專利名稱：Tan－1057衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的天然產(chǎn)物衍生物，其制備方法，含有這些衍生物的藥物組合物及其在治療人或動(dòng)物疾病中的應(yīng)用。
EP-A-0339596公開了下式的抗菌素 該類抗菌素是通過培養(yǎng)屈撓桿菌屬(Flexibacter)微生物獲得的。
尤其是該專利公開中還描述了下列化合物 其中碳原子A具有S構(gòu)型(TAN-1057A)或R構(gòu)型(TAN-1057B)。Y.Funabashi等；Tetrahedron 49,13,1993描述了TAN-1057A和TAN-1057的化學(xué)和結(jié)構(gòu)特征。B.N.Katayama等；J.Antibiotics,46,606,1993報(bào)道了產(chǎn)生TAN-1057的生物體的分類系統(tǒng)以及TAN-1057的生物學(xué)特性。C.Yuan和R.M.Williams在J.Am.Chem.,Soc.119,11777,1997和A.de Meijere等在Eur.Org.Chem.1998,777中公開了TAN-1057化合物的全合成。R.M.Williams在J.Antibiotics；51,189,1998中描述了TAN-1057的第一類衍生物。然而，多數(shù)衍生化作用與分子的環(huán)脒基脲部分有關(guān)。因此，例如描述了下列衍生物 其中R表示Ac、COPh、COOMe、SO2Me和CO2CH2Ph。
在本發(fā)明的優(yōu)選權(quán)日之后公布的WO99/07685公開了下式的在分子的環(huán)脒基脲部分?；⑶冶涣硗饬柞；难苌?其中R2表示下式基團(tuán) 或 僅有兩種衍生化作用(J.Antibiotics；51,189,1998)涉及(S)-β-高精氨酸部分 然而，所得到的這些衍生物完全失去了生物學(xué)活性。
本發(fā)明的發(fā)明人的目的是合成其他的TAN-1057化合物的衍生物，以對(duì)其生物學(xué)和/或藥理學(xué)作用進(jìn)行研究。在克服了困難的合成問題后，本發(fā)明人使用新的、通?？梢詰?yīng)用的方法成功地合成了其他新的化合物，這些化合物是在TAN 1057的(S)-β-高精氨酸部分衍生化的，具有出人意料的非常低的毒性以及相差無幾的活性。
因此，本發(fā)明提供了下列通式的化合物及其可藥用鹽 其中R1表示氫或(C1-C6)烷基，X表示式-(CH2)m-基團(tuán)，其中m是0、1或2，D選自式D1至D3基團(tuán) 其中R2表示氫或羥基，R3表示氫，或者R2和R3結(jié)合在一起形成氧代基，Y表示直鏈或支鏈(C1-C5)鏈烷二基，其中一個(gè)碳原子可以任選地被-O-或-NH-置換，并且該基團(tuán)可以任選地被羥基或氧代基取代，或者Y表示下式基團(tuán) 和 其中r和s彼此相同或不同，并且是0、1或2，Z表示選自下式的基團(tuán) 和-CN,其中R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18和R19彼此獨(dú)立地選自氫、(C1-C6)烷基、(C1-C4)鏈烷?；?、叔丁氧羰基、芐氧羰基和芐基，Q表示氧或硫，并且p是1、2或3，并且Het表示具有1至4個(gè)碳原子的5-或6-元雜芳基，
排除下列化合物，其中R1表示甲基，m是1,D表示D1,Y表示-(CH2)3-，并且Z表示下式基團(tuán) 對(duì)于與TAN1057A/B相應(yīng)的化合物來說，其中R1表示甲基、m是1、D表示D1、Y表示-(CH2)3-并且Z表示下式基團(tuán)的化合物不包括在本發(fā)明權(quán)利要求所要求的化合物內(nèi)， 因此，其中D表示D2、R2和R3表示氫、R1表示甲基、m是1、Y表示-(CH2)2-并且Z表示下式基團(tuán)的化合物也不包括在本發(fā)明的化合物內(nèi) 本發(fā)明優(yōu)選提供下列通式的化合物及其可藥用鹽 其中R1表示氫或(C1-C6)烷基，X表示式-(CH2)m-基團(tuán)，其中m是0、1或2，D選自式D1至D3基團(tuán) 其中R2表示氫或羥基，R3表示氫，或者R2和R3一起形成氧代基，Y表示直鏈或支鏈(C1-C5)鏈烷二基，其中一個(gè)碳原子可以任選地被-O-或-NH-置換，并且該基團(tuán)可以任選地被羥基或氧代基取代，或者Y表示下式基團(tuán) 和 其中r和s彼此相同或不同，它們是0、1或2，Z表示選自下式的基團(tuán) 和 其中R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18和R19各自彼此獨(dú)立地選自氫、(C1-C6)烷基、(C1-C4)鏈烷?；⑹宥⊙豸驶?、芐氧羰基和芐基，Q表示氧或硫，并且p是1、2或3，和Het表示具有1-4個(gè)氮原子的5-或6-元雜芳基，但是不包括下列化合物，其中R1表示甲基，m是1,D表示D1,Y表示-(CH2)3-并且Z表示下式基團(tuán) (與其中D表示D2,R2和R3表示氫，R1表示甲基，m是1,Y表示-(CH2)2并且Z表示下式基團(tuán)的情況相對(duì)應(yīng)
在式X所示的-(CH2)m-基團(tuán)中，m優(yōu)選為1或2。因此，X所示-(CH2)m-基團(tuán)優(yōu)選包括亞甲基或亞乙基(乙-1,2-二基)-。X特別優(yōu)選為亞甲基。
Y定義中的其中一個(gè)碳原子可以任選地被-O-或-NH-取代、并且可以任選地被羥基或氧代基取代的直鏈或支鏈(C1-C5)鏈烷二基包括例如直鏈(C1-C5)鏈烷二基，如亞甲基、亞乙基、丙-1,3-二基、丁-1,4-二基和戊-1,5-二基。優(yōu)選的是直鏈(C1-C4)鏈烷二基。
Y定義中的其中一個(gè)碳原子被-O-或-NH-取代、并且可以任選地被羥基或氧代基取代的直鏈或支鏈(C1-C5)鏈烷二基包括例如下式基團(tuán) 此處，基團(tuán)的任何一側(cè)均可與Z相連。
Y所示的下列各式基團(tuán)包括例如其中r和s彼此相同的對(duì)稱基團(tuán)或者不對(duì)稱基團(tuán)；優(yōu)選其中r和s均為0的對(duì)稱基團(tuán)，即1,2-亞苯基、1,3-亞苯基和1,4-亞苯基。特別優(yōu)選的是1,3-或間亞苯基。 和 在通式(Ⅰ)中，Z選自下式基團(tuán) 和 其中R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18和R19各自彼此獨(dú)立地選自氫、(C1-C6)烷基、(C1-C4)鏈烷?；⑹宥⊙豸驶?、芐氧羰基和芐基，Q表示氧或硫，并且p是1、2或3，和Het表示具有1-4個(gè)氮原子的5-或6-元雜芳基。
在這些Z基團(tuán)中，優(yōu)選的是下式基團(tuán) 或 其中R4、R5、R6、R7和R17如上所定義。
Z特別優(yōu)選下式基團(tuán) 其中R4、R5、R6和R7如上所定義，優(yōu)選為氫。
在下式所示基團(tuán)Z中 Het優(yōu)選選自下式基團(tuán) 此處，唑類，即含有1-4個(gè)氮原子的不飽和5元雜環(huán)系可以通過碳原子或氮原子連接。
在這些基團(tuán)中，具有1-3個(gè)氮原子的6元雜芳基是優(yōu)選的。
特別優(yōu)選的是，Het表示吡啶基，包括2-吡啶基、3-吡啶基和4-吡啶基，尤其優(yōu)選2-吡啶基。
非常特別優(yōu)選的是，Z表示下式基團(tuán) 在一個(gè)優(yōu)選的具體方案中，Z表示下式基團(tuán) 其中R18和R19如上所定義。
在上述R1和R4至R19的定義中(C1-C6)烷基表示具有1-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、仲丁基、異丁基、戊基和己基，優(yōu)選(C1-C4)烷基，特別優(yōu)選甲基。
R4至R19優(yōu)選表示氫。
在R4至R19的定義中(C1-C4)鏈烷?；硎纠缂柞；?、乙?；?、丙酰基和丁?；瑑?yōu)選甲?；鸵阴；?。
