，第8章，從神經(jīng)到大腦(From Neuron To Brain)(第三版)，Nichols，J.G.等編，Sinauer Associates，Inc.(1992)。測(cè)定IP3積累的方法可被用來(lái)確定一個(gè)候選化合物是否是例如針對(duì)Gq-或Go-關(guān)聯(lián)受體等的反激活劑(即如此的化合物能降低IP3的水平)。Gq關(guān)聯(lián)受體也可用AP1報(bào)告基因測(cè)定方法來(lái)檢測(cè)，因?yàn)镚q依賴的磷脂酶C引起含有AP1元件的基因活化；因而，活化的Gq關(guān)聯(lián)受體將導(dǎo)致如此基因的表達(dá)增高，而其反激活劑將導(dǎo)致如此表達(dá)的降低，激活劑將導(dǎo)致如此表達(dá)的升高。進(jìn)行如此測(cè)定的商業(yè)可得的方法是可得的。
3.GPCR融合蛋白內(nèi)源組成型活化的孤兒GPCR或非內(nèi)源組成型活化的孤兒GPCR，用于篩選候選化合物，直接識(shí)別反激活劑、激活劑和部分激活劑，提出了一個(gè)獨(dú)特的篩選難題，確切地說(shuō)，在沒(méi)有內(nèi)源配體結(jié)合的情況下，受體仍有活性。因此，使用能加強(qiáng)由該活化的受體獲得的信號(hào)的方法是經(jīng)常有用的。優(yōu)選的辦法就是使用GPCR融合蛋白。
一般來(lái)講，應(yīng)用上述分析技術(shù)(還有其它的技術(shù))一旦確定GPCR是或已被組成型活化的，就可能確定與內(nèi)源GPCR偶聯(lián)的優(yōu)勢(shì)G蛋白，G蛋白與GPCR的偶聯(lián)提供了可被估計(jì)的信號(hào)途徑。因?yàn)樽詈檬鞘褂貌溉閯?dòng)物表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行篩選，就希望在這個(gè)系統(tǒng)中有內(nèi)源G蛋白存在，確切來(lái)說(shuō)，該組成型活化的孤兒GPCR在這個(gè)系統(tǒng)中持續(xù)產(chǎn)生信號(hào)。從這點(diǎn)上，優(yōu)選使信號(hào)得到加強(qiáng)，從而在(例如)受體的反激活劑存在時(shí)，很可能更方便地區(qū)分與反激活劑接觸的不同受體，特別是在篩選的整個(gè)過(guò)程中。
GPCR融合蛋白的作用是增加G蛋白與非內(nèi)源GPCR偶聯(lián)的效應(yīng)，GPCR融合蛋白優(yōu)選用于篩選非內(nèi)源組成型活化的GPCR，因?yàn)檫@種方法增強(qiáng)對(duì)這樣的篩選技術(shù)非常有用的信號(hào)，雖然該GPCR融合蛋白也可(而且優(yōu)選)與內(nèi)源組成型活化的GPCR一起使用。重要的是有助于產(chǎn)生很大的“信噪”比，這種大信噪比對(duì)篩選此處公開(kāi)的候選化合物是特別優(yōu)選的。
用于GPCR融合蛋白表達(dá)的構(gòu)建體的構(gòu)建技術(shù)是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟悉，商業(yè)可獲得的表達(dá)載體和系統(tǒng)為實(shí)驗(yàn)者提供了各種可以滿足特殊需要的方法，這種GPCR融合蛋白構(gòu)建體重要的衡量標(biāo)準(zhǔn)，就是內(nèi)源GPCR序列與G蛋白序列都符合讀框(最好是，內(nèi)源GPCR的序列位于G蛋白序列上游)，以及必須去除或替代GPCR的“終止”密碼子，從而隨著GPCR的表達(dá)，G蛋白也能表達(dá)。GPCR可以直接連到G蛋白上，或在兩者之間存在間隔殘基(最好不超過(guò)12個(gè)，雖然本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以很方便得知這一數(shù)字)。我們喜歡使用間隔子(其于方便)，表達(dá)中不被有效利用的限制位點(diǎn)組成了間隔子。在制造GPCR融合蛋白構(gòu)建體之前，優(yōu)選首先確認(rèn)與GPCR偶聯(lián)的G蛋白，因?yàn)橹挥泻苌俚腉蛋白已被識(shí)別，所以優(yōu)選包含G蛋白序列(如通用G蛋白構(gòu)建體)的構(gòu)建體可在其中插入內(nèi)源GPCR序列，這樣可有效地大規(guī)模篩選大量具有不同序列的內(nèi)源GPCR。
E.其他應(yīng)用盡管本文公開(kāi)的人孤兒GPCR的一個(gè)優(yōu)選的應(yīng)用是為了直接識(shí)別作為反激活劑、激活劑或部分激活劑(優(yōu)選地作為藥物使用)的候選化合物，人GPCR的這些形式也可被用于研究之用。例如，帶有GPCR的體外或體內(nèi)系統(tǒng)可被用來(lái)闡釋和理解這些受體在正常和患病的人體狀況中的作用，也可理解當(dāng)它應(yīng)用于理解信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)時(shí)組成型活化的角色。這些人孤兒GPCR的價(jià)值在于它們作為研究工具的用途被強(qiáng)化了，即使在其內(nèi)源配體被識(shí)別之前，由于其能夠確定這些受體在人體內(nèi)的位置，該GPCR可被用來(lái)理解這些受體在人體中的作用。此處所公開(kāi)的受體的其他應(yīng)用對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員將是明顯的，特別是當(dāng)他們閱讀了本申請(qǐng)文件之后。
實(shí)施例下面提供的實(shí)施例，目的是要闡明而不是限制本發(fā)明。特異的核酸序列和氨基酸序列在此公開(kāi)時(shí)，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能夠?qū)@些序列進(jìn)行較小的修飾，并且得到與下面報(bào)告的相同或基本相似的結(jié)果。除非下文另外指明，對(duì)于所公開(kāi)的人內(nèi)源孤兒GPCR的所有核酸序列均進(jìn)行了測(cè)序并得到了證實(shí)。對(duì)于受體的等同物，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以容易地想到的是可對(duì)所公開(kāi)序列進(jìn)行保守取代以獲得功能上等同的受體。實(shí)施例1內(nèi)源人GPCR1.人GPCR的識(shí)別在瀏覽GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)信息的基礎(chǔ)上，識(shí)別了一些已公開(kāi)的內(nèi)源人GPCR。在檢索數(shù)據(jù)庫(kù)的同時(shí)，下列cDNA克隆也得以識(shí)別，列表如下。
用下列EST克隆作為詢問(wèn)序列，對(duì)EST數(shù)據(jù)庫(kù)(dbest)進(jìn)行BLASTTM檢索，識(shí)別出其他已公開(kāi)的人內(nèi)源GPCR。然后將下列已確認(rèn)的EST克隆用作探針篩選人的基因組文庫(kù)。已公開(kāi)的人詢問(wèn) EST克隆/ 可讀框核酸序列氨基酸序列孤兒GPCR (序列)入藏登記號(hào)(堿基對(duì)) SEQ.ID.NOSEQ.ID.NOhGPCR27 鼠 AA775870 1,125bp 15 16GPCR27hARE-1 TDAG 1689643 999bp 17 18AI090920hARE-2 GPCR27 685301,122bp 19 20AA359504hPPR1牛 238667 1,053bp2122PPR1 H67224hG2A 鼠 參見(jiàn)實(shí)施例1,113bp23241179426 2(a)hCHN3N.A.EST36581 1,113bp2526(全長(zhǎng))hCHN4 TDAG 1184934 1,077bp2728AA804531hCHN6N.A.EST2134670 1,503bp2930(全長(zhǎng))hCHN8 KIAA0001 EST7644551,029bp3132hCHN9 1365839 EST1541536 1,077bp3334hCHN10 鼠EST人13658391,005bp35361365839hRUP4N.A.AI307658 1,296bp3738N.A.＝“不適用”2全長(zhǎng)克隆a.hG2A(Seq.Id.No.23&24)利用鼠EST克隆1179426獲取包含幾乎所有三氨基酸hG2A編碼序列的人基因組克隆，該編碼序列通過(guò)5′RACETM獲得，PCR模板為Clontech’s Human Spleen Marathon-ReadyTMcDNA。已被公開(kāi)的人G2A用PCR擴(kuò)增，第一和第二輪PCR使用G2A cDNA特異引物，其為SEQ.ID.NO.39和SEQ.ID.NO.40如下5′-CTGTGTACAGCAGTTCGCAGAGTG-3′(SEQ.ID.NO.39，第一輪PCR)5′-GAGTGCCAGGCAGAGCAGGTAGAC-3′(SEQ.ID.NO.40，第二輪PCR)用AdvantageTMGC Polymerase試劑盒進(jìn)行PCR(Clontech按商家說(shuō)明進(jìn)行操作)，94℃ 30秒；94℃ 5秒，72℃ 4分鐘，5個(gè)循環(huán)；94℃ 5秒，70℃ 4分鐘，30個(gè)循環(huán)。將大約1.3kb PCR片段從瓊脂糖凝膠中純化出來(lái)，經(jīng)Hind III和XbaI酶切，克隆到表達(dá)載體pRC/CMV2(Invitrogen)中。被克隆的插入片段用T7 SequenaseTM試劑盒(USBAmersham；按商家說(shuō)明進(jìn)行操作)進(jìn)行測(cè)序，并將所得序列與已存在的序列進(jìn)行比較。人G2A的表達(dá)通過(guò)用P32標(biāo)記片段與RNA點(diǎn)印跡雜交進(jìn)行測(cè)定(clontech；按商家說(shuō)明進(jìn)行操作)。
b.hCHN9(Seq.Id.No.33&34)EST克隆1541536的測(cè)序表明，hCHN9為cDNA克隆的一部分，只有起始密碼子，即，沒(méi)有終止密碼子。用hCHN9檢索數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，hCHN9的3′端序列與白細(xì)胞三烯B4受體cDNA 5′端非翻譯區(qū)100％同源，該cDNA帶有一個(gè)與hCHN9編碼序列符合讀框的終止密碼子。為了確定LTB4R cDNA5′端非翻譯區(qū)是否是hCHN9的3′端序列，進(jìn)行了PCR擴(kuò)增，所用引物是以在hCHN9中發(fā)現(xiàn)的起始密碼子的5′端側(cè)翼序列和在LTB4R 5′端非翻譯區(qū)中發(fā)現(xiàn)的終止密碼子的3′端側(cè)翼序列為基礎(chǔ)。所用的5′端引物序列如下5′-CCCGAATTCCTGCTTGCTCCCAGCTTGGCCC-3′(SEQ.ID.NO.41，有義)5′-TGTGGATCCTGCTGTCAAAGGTCCCATTCCGG-3′(SEQ.ID.NO.42，反義)以胸腺cDNA為模板，并用商家提供的緩沖液系統(tǒng)及rTth聚合酶(PerkinElmer)進(jìn)行PCR，每種引物0.25μM，4種核苷酸每種0.2mM。循環(huán)條件為94℃ 1分鐘，65℃ 1分鐘，72℃ 1分10秒，30個(gè)循環(huán)，由PCR獲得了與預(yù)計(jì)大小一致的1.1kb片段，將該P(yáng)CR片段亞克隆到pCMV中(參見(jiàn)下文)并測(cè)序(參見(jiàn)SEQ.ID.NO.33)。
c.hRUP4(Seq.Id.No.37&38)以人腦cDNA(clontech)為模板，經(jīng)RT-PCR克隆了全長(zhǎng)hRUP4。
5′-TCACAATGCTAGGTGTGGTC-3′(SEQ.ID.NO.43，有義)
5′-TGCATAGACAATGGGATTACAG-3′(SEQ.ID.NO.44，反義)使用Taqplas PrecisionTM聚合酶(Stratagene按商家說(shuō)明)進(jìn)行PCR，經(jīng)以下循環(huán)94℃ 2分鐘；94℃ 30秒；55℃ 30秒；72℃ 45秒；72℃ 10分鐘。循環(huán)2到循環(huán)4重復(fù)30次。
PCR產(chǎn)物在1％瓊脂糖凝膠上分離，提取500bp PCR片段，并克隆到pCRII-TOPO載體(Invitrogen)中，用T7 SequeraseTM試劑盒(Amsham)和SP6/T7引物(Stratagene)進(jìn)行測(cè)序。序列分析表明，該P(yáng)CR片段確實(shí)是AI307658的另一種剪接形式，帶有一個(gè)與其他GPCR相似的連續(xù)的可讀框，該P(yáng)CR片段的全序列如下5’-TCACAATGCTAGGTGTGGTCTGGCTGGTGGCAGTCATCGTAGGATCACCCATGTGGCACGTGCAACAACTTGAGATCAAATATGACTTCCTATATGAAAAGGAACACATCTGCTGCTTAGAAGAGTGGACCAGCCCTGTGCACCAGAAGATCTACACCACCTTCATCCTTGTCATCCTCTTCCTCCTGCCTCTTATGGTGATGCTTATTCTGTACGTAAAATTGGTTATGAACTTTGGATAAAGAAAAGAGTTGGGGATGGTTCAGTGCTTCGAACTATTCATGGAAAAGAAATGTCCAAAATAGCCAGGAAGAAGAAACGAGCTGTCATTATGATGGTGACAGTGGTGGCTCTCTTTGCTGTGTGCTGGGCACCATTCCATGTTGTCCATATGATGATTGAATACAGTAATTTTGAAAAGGAATATGATGATGTCACAATCAAGATGATTTTTGCTATCGTGCAAATTATTGGATTTTCCAACTCCATCTGTAATCCCATTGTCTATGCA-3’(SEQ.ID.NO.45)以上面的序列為基礎(chǔ)，制備兩個(gè)有義寡核苷酸引物5′-CTGCTTAGAAGAGTGGACCAG-3′(SEQ.ID.NO.46，寡聚核苷酸引物1)5′-CTGTGCACCAGAAGATCTACAC-3′(SEQ.ID.NO.47， 寡聚核苷酸引物2)兩個(gè)反義寡核苷酸引物5′-CAAGGATGAAGGTGGTGTAGA-3′(SEQ.ID.NO.48，寡聚核苷酸引物3)5′-GTGTAGATCTTCTGGTGCACAGG-3′(SEQ.ID.NO.49，寡聚核苷酸引物4)用于3′端和5′端RACE PCR，以人腦Marathon-ReadyTMcDNA(clontech，Cat#7400-1)為模板，按商家說(shuō)明進(jìn)行。經(jīng)RACE PCR產(chǎn)生的DNA片段克隆到pCRII-TOPOTM載體(Invitrogen)中，用SP6/T7引物(Stratagene)和一些中間引物測(cè)序，3′端RACE產(chǎn)物帶有一個(gè)poly(A)尾巴和一個(gè)結(jié)束于TAA終止密碼子的完整的可讀框，5′端RACE產(chǎn)物包含不完整的5′端，即，起始密碼子ATG沒(méi)有出現(xiàn)。
基于新的5′端序列，寡聚核苷酸引物3和下列引物5′-GCAATGCAGGTCATAGTGAGC-3′(SEQ.ID.NO.50，寡聚核苷酸引物5)用于第二輪的5′端RACE PCR，對(duì)PCR產(chǎn)物象上面一樣進(jìn)行分析。第三輪的5′端RACE PCR用反義引物進(jìn)行5′-TGGAGCATGGTGACGGGAATGCAGAAG-3′(SEQ.ID.NO.51，寡聚核苷酸引物6)5′-GTGATGAGCAGGTCACTGAGCGCCAAG-3′(SEQ.ID.NO.52，寡聚核苷酸引物7)5′端RACE PCR產(chǎn)物序列顯示存在起始密碼子ATG，再下一輪的5′RACE PCR沒(méi)有產(chǎn)生更多的5′序列，通過(guò)利用有義引物5′-GCAATGCAGGCGCTTAACATTAC-3′(SEQ.ID.NO.53，寡聚核苷酸引物8)和寡聚核苷酸引物4為引物進(jìn)行的RT-PCR，以及由人腦和心cDNA模板(Clontech、Cat#7404-1)產(chǎn)生的650bp PCR產(chǎn)物的序列分析，證實(shí)了上述完整的5′端序列。通過(guò)利用寡聚核苷酸引物2和下列反義引物的RT-PCR5′-TTGGGTTACAATCTGAAGGGCA3′(SEQ.ID.NO.54，寡聚核苷酸引物9)以及由人腦和心cDNA模板(Clontech，Cat#7404-1)產(chǎn)生的670bp PCR產(chǎn)物的序列分析，證實(shí)了上述完整的3′端序列。
