專利名稱：1,3－氧硒戊環(huán)核苷的合成及抗人類免疫缺陷病毒和抗乙肝病毒活性的制作方法
背景技術(shù)：
美國(guó)國(guó)家變應(yīng)性和感染性疾病研究院(National Institute ofAllergy and Infectious Disease)和退伍軍人事務(wù)部(the Departmentof veterans Affairs)部分地資助本發(fā)明的研究，本發(fā)明源于這兩個(gè)單位的美國(guó)公共健康服務(wù)研究(U.S.Public Health ServiceResearch)基金資助，美國(guó)政府對(duì)本發(fā)明享有專利權(quán)。
本發(fā)明屬于合成核苷領(lǐng)域，具體講涉及1，3-氧硒戊環(huán)(oxaselenolane)核苷及其藥學(xué)用途、組合物和制備方法。
1981年，獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDS)被認(rèn)為是一種嚴(yán)重危害人類免疫系統(tǒng)的疾病，該疾病幾乎全部導(dǎo)致死亡。1983年，AIDS的病因確定為人類免疫缺陷病毒(HIV)。
1985年，據(jù)報(bào)道，合成核苷3′-疊氮-3′-脫氧胸苷(AZT)抑制人免疫缺陷病毒的復(fù)制。此后，許多其它合成核苷，包括2′，3′-二去氧肌苷(DDI)、2′，3′-二去氧胞苷(DDC)、2′，3′-二去氧-2′，3′-二脫氫胸苷(D4T)和(1S，4R)-4-[2-氨基-6-環(huán)丙基-氨基)-9H-嘌呤-9-基]-2-環(huán)戊烯-1-甲醇琥珀酸酯(“159U89”)，已經(jīng)證明能有效地抗HIV。通常地，在細(xì)胞激酶對(duì)5′-三磷酸酯的細(xì)胞磷酸化作用后，這些合成核苷摻入到生長(zhǎng)的病毒DNA鏈中，由于沒(méi)有3′-羥基基團(tuán)，導(dǎo)致鏈終止。它們還能抑制病毒反轉(zhuǎn)錄酶或DNA聚合酶。
各種合成核苷成功地抑制體內(nèi)或體外HIV的復(fù)制使許多研究人員設(shè)計(jì)和測(cè)試3′-位置碳原子被雜原子取代后的核苷。Norbeck等，公開(kāi)了(±)-1-[(2β，4β)-2-(羥甲基)-4-二氧戊環(huán)基]胸苷(稱為(±)-二氧戊環(huán)-T)顯示一定的抗HIV活性(對(duì)ATH8細(xì)胞的EC50為20μM)，并且在200μM的濃度時(shí)對(duì)未感染的對(duì)照細(xì)胞沒(méi)有毒性。四面體通訊(TetrahedronLetters)，30(46)，6246，(1989)。轉(zhuǎn)讓給BioChem Pharm，Inc的歐洲0337713號(hào)專利申請(qǐng)公開(kāi)和轉(zhuǎn)讓給該公司的US5041449公開(kāi)了顯示抗病毒活性的外消旋2-取代-4-取代-1，3-二氧戊環(huán)。已公開(kāi)的PCT申請(qǐng)PCT/US91/09124和PCT/US93/08044公開(kāi)了應(yīng)用純?chǔ)?D-1，3-二氧戊環(huán)核苷來(lái)治療HBV感染。PCT公開(kāi)了β-D-1，3-二氧戊環(huán)核苷用于治療HBV感染。
PCT/US95/11464公開(kāi)了(-)-(2S，4S)-1-(2-羥基甲基)-1，3-二氧戊環(huán)-4-基)胞嘧啶用于治療腫瘤和其它異常細(xì)胞增生。
BioChem Pharm，Inc的美國(guó)5047407號(hào)專利和該公司的歐洲0382526號(hào)專利申請(qǐng)公開(kāi)公開(kāi)了許多外消旋2-取代-5-取代-1，3-二氧戊環(huán)核苷具有抗病毒活性，并且特別報(bào)道了2-羥甲基-5-(胞嘧啶-1-基)-1，3-氧硫戊環(huán)(以下稱之為BCH-189)的外消旋混合物具有與AZT大致相同的抗HIV活性，但毒性較AZT低。在Liotta等的美國(guó)5539116號(hào)專利中，稱為3TC的BCH-189的(-)對(duì)映異構(gòu)體如今已在美國(guó)上市用于治療人的HIV。