Q優(yōu)選表示氧。
p優(yōu)選為1或2。
在一個(gè)優(yōu)選的本發(fā)明實(shí)施方案中，基團(tuán)D表示下式基團(tuán) 在另一個(gè)優(yōu)選的本發(fā)明實(shí)施方案中，基團(tuán)D表示下式基團(tuán) 其中R2和R3如上所定義，并且優(yōu)選為氫。
在一個(gè)優(yōu)選的本發(fā)明實(shí)施方案中，基團(tuán)D表示下式基團(tuán) 在這些基團(tuán)中，優(yōu)選的是基團(tuán)D1和D2，并且特別優(yōu)選D1。在D2中R2和R3均為氫的情況也是優(yōu)選的。
適宜的通式(Ⅰ)化合物的可藥用鹽可以是通常的無毒鹽，包括例如與無機(jī)酸、羧酸或磺酸的鹽。所述酸加成鹽包括有機(jī)酸鹽(例如乙酸鹽、丙酸鹽、乳酸鹽、檸檬酸鹽、苯甲酸鹽、三氟乙酸鹽、馬來酸鹽、酒石酸鹽、富馬酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、甲酸鹽、甲苯磺酸鹽、萘二磺酸鹽等)和無機(jī)酸鹽(例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽等)。
如果存在雙鍵和不對(duì)稱碳原子，則通式(Ⅰ)化合物可以以立體異構(gòu)體形式存在，例如順式/反式異構(gòu)體和構(gòu)型異構(gòu)體，如對(duì)映體或非對(duì)映體；這些異構(gòu)體及其混合物包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
在偶合劑存在下，并且根據(jù)需要在堿存在下，通過通式(Ⅱ)化合物與通式(Ⅲ)化合物反應(yīng)制備本發(fā)明化合物 其中X、Y和Z如上所定義，并且D’選自式D’1至D’3基團(tuán) 其中R2和R3如上所定義，并且A是進(jìn)行了常規(guī)保護(hù)的氨基 其中R1如上所定義，并通過本身已知的方法除去被護(hù)氨基A中的常規(guī)保護(hù)基。
采用V.V.Sokolov,S.I.Kozhushkov,S.Nikolskaya,V.N.Belov,M.Es-Sayed,A.de Meijere,Eur.J.Org.Chem.1998,777的方法，合成式(Ⅲ)化合物。
用于形成酰胺的式(Ⅱ)化合物是適當(dāng)保護(hù)的氨基酸，它們可以通過例如由α-氨基酸鏈延長(zhǎng)獲得(參見H.M.M.Bastiaans,A.E.Alewijnse,J.L.van der Baan,H.C.J.Ottenheijm,TetrahedronLett.1994,35,7659)。
對(duì)于Y來說，如果直鏈或支鏈(C1-C5)鏈烷二基含有官能團(tuán)例如羥基、酮、酯或酰胺官能團(tuán)，則可以通過標(biāo)準(zhǔn)方法引入這些官能團(tuán)或進(jìn)行合成(參見例如B.Houben-Weyl,Methoden der OrganischenChemie[有機(jī)化學(xué)方法]，第ⅩⅤ/1和2卷)。
例如，按照下面的反應(yīng)方案1制備3-(芐氧羰基氨基)-3-[3’-(N-芐氧羰基胍基)苯基]-丙酸。
反應(yīng)方案1Cbz: MeOH甲醇THF四氫呋喃H+酸此處，例如化合物D(E.Proft,F.-J.Becker,J.prakt.Chemie1965,30,18)在例如濃硫酸存在下用甲醇酯化。在兩相系統(tǒng)二氯甲烷/堿例如飽和碳酸氫鈉水溶液中，用氯甲酸芐酯將游離氨基轉(zhuǎn)化為氨基甲酸芐酯。芳族硝基用氯化錫(Ⅱ)還原。然后在氯化汞(Ⅱ)存在下與二(芐氧羰基)-S-甲基硫脲反應(yīng)(W.Su,Synth.Commun.1996,26,407)，并將甲酯堿性水解，得到羧酸Ⅰ。
在上述反應(yīng)中，還可以使用下面列出的通?？墒褂玫娜軇?、酸和堿以代替此處述及的。
例如，如下列實(shí)施例所述，制備其中D表示D3的式(Ⅱ)化合物 反應(yīng)方案2此處Bn表示-CH2-PhCbz表示PhCH2-O-C(O)-Mes表示CH3SO2-Me表示甲基反應(yīng)優(yōu)選在實(shí)驗(yàn)部分所述條件下進(jìn)行。
原則上，通過S-甲基硫脲衍生物與末端氨基反應(yīng)，合成式(Ⅱ)酸部分中的基團(tuán)Z。該反應(yīng)由堿性試劑例如叔胺或氫氧化鈉介導(dǎo)，任選地在氯化汞存在下進(jìn)行。
如果Z是氨基甲酸酯基，則通過末端氨基與氯甲酸酯在堿(例如叔胺或氫氧化鈉)存在下進(jìn)行反應(yīng)，獲得氨基甲酸酯基(反應(yīng)方案3)。此處，酸官能團(tuán)可以是游離的或者用合適的保護(hù)基保護(hù)(例如烷基酯)。 反應(yīng)方案3此處，取代基如上所定義，并且Hal表示鹵素例如氟、氯、溴和碘。
當(dāng)上述方法中的R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18和R19不是氫而是(C1-C6)烷基、(C1-C4)鏈烷?；?、叔丁氧羰基、芐氧羰基和芐基時(shí)，通過常規(guī)方法使氨基烷基化，例如使用烷基化試劑，如烷基鹵、磺酸酯或取代或未取代的二烷基-或二芳基磺酸酯例如碘甲烷或硫酸二甲酯，并且作為常規(guī)氨基保護(hù)基的(C1-C4)鏈烷酰基、叔丁氧羰基、芐氧羰基和芐基通過常規(guī)方法引入(參見T.W.Greene,P.G.M.Wuts，有機(jī)合成中的保護(hù)基(ProtectiveGroups in Organic Synthesis)，第2版，John Wiley and Sons,NewYork,1991)。
有利的是采用下述方法除去常規(guī)保護(hù)的氨基A中的常規(guī)的氨基保護(hù)基。
在式(Ⅱ)與式(Ⅲ)化合物的反應(yīng)中適于用作偶合劑的是已知試劑，例如六氟磷酸O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基uronium(HATU)或六氟磷酸[溴-三-吡咯烷子基-鏻](PyBroP)，因?yàn)槭褂门己蟿┛梢源_保高產(chǎn)率地平穩(wěn)偶合。
在常規(guī)保護(hù)的氨基A(即常規(guī)保護(hù)的-NH2基團(tuán))中適于使用的常規(guī)氨基保護(hù)基是肽化學(xué)中使用的常規(guī)氨基保護(hù)基。這些保護(hù)基優(yōu)選包括芐氧羰基、2,4-二甲氧基芐氧羰基、4-甲氧基芐氧羰基、甲氧羰基、乙氧羰基、叔丁氧羰基、烯丙氧羰基、鄰苯二甲酰基、2,2,2-三氯乙氧羰基、芴基-9-甲氧羰基、甲酰基、乙?；?-氯乙?；⒈郊柞；?、4-氯苯甲酰基、4-溴苯甲酰基、4-硝基苯甲酰基、鄰苯二甲酰亞氨基、異戊?；蚱S氧基亞甲基、4-硝基芐基、2,4-二硝基芐基、4-硝基苯基、4-甲氧基苯基或三苯基甲基，其中特別優(yōu)選的是芐氧羰基。
通過常規(guī)方法除去常規(guī)保護(hù)的氨基A中的氨基保護(hù)基(參見T.W.Greene,P.G.M.Wuts，有機(jī)合成中的保護(hù)基(Protective Groups inOrganic Synthesis)，第2版，John Wiley and Sons,New York,1991)，即優(yōu)選在二噁烷中用鹽酸除去叔丁氧羰基，用哌啶除去芴基-9-甲氧羰基，以及在催化劑例如阮內(nèi)鎳、鈀、披鈀碳或鉑存在下、或者優(yōu)選在氯化鈀(Ⅱ)存在下通過氫解除去芐氧羰基。任選地還可以在此反應(yīng)中除去基團(tuán)Z中的氨基保護(hù)基，例如芐氧羰基。
在本發(fā)明中，在于反應(yīng)條件下不發(fā)生變化的惰性有機(jī)溶劑中進(jìn)行反應(yīng)。這些溶劑包括醚例如乙醚、1,4-二噁烷或四氫呋喃，鹵代烴例如二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、1,2-二氯乙烷、三氯乙烷或四氯乙烷，烴例如苯、甲苯、二甲苯、己烷、環(huán)己烷或礦物油餾分，醇如甲醇、乙醇或異丙醇，硝基甲烷，二甲基甲酰胺或乙腈。還可以使用這些溶劑的混合物。特別優(yōu)選的是二氯甲烷、四氫呋喃、二噁烷、甲醇或二甲基甲酰胺。