d.hRUP5(Seq.Id.No.9&10)以人的外周白細(xì)胞cDNA(Clontech)為模板，通過(guò)RT-PCR克隆了全長(zhǎng)的hRUP5，所用引物為在ATG起始密碼子上游的有義引物(SEQ.ID.NO.55)，以及包含TCA為終止密碼子的反義引物(SEQ.ID.NO.56)，其序列如下
5′-ACTCCGTGTCCAGCAGGACTCTG-3′(SEQ.ID.NO.55)5′-TGCGTGTTCCTGGACCCTCACGTG-3′(SEQ.ID.NO.56)Advantage cDNA聚合酶(Clontech)用于50μl反應(yīng)，經(jīng)下列循環(huán)進(jìn)行擴(kuò)增，其中第二步到第四步重復(fù)30次94℃ 30秒；94℃ 15秒；69℃ 40秒；72℃ 3分鐘；72℃ 6分鐘。分離得到1.4kb PCR片段，并克隆到pCRII-TOPOTM載體(Invitrogen)，用T7 DNA SequenaseTM試劑盒(Amsham)進(jìn)行全序列測(cè)定，參見(jiàn)SEQ.ID.NO.9。
e.hRUP6(Seq.Id.No.11&12)用下列引物及人的胸腺M(fèi)arathon-ReadyTMcDNA(Clontech)為模板，通過(guò)RT-PCR克隆了全長(zhǎng)hRUP6。
5′-CAGGCCTTGGATTTTAATGTCAGGGATGG-3′(SEQ.ID.NO.57)5′-GGAGAGTCAGCTCTGAAAGAATTCAGG-3′(SEQ.ID.NO.58)AdvantageTMcDNA聚合酶(Clontech，按商家說(shuō)明)用于50μl反應(yīng)，經(jīng)下列循環(huán)進(jìn)行擴(kuò)增94℃ 30秒；94℃ 5秒；66℃ 40秒；72℃ 2.5秒和72℃ 7分鐘，循環(huán)2到循環(huán)4重復(fù)30次。分離得到1.3kb PCR片段，并克隆到pCRII-TOPOTM載體(Invitrogen)，用ABI Big Dye TerminatorTM試劑盒(P.E.Biosystem)進(jìn)行全序列測(cè)定(參見(jiàn)，SEQ.ID.NO.11)。
f.hRUP7(Seq.Id.No.13&14)用下列引物及人的外周白細(xì)胞cDNA(Clontech)為模板，通過(guò)RT-PCR克隆了全長(zhǎng)PUP7，5′-TGATGTGATGCCAGATACTAATAGCAC-3′(SEQ.ID.NO.59，有義)5′-CCTGATTCATTTAGGTGAGATTGAGAC-3′(SEQ.ID.NO.60，反義)AdvantageTMcDNA聚合酶(Clontech)用于50μl反應(yīng)，經(jīng)下列循環(huán)進(jìn)行擴(kuò)增，其中第二步到第四步重復(fù)30次94℃ 2分鐘94℃ 15秒；60℃ 20秒；72℃ 2分鐘；72℃ 10分鐘。分離得到1.25kb PCR片段，并克隆到pCRII-TOPOTM載體(Invitrogen)，用ABI Big Dye TerminatorTM試劑盒(P.E.Biosystem)進(jìn)行全序列測(cè)定。(參見(jiàn)，SEQ.ID.NO.13)g.hARE-5(Seq.Id.No.5&6)采用hARE-5特異的引物5′-CAGCGCAGGGTGAAGCCTGAGAGC-3′SEQ.ID.NO.69(有義，位于起始密碼子ATG的5′端)和5′-GGCACCTGCTGTGACCTGTGCAGG-3′SEQ.ID.NO.70(反義，位于終止密碼子TGA的3′端)并用人基因組DNA為模板，通過(guò)PCR來(lái)克隆全長(zhǎng)hARE-5。按照下列循環(huán)采用TaqPlus PrecisionTMDNA聚合酶(Stratagene)來(lái)擴(kuò)增，其中第2步至第4步重復(fù)35次96℃ 2分鐘；96℃ 20秒；58℃ 30秒；72℃ 2分鐘；72℃ 10分鐘。
分離到預(yù)計(jì)大小的1.1Kb PCR片段并克隆到pCRII-TOPOTM載體(Invitrogen)，用T7 DNA SequenaseTM試劑盒(Amsham)進(jìn)行全序列測(cè)定(SEQ.ID.NO.5)。
h.hARE-4(Seq.Id.No.3&4)采用hARE-4特異的引物5′-CTGGTGTGCTCCATGGCATCCC-3′SEQ.ID.NO.67(有義，位于起始密碼子ATG的5′端)和5′-GTAAGCCTCCCAGAACGAGAGG-3′SEQ.ID.NO.68(反義，位于終止密碼子TGA的3′端)并用人基因組DNA為模板，通過(guò)PCR來(lái)克隆全長(zhǎng)hARE-4。采用Taq DNA聚合酶(Stratagene)和5％DMSO，按照下列循環(huán)來(lái)擴(kuò)增，其中第2步至第3步重復(fù)35次94℃ 3分鐘；94℃ 30秒；59℃ 2分鐘；72℃ 10分鐘。
分離到預(yù)計(jì)大小的1.12Kb PCR片段并克隆到pCRII-TOPOTM載體(Invitrogen)，用T7 DNA SequenaseTM試劑盒(Amsham)進(jìn)行全序列測(cè)定(SEQ.ID.NO.3)。
i.hARE-3(Seq.Id.No.1&2)采用hARE-3特異的引物5′-gatcaagcttCCATCCTACTGAAACCATGGTC-3′SEQ.ID.NO.65(有義，小寫(xiě)字母核苷酸代表Hind III突出端，ATG為起始密碼子)和5′-gatcagatctCAGTTCCAATATTCACACCACCGTC-3′SEQ.ID.NO.66(反義，小寫(xiě)字母核苷酸代表Xba I突出端，TCA為終止密碼子)并用人基因組DNA為模板，通過(guò)PCR來(lái)克隆全長(zhǎng)hARE-3。采用TaqPlusPrecisionTMDNA聚合酶(Stratagene)，按照下列循環(huán)來(lái)擴(kuò)增，其中第2步至第4步重復(fù)35次94℃ 3分鐘；94℃ 1分鐘；55℃ 1分鐘；72℃ 2分鐘；72℃ 10分鐘。
分離到預(yù)計(jì)大小的1.3Kb PCR片段并用Hind III和Xba I消化，克隆到pRC/CMV載體(Invitrogen)的Hind III和Xba I位點(diǎn)，用T7 DNASequenaseTM試劑盒(Amsham)進(jìn)行全序列測(cè)定(SEQ.ID.NO.1)。
j.hRUP3(Seq.Id.No.7&8)采用hRUP3特異的引物5′-GTCCTGCCACTTCGAGACATGG-3′SEQ.ID.NO.71(有義，ATG為起始密碼子)和5′-GAAACTTCTCTGCCCTTACCGTC-3′SEQ.ID.NO.72(反義，位于終止密碼子TAA的3′端)并用人基因組DNA為模板，通過(guò)PCR來(lái)克隆全長(zhǎng)hRUP3。采用TaqPlus PrecisionTMDNA聚合酶(Stratagene)，按照下列循環(huán)來(lái)擴(kuò)增，其中第2步至第4步重復(fù)35次94℃ 3分鐘；94℃ 1分鐘；58℃ 1分鐘；72℃ 2分鐘；72℃ 10分鐘。
分離到預(yù)計(jì)大小的1.0Kb PCR片段并克隆到pCRII-TOPOTM載體(Invitrogen)，用T7 DNA SequenaseTM試劑盒(Amsham)進(jìn)行全序列測(cè)定(SEQ.ID.NO.7)。實(shí)施例2受體表達(dá)盡管在本領(lǐng)域中有多種細(xì)胞可用于蛋白質(zhì)的表達(dá)，但最優(yōu)選應(yīng)用的是哺乳動(dòng)物細(xì)胞。據(jù)預(yù)測(cè)，其基本原因是實(shí)用性，即例如表達(dá)GPCR的酵母細(xì)胞的應(yīng)用，有可能把一種非哺乳動(dòng)物細(xì)胞引入到程序中，此細(xì)胞可能不(其實(shí)，對(duì)于酵母來(lái)說(shuō)，是不)包括偶聯(lián)受體、遺傳機(jī)制和分泌途徑，而這些是經(jīng)過(guò)進(jìn)化用于哺乳動(dòng)物系統(tǒng)的。因此，在非哺乳動(dòng)物細(xì)胞中得到的結(jié)果，盡管是可能有用的，但并不如從哺乳動(dòng)物細(xì)胞中得到的結(jié)果優(yōu)選。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，COS-7、293和293T細(xì)胞是特別優(yōu)選的，盡管應(yīng)用的特定哺乳動(dòng)物細(xì)胞可按技術(shù)人員的特別需要而被判定。用于表達(dá)所公開(kāi)的GPCR的一般步驟如下。
第一天，將1×107個(gè)293T細(xì)胞接種到150mm的培養(yǎng)板上。第二天，準(zhǔn)備兩支試管(比例是每板用于一支試管)通過(guò)混合20μg DNA(例如pCMV載體、帶有受體cDNA的pCMV載體，等)在1.2ml無(wú)血清的DMEM(Irvine Scientific，Irvine，CA)來(lái)制備試管A；通過(guò)混合120μllipofectamine(Gibco BRL)在1.2ml無(wú)血清DMEM中制備試管B。把試管A和B互傾混合(幾次)，然后在室溫下溫育30-45分鐘。組合物被稱為“轉(zhuǎn)染組合物”。植出的293T細(xì)胞用1×PBS洗滌，然后加入10ml無(wú)血清的DMEM。把2.4ml轉(zhuǎn)染組合物加入到細(xì)胞中去，然后在37℃/5％CO2下溫育4小時(shí)。接著通過(guò)抽吸移去轉(zhuǎn)染組合物，然后加入25ml的DMEM/10％胎牛血清。接著細(xì)胞在37℃/5％CO2溫育。72小時(shí)后收獲細(xì)胞并用來(lái)進(jìn)行分析。實(shí)施例3所公開(kāi)的人GPCR的組織分布可用幾中方法來(lái)測(cè)定本文所公開(kāi)的GPCR的組織分布。
1.斑點(diǎn)印跡分析應(yīng)用商業(yè)可得的人組織斑點(diǎn)印跡系統(tǒng)，探查內(nèi)源孤兒GPCR以確定這些受體所存在的區(qū)域。實(shí)施例1的GPCR的cDNA片段(放射標(biāo)記的)被(或可被)用作探針按照制造商的指令，應(yīng)用Prime-It IITM隨機(jī)引物標(biāo)記試劑盒(Stratagene，#300385)，用完全受體cDNA(從載體中切下)產(chǎn)生(或可產(chǎn)生)放射標(biāo)記的探針。把人RNA Master BlotTM(Clontech，#7770-1)與內(nèi)源人GPCR放射標(biāo)記的探針雜交，并按照制造商的指令在嚴(yán)謹(jǐn)條件下洗滌。印跡曝光于Kodak BioMaxTM放射自顯影底片，在-80℃過(guò)夜。幾種受體的結(jié)果在表B和表C中列出(參見(jiàn)圖1A和1B，其中分別列出了各種組織和其位置)。用hCHN3和hCHN8得到的結(jié)果顯示在圖2A和2B所示的典型斑點(diǎn)印跡中。
表B孤兒GPCR 組織分布(在斑點(diǎn)印跡中相對(duì)于其它組織的最高水平)hGPCR27 胎腦、殼、腦下垂體、尾狀核hARE-1 脾、外周血白細(xì)胞、胎脾hPPR1腦下垂體、心、唾液腺、小腸、睪丸hRUP3 胰腺hCHN3 胎腦、殼、枕皮質(zhì)hCHN9 胰腺、小腸、肝hCHN10腎、甲狀腺表C孤兒GPCR 組織分布(在斑點(diǎn)印跡中相對(duì)于其它組織的最高水平)hARE-3 左小腦、右小腦、睪丸、AccumbenshGPCR3 尸體collusum、尾狀核、肝、心、心臟室間隔膜hARE-2 左小腦、右小腦、黑質(zhì)hCHN8 左小腦、右小腦、腎、肺2.RT-PCRa.hRUP3為證實(shí)hRUP3 mRNA的組織分布，采用hRUP3特異的引物和作為模板的人多組織cDNA板(MTC，Clontech)進(jìn)行RT-PCR。采用Taq DNA聚合酶(Stratagene)并按照下列循環(huán)在40微升反應(yīng)液中來(lái)進(jìn)行該P(yáng)CR反應(yīng)94℃ 2分鐘；94℃ 15秒；55℃ 30秒；72℃ 1分鐘；72℃ 10分鐘。所用引物如下5′-GACAGGTACCTTGCCATCAAG-3′(SEQ.ID.NO.61；有義)5′-CTGCACAATGCCAGTGATAAGG-3′(SEQ.ID.NO.62；反義)。
將20微升反應(yīng)液上樣到1％瓊脂糖凝膠中，結(jié)果如圖3所示。
正如圖3中的數(shù)據(jù)所支持的那樣，在所使用的cDNA板的16個(gè)組織(腦、結(jié)腸、心、腎、肺、卵巢、胰腺、胎盤(pán)、前列腺、骨、小腸、脾、睪丸、胸腺白細(xì)胞和肝)中，只有胰腺顯示了一條hRUP3帶。hRUP3的蛋白質(zhì)序列與其它GPCR的進(jìn)一步的對(duì)比分析表明hRUP3與具有小分子內(nèi)源配體的GPCR有關(guān)，由此可以做出這樣的預(yù)測(cè)hRUP3的內(nèi)源配體是小分子。
b.hRUP4采用作為引物的hRUP4的寡聚核苷酸引物8和4和作為模板的人多組織cDNA板(MTC，Clontech)進(jìn)行RT-PCR。采用Taq DNA聚合酶(Stratagene)并按照下列循環(huán)在40微升反應(yīng)液中來(lái)進(jìn)行擴(kuò)增94℃ 30秒；94℃ 10秒；55℃ 30秒；72℃ 2分鐘；72℃ 5分鐘，其中循環(huán)2到循環(huán)4重量復(fù)30次。
將20微升反應(yīng)液上樣到1％瓊脂糖凝膠中來(lái)分析該RT-PCR的產(chǎn)物，發(fā)現(xiàn)hRUP4 mRNA在許多人組織中表達(dá)，但在心和腎中表達(dá)最強(qiáng)。(參見(jiàn)圖4)。為證實(shí)這些PCR片段的真實(shí)性，使用從hRUP4的5′末端產(chǎn)生的300bp片段做探針，進(jìn)行Souther印跡分析。該探針用32p-dCTP采用Prime-It IITM隨機(jī)引物標(biāo)記試劑盒(Stratagore)進(jìn)行標(biāo)記，并用ProbeQuantTMG-50微型柱(Amershan)進(jìn)行純化。進(jìn)行12小時(shí)的預(yù)雜交，然后在42℃雜交過(guò)夜。最后，在65℃用0.1×SSC對(duì)印跡進(jìn)行洗滌。該Southern印跡沒(méi)有證實(shí)hRUP4的PCR片段。
c.hRUP5采用hRUP5的下列特異的引物和作為模板的人多組織cDNA板(MTC，Clontech)進(jìn)行RT-PCR5′-CTGACTTCTTGTTCCTGGCAGCAGCGG-3′(SEQ.ID.NO.63；有義)
5′-AGACCAGCCAGGGCACGCTGAAGAGTG-3′(SEQ.ID.NO.64；反義)。
采用Taq DNA聚合酶(Stratagene)并按照下列循環(huán)在40微升反應(yīng)液中來(lái)進(jìn)行擴(kuò)增94℃ 30秒；94℃ 10秒；62℃ 1分30秒；72℃ 5分鐘；其中第2步至第3步重復(fù)30次。將20微升反應(yīng)液上樣到1.5％瓊脂糖凝膠中來(lái)分析該RT-PCR的產(chǎn)物，發(fā)現(xiàn)hRUP5 mRNA僅在外周血白細(xì)胞中表達(dá)(數(shù)據(jù)未顯示)。
d.hRUP6采用RT-PCR來(lái)證實(shí)hRUP6的表達(dá)并確定hRUP6的組織分布?；贏C005871和GPR66片斷的對(duì)齊排比，采用具有下列序列的寡聚核苷酸和作為模板的人多組織cDNA板(MTC，Clontech)5′-CCAACACCAGCATCCATGGCATCAAG-3′(SEQ.ID.NO.73有義)5′-GGAGAGTCAGCTCTGAAAGAATTCAGG-3′(SEQ.ID.NO.74；反義)。采用TaqPlus PrecisionTMDNA聚合酶(Stratagene，按照廠商的指令)并按照下列循環(huán)在40微升反應(yīng)液中來(lái)進(jìn)行PCR94℃ 30秒；94℃ 5秒；66℃ 40秒；72℃ 2分30秒；和72℃ 7分鐘。其中第2至第4循環(huán)重復(fù)30次。
將20微升反應(yīng)液上樣到1.2％瓊脂糖凝膠中來(lái)分析該RT-PCR的產(chǎn)物，代表hRUP6的特異760bp DNA片段主要在胸腺中表達(dá)，而在心、腎、肺、前列腺、小腸和睪丸中僅少量表達(dá)。(參見(jiàn)圖5)。