已經(jīng)公開(kāi)順-2-羥甲基-5-(5-氟胞嘧啶-1-基)-1，3-氧硫戊環(huán)(下面稱之為“FTC”)具有強(qiáng)抗HIV活性。Schinazi等，“順-5-氟-1-[2-(羥甲基)-1，3-氧硫戊環(huán)-5-基]胞嘧啶的外消旋體和對(duì)映異構(gòu)體對(duì)人免疫缺陷病毒的選擇性抑制”，抗微生物試劑和化療(Antimicrobial Agentsand Chemotherapy)，1992年11月，2423-2431頁(yè)。還可參見(jiàn)美國(guó)5,210,085號(hào)專利、美國(guó)5,204,466號(hào)專利、WO91/11186以及WO92/14743。
另一種對(duì)人類造成嚴(yán)重健康問(wèn)題的病毒是乙肝病毒(以下稱“HBV”)。作為人癌癥的引發(fā)因素，HBV僅次于煙草。HBV的致癌機(jī)理尚不清楚。有假說(shuō)認(rèn)為它可能直接引發(fā)腫瘤的生長(zhǎng)，或者通過(guò)與感染相關(guān)的慢性炎癥、肝硬化以及細(xì)胞再生間接引發(fā)腫瘤的生長(zhǎng)。
經(jīng)過(guò)2-6個(gè)月宿主未察覺(jué)的潛伏期后，HBV感染能夠?qū)е录毙愿窝缀透螕p傷，從而引起異常的疼痛、黃疸和某些酶的血漿濃度升高。HBV能夠引起暴發(fā)性肝炎，它是一種迅速發(fā)展的經(jīng)常致死性疾病，其中肝臟的大部分受到損害。
病人患急性肝炎后一般會(huì)恢復(fù)。然而，對(duì)于有些病人，病毒抗原在血中長(zhǎng)時(shí)間或無(wú)限期保持高濃度，從而引起慢性感染。慢性感染可以造成慢性持續(xù)性肝炎。在發(fā)展中國(guó)家，感染慢性持續(xù)性乙肝病毒的病人是非常普遍的。截止1991年中期，僅在亞洲就有約2.25億慢性HBV攜帶者，在全球幾乎有3億攜帶者。慢性持續(xù)性肝炎可以造成疲勞、肝硬化和肝細(xì)胞癌(一種原發(fā)性肝癌)。
在西方工業(yè)化國(guó)家，HBV感染的高危人群包括那些與HBV攜帶者或它們的血樣品接觸的人。HBV的流行病學(xué)特征與獲得性免疫缺陷綜合癥非常相似，從而可以解釋為什么在患有AIDS或AIDS相關(guān)綜合征的病人中常常發(fā)生HBV感染。然而HBV比HIV傳染性更強(qiáng)。
FTC和3TC均顯示抗HBV活性。參見(jiàn)Fumran等，“順-5-氟-1-[2-(羥甲基)-1，3-氧硫戊環(huán)-5-基]-胞嘧啶的(-)和(+)對(duì)映異構(gòu)體的抗乙肝病毒活性、細(xì)胞毒性和合成代謝特征”，抗微生物劑和化療(Antimicrobial Agents and Chemotherapy)，1992年12月，2686-2692頁(yè)；和Cheng等，生物化學(xué)雜志(Journal of BiologicalChemistry)，267(20)卷，13938-13942(1992)。
已經(jīng)開(kāi)發(fā)了人血清來(lái)源的疫苗用于使患者免受HBV感染，而且最近疫苗已經(jīng)通過(guò)基因工程產(chǎn)生，并在目前得到廣泛應(yīng)用。但不幸的是，疫苗不能治療那些已經(jīng)感染HBV的病人。應(yīng)用一種基因工程蛋白α-干擾素的每日治療也顯示了一定的治療前景，但這種治療只對(duì)約1/3的治療病人是成功的，而且，干擾素不能口服。
由于1，3-二氧戊環(huán)和1，3-氧硫戊環(huán)核苷類已經(jīng)顯示了有價(jià)值的抗病毒和抗癌活性，為了尋找有生物價(jià)值的核苷，合成其電子等排體類化合物1，3-氧硒戊環(huán)核苷引起了人們的興趣。雖然它們的結(jié)構(gòu)與3′-雜原子被取代的核苷相似，但由于合成氧硒戊環(huán)結(jié)構(gòu)的難度，合成1，3-氧硒戊環(huán)核苷還是較困難的。正因如此，未見(jiàn)1，3-氧硒戊環(huán)核苷的報(bào)道。