該反應(yīng)通常在0℃-150℃、優(yōu)選0℃-70℃的溫度下進(jìn)行。反應(yīng)可以在大氣壓、升高或降低的壓力(例如0.5-5巴)下進(jìn)行。通常，反應(yīng)在大氣壓下進(jìn)行。
適用于本發(fā)明方法的堿通常是二-三甲基甲硅烷基氨基鈉或二-三甲基甲硅烷基氨基鋰，堿金屬氫氧化物例如氫氧化鈉、氫氧化鋰或氫氧化鉀，碳酸氫鈉，氫化鈉或有機(jī)(三烷基(C1-C6)胺)例如三乙胺，或雜環(huán)例如1,4-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一-7-烯(DBU)、吡啶、二氨基吡啶、甲基哌啶或N-甲基嗎啉。優(yōu)選的是氫氧化鋰、碳酸氫鈉、吡啶、二異丙基乙胺和三乙胺。
適宜的酸包括有機(jī)酸(例如甲酸、乙酸、丙酸、三氯乙酸、三氟乙酸等)、無機(jī)酸(例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、氯化氫、溴化氫、氟化氫等)等。
本發(fā)明天然產(chǎn)物衍生物具有有意義的藥學(xué)作用。特別是，本發(fā)明化合物具有抗菌作用，因此可以有效地防治人和動(dòng)物的細(xì)菌感染。此外，已知化合物TAN-1057 A和B存在的問題是所治療的病菌迅速對(duì)這些化合物產(chǎn)生抗性，而本發(fā)明化合物可以使抗性的發(fā)展速度降低，同時(shí)具有相差無幾的抗菌活性。
TAN-1057 A、B對(duì)肝和免疫系統(tǒng)細(xì)胞具有顯著的毒性，事實(shí)上排除了這些物質(zhì)在治療細(xì)菌感染中的應(yīng)用。與TAN-1057 A、B相比，所有本發(fā)明的化合物具有降低的毒性并且可用于治療應(yīng)用。測(cè)定最低抑制濃度(MIC)采用液體稀釋試驗(yàn)測(cè)定MIC。將試驗(yàn)菌(金黃色葡萄球菌(S.aureus 133))在Isosensitest肉湯中過夜培養(yǎng)，培養(yǎng)物用胎牛血清(FSC)或Isosensitest肉湯稀釋1∶1000并與試驗(yàn)物質(zhì)的稀釋液(1∶2的連續(xù)稀釋液)一起孵育。TAN 1057 A、B-抗性菌的選擇將S.aureus 133與不同濃度的TAN 1057 A、B一起孵育24小時(shí)。將在升高的TAN 1057 A、B濃度下具有可見生長(zhǎng)的細(xì)菌轉(zhuǎn)入具有不同TAN 1057 A、B濃度的新培養(yǎng)瓶中并再次孵育。將該方法重復(fù)幾天，逐步篩選對(duì)TAN 1057 A、B具有增加的抗性的細(xì)菌。具有高度抗性的S.aureus 133的MIC＞100μg/ml(初始MIC:＜0.1μg/ml)。由該選擇系列得到的MIC值＜0.1、0.8、25、100和＞100μg/ml的細(xì)菌用于進(jìn)行試驗(yàn)。因此可以確定對(duì)TAN 1057 A、B-抗性細(xì)胞具有抗菌活性的TAN 1057 A、B衍生物。毒理學(xué)研究方法描述用真核細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行示例化合物的相容性試驗(yàn)。肝細(xì)胞(HepG2)和鼠巨噬細(xì)胞(J774.A1)用作器官特異性毒性的指示劑。鼠巨噬細(xì)胞系用作毒性作用的特別敏感的指示劑。所試驗(yàn)的所有衍生物的毒性均顯示低于TAN 1057 A、B的毒性。用HepG2細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)在用示例化合物進(jìn)行處理之后，測(cè)定人HepG2肝細(xì)胞的活力和功能。在各種情況下，將2×104-1×105個(gè)細(xì)胞在含有10％加熱滅活胎牛血清(Gibco)的RPMI 1640(Whittacker)中、于37℃孵育40-48小時(shí)。200μl體積培養(yǎng)物中含有濃度為10、2和0.4μg/ml的試驗(yàn)物質(zhì)。
在加入20μl Alamar藍(lán)(Biosource,Art.No.DAL 1100)之后，通過測(cè)量熒光(激發(fā)544nm，發(fā)射590nm)，測(cè)定活力。
通過測(cè)定經(jīng)處理的apo B100和α2-巨球蛋白的分泌，測(cè)定HepG2細(xì)胞的功能。至結(jié)束時(shí)，在孵育40-48小時(shí)后，通過ELISA測(cè)定培養(yǎng)上清液中的蛋白含量。用兔ahLDL(1mg/ml)結(jié)合apo B100，并用過氧化物酶共軛的單克隆抗體(ahLDL_POD)進(jìn)行定量，其中加有底物TMB/H2O2。測(cè)量450nm處的光密度。
為了測(cè)定α2-巨球蛋白，使用得自Biodesign(Art.No.H 45205M)的ELISA-系統(tǒng)。同樣使用TMB/H2O2底物進(jìn)行定量，并測(cè)量450nm處的光密度。用J774.A1細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)在各種情況下，將1.2×104個(gè)細(xì)胞在37℃孵育24小時(shí)。加入不同濃度的試驗(yàn)物質(zhì)，并將所有細(xì)胞再孵育72小時(shí)。然后用50μl中性紅溶液(Sigma,No.N 2889)處理細(xì)胞2小時(shí)，用PBS基質(zhì)洗滌，并用乙醇/冰醋酸混合物使其變性。
在Elisa讀數(shù)器中、于540nm和630nm對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行測(cè)定。外推IC50值，該值表明了與未經(jīng)處理的對(duì)照細(xì)胞相比，細(xì)胞的活力在何濃度降至50％，這是通過中性紅的攝取進(jìn)行測(cè)定的。結(jié)果將細(xì)胞在30℃培養(yǎng)18-24小時(shí)。在各種情況下，將沒有可見細(xì)菌生長(zhǎng)的物質(zhì)最低濃度定義為MIC。
用對(duì)TAN 1057 A、B具有中和高抗性的S.aureus 133分離菌進(jìn)行試驗(yàn)，與本發(fā)明衍生物進(jìn)行比較。在顯示對(duì)TAN 1057 A、B具有中度抗性(TAN 1057 A、B的MIC=0.8μ/ml)的分離菌的MIC試驗(yàn)中，實(shí)施例4顯示出更好的抗菌活性(實(shí)施例4的MIC=0.2μ/ml)。體內(nèi)抗菌活性試驗(yàn)用在5％粘蛋白中的l×106個(gè)S.aureus 133菌感染小鼠(腹膜內(nèi))，并在感染后30分鐘，靜脈內(nèi)注射試驗(yàn)物質(zhì)進(jìn)行治療。未經(jīng)治療的所有感染動(dòng)物均死亡。TAN 1057 A、B和實(shí)施例4化合物在所有存活的感染動(dòng)物中的治療劑量(=ED100)均為1mg/kg。
達(dá)到最高試驗(yàn)濃度的實(shí)施例1和2化合物在活力和功能試驗(yàn)中未顯示出抑制作用(IC50＞10μg/ml)。在α2-巨球蛋白分析中，檢測(cè)到TAN 1057 A、B的抑制作用(IC507μg/ml)。
在用J774.A1細(xì)胞中進(jìn)行的中性紅活力試驗(yàn)中，測(cè)得TAN 1057A、B的IC50值為0.25μg/ml。進(jìn)行試驗(yàn)的本發(fā)明所有的TAN 1057衍生物均顯示較高的IC50值，這表明這些化合物在某些情況下具有明顯更好的相容性。
IC50值列于下表中