本專利申請(qǐng)文件中提到的每個(gè)專利、申請(qǐng)及印刷出版物以其全文引入本申請(qǐng)作參考。
本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到在不背離本發(fā)明精神和實(shí)質(zhì)的前提下，可以對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案做許多許多改變和修改。這些修改和變化均在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
雖然本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以得到許多不同的載體為內(nèi)源和非內(nèi)源GPCR的目的使用，但最好是用pCMV載體。按照國(guó)際承認(rèn)用于專利程序的微生物保存布達(dá)佩斯條約，該載體于1998年10月13日保存在美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(American Type Culture Collection)(ATCC)(University Blvd，Manassas，VA20110-2209 USA7)。其DNA經(jīng)ATCC測(cè)定并得到確認(rèn)，ATCC為pCMV給出了下列保藏號(hào)ATCC#203351。
序列表(1)一般資料(i)申請(qǐng)人陳若平；鄧杭；廖王蓁；林伊玲(ii)發(fā)明名稱與人G蛋白偶聯(lián)的孤兒受體(iii)序列數(shù)74(iv)通訊地址(A)收信人阿瑞那制藥公司(B)Nancy Ridge大道6166號(hào)(C)城市圣地亞哥(D)州加利福尼亞州(E)國(guó)家美國(guó)(F)郵編92121(v)計(jì)算機(jī)可讀形式(A)介質(zhì)類型軟盤(pán)(B)計(jì)算機(jī)IBM個(gè)人兼容機(jī)(C)操作系統(tǒng)PC-DOS/MS-DOS(D)軟件PatentIn Release#1.0，#1.30版(vi)本申請(qǐng)資料(A)申請(qǐng)?zhí)?B)申請(qǐng)日(C)分類號(hào)(viii)代理人信息(A)姓名Burgoon，Richard P.
(B)登記號(hào)34787(ix)電訊信息(A)電話(858)453-7200(B)電傳(858)453-7210(2)SEQ ID NO1的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度1260個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(xi)SEQ ID NO1的序列描述ATGGTCTTCT CGGCAGTGTT GACTGCGTTC CATACCGGGA CATCCAACAC AACATTTGTC 60GTGTATGAAA ACACCTACAT GAATATTACA CTCCCTCCAC CATTCCAGCA TCCTGACCTC 120AGTCCATTGC TTAGATATAG TTTTGAAACC ATGGCTCCCA CTGGTTTGAG TTCCTTGACC 180GTGAATAGTA CAGCTGTGCC CACAACACCA GCAGCATTTA AGAGCCTAAA CTTGCCTCTT 240CAGATCACCC TTTCTGCTAT AATGATATTC ATTCTGTTTG TGTCTTTTCT TGGGAACTTG 300GTTGTTTGCC TCATGGTTTA CCAAAAAGCT GCCATGAGGT CTGCAATTAA CATCCTCCTT 360GCCAGCCTAG CTTTTGCAGA CATGTTGCTT GCAGTGCTGA ACATGCCCTT TGCCCTGGTA 420ACTATTCTTA CTACCCGATG GATTTTTGGG AAATTCTTCT GTAGGGTATC TGCTATGTTT 480TTCTGGTTAT TTGTGATAGA AGGAGTAGCC ATCCTGCTCA TCATTAGCAT AGATAGGTTC 540CTTATTATAG TCCAGAGGCA GGATAAGCTA AACCCATATA GAGCTAAGGT TCTGATTGCA 600GTTTCTTGGG CAACTTCCTT TTGTGTAGCT TTTCCTTTAG CCGTAGGAAA CCCCGACCTG 660CAGATACCTT CCCGAGCTCC CCAGTGTGTG TTTGGGTACA CAACCAATCC AGGCTACCAG 720GCTTATGTGA TTTTGATTTC TCTCATTTCT TTCTTCATAC CCTTCCTGGT AATACTGTAC 780TCATTTATGG GCATACTCAA CACCCTTCGG CACAATGCCT TGAGGATCCA TAGCTACCCT 840GAAGGTATAT GCCTCAGCCA GGCCAGCAAA CTGGGTCTCA TGAGTCTGCA GAGACCTTTC 900CAGATGAGCA TTGACATGGG CTTTAAAACA CGTGCCTTCA CCACTATTTT GATTCTCTTT 960GCTGTCTTCA TTGTCTGCTG GGCCCCATTC ACCACTTACA GCCTTGTGGC AACATTCAGT 1020AAGCACTTTT ACTATCAGCA CAACTTTTTT GAGATTAGCA CCTGGCTACT GTGGCTCTGC 1080TACCTCAAGT CTGCATTGAA TCCGCTGATC TACTACTGGA GGATTAAGAA ATTCCATGAT 1140GCTTGCCTGG ACATGATGCC TAAGTCCTTC AAGTTTTTGC CGCAGCTCCC TGGTCACACA 1200AAGCGACGGA TACGTCCTAG TGCTGTCTAT GTGTGTGGGG AACATCGGAC GGTGGTGTGA 1260(3)SEQ ID NO2的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度419個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(xi)SEQ ID NO2的序列描述Met Val Phe Ser Ala Val Leu Thr Ala Phe His Thr Gly Thr Ser Asn1 5 10 15Thr Thr Phe Val Val Tyr Glu Asn Thr Tyr Met Asn Ile Thr Leu Pro20 25 30Pro Pro Phe Gln His Pro Asp Leu Ser Pro Leu Leu Arg Tyr Ser Phe35 40 45Glu Thr Met Ala Pro Thr Gly Leu Ser Ser Leu Thr Val Asn Ser Thr50 55 60Ala Val Pro Thr Thr Pro Ala Ala Phe Lys Ser Leu Asn Leu Pro Leu65 70 75 80Gln Ile Thr Leu Ser Ala Ile Met Ile Phe Ile Leu Phe Val Ser Phe85 90 95Leu Gly Asn Leu Val Val Cys Leu Met Val Tyr Gln Lys Ala Ala Met100 105 110Arg Ser Ala Ile Asn Ile Leu Leu Ala Ser Leu Ala Phe Ala Asp Met115 120 125Leu Leu Ala Val Leu Asn Met Pro Phe Ala Leu Val Thr Ile Leu Thr130 135 140Thr Arg Trp Ile Phe Gly Lys Phe Phe Cys Arg Val Ser Ala Met Phe145 150 155 160Phe Trp Leu Phe Val Ile Glu Gly Val Ala Ile Leu Leu Ile Ile Set165 170 175Ile Asp Arg Phe Leu Ile Ile Val Gln Arg Gln Asp Lys Leu Asn Pro180 185 190Tyr Arg Ala Lys Val Leu Ile Ala Val Ser Trp Ala Thr Ser Phe Cys195 200 205Val Ala Phe Pro Leu Ala Val Gly Asn Pro Asp Leu Gln Ile Pro Ser210 215 220Arg Ala Pro Gln Cys Val Phe Gly Tyr Thr Thr Asn Pro Gly Tyr Gln225 230 235 240Ala Tyr Val Ile Leu Ile Ser Leu Ile Set Phe Phe Ile Pro Phe Leu245 250 255Val Ile Leu Tyr Ser Phe Met Gly Ile Leu Asn Thr Leu Arg His Asn260 265 270Ala Leu Arg Ile His Ser Tyr Pro Glu Gly Ile Cys Leu Ser Gln Ala275 280 285Ser Lys Leu Gly Leu Met Ser Leu Gln Arg Pro Phe Gln Met Ser Ile290 295 300Asp Met Gly Phe Lys Thr Arg Ala Phe Thr Thr Ile Leu Ile Leu Phe305 310 315 320Ala Val Phe Ile Val Cys Trp Ala Pro Phe Thr Thr Tyr Ser Leu Val325 330 335Ala Thr Phe Ser Lys His Phe Tyr Tyr Gln His Asn Phe Phe Glu Ile340 345 350Ser Thr Trp Leu Leu Trp Leu Cys Tyr Leu Lys Ser Ala Leu Asn Pro355 360 365Leu Ile Tyr Tyr Trp Arg Ile Lys Lys Phe His Asp Ala Cys Leu Asp370 375 380Met Met Pro Lys Ser Phe Lys Phe Leu Pro Gln Leu Pro Gly His Thr385 390 395 400Lys Arg Arg Ile Arg Pro Ser Ala Val Tyr Val Cys Gly Glu His Arg405 410 415Thr Val Val(4)SEQ ID NO3的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度1119個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(xi)SEQ ID NO3的序列描述ATGTTAGCCA ACAGCTCCTC AACCAACAGT TCTGTTCTCC CGTGTCCTGA CTACCGACCT 60ACCCACCGCC TGCACTTGGT GGTCTACAGC TTGGTGCTGG CTGCCGGGCT CCCCCTCAAC 120GCGCTAGCCC TCTGGGTCTT CCTGCGCGCG CTGCGCGTGC ACTCGGTGGT GAGCGTGTAC 180ATGTGTAACC TGGCGGCCAG CGACCTGCTC TTCACCCTCT CGCTGCCCGT TCGTCTCTCC 240TACTACGCAC TGCACCACTG GCCCTTCCCC GACCTCCTGT GCCAGACGAC GGGCGCCATC 300TTCCAGATGA ACATGTACGG CAGCTGCATC TTCCTGATGC TCATCAACGT GGACCGCTAC 360GCCGCCATCG TGCACCCGCT GCGACTGCGC CACCTGCGGC GGCCCCGCGT GGCGCGGCTG 420CTCTGCCTGG GCGTGTGGGC GCTCATCCTG GTGTTTGCCG TGCCCGCCGC CCGCGTGCAC 480AGGCCCTCGC GTTGCCGCTA CCGGGACCTC GAGGTGCGCC TATGCTTCGA GAGCTTCAGC 540GACGAGCTGT GGAAAGGCAG GCTGCTGCCC CTCGTGCTGC TGGCCGAGGC GCTGGGCTTC 600CTGCTGCCCC TGGCGGCGGT GGTCTACTCG TCGGGCCGAG TCTTCTGGAC GCTGGCGCGC 660CCCGACGCCA CGCAGAGCCA GCGGCGGCGG AAGACCGTGC GCCTCCTGCT GGCTAACCTC 720GTCATCTTCC TGCTGTGCTT CGTGCCCTAC AACAGCACGC TGGCGGTCTA CGGGCTGCTG 780CGGAGCAAGC TGGTGGCGGC CAGCGTGCCT GCCCGCGATC GCGTGCGCGG GGTGCTGATG 840GTGATGGTGC TGCTGGCCGG CGCCAACTGC GTGCTGGACC CGCTGGTGTA CTACTTTAGC 900GCCGAGGGCT TCCGCAACAC CCTGCGCGGC CTGGGCACTC CGCACCGGGC CAGGACCTCG 960GCCACCAACG GGACGCGGGC GGCGCTCGCG CAATCCGAAA GGTCCGCCGT CACCACCGAC 1020GCCACCAGGC CGGATGCCGC CAGTCAGGGG CTGCTCCGAC CCTCCGACTC CCACTCTCTG 1080TCTTCCTTCA CACAGTGTCC CCAGGATTCC GCCCTCTGA1119(5)SEQ ID NO4的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度372個(gè)氨基酸