由于這樣一個(gè)事實(shí)即獲得性免疫缺陷綜合癥、AIDS相關(guān)綜合癥和乙肝病毒已在世界范圍內(nèi)流行并使感染病人非常悲慘，因此非常需要提供有效的治療這些疾病的新制劑。
因此，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種治療感染HIV的病人的方法和組合物。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種治療感染HBV的病人或其它宿主動(dòng)物的方法和組合物。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種合成1，3-氧硒戊環(huán)核苷的方法。
本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供1，3-氧硒戊環(huán)核苷和包括1，3-氧硒戊環(huán)核苷的藥物組合物。
發(fā)明概述本發(fā)明公開(kāi)一種治療HIV或HBV感染的病人及其它宿主動(dòng)物的方法和組合物，包括施用有效量的在任選可藥用載體中的1，3-氧硒戊環(huán)核苷或其可藥用鹽。
在一個(gè)實(shí)施方案中，1，3-氧硒戊環(huán)核苷具有下列通式
其中B是嘌呤或嘧啶堿基，R為氫、?；蛄姿狨?，包括單磷酸酯、二磷酸酯或三磷酸酯。在另一個(gè)實(shí)施方案中，1，3-氧硒戊環(huán)核苷是以親脂性或親水性前藥的形式提供，這將在下面詳細(xì)描述。在另一個(gè)供選擇的實(shí)施方案中，分子中的硒原子被氧化。優(yōu)選的1，3-氧硒戊環(huán)核苷在不高于約5微摩爾的濃度下在體外試驗(yàn)中就能顯示抗HIV或抗HBV活性，最優(yōu)選的1，3-氧硒戊環(huán)核苷在約1微摩爾或更低的濃度就能在體外試驗(yàn)中顯示這些活性，這些物質(zhì)例如在本申請(qǐng)中詳細(xì)描述的物質(zhì)。治療HIV和HBV時(shí)，在體外試驗(yàn)中顯示IC50毒性例如此處記載的高于50微摩爾、和更優(yōu)選地約100微摩爾或更高的1，3-氧硒戊環(huán)核苷也是優(yōu)選的。
1，3-氧硒戊環(huán)核苷優(yōu)選為分離的對(duì)映異構(gòu)體β-L-核苷或β-D-核苷。在一個(gè)實(shí)施方案中，核苷是基本上純的β-L-或β-D-核苷，即基本上不存在相應(yīng)的β-D-或β-L-核苷。
優(yōu)選的化合物是2-羥甲基-4-(N-5′-胞嘧啶-1’-基)-1，3-氧硒戊環(huán)和2-羥甲基-4-(N-5′-氟胞嘧啶-1’-基)-1，3-氧硒戊環(huán)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)這些核苷的分離的(-)-β-L-異構(gòu)體比它們的β-D-對(duì)映體更有效。然而，這些化合物的(+)對(duì)映體對(duì)CEM細(xì)胞沒(méi)有毒性。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，活性化合物或者其衍生物或鹽可以與其它抗病毒劑如在第IV部分更詳細(xì)描述的其它抗HIV或抗HBV劑聯(lián)合給藥或交替給藥。通常地，在交替給藥治療期間，有效劑量的每種藥劑順序給藥、而在聯(lián)合給藥治療中，有效劑量的兩種或更多試劑一起給藥。給藥的劑量依據(jù)藥物的吸收、失效和排泄速率以及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它因素而定。應(yīng)該注意的是由于所需治療疾病的嚴(yán)重程度不同，給藥的劑量值也可以相應(yīng)變化。還需要理解的是對(duì)于任何一個(gè)具體的病人，根據(jù)個(gè)體需要以及根據(jù)給藥人員或監(jiān)督給藥人員的職業(yè)判斷，應(yīng)該隨時(shí)調(diào)整具體的用藥方法和方案。