TAN 1057 A、B和實(shí)施例4化合物的急性毒性通過測(cè)定50％接收治療小鼠的存活劑量(=LD50)，測(cè)定物質(zhì)的急性毒性。經(jīng)腹膜注射試驗(yàn)物質(zhì)后，TAN 1057 A、B的LD50值為100mg/kg。實(shí)施例4化合物的LD50值＞400mg/kg。
該結(jié)果反映出本發(fā)明化合物具有明顯較低的毒性。然而，如上所述，TAN 1057 A、B與實(shí)施例4化合物的體內(nèi)治療活性是相差無幾的。
本發(fā)明的通式(Ⅰ)化合物具有廣譜抗菌作用，特別是抗革蘭氏陽性菌和某些革蘭氏陰性菌，還可以抗棒狀桿菌。由于這些性質(zhì)，它們可以在人用和獸用藥物中作為化療活性化合物。
因此，可以控制革蘭氏陽性菌(對(duì)葡萄球菌、包括抗methillicin的金黃色葡萄球菌具有特別好的作用)、革蘭氏陰性菌(例如粘膜炎莫拉菌(Moraxella catarrhalis))和棒狀桿菌，以及預(yù)防、改善和/或治愈由這些致病菌引起的疾病。
這些物質(zhì)尤其適用于人用和獸用藥物中用于對(duì)由這些致病菌引起的局部和全身感染的預(yù)防和化療的。
本發(fā)明包括藥物組合物，其中除了無毒惰性可藥用載體或賦形劑之外，含有一種或多種本發(fā)明的化合物，或者該組合物由一種或多種本發(fā)明活性化合物組成，以及這些組合物的制備方法。
任選地，活性化合物還可以是在上述一種或多種載體中的微膠囊的形式。
在上述藥物組合物中，治療活性化合物的濃度優(yōu)選為占混合物總重量的約0.1-99.5％，更優(yōu)選約0.5-95％。
除了本發(fā)明化合物之外，上述藥物組合物還可以含有其他藥物活性化合物。
通常發(fā)現(xiàn)，無論是人用或是獸用藥物，以約0.5至約500、優(yōu)選5至100mg/kg體重/24小時(shí)的總量施用本發(fā)明活性化合物對(duì)于獲得所需的結(jié)果是有利的，任選地，多數(shù)情況下單次給藥。單次給藥優(yōu)選含有約1至約80、特別是3-30mg/kg體重的本發(fā)明活性化合物。
為了拓寬活性譜和達(dá)到增加的活性，還可以將本發(fā)明化合物與其他抗菌素聯(lián)合使用。
在23℃，將4g(11.1mmol)化合物F、3-芐氧羰基氨基-3-(3-硝基苯基)丙酸甲酯在20ml乙醇中的溶液滴加至12.6g(55.8mmol)二水合氯化錫(Ⅱ)溶液中。在80℃浴溫?cái)嚢柙摶旌衔?0分鐘，然后減壓除去大部分乙醇。殘余物在水和乙酸乙酯之間分配。通過加入碳酸氫鈉將水相的pH值調(diào)節(jié)至8。該混合物經(jīng)5cm的硅藻土層過濾，用乙酸乙酯洗滌。分離水相，然后用乙酸乙酯萃取水相3次。有機(jī)相用硫酸鈉干燥。減壓除去溶劑，得到3.8g無色油G，即3-芐氧羰基氨基-3-(3-氨基苯基)丙酸甲酯，其中仍然含有錫鹽。1H-NMR(200MHz,CDCl3):2.87(dd,2H),3.61(s,3H),5.08(m,1H),5.11(s,2H),6.60(m,3H),7.11(t,1H),7.35(m,5H)。MS(DCI/NH3):346(M+NH4)+。
將0.92g(2.8mmol)G、3-芐氧羰基氨基-3-(3-氨基苯基)-丙酸甲酯和1.0g(2.8mmol)二(芐氧羰基)-S-甲基硫脲在10ml DMF中的溶液與1.56ml(11.2mmol)三乙胺和0.83g(3.1mmol)氯化汞(Ⅱ)混合。在23℃攪拌該混合物1小時(shí)，用100ml乙酸乙酯稀釋，經(jīng)5cm硅藻土層過濾。有機(jī)相用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，并用硫酸鈉干燥，減壓除去揮發(fā)性成分。殘余物經(jīng)硅膠色譜純化(二氯甲烷∶乙酸乙酯=1∶1)。得到1.5g(84％)H，即3-芐氧羰基氨基-3-[3-(N,N’-二芐氧羰基胍基)苯基)-丙酸甲酯，為白色固體。1H-NMR(200MHz,CDCl3):2.86(m,2H),3.60(s,3H),5.17(m,7H),7.09(d,1H),7.35(m,17H),7.65(d,2H),10.26(s,br,1H),11.90(s,br,1H)。MS(ESI):639(M+H)+。
將500mg(0.78mmol)化合物H、芐氧羰基氨基-3-[3-(N,N’-二芐氧羰基胍基)苯基)丙酸甲酯在7ml THF和3.5ml水中的溶液與66mg(1.56mmol)氫氧化鋰一水合物混合。該混合物在沸點(diǎn)加熱16小時(shí)，然后減壓除去溶劑。殘余物在水和乙酸乙酯之間分配。分離各相，然后用濃鹽酸將水相的pH調(diào)節(jié)至1。水相用乙酸乙酯萃取兩次，有機(jī)相用硫酸鈉干燥并濃縮。殘余物經(jīng)硅膠色譜純化(二氯甲烷/乙酸乙酯梯度洗脫)。得到3-(芐氧羰基氨基)-3-[3-(N-芐氧羰基胍基)苯基]-丙酸(Ⅰ)(270mg,70％)，為無色油。1H-NMR(400MHz,CD3OD):2.78(m,2H),5.05(s,2H),5.11(m,1H),5.31(s,2H),7.37(m,14H)。MS(ESI):491(M+H)+。
在23℃，將20mg(0.108mmol)(5R,S)-3,4,5,6-四氫-5-甲基氨基-2-脲基嘧啶-4-酮、53mg(0.108mmol)酸Ⅰ、40mg(0.216mmol)六氟磷酸0-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基uronium(HATU)和26mg(0.216mmol)二異丙基乙胺在5ml DMF中的溶液攪拌16小時(shí)。減壓除去溶劑。殘余物與2M鹽酸一起攪拌。從殘余物中傾析出水相。將殘余物溶解在二氯甲烷中。有機(jī)相用2M鹽酸萃取兩次，用硫酸鈉干燥，并減壓濃縮。得到70mg(98％)偶合產(chǎn)物，為白色固體[MS(ESI):658(M+H)+]。將該產(chǎn)物溶解在10ml甲醇中。所得溶液與38mg(0.213mmol)氯化鈀(Ⅱ)混合并在氫氣氛(大氣壓)下攪拌4小時(shí)。將該溶液過濾并減壓濃縮。殘余物與乙醚一起研制。傾析出醚，并將殘余物減壓干燥，得到標(biāo)題化合物，為無色油(28mg,57％)。1H-NMR(400MHz,CD3OD):2.81-3.34(m,7H),3.86+3.99(m,1H),4.77+5.16(m,1H),7.35-7.62(m,4H)。MS(ESI)390(M+H)+。
在0℃和攪拌下，向即用即制的34.0g鈉(1.48mol,8當(dāng)量)在250ml甲醇中的溶液中緩緩滴加62.9g(185mmol)J，即2-(2-芐氧基乙基)-1-氯-1-(1,2,2-三氯乙烯基)環(huán)丙烷在50ml無水甲醇中的溶液。然后將該混合物加熱回流2天。冷卻至室溫后，將該混合物與700ml水混合并用乙醚萃取。減壓濃縮合并的有機(jī)相，并將殘余物溶解在300ml甲醇中。加入25ml 10％鹽酸，并攪拌反應(yīng)混合物45分鐘。然后將該混合物與300ml飽和碳酸氫鈉溶液混合，用乙醚萃取。乙醚提取液用氯化鈣干燥。減壓除去溶劑，得到深棕色油。經(jīng)300g硅膠過濾(PE∶乙醚10∶1)，得到24.4g(47％)K，即[2-(2-芐氧基乙基)環(huán)亞丙基]氯乙酸甲酯，為淡黃色液體，是兩種非對(duì)映體的1∶1.6混合物。-13C-NMR(62.9MHz,CDCl3，還有DEPT)，異構(gòu)體A:δ=11.6(-),20.3(+),31.6(-),52.8(+),68.8(-),72.9(-),115.3(C季),127.49(+),127.53(+),128.3(+),138.3(C季),143.8(C季),162.4(C季)。-異構(gòu)體B:δ=15.6(-),16.1(+),31.5(-),52.8(+),69.3(-),73.0(-),114.6(C季),127.49(+),127.53(+),128.3(+),143.3(C季),162.7(C季)。MS(70eV),m/z(％):280(＜1)[M+],245(1)[M+-Cl],189(2)[M+-CH2Ph],91(100)[CH2Ph+]。-C15H17ClO3(280.8)計(jì)算值C 64.17,H 6.10；實(shí)測(cè)值C 63.24,H 5.97。