(B)類型氨基酸(C)鏈型(D)拓?fù)鋵W(xué)不相關(guān)(ii)分子類型蛋白質(zhì)(xi)SEQ ID NO4的序列描述Met Leu Ala Asn Ser Ser Ser Thr Asn Ser Ser Val Leu Pro Cys Pro1 5 10 15Asp Tyr Arg Pro Thr His Arg Leu His Leu Val Val Tyr Ser Leu Val20 25 30Leu Ala Ala Gly Leu Pro Leu Asn Ala Leu Ala Leu Trp Val Phe Leu35 40 45Arg Ala Leu Arg Val His Ser Val Val Ser Val Tyr Met Cys Asn Leu50 55 60Ala Ala Ser Asp Leu Leu Phe Thr Leu Ser Leu Pro Val Arg Leu Ser65 70 75 80Tyr Tyr Ala Leu His His Trp Pro Phe Pro Asp Leu Leu Cys Gln Thr85 90 95Thr Gly Ala Ile Phe Gln Met Asn Met Tyr Gly Ser Cys Ile Phe Leu100 105 110Met Leu Ile Asn Val Asp Arg Tyr Ala Ala Ile Val His Pro Leu Arg115 120 125Leu Arg His Leu Arg Arg Pro Arg Val Ala Arg Leu Leu Cys Leu Gly130 135 140Val Trp Ala Leu Ile Leu Val Phe Ala Val Pro Ala Ala Arg Val His145 150 155 160Arg Pro Ser Arg Cys Arg Tyr Arg Asp Leu Glu Val Arg Leu Cys Phe165 170 175Glu Ser Phe Ser Asp Glu Leu Trp Lys Gly Arg Leu Leu Pro Leu Val180 185 190Leu Leu Ala Glu Ala Leu Gly Phe Leu Leu Pro Leu Ala Ala Val Val195 200 205Tyr Ser Ser Gly Arg Val Phe Trp Thr Leu Ala Arg Pro Asp Ala Thr210 215 220Gln Ser Gln Arg Arg Arg Lys Thr Val Arg Leu Leu Leu Ala Asn Leu225 230 235 240Val Ile Phe Leu Leu Cys Phe Val Pro Tyr Asn Ser Thr Leu Ala Val245 250 255Tyr Gly Leu Leu Arg Ser Lys Leu Val Ala Ala Ser Val Pro Ala Arg260 265 270Asp Arg Val Arg Gly Val Leu Met Val Met Val Leu Leu Ala Gly Ala275 280 285Asn Cys Val Leu Asp Pro Leu Val Tyr Tyr Phe Ser Ala Glu Gly Phe290 295 300Arg Asn Thr Leu Arg Gly Leu Gly Thr Pro His Arg Ala Arg Thr Ser305 310 315 320Ala Thr Asn Gly Thr Arg Ala Ala Leu Ala Gln Set Glu Arg Ser Ala325 330 335Val Thr Thr Asp Ala Thr Arg Pro Asp Ala Ala Ser Gln Gly Leu Leu340 345 350Arg Pro Ser Asp Ser His Ser Leu Ser Ser Phe Thr Gln Cys Pro Gln355 360 365Asp Ser Ala Leu370(6)SEQ ID NO5的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度1107個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(xi)SEQ ID NO5的序列描述ATGGCCAACT CCACAGGGCT GAACGCCTCA GAAGTCGCAG GCTCGTTGGG GTTGATCCTG 60GCAGCTGTCG TGGAGGTGGG GGCACTGCTG GGCAACGGCG CGCTGCTGGT CGTGGTGCTG 120CGCACGCCGG GACTGCGCGA CGCGCTCTAC CTGGCGCACC TGTGCGTCGT GGACCTGCTG 180GCGGCCGCCT CCATCATGCC GCTGGGCCTG CTGGCCGCAC CGCCGCCCGG GCTGGGCCGC 240GTGCGCCTGG GCCCCGCGCC ATGCCGCGCC GCTCGCTTCC TCTCCGCCGC TCTGCTGCCG 300GCCTGCACGC TCGGGGTGGC CGCACTTGGC CTGGCACGCT ACCGCCTCAT CGTGCACCCG 360CTGCGGCCAG GCTCGCGGCC GCCGCCTGTG CTCGTGCTCA CCGCCGTGTG GGCCGCGGCG 420GGACTGCTGG GCGCGCTCTC CCTGCTCGGC CCGCCGCCCG CACCGCCCCC TGCTCCTGCT 480CGCTGCTCGG TCCTGGCTGG GGGCCTCGGG CCCTTCCGGC CGCTCTGGGC CCTGCTGGCC 540TTCGCGCTGC CCGCCCTCCT GCTGCTCGGC GCCTACGGCG GCATCTTCGT GGTGGCGCGT 600CGCGCTGCCC TGAGGCCCCC ACGGCCGGCG CGCGGGTCCC GACTCCGCTC GGACTCTCTG 660GATAGCCGCC TTTCCATCTT GCCGCCGCTC CGGCCTCGCC TGCCCGGGGG CAAGGCGGCC 720CTGGCCCCAG CGCTGGCCGT GGGCCAATTT GCAGCCTGCT GGCTGCCTTA TGGCTGCGCG 780TGCCTGGCGC CCGCAGCGCG GGCCGCGGAA GCCGAAGCGG CTGTCACCTG GGTCGCCTAC 840TCGGCCTTCG CGGCTCACCC CTTCCTGTAC GGGCTGCTGC AGCGCCCCGT GCGCTTGGCA 900CTGGGCCGCC TCTCTCGCCG TGCACTGCCT GGACCTGTGC GGGCCTGCAC TCCGCAAGCC 960TGGCACCCGC GGGCACTCTT GCAATGCCTC CAGAGACCCC CAGAGGGCCC TGCCGTAGGC 1020CCTTCTGAGG CTCCAGAACA GACCCCCGAG TTGGCAGGAG GGCGGAGCCC CGCATACCAG 1080GGGCCACCTG AGAGTTCTCT CTCCTGA 1107(7)SEQ ID NO6的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度368個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型(D)拓?fù)鋵W(xué)不相關(guān)(ii)分子類型蛋白質(zhì)(xi)SEQ ID NO6的序列描述Met Ala Asn Ser Thr Gly Leu Asn Ala Ser Glu Val Ala Gly Ser Leu1 5 10 15Gly Leu Ile Leu Ala Ala Val Val Glu Val Gly Ala Leu Leu Gly Asn20 25 30Gly Ala Leu Leu Val Val Val Leu Arg Thr Pro Gly Leu Arg Asp Ala35 40 45Leu Tyr Leu Ala His Leu Cys Val Val Asp Leu Leu Ala Ala Ala Ser50 55 60Ile Met Pro Leu Gly Leu Leu Ala Ala Pro Pro Pro Gly Leu Gly Arg65 70 75 80Val Arg Leu Gly Pro Ala Pro Cys Arg Ala Ala Arg Phe Leu Ser Ala85 90 95Ala Leu Leu Pro Ala Cys Thr Leu Gly Val Ala Ala Leu Gly Leu Ala100 105 110Arg Tyr Arg Leu Ile Val His Pro Leu Arg Pro Gly Ser Arg Pro Pro115 120 125Pro Val Leu Val Leu Thr Ala Val Trp Ala Ala Ala Gly Leu Leu Gly130 135 140Ala Leu Ser Leu Leu Gly Pro Pro Pro Ala Pro Pro Pro Ala Pro Ala145 150 155 160Arg Cys Ser Val Leu Ala Gly Gly Leu Gly Pro Phe Arg Pro Leu Trp165 170 175Ala Leu Leu Ala Phe Ala Leu Pro Ala Leu Leu Leu Leu Gly Ala Tyr180 185 190Gly Gly Ile Phe Val Val Ala Arg Arg Ala Ala Leu Arg Pro Pro Arg195 200 205Pro Ala Arg Gly Ser Arg Leu Arg Ser Asp Ser Leu Asp Ser Arg Leu210 215 220Ser Ile Leu Pro Pro Leu Arg Pro Arg Leu Pro Gly Gly Lys Ala Ala225 230 235 240Leu Ala Pro Ala Leu Ala Val Gly Gln Phe Ala Ala Cys Trp Leu Pro245 250 255Tyr Gly Cys Ala Cys Leu Ala Pro Ala Ala Arg Ala Ala Glu Ala Glu260 265 270Ala Ala Val Thr Trp Val Ala Tyr Ser Ala Phe Ala Ala His Pro Phe275 280 285Leu Tyr Gly Leu Leu Gln Arg Pro Val Arg Leu Ala Leu Gly Arg Leu290 295 300Ser Arg Arg Ala Leu Pro Gly Pro Val Arg Ala Cys Thr Pro Gln Ala305 310 315 320Trp His Pro Arg Ala Leu Leu Gln Cys Leu Gln Arg Pro Pro Glu Gly325 330 335Pro Ala Val Gly Pro Ser Glu Ala Pro Glu Gln Thr Pro Glu Leu Ala340 345 350Gly Gly Arg Ser Pro Ala Tyr Gln Gly Pro Pro Glu Ser Ser Leu Ser355 360 365(8)SEQ ID NO7的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度1008個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(xi)SEQ ID NO7的序列描述ATGGAATCAT CTTTCTCATT TGGAGTGATC CTTGCTGTCC TGGCCTCCCT CATCATTGCT 60ACTAACACAC TAGTGGCTGT GGCTGTGCTG CTGTTGATCC ACAAGAATGA TGGTGTCAGT 120CTCTGCTTCA CCTTGAATCT GGCTGTGGCT GACACCTTGA TTGGTGTGGC CATCTCTGGC 180CTACTCACAG ACCAGCTCTC CAGCCCTTCT CGGCCCACAC AGAAGACCCT GTGCAGCCTG 240CGGATGGCAT TTGTCACTTC CTCCGCAGCT GCCTCTGTCC TCACGGTCAT GCTGATCACC 300TTTGACAGGT ACCTTGCCAT CAAGCAGCCC TTCCGCTACT TGAAGATCAT GAGTGGGTTC 360GTGGCCGGGG CCTGCATTGC CGGGCTGTGG TTAGTGTCTT ACCTCATTGG CTTCCTCCCA 420CTCGGAATCC CCATGTTCCA GCAGACTGCC TACAAAGGGC AGTGCAGCTT CTTTGCTGTA 480TTTCACCCTC ACTTCGTGCT GACCCTCTCC TGCGTTGGCT TCTTCCCAGC CATGCTCCTC 540TTTGTCTTCT TCTACTGCGA CATGCTCAAG ATTGCCTCCA TGCACAGCCA GCAGATTCGA 600AAGATGGAAC ATGCAGGAGC CATGGCTGGA GGTTATCGAT CCCCACGGAC TCCCAGCGAC 660TTCAAAGCTC TCCGTACTGT GTCTGTTCTC ATTGGGAGCT TTGCTCTATC CTGGACCCCC 720TTCCTTATCA CTGGCATTGT GCAGGTGGCC TGCCAGGAGT GTCACCTCTA CCTAGTGCTG 780GAACGGTACC TGTGGCTGCT CGGCGTGGGC AACTCCCTGC TCAACCCACT CATCTATGCC 840TATTGGCAGA AGGAGGTGCG ACTGCAGCTC TACCACATGG CCCTAGGAGT GAAGAAGGTG 900CTCACCTCAT TCCTCCTCTT TCTCTCGGCC AGGAATTGTG GCCCAGAGAG GCCCAGGGAA 960AGTTCCTGTC ACATCGTCAC TATCTCCAGC TCAGAGTTTG ATGGCTAA 1008(9)SEQ ID NO8的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度335個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型(D)拓?fù)鋵W(xué)不相關(guān)(ii)分子類型蛋白質(zhì)(xi)SEQ ID NO8的序列描述Met Glu Ser Ser Phe Ser Phe Gly Val Ile Leu Ala Val Leu Ala Ser1 5 10 15Leu Ile Ile Ala Thr Asn Thr Leu Val Ala Val Ala Val Leu Leu Leu20 25 30Ile His Lys Asn Asp Gly Val Ser Leu Cys Phe Thr Leu Asn Leu Ala35 40 45Val Ala Asp Thr Leu Ile Gly Val Ala Ile Ser Gly Leu Leu Thr Asp50 55 60Gln Leu Ser Ser Pro Ser Arg Pro Thr Gln Lys Thr Leu Cys Ser Leu65 70 75 80Arg Met Ala Phe Val Thr Ser Ser Ala Ala Ala Ser Val Leu Thr Val85 90 95Met Leu Ile Thr Phe Asp Arg Tyr Leu Ala Ile Lys Gln Pro Phe Arg100 105 110Tyr Leu Lys Ile Met Ser Gly Phe Val Ala Gly Ala Cys Ile Ala Gly115 120 125Leu Trp Leu Val Ser Tyr Leu Ile Gly Phe Leu Pro Leu Gly Ile Pro130 135 140Met Phe Gln Gln Thr Ala Tyr Lys Gly Gln Cys Ser Phe Phe Ala Val145 150 155 160Phe His Pro His Phe Val Leu Thr Leu Ser Cys Val Gly Phe Phe Pro165 170 175Ala Met Leu Leu Phe Val Phe Phe Tyr Cys Asp Met Leu Lys Ile Ala180 185 190Ser Met His Ser Gln Gln Ile Arg Lys Met Glu His Ala Gly Ala Met195 200 205Ala Gly Gly Tyr Arg Ser Pro Arg Thr Pro Ser Asp Phe Lys Ala Leu210 215 220Arg Thr Val Ser Val Leu Ile Gly Ser Phe Ala Leu Ser Trp Thr Pro225 230 235 240Phe Leu Ile Thr Gly Ile Val Gln Val Ala Cys Gln Glu Cys His Leu245 250 255Tyr Leu Val Leu Glu Arg Tyr Leu Trp Leu Leu Gly Val Gly Asn Ser260 265 270Leu Leu Asn Pro Leu Ile Tyr Ala Tyr Trp Gln Lys Glu Val Arg Leu275 280 285Gln Leu Tyr His Met Ala Leu Gly Val Lys Lys Val Leu Thr Ser Phe290 295 300Leu Leu Phe Leu Ser Ala Arg Asn Cys Gly Pro Glu Arg Pro Arg Glu305 310 315 320Ser Ser Cys His Ile Val Thr Ile Ser Ser Ser Glu Phe Asp Gly325 330 335(10)SEQ ID NO9的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度1413個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(xi)SEQ ID NO9的序列描述ATGGACACTA CCATGGAAGC TGACCTGGGT GCCACTGGCC ACAGGCCCCG CACAGAGCTT 60GATGATGAGG ACTCCTACCC CCAAGGTGGC TGGGACACGG TCTTCCTGGT GGCCCTGCTG 120CTCCTTGGGC TGCCAGCCAA TGGGTTGATG GCGTGGCTGG CCGGCTCCCA GGCCCGGCAT 180GGAGCTGGCA