這些化合物還可以用于治療馬傳染性貧血病毒(EIAV)、貓免疫缺陷病毒和猴免疫缺陷病毒(Wang，S.，Montelaro，R.，Schinazi，R.R.，Jagerski，B.和Mellors，J.W.核苷和非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NNRTI)的抗馬傳染性貧血病毒(EIAV)活性。第一屆全國(guó)人類逆轉(zhuǎn)錄病毒和相關(guān)感染會(huì)議(First National Conference on HumanRetroviruses and Related Infections)，華盛頓，DC，1993年12月12-16日；Sellon D.C.，馬傳染性貧血，Vet.Clin.North Am.EquinePrac.美國(guó)，9321-336，1993；Philpott，M.S.，Ebner，J.P.，Hoover，E.A.，應(yīng)用定量聚合酶鏈反應(yīng)評(píng)價(jià)9-(2-膦?；籽跻一?腺嘌呤對(duì)貓免疫缺陷病毒的治療，Vet.Immunol.Immunopathol.35155166，1992)。
附圖簡(jiǎn)述

圖1表示本發(fā)明實(shí)施例1中描述的1，3-氧硒戊環(huán)核苷的一種制備方法。
圖2表示本發(fā)明實(shí)施例3中描述的β-D和β-L-1，3-氧硒戊環(huán)核苷的一種制備方法。
圖3表示[2-(1’R，2’S，5’R)-薄荷基-(5-酮-1，3-氧硒戊環(huán))]-L-羧酸酯的x-射線晶體結(jié)構(gòu)圖。
圖4表示(+)-β-Se-ddC、(-)-β-Se-ddc、(+)-β-Se-FddC和(-)-β-Se-Fddc對(duì)映體的結(jié)構(gòu)。
發(fā)明詳述此處所用的術(shù)語(yǔ)“分離的對(duì)映異構(gòu)體”指含有至少約95-100％或更優(yōu)選地，大于97％的核苷單一對(duì)映異構(gòu)體的核苷組分術(shù)語(yǔ)“基本上純凈形式”是指一種對(duì)映異構(gòu)體的核苷組分，它包括另一種對(duì)映體的量不高于5％重量比、更優(yōu)選不高于2％重量比和最優(yōu)選不高于1％重量比。
術(shù)語(yǔ)“嘌呤或嘧啶堿基”包括但不限于N6-alyl嘌呤、N6-乙酰嘌呤、N6-芐基嘌呤、N6-鹵代嘌呤、N6-乙烯基嘌呤、N6-炔基嘌呤、N6-酰基嘌呤、N6-羥烷基嘌呤、N6-硫烷基嘌呤、N2-烷基嘌呤、N4-烷基嘧啶、N4-?；奏?、N4-芐基嘌呤、N4-鹵代嘧啶、N4-乙烯基嘧啶、N4-炔基嘧啶、N4-酰基嘧啶、N4-羥烷基嘧啶、N6-硫烷基嘧啶、胸腺嘧啶、胞嘧啶、6-氮雜嘧啶包括6-氮雜胞嘧啶、2-和/或4-巰基嘧啶、尿嘧啶、C5-烷基嘧啶、C5-芐基嘧啶、C5-鹵代嘧啶、C5-乙烯基嘧啶、C5-炔基嘧啶、C5-?；奏?、C5-羥烷基嘌呤、C5-酰氨基嘧啶、C5-氰基嘧啶、C5-硝基嘧啶、C5-氨基嘧啶，N2-烷基嘌呤、N2-烷基-6-硫代嘌呤、5-氮雜胞嘧啶基、5-氮雜脲嘧啶基、三唑并嘧啶基(trazolopyridinyl)、咪唑并嘧啶基、吡咯并嘧啶基，和吡唑并嘧啶基。需要時(shí)可以保護(hù)堿中的氧和氮官能團(tuán)。合適的保護(hù)基團(tuán)是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，包括三甲基甲硅烷基、二甲基己基甲硅烷基、叔丁基二薄荷基甲硅烷基，和叔丁基二苯基甲硅烷基、三苯甲基、烷基、?；缫阴；捅；?，甲磺?；蛯?duì)甲苯磺?；?yōu)選的堿包括胞嘧啶、5-氟胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶、腺嘌呤、鳥(niǎo)嘌呤、黃嘌呤、2，6-氨基嘌呤、6-氨基嘌呤和6-氯嘌呤。