將11.98g(42.7mmol)K，即[2-(2-芐氧基乙基)環(huán)亞丙基]氯乙酸甲酯在100ml無水甲醇中的溶液與8.42g(42.7mmol)無水N,N-二芐基胺緩緩混合。在室溫?cái)嚢柙撊芤?6小時(shí)，然后減壓濃縮。經(jīng)300g硅膠柱色譜純化(PE∶乙醚9∶1)，得到15.71g(77％)L，即(E)-2-[2-(芐氧基乙基)-1-(N,N-二芐基氨基)環(huán)丙基]-2-氯乙酸甲酯(淡黃色油)，為兩種非對(duì)映體的1∶1.6混合物。-13C-NMR(62.9MHz,CDCl3，還有DEPT)，異構(gòu)體A:δ=23.6(-),29.2(+),29.4(-),51.1(C季),52.8(+),56.6(-),62.1(+),69.8(-),72.8(-),126.5(+),126.6(+),127.6(+),128.3(+),128.7(+),128.8(+),138.4(C季),139.7(C季),169.1(C季)。-異構(gòu)體B:δ=23.2(-),26.0(+),29.5(-),50.4(C季),52.9(+),56.6(-),64.3(+),69.8(-),72.9(-),126.5(+),126.6(+),127.6(+),128.3(+),128.7(+),128.8(+),138.4(C季),139.0(C季),169.5(C季)。MS(70 eV),m/z(％):442(＜1)[M+-Cl],386(＜1)[M+-CH2Ph],91(100)[CH2Ph+]。-C29H32ClNO3(478.0)計(jì)算值C 72.87,H 6.75；實(shí)測(cè)值C 72.53,H 6.84。
向高壓釜中加入100ml甲醇和約2.00g披鈀活性炭(10％濃度，50％水)，反復(fù)充入氫，并在4.5巴攪拌30分鐘。向活性催化劑中加入8.86g(18.5mmol)L，即(E)-2-[2-(芐氧基乙基)-1-(N,N-二芐基氨基)環(huán)丙基]-2-氯乙酸甲酯在100ml甲醇中的溶液，并在室溫和4.5巴壓力下攪拌該混合物7天。然后經(jīng)硅藻土濾出催化劑，減壓濃縮濾液。將殘余物懸浮在110ml飽和碳酸鈉溶液中，在劇烈攪拌下和在冰浴中，與4.51g(1.43當(dāng)量)氯甲酸芐酯混合，并在同樣的溫度下攪拌5小時(shí)。用乙酸乙酯萃取并用硫酸鎂干燥后，經(jīng)硅膠柱色譜純化產(chǎn)物(乙醚)。由此得到3.73g(66％)N，即(E)-2-[1-氨基-2-(羥乙基)環(huán)丙基]乙酸甲酯鹽酸鹽。-1H-NMR(250MHz,CDCl3):δ=0.39(mc,1H),1.00-1.30(m,3H),1.90-2.00(m,1H),2.18(d,J2=17.3Hz,1H,),3.02(d,J2=17.3Hz,1H),3.66(s,3H),3.74(mc,2H),5.05(mc,2H),5.92(s,1H),7.31(mc,5H)。-13C-NMR(62.9MHz,CDCl3，還有DEPT):δ=18.0(-),24.4(+),32.1(-),33.6(C季),37.4(-),51.5(+),61.9(-),66.9(-),128.0(+),128.1(+),128.4(+),136.0(C季),157.1(C季),172.6(C季)。-MS(70eV),m/z(％):307(＜1)[M+],276(＜1)[M+-OCH3],172(8)[M+-OCOCH2Ph],91(100)[CH2Ph+]。
將1.600g(5.209mmol)N，即(E)-2-[1-氨基-2-(羥乙基)環(huán)丙基]-乙酸甲酯鹽酸鹽在40ml無水二氯甲烷中的溶液冷卻到0℃，與1.02g(2.0當(dāng)量)三乙胺和1.19g(2.0當(dāng)量)甲磺酸氯混合，并在同樣的溫度下攪拌2小時(shí)。減壓除去溶劑，將殘余物溶解在50ml乙酸乙酯中，并用40ml NaHCO3溶液洗滌。水相用乙酸乙酯萃取。有機(jī)相用硫酸鎂干燥，并減壓除去溶劑，得到2.010g(定量)O，即(E)-2-[1-芐氧羰基氨基-2-(羥乙基)環(huán)丙基]-乙酸甲酯，為略帶淡黃色的固體。-1H-NMR(250MHz,CDCl3):δ=0.48(mc,1H),1.05-1.20(m,2H),1.65-1.90(m,2H),2.52(d,1H),2.60(d,1H),2.99(s,3H),3.65(s,3H),4.35(mc,2H),5.02(s,2H),5.68(s,1H),7.30(mc,5H)。-C17H23NO7S(385.4)計(jì)算值C 52.98,H 6.01；實(shí)測(cè)值C 53.08,H 6.00。
將2.010g(5.209mmol)O，即(E)-2-[1-芐氧羰基氨基-2-羥乙基)環(huán)丙基]-乙酸甲酯溶解在10ml無水DMF中，與1.69g(5.0當(dāng)量)疊氮化鈉混合，并在室溫?cái)嚢?天。減壓除去溶劑，然后將殘余物與100ml水混合，并用乙酸乙酯萃取兩次，提取液用硫酸鈉干燥并減壓除去溶劑。經(jīng)硅膠柱色譜純化(PE∶乙醚1∶1→DE)，得到1.540g(89％)P，即(E)-2-[2-(疊氮乙基)-1-(芐氧羰基氨基)環(huán)丙基]乙酸甲酯，為無色油。-1H-NMR(250MHz,CDCl3):δ=0.48(mc,1H),1.05-1.26(m,2H),1.49(mc,1H,),1.75(mc,1H),2.54(d,J2=17Hz,1H),2.69(d,J2=17Hz,1H),3.42(mc,2H),3.68(s,3H),5.05(s,2H),5.60(br.s,1H),7.33(mc,5H)。-13C-NMR(62.9MHz,CDCl3,還有DEPT):δ=19.3(-),23.2(+),29.2(-),33.5(C),36.6(-),50.8(-),51.8(+),66.5(-),128.0(+),128.5(+),1 36.2(C季),155.8(C季),172.3(C季)。-MS(DCI,NH3)。m/z(％):350(100)[M++NH4],333(10)[M++H]。-C16H20N4O4(332.4)計(jì)算值C 57.82,H 6.07；實(shí)測(cè)值C 57.54,H 5.87。
將1.51g(4.54mmol)P，即(E)-2-[2-(疊氮乙基)-1-(芐氧羰基氨基)-環(huán)丙基]乙酸甲酯在5ml THF中的溶液在室溫下與1.19g(1.0當(dāng)量)三苯膦和82μl(4.54mmol)水混合，并攪拌24小時(shí)。減壓除去溶劑。向殘余物中加入10ml PE∶乙醚=1∶1的混合物，并在超聲浴中處理該混合物，直至三苯膦氧化物沉淀出來。將后者過濾，并用總量100ml的溶劑混合物反復(fù)洗滌。減壓濃縮濾液，然后將殘余物溶解在15ml DMF中，并與1.63g(1.0當(dāng)量)N,N’-二(芐氧羰基)-S-甲基異硫脲、1.23g(1.0當(dāng)量)氯化汞(Ⅱ)和0.92g(2.0當(dāng)量)三乙胺混合。攪拌2小時(shí)后，該混合物經(jīng)硅藻土過濾，然后用150ml乙醚洗滌。減壓除去溶劑，然后將殘余物溶解在200ml二氯甲烷中，并用100ml水洗滌。經(jīng)硫酸鎂干燥后，產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱色譜純化(乙醚)。得到1.82g(65％)產(chǎn)物R，即(E)-2-{2-[N,N’-(二芐氧羰基)胍基]乙基-1-(芐氧羰基氨基)環(huán)丙基}乙酸甲酯，為玻璃狀的油。-1H-NMR(250MHz,CDCl3):δ=0.48(mc,1H),1.11(mc,2H),1.63(mc,2H),2.52(d,J2=17.3Hz,1H),2.74(d,J2=17.3Hz,1H),3.40-3.80(m,2H),3.66(s,3H),5.05-5.20(m,6H),5.69(s,1H),7.2-7.4(m,15H),8.61(br.s,1H),11.75(br.s,1H)。-13C-NMR(62.9MHz,CDCl3):δ=19.2,23.6,28.8,33.2,36.7,40.5,51.6,66.4,67.0,67.9,127.7-128.6(9×C),134.5,136.2,136.7,153.5,155.8,163.6,172.4。-C33H36N4O8(616.7):計(jì)算值C 64.27,H 5.88；實(shí)測(cè)值C 64.57,H 6.07。