CGCGTCTGGC GCTGCTCCTG CTCAGCCTGG CCCTCTCTGA CTTCTTGTTC 240CTGGCAGCAG CGGCCTTCCA GATCCTAGAG ATCCGGCATG GGGGACACTG GCCGCTGGGG 300ACAGCTGCCT GCCGCTTCTA CTACTTCCTA TGGGGCGTGT CCTACTCCTC CGGCCTCTTC 360CTGCTGGCCG CCCTCAGCCT CGACCGCTGC CTGCTGGCGC TGTGCCCACA CTGGTACCCT 420GGGCACCGCC CAGTCCGCCT GCCCCTCTGG GTCTGCGCCG GTGTCTGGGT GCTGGCCACA 480CTCTTCAGCG TGCCCTGGCT GGTCTTCCCC GAGGCTGCCG TCTGGTGGTA CGACCTGGTC 540ATCTGCCTGG ACTTCTGGGA CAGCGAGGAG CTGTCGCTGA GGATGCTGGA GGTCCTGGGG 600GGCTTCCTGC CTTTCCTCCT GCTGCTCGTC TGCCACGTGC TCACCCAGGC CACAGCCTGT 660CGCACCTGCC ACCGCCAACA GCAGCCCGCA GCCTGCCGGG GCTTCGCCCG TGTGGCCAGG 720ACCATTCTGT CAGCCTATGT GGTCCTGAGG CTGCCCTACC AGCTGGCCCA GCTGCTCTAC 780CTGGCCTTCC TGTGGGACGT CTACTCTGGC TACCTGCTCT GGGAGGCCCT GGTCTACTCC 840GACTACCTGA TCCTACTCAA CAGCTGCCTC AGCCCCTTCC TCTGCCTCAT GGCCAGTGCC 900GACCTCCGGA CCCTGCTGCG CTCCGTGCTC TCGTCCTTCG CGGCAGCTCT CTGCGAGGAG 960CGGCCGGGCA GCTTCACGCC CACTGAGCCA CAGACCCAGC TAGATTCTGA GGGTCCAACT 1020CTGCCAGAGC CGATGGCAGA GGCCCAGTCA CAGATGGATC CTGTGGCCCA GCCTCAGGTG 1080AACCCCACAC TCCAGCCACG ATCGGATCCC ACAGCTCAGC CACAGCTGAA CCCTACGGCC 1140CAGCCACAGT CGGATCCCAC AGCCCAGCCA CAGCTGAACC TCATGGCCCA GCCACAGTCA 1200GATTCTGTGG CCCAGCCACA GGCAGACACT AACGTCCAGA CCCCTGCACC TGCTGCCAGT 1260TCTGTGCCCA GTCCCTGTGA TGAAGCTTCC CCAACCCCAT CCTCGCATCC TACCCCAGGG 1320GCCCTTGAGG ACCCAGCCAC ACCTCCTGCC TCTGAAGGAG AAAGCCCCAG CAGCACCCCG 1380CCAGAGGCGG CCCCGGGCGC AGGCCCCACG TGA 1413(11)SEQ ID NO10的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度468個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型(D)拓?fù)鋵W(xué)不相關(guān)(ii)分子類型蛋白質(zhì)(xi)SEQ ID NO10的序列描述Met Asp Thr Thr Met Glu Ala Asp Leu Gly Ala Thr Gly His Arg Pro1 5 10 15Arg Thr Glu Leu Asp Asp Glu Asp Ser Tyr Pro Gln Gly Gly 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Leu Arg Leu Pro Tyr Gln Leu Ala Gln Leu245 250 255Leu Tyr Leu Ala Phe Leu Trp Asp Val Tyr Ser Gly Tyr Leu Leu Trp260 265 270Glu Ala Leu Val Tyr Ser Asp Tyr Leu Ile Leu Leu Asn Ser Cys Leu275 280 285Ser Pro Phe Leu Cys Leu Met Ala Ser Ala Asp Leu Arg Thr Leu Leu290 295 300Arg Ser Val Leu Ser Ser Phe Ala Ala Ala Leu Cys Glu Glu Arg Pro305 310 315 320Gly Ser Phe Thr Pro Thr Glu Pro Gln Thr Gln Leu Asp Ser Glu Gly325 330 335Pro Thr Leu Pro Gu Pro Met Ala Glu Ala Gln Ser Gln Met Asp Pro340345 350Val Ala Gln Pro Gln Val Asn Pro Thr Leu Gln Pro Arg Ser Asp Pro355 360 365Thr Ala Gln Pro Gln Leu Asn Pro Thr Ala Gln Pro Gln Ser Asp Pro370 375 380Thr Ala Gln Pro Gln Leu Asn Leu Met Ala Gln Pro Gln Ser Asp Ser385 390 395 400Val Ala Gln Pro Gln Ala Asp Thr Asn Val Gln Thr Pro Ala Pro Ala405 410 415Ala Ser Ser Val Pro Ser Pro Cys Asp Glu Ala Ser Pro Thr Pro Ser420 425 430Ser His Pro Thr Pro Gly Ala Leu Glu Asp Pro Ala Thr Pro Pro Ala435 440 445Ser Glu Gly Glu Ser Pro Ser Ser Thr Pro Pro Glu Ala Ala 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AGAAAGACAA ATCTCTTGAG GCAGATGAAG GGAATGCAAA TATTCAAAGA 780CCCTGCAGAA AATCAGTCAA CAAGATGCTG TTTGTCTTGG TCTTAGTGTT TGCTATCTGT 840TGGGCCCCGT TCCACATTGA CCGACTCTTC TTCAGCTTTG TGGAGGAGTG GAGTGAATCC 900CTGGCTGCTG TGTTCAACCT CGTCCATGTG GTGTCAGGTG TCTTCTTCTA CCTGAGCTCA 960GCTGTCAACC CCATTATCTA TAACCTACTG TCTCGCCGCT TCCAGGCAGC ATTCCAGAAT 1020GTGATCTCTT CTTTCCACAA ACAGTGGCAC TCCCAGCATG ACCCACAGTT GCCACCTGCC 1080CAGCGGAACA TCTTCCTGAC AGAATGCCAC TTTGTGGAGC TGACCGAAGA TATAGGTCCC 1140CAATTCCCAT GTCAGTCATC CATGCACAAC TCTCACCTCC CAACAGCCCT CTCTAGTGAA 1200CAGATGTCAA GAACAAACTA TCAAAGCTTC CACTTTAACA AAACCTGA 1248(13)SEQ ID NO12的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度415個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型(D)拓?fù)鋵W(xué)不相關(guān)(ii)分子類型蛋白質(zhì)(xi)SEQ ID NO12的序列描述Met Ser Gly Met Glu Lys Leu Gln Asn Ala Ser Trp Ile Tyr Gln Gln1 5 10 15Lys Leu Glu Asp Pro Phe Gln Lys His Leu Asn Ser Thr Glu Glu Tyr20 25 30Leu Ala Phe Leu Cys Gly Pro Arg Arg Ser His Phe Phe Leu Pro Val35 40 45Ser Val Val Tyr Val Pro Ile Phe Val Val Gly Val Ile Gly Asn Val50 55 60Leu Val Cys Leu Val Ile Leu Gln His Gln Ala Met Lys Thr Pro Thr65 70 75 80Asn Tyr Tyr Leu Phe Ser Leu Ala Val Ser Asp Leu Leu Val Leu Leu85 90 95Leu Gly Met Pro Leu Glu Val Tyr Glu Met Trp Arg Asn Tyr Pro Phe100 105 110Leu Phe Gly Pro Val Gly Cys Tyr Phe Lys Thr Ala Leu Phe Glu Thr115 120 125Val Cys Phe Ala Ser Ile Leu Ser Ile Thr Thr Val Ser Val Glu Arg130 135 140Tyr Val Ala Ile Leu His Pro Phe Arg Ala Lys Leu Gln Ser Thr Arg145 150 155 160Arg Arg Ala Leu Arg Ile Leu Gly Ile Val Trp Gly Phe Ser Val Leu165 170 175Phe Ser Leu Pro Asn Thr Ser Ile His Gly Ile Lys Phe His Tyr Phe180 185 190Pro Asn Gly Ser Leu Val Pro Gly Ser Ala Thr Cys Thr Val Ile Lys195 200 205Pro Met Trp Ile Tyr Asn Phe Ile Ile Gln Val Thr Ser Phe Leu Phe210 215 220Tyr Leu Leu Pro Met Thr Val Ile Ser Val Leu Tyr Tyr Leu Met Ala225 230 235 240Leu Arg Leu Lys Lys Asp Lys Ser Leu Glu Ala Asp Glu Gly Asn Ala245 250 255Asn Ile Gln Arg Pro Cys Arg Lys Ser Val Asn Lys Met Leu Phe Val260 265 270Leu Val Leu Val Phe Ala Ile Cys Trp Ala Pro Phe His Ile Asp Arg275 280 285Leu Phe Phe Ser Phe Val Glu Glu Trp Ser Glu Ser Leu Ala Ala Val290 295 300Phe Asn Leu Val His Val Val Ser Gly Val Phe Phe Tyr Leu Ser Ser305 310 315 320Ala Val Asn Pro Ile Ile Tyr Asn Leu Leu Ser Arg Arg Phe Gln Ala325 330 335Ala Phe Gln Asn Val Ile Ser Ser Phe His Lys Gln Trp His Ser Gln340 345 350His Asp Pro Gln Leu Pro Pro Ala Gln Arg Asn Ile Phe Leu Thr Glu355 360 365Cys His Phe Val Glu Leu Thr Glu Asp Ile Gly Pro Gln Phe Pro Cys370 375 380Gln Ser Ser Met His Asn Ser His Leu Pro Thr Ala Leu Ser Set Glu385 390 395 400Gln Met Ser Arg Thr Asn Tyr Gln Ser Phe His Phe Asn Lys Thr405 410 415(14)SEQ ID NO13的資料(i)序列特征
(A)長(zhǎng)度1173個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(xi)SEQ ID NO13的序列描述ATGCCAGATA CTAATAGCAC AATCAATTTA TCACTAAGCA CTCGTGTTAC TTTAGCATTT 60TTTATGTCCT TAGTAGCTTT TGCTATAATG CTAGGAAATG CTTTGGTCAT TTTAGCTTTT 120GTGGTGGACA AAAACCTTAG ACATCGAAGT AGTTATTTTT TTCTTAACTT GGCCATCTCT 180GACTTCTTTG TGGGTGTGAT CTCCATTCCT TTGTACATCC CTCACACGCT GTTCGAATGG 240GATTTTGGAA AGGAAATCTG TGTATTTTGG CTCACTACTG ACTATCTGTT ATGTACAGCA 300TCTGTATATA ACATTGTCCT CATCAGCTAT GATCGATACC TGTCAGTCTC AAATGCTGTG 360TCTTATAGAA CTCAACATAC TGGGGTCTTG AAGATTGTTA CTCTGATGGT GGCCGTTTGG 420GTGCTGGCCT TCTTAGTGAA TGGGCCAATG ATTCTAGTTT CAGAGTCTTG GAAGGATGAA 480GGTAGTGAAT GTGAACCTGG ATTTTTTTCG GAATGGTACA TCCTTGCCAT CACATCATTC 540TTGGAATTCG TGATCCCAGT CATCTTAGTC GCTTATTTCA ACATGAATAT TTATTGGAGC 600CTGTGGAAGC GTGATCATCT CAGTAGGTGC CAAAGCCATC CTGGACTGAC TGCTGTCTCT 660TCCAACATCT GTGGACACTC ATTCAGAGGT AGACTATCTT CAAGGAGATC TCTTTCTGCA 720TCGACAGAAG TTCCTGCATC CTTTCATTCA GAGAGACAGA GGAGAAAGAG TAGTCTCATG 780TTTTCCTCAA GAACCAAGAT GAATAGCAAT ACAATTGCTT CCAAAATGGG TTCCTTCTCC 840CAATCAGATT CTGTAGCTCT TCACCAAAGG GAACATGTTG AACTGCTTAG AGCCAGGAGA 900TTAGCCAAGT CACTGGCCAT TCTCTTAGGG GTTTTTGCTG TTTGCTGGGC TCCATATTCT 960CTGTTCACAA TTGTCCTTTC ATTTTATTCC TCAGCAACAG GTCCTAAATC AGTTTGGTAT 1020AGAATTGCAT TTTGGCTTCA GTGGTTCAAT TCCTTTGTCA ATCCTCTTTT GTATCCATTG 1080TGTCACAAGC GCTTTCAAAA GGCTTTCTTG AAAATATTTT GTATAAAAAA GCAACCTCTA 1140CCATCACAAC ACAGTCGGTC AGTATCTTCT TAA 1173(15)SEQ ID NO14的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度390個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型(D)拓?fù)鋵W(xué)不相關(guān)(ii)分子類型蛋白質(zhì)(xi)SEQ ID NO14的序列描述Met Pro Asp Thr Asn Ser Thr Ile Asn Leu Ser Leu Ser Thr Arg Val1 5 10 15Thr Leu Ala Phe Phe Met Ser Leu Val Ala Phe Ala Ile Met Leu Gly20 25 30Asn Ala Leu Val Ile Leu Ala Phe Val Val Asp Lys