此處所用的術(shù)語(yǔ)烷基，除特別說(shuō)明外，是指飽和的，直鏈、支鏈或環(huán)狀的，伯、仲或叔的烴基，典型地是C1-C18，具體包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基、環(huán)戊基、異戊基、新戊基、己基、異己基、環(huán)己基、環(huán)己基甲基、3-甲基戊基、2，2-二甲基丁基，和2，3-二甲基丁基。烷基可以任選地被一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，這些取代基團(tuán)選自羥基、氨基、烷基氨基、芳氨基、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、磺酸、磺酸酯、磷酸、磷酸酯或膦酸酯，根據(jù)需要可以對(duì)其進(jìn)行保護(hù)或不保護(hù)，這些是本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員已知的，例如如Greene等在“有機(jī)合成的保護(hù)性基團(tuán)(Protective Groups in OrganicSynthesis)”.John wiley and Sons，第二版，1991年中所教導(dǎo)的，該文在此引入作為參考。
此處所用的術(shù)語(yǔ)低級(jí)烷基，除非特別說(shuō)明，指飽和的直鏈或支鏈C1-C4烷基。
在此所用的“保護(hù)的”是指為防止進(jìn)一步反應(yīng)或?yàn)槠渌康募尤氲窖?、氮或磷原子上的基團(tuán)(但另有說(shuō)明除外)。大量的氧和氮保護(hù)基團(tuán)是有機(jī)合成領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。
此處所用的術(shù)語(yǔ)芳基，除非特別說(shuō)明，是指苯基或聯(lián)苯基、或萘基，優(yōu)選苯基。芳基可以任選地被一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，這些基團(tuán)選自羥基、鹵素、烷基、烯基、炔基、烷芳基、芳烷基、氨基、烷基氨基、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、磺酸、磺酸酯、磷酸、磷酸酯或膦酸酯，根據(jù)需要可以為未保護(hù)或保護(hù)形式，而這種保護(hù)是本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員所已知的，例如見(jiàn)Greene等，“有機(jī)合成中的保護(hù)基(ProtectiveGroups in Organic Synthesis)”.John wiley and Sons，第二版，1991年中所教導(dǎo)。
術(shù)語(yǔ)烷芳基或烷基芳基是指帶有芳基取代基的烷基。
術(shù)語(yǔ)芳烷基或芳基烷基是指帶有烷基取代基的芳基。
此處所用的術(shù)語(yǔ)鹵素包括氯、溴、碘和氟。
術(shù)語(yǔ)?；侵甘?C(O)R′基團(tuán)，其中的R′為烷基、芳基、烷芳基、芳烷基、雜芳基、烷氧基烷基包括甲氧基甲基；芳烷基包括芐基；芳氧基烷基例如苯氧甲基；芳基包括被鹵素、C1-C4烷基或C1-C4烷氧基任意取代的苯基，或?yàn)榘被釟埢?br> 此處所用的術(shù)語(yǔ)“離去基團(tuán)”是那些能從分子中裂解但在正常狀況下與該分子相連的基團(tuán)。
術(shù)語(yǔ)氨基酸包括天然或合成氨基酸，包括但不限于丙氨酰、纈氨?；?、亮氨?；?、異亮氨?；?、脯氨?；?、苯丙氨?；⑸滨；?、蛋氨酰基、甘氨?；?、絲氨?；?、蘇氨?；腚装滨；⒗野滨；⑻於滨；⒐劝滨０坊?、天冬氨酰基、glutaroyl、賴氨?；⒕滨；徒M氨酰基。