在室溫，將300mg(0.486mmol)R，即(E)-2-{2-[N,N’-(二芐氧羰基)-胍基]乙基-1-(芐氧羰基氨基)環(huán)丙基}乙酸甲酯在6ml二噁烷中的溶液與5ml 2N氫氧化鈉水溶液混合。1小時(shí)后，該混合物用50ml水稀釋，并用50ml乙酸乙酯萃取。通過加入1M鹽酸和使用pH計(jì)(玻璃電極)，將該混合物酸化至pH=5.4，并用二氯甲烷萃取。分離兩部分有機(jī)相，各用30ml飽和碳酸銨溶液洗滌，然后合并，并用硫酸鎂干燥。減壓除去溶劑，得到S，即(E)-2-{2-[N,N’-(二芐氧羰基)-胍基]乙基-1-(芐氧羰基氨基)環(huán)丙基}乙酸，為油狀。-1H-NMR(250MHz,CDCl3):δ=0.46(mc,1H),1.09(mc,2H),1.61(mc,2H),2.53(d,J2=17Hz,1H),2.75(d,J2=17Hz,1H),3.4-3.8(m,2H),5.05-5.20(m,6H),5.83(s,1H),7.2-7.5(m,15H),8.60(s,1H),8.97(s,1H),11-12(br.S,1H)。-FAB-MS(甘油-基質(zhì)),m/z(％):625(20)[M++Na],603(45)[M++H]。
如實(shí)施例1所述，將(5R,S)-3,4,5,6-四氫-5-甲基氨基-2-脲基嘧啶-4-酮與酸S，即(E)-2-{2-[N,N’-(二芐氧羰基)胍基]乙基-1-(芐氧羰基氨基)-環(huán)丙基}乙酸偶合，然后除去芐氧羰基保護(hù)基。得到非晶形固體狀標(biāo)題化合物(非對(duì)映體混合物)。-1H-NMR(250MHz,D2O):0.88(m,1H),0.93(m,1H),1.05(m,1H),1.12(m,2H),2.81-3.02(m,5H),3.07(m,2H),3.92(m,2H),4.95(m,1H)。
J，即2-(2-芐氧基乙基)-1-氯-1-(1,2,2-三氯乙烯基)環(huán)丙烷按照下述方法制備M.Es-Sayed，論文，Universitt Hamburg 1992.-M.Kordes，畢業(yè)論文，Universitt Gttingen 1996。實(shí)施例4 (3’S,5R,S)-5-[N-甲基-N-(3’,6’-二氨基己?；?氨基]-5,6-二氫-2-脲基-4(1H)-嘧啶酮-二鹽酸鹽將1.0g(2.6mmol)(3S)-3-芐氧羰基氨基-6-叔丁氧羰基氨基己酸和5ml 4M氯化氫在二噁烷中的溶液在23℃攪拌30分鐘。減壓除去揮發(fā)性成分。由此得到油狀殘余物，該產(chǎn)物無需純化即用于下一步反應(yīng)。
將100mg殘余物懸浮在3ml二氯甲烷中，加入34mg(0.316mmol)氯三甲基硅烷。所得溶液在40℃加熱1小時(shí)，然后冷卻至0℃，并依次與45mg(0.474mmol)氯甲酸芐酯和80mg(0.789mmol)三乙胺混合。該混合物在40℃加熱1小時(shí)。然后加入0.7ml甲醇。該混合物在23℃攪拌10分鐘，然后減壓除去揮發(fā)性成分。將殘余物溶解在二氯甲烷中。用2M鹽酸洗滌有機(jī)相，有機(jī)相用硫酸鈉干燥，并除去溶劑，殘余物用乙醚消化。過濾并減壓干燥，得到100mg(3S)-3,6-二-(芐氧羰基氨基)己酸，為白色固體。1H-NMR(200MHz,DMSO):1.41(m,4H),2.33(d,2H),2.95(m,2H),3.78(m,1H),5.02(s,2H),7.22(m,2H),7.33(m,5H)。MS(DCI/NH3):432(M+NH4)+。
按照實(shí)施例1所述的方法，將(5R,S)-3,4,5,6-四氫-5-甲基氨基-2-脲基嘧啶-4-酮與(3S)-3,6-二-(芐氧羰基氨基)己酸，然后除去芐氧羰基保護(hù)基。得到非晶形固體狀的標(biāo)題化合物。1H-NMR(400MHz,D2O):0.88(m,1H),0.93(m,1H),1.05(m,1H),1.12(m,2H),2.81-3.02(m,5H),3.07(m,2H),3.92(m,2H),4.95(m,1H)。實(shí)施例5 (3’S,5R,S)-5-[N-甲基-N-(3’,7’-二氨基庚?；?氨基]-5,6-二氫-2-脲基-4(1H)-嘧啶酮二鹽酸鹽按照實(shí)施例1所述的方法，將86mg(0.47mmol)of(5R,S)-3,4,5,6-四氫-5-甲氨基-2-脲基嘧啶-4-酮與200mg(0.47mmol)(3S)-3,7-二(芐氧羰基氨基)庚酸偶合，然后除去芐氧羰基保護(hù)基。得到白色固體狀的標(biāo)題化合物(57mg,30％)。1H-NMR(400MHz,CD3OD):1.55(m,2H),1.74(m,4H),2.75(m,1H),2.96(m,3H),3.14(m,3H),3.58(m,1H),3.89(m,1H),4.01(m,1H),5.14(m,1H)。
按照實(shí)施例1所述方法，將76.5mg(0.41mmol)(5R,S)-3,4,5,6-四氫-5-甲氨基-2-脲基嘧啶-4-酮與所述酸偶合，然后除去芐氧羰基保護(hù)基。得到米色固體標(biāo)題化合物(180mg,99％)。1H-NMR(400MHz,CD3OD)；1.70(m,4H),2.72-2.94(m,2H),2.84(s,3H),3.14(s,3H),3.23(m,2H),3.61(m,IH),3.90(m,IH),4.02(dt,1H),5.15(m,1H)。
將所述產(chǎn)物(630mg,1.95mmol)溶解在10ml二氯甲烷中，并在0℃與300μl(2.15mmol)三乙胺和310μl(2.15mmol)氯甲酸芐酯混合。在室溫?cái)嚢柙摶旌衔?6小時(shí)，有機(jī)相用水洗滌兩次，并用Na2SO4干燥，減壓除去溶劑。殘余物經(jīng)硅膠色譜純化(乙酸乙酯/環(huán)己烷1∶1)。由此得到515mg(58％)(3S)-3-芐氧羰基氨基-6-[(芐氧羰基)乙基氨基]己酸甲酯，為白色固體。1H-NMR(200MHz,DMSO):1.02(t,3H),1.40(m,4H),2.42(m,2H),3.18(m,4H),3.56(s,3H),3.82(m,1H),5.01(s,2H),5.06(s,2H),7.25(m,1H),7.35(m,10H)。MS(ESI):457(M+H)+。
將所述產(chǎn)物(510mg,1.12mmol)溶解在4ml二氯甲烷中，并在室溫與158mg(1.30mmol)三甲基甲硅烷醇鉀混合。在室溫?cái)嚢柙摶旌衔?6小時(shí)，用20ml二氯甲烷稀釋，并用1M鹽酸洗滌，有機(jī)相用Na2SO4干燥并減壓除去揮發(fā)性成分。由此得到463mg(94％)(3S)-3-芐氧羰基氨基-6-[(芐氧羰基)乙基]氨基己酸，為白色固體。1H-NMR(200MHz,DMSO):1.02(t,3H),1.40(m,4H),2.35(m,2H),3.20(m,4H),3.81(m,1H),5.00(s,2H),5.05(s,2H),7.25(m,1H),7.33(m,10H)。MS(ESI):443(M+H)+。
按照實(shí)施例1所述方法，將42mg(0.27mmol)(5R,S)-3,4,5,6-四氫-5-甲基氨基-2-脲基嘧啶-4-酮與100mg(0.27mmol)所述酸偶合，然后除去芐氧羰基保護(hù)基。得到白色固體狀標(biāo)題化合物(60mg,64％)。1H-NMR(400MHz,CD3OD):1.32(t,3H),1.83(m,4H),2.80(dd,1H),2.95-3.18(m,5H),3.19(s,3H),3.61(m,1H),3.90(ddd,1H),4.03(dt,1H),5.18(m,1H)。MS(ESI):342(M+H)+。