Asn Leu Arg His35 40 45Arg Ser Ser Tyr Phe Phe Leu Asn Leu Ala Ile Ser Asp Phe Phe Val50 55 60Gly Val Ile Ser Ile Pro Leu Tyr Ile Pro His Thr Leu Phe Glu Trp65 70 75 80Asp Phe Gly Lys Glu Ile Cys Val Phe Trp Leu Thr Thr Asp Tyr Leu85 90 95Leu Cys Thr Ala Ser Val Tyr Asn Ile Val Leu Ile Ser Tyr Asp Arg100 105 110Tyr Leu Ser Val Ser Asn Ala Val Ser Tyr Arg Thr Gln His Thr Gly115 120 125Val Leu Lys Ile Val Thr Leu Met Val Ala Val Trp Val Leu Ala Phe130 135 140Leu Val Asn Gly Pro Met Ile Leu Val Ser Glu Ser Trp Lys Asp Glu145 150 155 160Gly Ser Glu Cys Glu Pro Gly Phe Phe Ser Glu Trp Tyr Ile Leu Ala165 170 175Ile Thr Ser Phe Leu Glu Phe Val Ile Pro Val Ile Leu Val Ala Tyr180 185 190Phe Asn Met Asn Ile Tyr Trp Ser Leu Trp Lys Arg Asp His Leu Ser195 200 205Arg Cys Gln Ser His Pro Gly Leu Thr Ala Val Ser Ser Asn Ile Cys210 215 220Gly His Ser Phe Arg Gly Arg Leu Ser Ser Arg Arg Ser Leu Ser Ala225 230 235 240Ser Thr Glu Val Pro Ala Ser Phe His Ser Glu Arg Gln Arg Arg Lys245 250 255Ser Ser Leu Met Phe Ser Ser Arg Thr Lys Met Asn Ser Asn Thr Ile260 265 270Ala Ser Lys Met Gly Ser Phe Ser Gln Ser Asp Ser Val Ala Leu His275 280 285Gln Arg Glu His Val Glu Leu Leu Arg Ala Arg Arg Leu Ala Lys Ser290 295 300Leu Ala Ile Leu Leu Gly Val Phe Ala Val Cys Trp Ala Pro Tyr Ser305 310 315 320Leu Phe Thr Ile Val Leu Ser Phe Tyr Ser Ser Ala Thr Gly Pro Lys325 330 335Ser Val Trp Tyr Arg Ile Ala Phe Trp Leu Gln Trp Phe Asn Ser Phe340 345 350Val Asn Pro Leu Leu Tyr Pro Leu Cys His Lys Arg Phe Gln Lys Ala355 360 365Phe Leu Lys Ile Phe Cys Ile Lys Lys Gln Pro Leu Pro Ser Gln His370 375 380Ser Arg Ser Val Ser Ser385 390(16)SEQ ID NO15的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度1128個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(xi)SEQ ID NO15的序列描述ATGGCGAACG CGAGCGAGCC GGGTGGCAGC GGCGGCGGCG AGGCGGCCGC CCTGGGCCTC 60AAGCTGGCCA CGCTCAGCCT GCTGCTGTGC GTGAGCCTAG CGGGCAACGT GCTGTTCGCG 120CTGCTGATCG TGCGGGAGCG CAGCCTGCAC CGCGCCCCGT ACTACCTGCT GCTCGACCTG 180TGCCTGGCCG ACGGGCTGCG CGCGCTCGCC TGCCTCCCGG CCGTCATGCT GGCGGCGCGG 240CGTGCGGCGG CCGCGGCGGG GGCGCCGCCG GGCGCGCTGG GCTGCAAGCT GCTCGCCTTC 300CTGGCCGCGC TCTTCTGCTT CCACGCCGCC TTCCTGCTGC TGGGCGTGGG CGTCACCCGC 360TACCTGGCCA TCGCGCACCA CCGCTTCTAT GCAGAGCGCC TGGCCGGCTG GCCGTGCGCC 420GCCATGCTGG TGTGCGCCGC CTGGGCGCTG GCGCTGGCCG CGGCCTTCCC GCCAGTGCTG 480GACGGCGGTG GCGACGACGA GGACGCGCCG TGCGCCCTGG AGCAGCGGCC CGACGGCGCC 540CCCGGCGCGC TGGGCTTCCT GCTGCTGCTG GCCGTGGTGG TGGGCGCCAC GCACCTCGTC 600TACCTCCGCC TGCTCTTCTT CATCCACGAC CGCCGCAAGA TGCGGCCCGC GCGCCTGGTG 660CCCGCCGTCA GCCACGACTG GACCTTCCAC GGCCCGGGCG CCACCGGCCA GGCGGCCGCC 720AACTGGACGG CGGGCTTCGG CCGCGGGCCC ACGCCGCCCG CGCTTGTGGG CATCCGGCCC 780GCAGGGCCGG GCCGCGGCGC GCGCCGCCTC CTCGTGCTGG AAGAATTCAA GACGGAGAAG 840AGGCTGTGCA AGATGTTCTA CGCCGTCACG CTGCTCTTCC TGCTCCTCTG GGGGCCCTAC 900GTCGTGGCCA GCTACCTGCG GGTCCTGGTG CGGCCCGGCG CCGTCCCCCA GGCCTACCTG 960ACGGCCTCCG TGTGGCTGAC CTTCGCGCAG GCCGGCATCA ACCCCGTCGT GTGCTTCCTC 1020TTCAACAGGG AGCTGAGGGA CTGCTTCAGG GCCCAGTTCC CCTGCTGCCA GAGCCCCCGG 1080ACCACCCAGG CGACCCATCC CTGCGACCTG AAAGGCATTG GTTTATGA 1128(17)SEQ ID NO16的資料(i)序列特征
(A)長(zhǎng)度375個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型(D)拓?fù)鋵W(xué)不相關(guān)(ii)分子類型蛋白質(zhì)(xi)SEQ ID NO16的序列描述Met Ala Asn Ala Ser Glu Pro Gly Gly Ser Gly Gly Gly Glu Ala Ala1 5 10 15Ala Leu Gly Leu Lys Leu Ala Thr Leu Ser Leu Leu Leu Cys Val Ser20 25 30Leu Ala Gly Asn Val Leu Phe Ala Leu Leu Ile Val Arg Glu Arg Ser35 40 45Leu His Arg Ala Pro Tyr Tyr Leu Leu Leu Asp Leu Cys Leu Ala Asp50 55 60Gly Leu Arg Ala Leu Ala Cys Leu Pro Ala Val Met Leu Ala Ala Arg65 70 75 80Arg Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ala Pro Pro Gly Ala Leu Gly Cys Lys85 90 95Leu Leu Ala Phe Leu Ala Ala Leu Phe Cys Phe His Ala Ala Phe Leu100 105 110Leu Leu Gly Val Gly Val Thr Arg Tyr Leu Ala Ile Ala His His Arg115 120 125Phe Tyr Ala Glu Arg Leu Ala Gly Trp Pro Cys Ala Ala Met Leu Val130 135 140Cys Ala Ala Trp Ala Leu Ala Leu Ala Ala Ala Phe Pro Pro Val Leu145 150 155 160Asp Gly Gly Gly Asp Asp Glu Asp Ala Pro Cys Ala Leu Glu Gln Arg165 170 175Pro Asp Gly Ala Pro Gly Ala Leu Gly Phe Leu Leu Leu Leu Ala Val180 185 190Val Val Gly Ala Thr His Leu Val Tyr Leu Arg Leu Leu Phe Phe Ile195 200 205His Asp Arg Arg Lys Met Arg Pro Ala Arg Leu Val Pro Ala Val Ser210 215 220His Asp Trp Thr Phe His Gly Pro Gly Ala Thr Gly Gln Ala Ala Ala225 230 235 240Asn Trp Thr Ala Gly Phe Gly Arg Gly Pro Thr Pro Pro Ala Leu Val245 250 255Gly Ile Arg Pro Ala Gly Pro Gly Arg Gly Ala Arg Arg Leu Leu Val260 265 270Leu Glu Glu Phe Lys Thr Glu Lys Arg Leu Cys Lys Met Phe Tyr Ala275 280 285Val Thr Leu Leu Phe Leu Leu Leu Trp Gly Pro Tyr Val Val Ala Ser290 295 300Tyr Leu Arg Val Leu Val Arg Pro Gly Ala Val Pro Gln Ala Tyr Leu305 310 315 320Thr Ala Ser Val Trp Leu Thr Phe Ala Gln Ala Gly Ile Asn Pro Val325 330 335Val Cys Phe Leu Phe Asn Arg Glu Leu Arg Asp Cys Phe Arg Ala Gln340 345 350Phe Pro Cys Cys Gln Ser Pro Arg Thr Thr Gln Ala Thr His Pro Cys355 360 365Asp Leu Lys Gly Ile Gly Leu370 375(18)SEQ ID NO17的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度1002個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(xi)SEQ ID NO17的序列描述ATGAACACCA CAGTGATGCA AGGCTTCAAC AGATCTGAGC 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(A)長(zhǎng)度1053個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(xi)SEQ ID NO21的序列描述ATGGCTTTGG AACAGAACCA GTCAACAGAT TATTATTATG AGGAAAATGA AATGAATGGC 60ACTTATGACT ACAGTCAATA TGAATTGATC TGTATCAAAG AAGATGTCAG AGAATTTGCA 120AAAGTTTTCC TCCCTGTATT CCTCACAATA GCTTTCGTCA TTGGACTTGC AGGCAATTCC 180ATGGTAGTGG CAATTTATGC CTATTACAAG AAACAGAGAA CCAAAACAGA TGTGTACATC 240CTGAATTTGG CTGTAGCAGA TTTACTCCTT CTATTCACTC TGCCTTTTTG GGCTGTTAAT 300GCAGTTCATG GGTGGGTTTT AGGGAAAATA ATGTGCAAAA TAACTTCAGC CTTGTACACA 360CTAAACTTTG TCTCTGGAAT GCAGTTTCTG GCTTGCATCA GCATAGACAG ATATGTGGCA 420GTAACTAATG TCCCCAGCCA ATCAGGAGTG GGAAAACCAT GCTGGATCAT CTGTTTCTGT 480GTCTGGATGG CTGCCATCTT GCTGAGCATA CCCCAGCTGG TTTTTTATAC AGTAAATGAC 540AATGCTAGGT GCATTCCCAT TTTCCCCCGC TACCTAGGAA CATCAATGAA AGCATTGATT 600CAAATGCTAG AGATCTGCAT TGGATTTGTA GTACCCTTTC TTATTATGGG GGTGTGCTAC 660TTTATCACGG CAAGGACACT CATGAAGATG CCAAACATTA AAATATCTCG ACCCCTAAAA 720GTTCTGCTCA CAGTCGTTAT AGTTTTCATT GTCACTCAAC TGCCTTATAA CATTGTCAAG 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NO28的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度359個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型(D)拓?fù)鋵W(xué)不相關(guān)(ii)分子類型蛋白質(zhì)(xi)SEQ ID NO28的序列描述Met Gln Val Pro Asn Ser Thr Gly Pro Asp Asn Ala Thr Leu Gln Met1 5 10 15Leu Arg Asn Pro Ala Ile Ala Val Ala Leu Pro Val Val Tyr Ser Leu20 25 30Val Ala Ala Va1 Ser Ile Pro Gly Asn Leu Phe Ser Leu Trp Val Leu35 40 45Cys Arg Arg Met Gly Pro Arg Ser Pro Ser Val Ile Phe Met Ile Asn50 55 60Leu Ser Val Thr Asp Leu Met Leu Ala Ser Val Leu Pro Phe Gln Ile65 70 75 80Tyr Tyr His Cys Asn Arg His His Trp Val Phe Gly Val Leu Leu Cys85 90 95Asn Val Val Thr Val Ala Phe Tyr Ala Asn Met Tyr Ser Ser Ile Leu100 105 110Thr Met Thr Cys Ile Ser Val Glu Arg Phe Leu Gly Val Leu Tyr Pro115 120 125Leu Ser Ser Lys Arg Trp Arg Arg Arg Arg Tyr Ala Val Ala Ala Cys130 135 140Ala Gly Thr Trp Leu Leu Leu Leu Thr Ala Leu Cys Pro Leu Ala Arg145 150 155 160Thr Asp Leu Thr Tyr Pro Val His Ala Leu Gly Ile Ile Thr Cys Phe165 170 175Asp Val Leu Lys Trp Thr Met Leu Pro Ser Val Ala Met Trp Ala Val180 185 190Phe Leu Phe 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Leu Gly Asp His Phe Arg