此處所用的術(shù)語(yǔ)雜芳基或雜芳香基是指芳香環(huán)中包括至少一個(gè)硫、氧或氮的芳香基團(tuán)。非限制性的例子為呋喃基、吡啶基、嘧啶基、噻吩基、異噻唑基、咪唑基、四唑基、吡嗪基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、喹啉基、異喹啉基、苯并噻吩基、異苯并呋喃基、吡唑基、吲哚基、異吲哚基、苯并咪唑基、嘌呤基，咔唑基、噁唑基、噻唑基、異噻唑基、1，2，4-噻二唑基、異噁唑基、吡咯基、喹唑啉基、噠嗪基、吡嗪基、鄰二氮萘基、2，3-二氮雜萘基、喹喔啉基、黃嘌呤基、次黃嘌呤基和蝶啶基。雜環(huán)堿基的氧和氮官能團(tuán)根據(jù)需要可以進(jìn)行保護(hù)。合適的保護(hù)基團(tuán)是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，它們包括三甲基甲硅烷基、二甲己基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基和叔丁基二苯基甲硅烷基、三苯甲基和取代的三苯甲基，烷基、酰基例如乙?；捅；谆酋；?、和對(duì)甲苯磺酰基。
術(shù)語(yǔ)親脂性前藥是指這樣的1，3-氧硒戊環(huán)核苷，其在5′-羥基位置含有可以裂解的共價(jià)取代基因而使該核苷的親脂性比具有5′-羥基的母體核苷更強(qiáng)些。
術(shù)語(yǔ)親水性前藥是指這樣的1，3-氧硒核苷其在5′-羥基位置含有可以裂解的共價(jià)取代基因而使該核苷的親水性比具有5′-羥基的母體核苷更強(qiáng)些。
此處公開(kāi)的本發(fā)明是治療人或其它宿主動(dòng)物中HIV或HBV感染以及以類似方式復(fù)制的其它病毒感染的方法和組合物，包括給藥有效量在任選可藥用載體中的1，3-氧硒戊環(huán)核苷、其可藥用衍生物包括帶有5′-離去基團(tuán)的1，3-氧硒核苷包括?；说幕蛄姿狨セ难苌锘蚱淇伤幱名}。關(guān)于本發(fā)明的化合物，或者它們本身具有抗病毒活性如抗HIV-1、抗HIV-2和抗HBV或抗類似免疫缺陷病毒(抗-SIV)活性；或者它們經(jīng)代謝形成具有抗病毒活性的化合物。
本發(fā)明中，這些公開(kāi)的化合物或其可藥用衍生物或鹽或含有這些化合物的可藥用制劑可用于治療HIV感染或其它相關(guān)病癥如AIDS相關(guān)綜合癥(ARC)、持續(xù)性彌散淋巴結(jié)病(PGL)、AIDS相關(guān)性神經(jīng)學(xué)疾病、抗HIV抗體陽(yáng)性和HIV陽(yáng)性疾病、卡波濟(jì)氏肉瘤、血小板減少癥和機(jī)會(huì)感染。另外，這些化合物或制劑可以預(yù)防性地用于防止或阻止抗HIV抗體或HIV抗原陽(yáng)性或者感染HIV的病人的臨床疾病的發(fā)展。
該化合物或者其可藥用衍生物或鹽，或者含有該化合物或者其衍生物或鹽的制劑，也可用于預(yù)防和治療HBV感染和其它相關(guān)性疾病例如抗HBV抗體陽(yáng)性和HBV陽(yáng)性疾病、HBV引起的慢性肝炎、肝硬化、急性肝炎、暴發(fā)性肝炎、慢性持續(xù)性肝炎和疲勞。這些化合物或制劑可預(yù)防性地用于防止或阻止那些抗HBV抗體陽(yáng)性或HBV抗原陽(yáng)性或接觸HBV的個(gè)體的臨床疾病進(jìn)展。
該化合物可以與合適的酯化劑如酰鹵或酸酐反應(yīng)轉(zhuǎn)變成可藥用酯。該化合物或其可藥用衍生物可以通過(guò)常規(guī)方式如用合適的堿處理轉(zhuǎn)變成其可藥用鹽。該化合物的酯或鹽可以例如通過(guò)水解轉(zhuǎn)變成母體化合物。
總之，本發(fā)明包括如下特征(a)上面概括的1，3-氧硒戊環(huán)核苷、其可藥用衍生物和鹽；(b)用于醫(yī)療目的例如治療或預(yù)防HIV或HBV感染的1，3-氧硒戊環(huán)核苷、其可藥用衍生物和鹽；(c)應(yīng)用1，3-氧硒戊環(huán)核苷、其可藥用衍生物或鹽制備治療HIV和HBV感染的藥物；(d)含有1，3-氧硒戊環(huán)核苷、其可藥用衍生物或鹽和可藥用載體或稀釋劑的藥物制劑；(e)制備1，3-氧硒戊環(huán)的方法；和(f)通過(guò)與其它抗病毒劑聯(lián)合給藥或交替給藥，應(yīng)用1，3-氧硒戊環(huán)核苷治療病毒感染。
I.活性化合物和其生理上可接受的衍生物和鹽此處公開(kāi)的活性化合物是外消旋形式或分開(kāi)的對(duì)映體形式的1，3-氧硒戊環(huán)核苷。