按照實(shí)施例1所述方法，將46mg(0.25mmol)(5R,S-3,4,5,6-四氫-5-甲基氨基-2-脲基嘧啶-4-酮與100mg(0.25mmol)(3S)-3,5-二-(芐氧羰基氨基)戊酸偶合，然后除去芐氧羰基保護(hù)基。得到白色固體狀的標(biāo)題化合物。(25mg,27％)。1H-NMR(400MHz,CD3OD):2.10(m,2H),2.86(dd,1H),3.04(m,1H),3.10(dd,2H),3.18(s,3H),3.72(m,1H),3.89(ddd,1H),4.02(dt,1H),5.19(m,1H)。
按照實(shí)施例1所述方法，將120mg(0.60mmol)(5R,S)-3,4,5,6-四氫-5-乙基氨基-2-脲基嘧啶-4-酮(與甲基化合物的合成類似參見V.V.Sokolov,S.I.Kozhushkov,S.Nikolskaya,V.N.Belov,M.Es-Sayed,A.de Meijere,Eur.J.Org.Chem.1998,777)與250mg(0.60mmol)(3S)-3,6-二-(芐氧羰基氨基)己酸偶合，然后除去芐氧羰基保護(hù)基。得到非晶形固體狀的標(biāo)題化合物(115mg,48％)。1H-NMR(400MHz,CD3OD):1.26(t,3H),1.78(m,4H),2.62-2.90(m,2H),2.98(m,2H),3.49(m,1H),3.63(m,2H),3.89(m,1H),4.08(m,1H),4.62(m,1H)。MS(ESI):328(M+H)+。
向用氨飽和的9ml乙醇溶液中加入0.88g(2.9mmol)所得酯。在封閉的瓶中，將該混合物在100℃(浴溫)加熱6小時(shí)。冷卻至室溫后，減壓除去揮發(fā)性成分。將殘余物溶解在15ml二氯甲烷中。將所得溶液冷卻至0℃，并依次與0.58ml(4.2mmol)三乙胺和0.51ml(3.6mmol)氯甲酸芐酯混合。使該混合物溫?zé)嶂潦覝夭⒃贁嚢?5小時(shí)。該混合物用50ml二氯甲烷稀釋并用1M鹽酸洗滌，有機(jī)相用Na2SO4干燥，并減壓除去揮發(fā)性成分。殘余物經(jīng)硅膠色譜純化(乙酸乙酯/環(huán)己烷1∶3-1∶2)，得到194mg(14％)(3R,S)-3,8-二(芐氧羰基氨基)辛酸乙酯[MS(ESI):471(M+H)+]和248mg(19％)(3R,S)-3,8-二(芐氧羰基氨基)辛酸甲酯[MS(ESI):457(M+H)+]，為無色油狀。將兩種產(chǎn)物合并，溶解在10ml二氯甲烷中，并與280mg(1.9mmol)三甲基甲硅烷醇鉀混合。該混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)，再加入100mg三甲基甲硅烷醇鉀并繼續(xù)攪拌1小時(shí)。該混合物用20ml二氯甲烷稀釋，有機(jī)相用2M鹽酸洗滌，用Na2SO4干燥并減壓除去溶劑。由此得到393mg(93％)(3R,S)-3,8-二(芐氧羰基氨基)辛酸，為白色固體。1H-NMR(300MHz,DMSO):1.21(m,4H),1.38(m,4H),2.36(m,2H),2.95(q,2H),3.77(m,1H),5.01(s,4H),7.14(m,1H),7.35(m,10H),12.08(s,1H)。
按照實(shí)施例1所述方法，將200mg(0.45mmol)所制備的酸與84mg(0.45mmol)(5R,S)-3,4,5,6-四氫-5-甲基氨基-2-脲基嘧啶-4-酮偶合，然后除去芐氧羰基保護(hù)基。得到白色固體標(biāo)題化合物(175mg,94％)。1H-NMR(400MHz,CD3OD):1.47(m,4H),1.72(m,4H),2.75(m,1H),2.94(m,3H),3.15(m,3H),3.58(m,1H),3.90(m,1H),4.03(m,1H),5.18(m,1H)。MS(ESI):342(M+H)+。
將殘余物溶解在15ml THF中，并在0℃與1.96g(12.1mmol)N,N-羰基二咪唑分批混合。該混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)(溶液A)。
在第二個(gè)反應(yīng)瓶中，將960mg(10.1mmol)氯化鎂和2.75g(15.1mmol)丙二酸乙酯鉀鹽在25ml THF中的溶液于50℃加熱4小時(shí)。使該混合物冷卻至室溫，然后滴加預(yù)先制備的溶液A并與之混合。將該混合物在室溫?cái)嚢柽^夜。
用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸掉溶劑，并將殘余物溶解在20ml水和50ml二氯甲烷中。有機(jī)相經(jīng)硅藻土過濾，并用硫酸鈉干燥。殘余物經(jīng)閃式柱純化(硅膠，流動(dòng)相環(huán)己烷/乙酸乙酯從10∶1增加極性至1∶1)。由此得到617mg(36％)5-氰基-3-氧代戊酸乙酯。1H-NMR(300MHz,DMSO)1.19(t,3H),2.60(t,2H),2.95(t,2H),3.62(s,2H),4.10(q,2H)。MS(EI):169(M)+。
將3.80g(22.4mmol)5-氰基-3-氧代戊酸乙酯溶解在5ml飽和乙醇氨溶液中，并在室溫?cái)嚢?4小時(shí)。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸掉揮發(fā)性成分，得到3.60g(95％)3-氨基-5-氰基-2-戊烯酸乙酯。1H-NMR(300MHz,DMSO)1.16(t,3H),2.37(t,2H),2.75(t,2H),3.99(q,2H),4.41(s,1H),6.96(s，寬，1H),7.69(s，寬，1H)。MS(DCI/NH3):169(M+H)+,186(M+NH4)+,337(2M+H)+。
在0℃，向56.0mg(892μmol)氰基硼氫化鈉在1ml無水甲醇中的溶液中滴加50.0mg(297μmol)3-氨基-5-氰基-2-戊烯酸乙酯在1ml甲醇中的溶液。將該混合物與6滴冰醋酸混合，移去冷浴，并在室溫?cái)嚢?小時(shí)。
將該混合物與1ml飽和碳酸氫鈉溶液混合，并用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮。水相用各5ml二氯甲烷萃取兩次。有機(jī)相用硫酸鈉干燥，并用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸出溶劑。得到39.9mg(79％)所需的3-氨基-5-氰基戊酸乙酯。1H-NMR(300MHz,DMSO)1.19(t,3H),1.49(m,1H),1.68(m,1H),2.27(dd,1H),2.40(dd,1H),2.55(t,2H),3.00(m,1H),4.08(q,2H)。MS(DCI/NH3):171(M+H)+。
在室溫下向470mg(2.76mmol)的3-氨基-5-氰基戊酸乙酯和458mg(3.31mmol)的碳酸鉀在10ml二噁烷/水(1∶1)中的溶液中滴加723mg(3.31mmol)BOC酐在0.5ml二噁烷中的溶液。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸掉揮發(fā)性成分，并用各5ml二氯甲烷萃取殘余物兩次。有機(jī)相用硫酸鈉干燥，并用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸掉溶劑。粗產(chǎn)物經(jīng)閃式柱純化(硅膠，流動(dòng)相∶環(huán)己烷/乙酸乙酯從20∶1增加極性至1∶1)。由此得到505mg(68％)3-[(叔丁氧羰基)氨基]-5-氰基戊酸乙酯。1H-NMR(300MHz,DMSO)1.19(t,3H),1.35(s,9H),1.70(m,2H),2.48(m,4H),3.81(m,1H),4.02(q,2H),6.80(m,1H)。MS(DCI/NH3):288(M+NH4)+。