Asp290 295 300Met Leu Met Asn Gln Leu Arg His Asn Phe Lys Ser Leu Thr Ser Phe305 310 315 320Ser Arg Trp Ala His Glu Leu Leu Leu Ser Phe Arg Glu Lys325 330(38)SEQ ID NO37的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度1296個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(xi)SEQ ID NO37的序列描述ATGCAGGCGC TTAACATTAC CCCGGAGCAG TTCTCTCGGC TGCTGCGGGA CCACAACCTG 60ACGCGGGAGC AGTTCATCGC TCTGTACCGG CTGCGACCGC TCGTCTACAC CCCAGAGCTG 120CCGGGACGCG CCAAGCTGGC CCTCGTGCTC ACCGGCGTGC TCATCTTCGC CCTGGCGCTC 180TTTGGCAATG CTCTGGTGTT CTACGTGGTG ACCCGCAGCA AGGCCATGCG CACCGTCACC 240AACATCTTTA TCTGCTCCTT GGCGCTCAGT GACCTGCTCA TCACCTTCTT CTGCATTCCC 300GTCACCATGC TCCAGAACAT TTCCGACAAC TGGCTGGGGG GTGCTTTCAT TTGCAAGATG 360GTGCCATTTG TCCAGTCTAC CGCTGTTGTG ACAGAAATGC TCACTATGAC CTGCATTGCT 420GTGGAAAGGC ACCAGGGACT TGTGCATCCT TTTAAAATGA AGTGGCAATA CACCAACCGA 480AGGGCTTTCA CAATGCTAGG TGTGGTCTGG CTGGTGGCAG TCATCGTAGG ATCACCCATG 540TGGCACGTGC AACAACTTGA GATCAAATAT GACTTCCTAT ATGAAAAGGA ACACATCTGC 600TGCTTAGAAG AGTGGACCAG CCCTGTGCAC CAGAAGATCT ACACCACCTT CATCCTTGTC 660ATCCTCTTCC TCCTGCCTCT TATGGTGATG CTTATTCTGT ACAGTAAAAT TGGTTATGAA 720CTTTGGATAA AGAAAAGAGT TGGGGATGGT TCAGTGCTTC GAACTATTCA TGGAAAAGAA 780ATGTCCAAAA TAGCCAGGAA GAAGAAACGA GCTGTCATTA TGATGGTGAC AGTGGTGGCT 840CTCTTTGCTG TGTGCTGGGC ACCATTCCAT GTTGTCCATA TGATGATTGA ATACAGTAAT 900TTTGAAAAGG AATATGATGA TGTCACAATC AAGATGATTT TTGCTATCGT GCAAATTATT 960GGATTTTCCA ACTCCATCTG TAATCCCATT GTCTATGCAT TTATGAATGA AAACTTCAAA 1020AAAAATGTTT TGTCTGCAGT TTGTTATTGC ATAGTAAATA AAACCTTCTC TCCAGCACAA 1080AGGCATGGAA ATTCAGGAAT TACAATGATG CGGAAGAAAG CAAAGTTTTC CCTCAGAGAG 1140AATCCAGTGG AGGAAACCAA AGGAGAAGCA TTCAGTGATG GCAACATTGA AGTCAAATTG 1200TGTGAACAGA CAGAGGAGAA GAAAAAGCTC AAACGACATC TTGCTCTCTT TAGGTCTGAA 1260CTGGCTGAGA ATTCTCCTTT AGACAGTGGG CATTAA 1296(39)SEQ ID NO38的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度431個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型(D)拓?fù)鋵W(xué)不相關(guān)(ii)分子類型蛋白質(zhì)(xi)SEQ ID NO38的序列描述Met Gln Ala Leu Asn Ile Thr Pro Glu Gln Phe Ser Arg Leu Leu Arg1 5 10 15Asp His Asn Leu Thr Arg Glu Gln Phe Ile Ala Leu Tyr Arg Leu Arg20 25 30Pro Leu Val Tyr Thr Pro Glu Leu Pro Gly Arg Ala Lys Leu Ala Leu35 40 45Val Leu Thr Gly Val Leu Ile Phe Ala Leu Ala Leu Phe Gly Asn Ala50 55 60Leu Val Phe Tyr Val Val Thr Arg Ser Lys Ala Met Arg Thr Val Thr65 70 75 80Asn Ile Phe Ile Cys Ser Leu Ala Leu Ser Asp Leu Leu Ile Thr Phe85 90 95Phe Cys Ile Pro Val Thr Met Leu Gln Asn Ile Ser Asp Asn Trp Leu100 105 110Gly Gly Ala Phe Ile Cys Lys Met Val Pro Phe Val Gln Ser Thr Ala115 120 125Val Val Thr Glu Met Leu Thr Met Thr Cys Ile Ala Val Glu Arg His130 135 140Gln Gly Leu Val His Pro Phe Lys Met Lys Trp Gln Tyr Thr Asn Arg145 150 155 160Arg Ala Phe Thr Met Leu Gly Val Val Trp Leu Val Ala Val Ile Val165 170 175Gly Ser Pro Met Trp His Val Gln Gln Leu Glu Ile Lys Tyr Asp Phe180 185 190Leu Tyr Glu Lys Glu His Ile Cys Cys Leu Glu Glu Trp Thr Ser Pro195 200 205Val His Gln Lys Ile Tyr Thr Thr Phe Ile Leu Val Ile Leu Phe Leu210 215 220Leu Pro Leu Met Val Met Leu Ile Leu Tyr Ser Lys Ile Gly Tyr Glu225 230 235 240Leu Trp Ile Lys Lys Arg Val Gly Asp Gly Ser Val Leu Arg Thr Ile245 250 255His Gly Lys Glu Met Ser Lys Ile Ala Arg Lys Lys Lys Arg Ala Val260 265 270Ile Met Met Val Thr Val Val Ala Leu Phe Ala Val Cys Trp Ala Pro275 280 285Phe His Val Val His Met Met Ile Glu Tyr Ser Asn Phe Glu Lys Glu290 295 300Tyr Asp Asp Val Thr Ile Lys Met Ile Phe Ala Ile Val Gln Ile Ile305 310 315 320Gly Phe Ser Asn Ser Ile Cys Asn Pro Ile Val Tyr Ala Phe Met Asn325 330 335Glu Asn Phe Lys Lys Asn Val Leu Ser Ala Val Cys Tyr Cys Ile Val340 345 350Asn Lys Thr Phe Ser Pro Ala Gln Arg His Gly Asn Ser Gly Ile Thr355 360 365Met Met Arg Lys Lys Ala Lys Phe Ser Leu Arg Glu Asn Pro Val Glu370 375 380Glu Thr Lys Gly Glu Ala Phe Ser Asp Gly Asn Ile Glu Val Lys Leu385 390 395 400Cys Glu Gln Thr Glu Glu Lys Lys Lys Leu Lys Arg His Leu Ala Leu405 410 415Phe Arg Ser Glu Leu Ala Glu Asn Ser Pro Leu Asp Ser Gly His420 425 430(40)SEQ ID NO39的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度24個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(xi)SEQ ID NO39的序列描述CTGTGTACAG CAGTTCGCAG AGTG 24(41)SEQ ID NO40的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度24個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸
(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(xi)SEQ ID NO40的序列描述GAGTGCCAGG CAGAGCAGGT AGAC 24(42)SEQ ID NO41的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度31個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(iv)反義否(xi)SEQ ID NO41的序列描述CCCGAATTCC TGCTTGCTCC CAGCTTGGCC C 31(43)SEQ ID NO42的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度32個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(iv)反義是(xi)SEQ ID NO42的序列描述TGTGGATCCT GCTGTCAAAG GTCCCATTCC GG 32(44)SEQ ID NO43的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度20個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(iv)反義否(xi)SEQ ID NO43的序列描述TCACAATGCT AGGTGTGGTC 20(45)SEQ ID NO44的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度22個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(iv)反義是(xi)SEQ ID NO44的序列描述TGCATAGACA ATGGGATTAC AG 22(46)SEQ ID NO45的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度511個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(xi)SEQ ID NO45的序列描述TCACAATGCT AGGTGTGGTC TGGCTGGTGG CAGTCATCGT AGGATCACCC ATGTGGCACG 60TGCAACAACT TGAGATCAAA TATGACTTCC TATATGAAAA GGAACACATC TGCTGCTTAG 120AAGAGTGGAC CAGCCCTGTG CACCAGAAGA TCTACACCAC CTTCATCCTT GTCATCCTCT 180TCCTCCTGCC TCTTATGGTG ATGCTTATTC TGTACGTAAA ATTGGTTATG AACTTTGGAT 240AAAGAAAAGA GTTGGGGATG GTTCAGTGCT TCGAACTATT CATGGAAAAG AAATGTCCAA 300AATAGCCAGG AAGAAGAAAC GAGCTGTCAT TATGATGGTG ACAGTGGTGG CTCTCTTTGC 360TGTGTGCTGG GCACCATTCC ATGTTGTCCA TATGATGATT GAATACAGTA ATTTTGAAAA 420GGAATATGAT GATGTCACAA TCAAGATGAT TTTTGCTATC GTGCAAATTA TTGGATTTTC 480CAACTCCATC TGTAATCCCA TTGTCTATGC A511(47)SEQ ID NO46的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度21個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(iv)反義否(xi)SEQ ID NO46的序列描述CTGCTTAGAA GAGTGGACCA G 21(48)SEQ ID NO47的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度22個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(iv)反義否(xi)SEQ ID NO47的序列描述CTGTGCACCA GAAGATCTAC AC22(49)SEQ ID NO48的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度21個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(iv)反義是(xi)SEQ ID NO48的序列描述CAAGGATGAA GGTGGTGTAG A 21(50)SEQ ID NO49的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度23個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(iv)反義是(xi)SEQ ID NO49的序列描述GTGTAGATCT TCTGGTGCAC AGG 23(51)SEQ ID NO50的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度21個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(xi)SEQ ID NO50的序列描述GCAATGCAGG TCATAGTGAG C 21(52)SEQ ID NO51的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度27個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(iii)推定的是(iv)反義是(xi)SEQ ID NO51的序列描述TGGAGCATGG TGACGGGAAT GCAGAAG 27(53)SEQ ID NO52的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度27個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(iv)反義是(xi)SEQ ID NO52的序列描述GTGATGAGCA GGTCACTGAG CGCCAAG 27(54)SEQ ID NO53的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度23個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(iv)反義否(xi)SEQ ID NO53的序列描述GCAATGCAGG CGCTTAACAT TAC 23(55)SEQ ID NO54的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度22個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(iv)反義是(xi)SEQ ID NO54的序列描述TTGGGTTACA ATCTGAAGGG CA22(56)SEQ ID NO55的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度23個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(iv)反義否(xi)SEQ ID NO55的序列描述ACTCCGTGTC CAGCAGGACT CTG 23(57)SEQ ID NO56的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度24個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸
(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(iv)反義是(xi)SEQ ID NO56的序列描述TGCGTGTTCC TGGACCCTCA CGTG24(58)SEQ ID NO57的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度29個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(iv)反義否(xi)SEQ ID NO57的序列描述CAGGCCTTGG ATTTTAATGT CAGGGATGG 29(59)SEQ ID NO58的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度27個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(iv)反義是(xi)SEQ ID NO58的序列描述GGAGAGTCAG CTCTGAAAGA ATTCAGG 27(60)SEQ ID NO59的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度27個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(iv)反義否(xi)SEQ ID NO59的序列描述TGATGTGATG CCAGATACTA ATAGCAC 27(61)SEQ ID NO60的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度27個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(iv)反義是(xi)SEQ ID NO60的序列描述CCTGATTCAT TTAGGTGAGA TTGAGAC 27(62)SEQ ID NO61的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度22個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(iv)反義否(xi)SEQ ID NO61的序列描述GACAGGTACC TTGCCATCAA G 21(63)SEQ ID NO62的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度22個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(iv)反義是(xi)SEQ ID NO62的序列描述CTGCACAATG CCAGTGATAA GG22(64)SEQ ID NO63的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度27個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(iv)反義否(xi)SEQ ID NO63的序列描述CTGACTTCTT GTTCCTGGCA GCAGCGG 27(65)SEQ ID NO64的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度27個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(iv)反義是(xi)SEQ ID NO64的序列描述AGACCAGCCA GGGCACGCTG AAGAGTG 27(66)SEQ ID NO65的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度32個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(iv)反義否(xi)SEQ ID NO65的序列描述GATCAAGCTT CCATCCTACT GAAACCATGG TC 32(67)SEQ ID NO66的資料(i)序列特征
(A)長(zhǎng)度35個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(iv)反義是(xi)SEQ ID NO66的序列描述GATCAGATCT CAGTTCCAAT ATTCACACCA CCGTC 35(68)SEQ ID NO67的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度22個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(iv)反義否(xi)SEQ ID NO67的序列描述CTGGTGTGCT CCATGGCATC CC 22(69)SEQ ID NO68的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度22個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(iv)反義是(xi)SEQ ID NO68的序列描述GTAAGCCTCC CAGAACGAGA GG 22(70)SEQ ID NO69的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度24個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈
(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(iv)反義否(xi)SEQ ID NO69的序列描述CAGCGCAGGG TGAAGCCTGA GAGC 24(71)SEQ ID NO70的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度24個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(iv)反義是(xi)SEQ ID NO70的序列描述GGCACCTGCT GTGACCTGTG CAGG 24(72)SEQ ID NO71的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度22個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(iv)反義否(xi)SEQ ID NO71的序列描述GTCCTGCCAC TTCGAGACAT GG22(73)SEQ ID NO72的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度23個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組)(iv)反義是(xi)SEQ ID NO72的序列描述GAAACTTCTC TGCCCTTACC GTC 23(74)SEQ ID NO73的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度26個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組的)(iv)反義否(xi)SEQ ID NO73的序列描述CCAACACCAG CATCCATGGC ATCAAG26(75)SEQ ID NO74的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度27個(gè)堿基對(duì)(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)鋵W(xué)線形(ii)分子類型DNA(基因組)(iv)反義是(xi)SEQ ID NO74的序列描述GGAGAGTCAG CTCTGAAAGA ATTCAGG 2權(quán)利要求
1.編碼人G蛋白偶聯(lián)受體的cDNA，其包含SEQ.ID.NO.1。
2.由SEQ.ID.NO.1所示的cDNA編碼的人G蛋白偶聯(lián)受體，其包含SEQ.ID.NO.2。
3.含有載體和SEQ.ID.NO.1所示cDNA的質(zhì)粒。
4.含有權(quán)利要求3所述的質(zhì)粒的宿主細(xì)胞。
5.編碼人G蛋白偶聯(lián)受體的cDNA，其包含SEQ.ID.NO.3。
6.由的SEQ.ID.NO.3所示的cDNA編碼的人G蛋白偶聯(lián)受體，其包含SEQ.ID.NO.4。
7.含有載體和SEQ.ID.NO.3所示的cDNA的質(zhì)粒。
8.含有權(quán)利要求7所述的質(zhì)粒的宿主細(xì)胞。
9.編碼人G蛋白偶聯(lián)受體的cDNA，其包含SEQ.ID.NO.5。
10.由SEQ.ID.NO.5所示的cDNA編碼的人G蛋白偶聯(lián)受體，其包含SEQ.ID.NO.6。
11.含有載體和SEQ.ID.NO.5所示cDNA的質(zhì)粒。
12.含有權(quán)利要求11所述的質(zhì)粒的宿主細(xì)胞。
13.編碼人G蛋白偶聯(lián)受體的cDNA，其包含SEQ.ID.NO.7。
14.由SEQ.ID.NO.7所示的cDNA編碼的人G蛋白偶聯(lián)受體，其包含SEQ.ID.NO.8。
15.含有載體和SEQ.ID.NO.7所示的cDNA的質(zhì)粒。
16.含有權(quán)利要求15所述的質(zhì)粒的宿主細(xì)胞。
17.編碼人G蛋白偶聯(lián)受體的cDNA，其包含SEQ.ID.NO.9。
18.由SEQ.ID.NO.9所示的cDNA編碼的人G蛋白偶聯(lián)受體，其包含SEQ.ID.NO.10。
19.含有載體和SEQ.ID.NO.9所示cDNA的質(zhì)粒。
20.含有權(quán)利要求19所述的質(zhì)粒的宿主細(xì)胞。
21.編碼人G蛋白偶聯(lián)受體的cDNA，其包含SEQ.ID.NO.11。
22.由SEQ.ID.NO.11所示的cDNA編碼的人G蛋白偶聯(lián)受體，其包含SEQ.ID.NO.12。
23.含有載體和SEQ.ID.NO.11所示的cDNA的質(zhì)粒。
24.含有權(quán)利要求23所述的質(zhì)粒的宿主細(xì)胞。
25.編碼人G蛋白偶聯(lián)受體的cDNA，其包含SEQ.ID.NO.13。
26.由SEQ.ID.NO.13所示的cDNA編碼的人G蛋白偶聯(lián)受體，其包含SEQ.ID.NO.14。
27.含有載體和SEQ.ID.NO.13所示cDNA的質(zhì)粒。
28.含有權(quán)利要求27所述的質(zhì)粒的宿主細(xì)胞。
29.編碼人G蛋白偶聯(lián)受體的cDNA，其包含SEQ.ID.NO.15。
30.由SEQ.ID.NO.15所示的cDNA編碼的人G蛋白偶聯(lián)受體，其包含SEQ.ID.NO.16。
31.含有載體和SEQ.ID.NO.15所示的cDNA的質(zhì)粒。
32.含有權(quán)利要求31所述的質(zhì)粒的宿主細(xì)胞。
33.編碼人G蛋白偶聯(lián)受體的cDNA，其包含SEQ.ID.NO.17。
34.由SEQ.ID.NO.17所示的cDNA編碼的人G蛋白偶聯(lián)受體，其包含SEQ.ID.NO.18。
35.含有載體和SEQ.ID.NO.17所示cDNA的質(zhì)粒。
36.含有權(quán)利要求35所述的質(zhì)粒的宿主細(xì)胞。
37.編碼人G蛋白偶聯(lián)受體的cDNA，其包含SEQ.ID.NO.19。
38.由SEQ.ID.NO.19所示的cDNA編碼的人G蛋白偶聯(lián)受體，其包含SEQ.ID.NO.20。
39.含有載體和SEQ.ID.NO.19所示的cDNA的質(zhì)粒。
40.含有權(quán)利要求39所述的質(zhì)粒的宿主細(xì)胞。
41.編碼人G蛋白偶聯(lián)受體的cDNA，其包含SEQ.ID.NO.21。
42.由SEQ.ID.NO.21所示的cDNA編碼的人G蛋白偶聯(lián)受體，其包含SEQ.ID.NO.22。
43.含有載體和SEQ.ID.NO.21所示cDNA的質(zhì)粒。
44.含有權(quán)利要求43所述的質(zhì)粒的宿主細(xì)胞。
45.編碼人G蛋白偶聯(lián)受體的cDNA，其包含SEQ.ID.NO.23。
46.由SEQ.ID.NO.23所示的cDNA編碼的人G蛋白偶聯(lián)受體，其包含SEQ.ID.NO.24。
47.含有載體和SEQ.ID.NO.23所示的cDNA的質(zhì)粒。
48.含有權(quán)利要求47所述的質(zhì)粒的宿主細(xì)胞。
49.編碼人G蛋白偶聯(lián)受體的cDNA，其包含SEQ.ID.NO.25。
50.由SEQ.ID.NO.25所示的cDNA編碼的人G蛋白偶聯(lián)受體，其包含SEQ.ID.NO.26。
51.含有載體和SEQ.ID.NO.25所示cDNA的質(zhì)粒。
52.含有權(quán)利要求51所述的質(zhì)粒的宿主細(xì)胞。
53.編碼人G蛋白偶聯(lián)受體的cDNA，其包含SEQ.ID.NO.27。
54.由SEQ.ID.NO.27所示的cDNA編碼的人G蛋白偶聯(lián)受體，其包含SEQ.ID.NO.28。
55.含有載體和SEQ.ID.NO.27所示的cDNA的質(zhì)粒。
56.含有權(quán)利要求55所述的質(zhì)粒的宿主細(xì)胞。
57.編碼人G蛋白偶聯(lián)受體的cDNA，其包含SEQ.ID.NO.29。
58.由SEQ.ID.NO.29所示的cDNA編碼的人G蛋白偶聯(lián)受體，其包含SEQ.ID.NO.30。
59.含有載體和SEQ.ID.NO.29所示cDNA的質(zhì)粒。
60.含有權(quán)利要求59所述的質(zhì)粒的宿主細(xì)胞。
61.編碼人G蛋白偶聯(lián)受體的cDNA，其包含SEQ.ID.NO.31。
62.由SEQ.ID.NO.31所示的cDNA編碼的人G蛋白偶聯(lián)受體，其包含SEQ.ID.NO.32。
63.含有載體和SEQ.ID.NO.31所示的cDNA的質(zhì)粒。
64.含有權(quán)利要求63所述的質(zhì)粒的宿主細(xì)胞。
65.編碼人G蛋白偶聯(lián)受體的cDNA，其包含SEQ.ID.NO.33。
66.由SEQ.ID.NO.33所示的cDNA編碼的人G蛋白偶聯(lián)受體，其包含SEQ.ID.NO.34。
67.含有載體和SEQ.ID.NO.33所示cDNA的質(zhì)粒。
68.含有權(quán)利要求67所述的質(zhì)粒的宿主細(xì)胞。
69.編碼人G蛋白偶聯(lián)受體的cDNA，其包含SEQ.ID.NO.35。
70.由SEQ.ID.NO.35所示的cDNA編碼的人G蛋白偶聯(lián)受體，其包含SEQ.ID.NO.36。
71.含有載體和SEQ.ID.NO.35所示的cDNA的質(zhì)粒。
72.含有權(quán)利要求71所述的質(zhì)粒的宿主細(xì)胞。
73.編碼人G蛋白偶聯(lián)受體的cDNA，其包含SEQ.ID.NO.37。
74.由SEQ.ID.NO.37所示的cDNA編碼的人G蛋白偶聯(lián)受體，其包含SEQ.ID.NO.38。
75.含有載體和SEQ.ID.NO.37所示的cDNA的質(zhì)粒。
76.含有權(quán)利要求75所述的質(zhì)粒的宿主細(xì)胞。
全文摘要
本發(fā)明申請(qǐng)文件所公開(kāi)的發(fā)明涉及跨膜受體;具體地講,涉及與人內(nèi)源G蛋白偶聯(lián)的孤兒受體。
文檔編號(hào)C07K14/72GK1344319SQ99812713
公開(kāi)日2002年4月10日 申請(qǐng)日期1999年10月13日 優(yōu)先權(quán)日1998年11月20日
發(fā)明者陳若平, 鄧杭, 廖王蓁, 林伊玲 申請(qǐng)人:阿瑞那制藥公司