將213mg(1.66mmol)三甲基甲硅烷醇鉀加入300mg(1.11mmol)3-[(叔丁氧羰基)氨基]-5-氰基戊酸乙酯在1ml二氯甲烷中的溶液中，并在室溫?cái)嚢柙摶旌衔铩?小時(shí)后，再加入213mg三甲基甲硅烷醇鉀，并攪拌該混合物30分鐘。
將該混合物與1ml飽和氯化銨溶液混合，并用2ml二氯甲烷萃取。水相用1M鹽酸調(diào)節(jié)至pH1，并用各3ml二氯甲烷萃取兩次。合并的有機(jī)相用硫酸鈉干燥，并用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去溶劑。由此得到177mg(66％)所需的3-[(叔丁氧羰基)氨基]-5-氰基戊酸。1H-NMR(300MHz,d6-DMSO)1.38(s,9H),1.65(m,1H),1.75(m,1H),2.38(m,2H),2.45(m,2H),3.79(m,1H),6.80(d,1H),12.20(s，寬，1H)。MS(DCI/NH3):260(M+NH4)+。
按照實(shí)施例1所述方法，將15mg(82μmol)3-[(叔丁氧羰基)氨基]-5-氰基戊酸與(5R,S)-3,4,5,6-四氫-5-甲基氨基-2-脲基嘧啶-4-酮偶合。產(chǎn)率32％。除去BOC保護(hù)基，將粗產(chǎn)物溶解在1ml 4M HCl的二噁烷溶液中，并在室溫?cái)嚢?0分鐘。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸掉所有揮發(fā)性成分。將殘余物溶解在甲醇中，滴加丙酮并混合，直至形成沉淀。傾析出上清液，并在油泵抽真空下除去殘留的溶劑，得到白色固體。由此得到2.1mg(28％)標(biāo)題化合物。MS(DCI):311(M+H)+。
權(quán)利要求
1．通式(Ⅰ)化合物及其可藥用鹽 其中R1表示氫或(C1-C6)烷基，X表示式-(CH2)m-基團(tuán)，其中m是0、1或2,D選自式D1至D3基團(tuán) 其中R2表示氫或羥基，R3表示氫，或者R3和R3結(jié)合在一起形成氧代基，Y表示直鏈或支鏈(C1-C5)鏈烷二基，其中一個(gè)碳原子可以任選地被-O-或-NH-置換，并且該基團(tuán)可以任選地被羥基或氧代基取代，或者Y表示下式基團(tuán) 和 其中r和s彼此相同或不同，并且是0、1或2，Z表示選自下式的基團(tuán) 和-CN，其中R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18和R19各彼此獨(dú)立地選自氫、(C1-C6)烷基、(C1-C4)鏈烷?；?、叔丁氧羰基、芐氧羰基和芐基，Q表示氧或硫，p是1、2或3，和Het表示具有1至4個(gè)氮原子的5-或6-元雜芳基，排除下列化合物，其中R1表示甲基，m是1,D表示D1,Y表示-(CH2)3-，并且Z表示下式基團(tuán)
2．權(quán)利要求1的通式(Ⅰ)化合物及其可藥用鹽，其中R1表示氫或(C1-C6)烷基，X表示式-(CH2)m-基團(tuán)，其中m是0、1或2，D選自式D1至D3基團(tuán) 其中R2表示氫或羥基，R3表示氫，或者R2和R3一起形成氧代基，Y表示直鏈或支鏈(C1-C5)鏈烷二基，其中一個(gè)碳原子可以任選地被-O-或-NH-置換，并且該基團(tuán)可以任選地被羥基或氧代基取代，或者Y表示下式基團(tuán) 和 其中r和s彼此相同或不同，它們是0、1或2，Z表示選自下式的基團(tuán) 和 其中R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18和R19各彼此獨(dú)立地選自氫、(C1-C6)烷基、(C1-C4)鏈烷酰基、叔丁氧羰基、芐氧羰基和芐基，Q表示氧或硫，p是1、2或3，和Het表示具有1-4個(gè)氮原子的5-或6-元雜芳基，但是不包括下列化合物，其中R1表示甲基，m是1,D表示D1,Y表示-(CH2)3-并且Z表示下式基團(tuán)
3．權(quán)利要求1或2的化合物，其中m是1或2。
4．權(quán)利要求1、2或3的化合物，其中Y表示直鏈或支鏈(C1-C5)鏈烷二基。
5．權(quán)利要求1、2、3或4的化合物，其中Y表示下式基團(tuán) 其中r和s如上所定義。
6．權(quán)利要求1-5中任何一項(xiàng)的化合物，其中Y表示間亞苯基。
7．權(quán)利要求1-5中任何一項(xiàng)的化合物，其中r和s是0。
8．權(quán)利要求1-7中任何一項(xiàng)的化合物，其中Z表示下式基團(tuán) 其中R18和R19如權(quán)利要求1所定義。
9．權(quán)利要求1-7中任何一項(xiàng)的化合物，其中Z表示下式基團(tuán) 或 其中R4、R5、R6、R7和R17如權(quán)利要求1所定義。
10．權(quán)利要求1-7和9中任何一項(xiàng)的化合物，其中Z表示下式基團(tuán) 其中R4、R5、R6和R7如權(quán)利要求1所定義。
11．權(quán)利要求1-7和9中任何一項(xiàng)的化合物，其中Z表示下式基團(tuán) 其中Het選自下列基團(tuán) 并且R17如權(quán)利要求1所定義。
12．權(quán)利要求1-7、9和11中任何一項(xiàng)的化合物，其中Z表示下式基團(tuán) 其中Het表示2-吡啶基、3-吡啶基或4-吡啶基，并且R17如權(quán)利要求1所定義。
13．權(quán)利要求1-7、9、11和12中任何一項(xiàng)的化合物，其中Z表示下式基團(tuán) 其中Het表示2-吡啶基，并且R17表示氫。
14．權(quán)利要求1-13中任何一項(xiàng)的化合物，其中D表示下式基團(tuán)
15．權(quán)利要求1-13中任何一項(xiàng)的化合物，其中D表示下式基團(tuán)
16．權(quán)利要求1-13中任何一項(xiàng)的化合物，其中D表示下式基團(tuán)
17．權(quán)利要求1或2中的下式化合物及其可藥用鹽
18．權(quán)利要求1或2中的下式化合物及其可藥用鹽
19．制備權(quán)利要求1的化合物的方法，其特征在于在偶合劑存在下，并且任選地在堿存在下，將通式(Ⅱ)化合物與通式(Ⅲ)化合物反應(yīng)，并通過本身已知的方法除去被護(hù)氨基A中的常規(guī)保擴(kuò)基， 其中X、Y和Z如權(quán)利要求1中所定義，并且D’選自式D’1至D’3基團(tuán) 其中R2和R3如權(quán)利要求1中所定義，并且A是被常規(guī)保護(hù)的氨基， 其中R1如權(quán)利要求1中所定義。
20．權(quán)利要求19的方法，其中偶合劑選自六氟磷酸
(HATU)或六氟磷酸[溴-三-吡咯烷子基-鏻](PyBroP)。
21．用作藥物的權(quán)利要求1或2的化合物。
22．藥物組合物，含有權(quán)利要求1或2的化合物及可藥用載體或賦形劑。
23．權(quán)利要求1或2的化合物在制備藥物中的應(yīng)用。
24．權(quán)利要求1或2的化合物在制備治療和預(yù)防人或動(dòng)物細(xì)菌感染的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的天然物質(zhì)的衍生物,其制備方法,含有這些衍生物的藥物組合物及其在治療人或動(dòng)物疾病中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)C07D401/00GK1324348SQ99812643
公開日2001年11月28日 申請(qǐng)日期1999年8月20日 優(yōu)先權(quán)日1998年8月27日
發(fā)明者M·布蘭茲, M·埃斯-薩耶德, D·海比希, S·拉達(dá)茨, J·克呂格爾, R·恩德爾曼, R·加爾曼, H·P·克羅爾, F·U·格施克, A·德梅杰雷, V·N·貝洛夫, V·索科洛夫, S·科朱施科夫, M·科爾德斯 申請(qǐng)人:拜爾公司