給藥的活性化合物可以是給藥至接受者能夠直接或間接提供該母體化合物或者它本身顯示活性的任何一種衍生物。非限制性的例子是可藥用鹽(或者稱為“生理學(xué)上可接受的鹽”)和該活性化合物的5′和N4嘧啶或N6嘌呤被?；蛲榛难苌?或者稱為“生理活性衍生物”)。在一個(gè)實(shí)施方案中，?；鶊F(tuán)為羧酸酯，其中酯基的非羰基部分選自直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基或低級(jí)烷基，烷氧基烷基包括甲氧基甲基，芳烷基包括芐基，芳氧基烷基例如苯氧甲基、芳基包括任選由鹵素、C1-C4烷基或C1-C4烷氧基取代的苯基；磺酸酯例如烷基或芳烷基磺酰基如甲磺?；?，磷酸酯包括但不限于單、雙或三磷酸酯，三苯甲基或單甲氧基三苯甲基、取代的芐基、三烷基甲硅烷基(例如二甲基-5-丁基甲硅烷基)或二苯基甲基甲硅烷基。酯中的芳基任選地含有苯基。
對(duì)活性化合物的修飾，特別是在N4嘧啶基或N6嘌呤和5′-O位置的修飾可以影響該活性物質(zhì)的生物利用度和代謝速率，從而控制該活性物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)。另外，這些修飾可以影響該化合物的抗病毒活性，在某些情況下增加母體化合物的活性。根據(jù)此處描述的方法或本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員熟知的其它方法制備該衍生物并測(cè)試其抗病毒活性可以很容易地評(píng)價(jià)上述結(jié)論。
核苷前藥為了增加核苷的活性、生物利用度、穩(wěn)定性或改變其它性質(zhì)，此處描述的任何一種核苷均可以作為核苷前藥給藥。許多核苷前藥配體是已知的。通常地，核苷的烷基化、?；蚱渌姿釂熙?、雙酯或三酯的親脂性修飾會(huì)增加該核苷的穩(wěn)定性。能夠替換磷酸酯部分的一個(gè)或多個(gè)氫原子的取代基團(tuán)的例子是烷基、芳基、甾族化合物、包括糖的碳水化合物、1，2-二乙酰甘油和醇類。許多這些物質(zhì)記載在R.Jones和N.Bischofberger，抗病毒研究(Antiviral Research)，27(1995)1-17。所有這些前藥可以與公開(kāi)的核苷聯(lián)合用藥以達(dá)到預(yù)期效果。
在一個(gè)實(shí)施方案中，1，3-氧硒戊環(huán)核苷以5-羥基親脂性前藥形式提供。多篇非限制性美國(guó)專利中公開(kāi)了合適的與核苷共價(jià)結(jié)合優(yōu)選與核苷5-OH位置共價(jià)結(jié)合的親脂性取代基或親脂性制劑，這些美國(guó)專利包括美國(guó)專利號(hào)5,419,794(1992年9月22日；Yatvin等)；5,194,654(1993年3月16日，Hostetler等)；5,223,263(1993年6月29日，Hostetler等)；5,256,641(1993年10月26日，Yatvin等)；5,411,947(1995年5月2日，Hostetler等)；5,463,092(1995年10月31日，Hostetler等)；5,543,389(1996年8月6日，Yatvin等)；5,543,390(1996年8月6日，Yatvin等)；5,543,391(1996年8月6日，Yatvin等)；和5,554,728(1996年9月10日，Basava等)，所有這些文獻(xiàn)在此引入作為參考。
一些外國(guó)專利申請(qǐng)也公開(kāi)了可以與本發(fā)明中1，3-氧硒戊環(huán)核苷結(jié)合的親脂性取代基或親脂性制劑，這些包括WO89/02733，WO90/00555，WO91/16920，WO91/18914，WO93/00910，WO94/26273，WO/15132，EP0350287，EP93917054.4，和WO91/19721。
1，3-氧硒戊環(huán)核苷衍生物的其它非限制性實(shí)施例是含有下列出版物中公開(kāi)的取代基的衍生物。這些1，3-氧硒戊環(huán)核苷衍生物可以用于本文記載的指示劑或者作為抗病毒劑包括抗HIV或抗HBV試劑。Ho，D.H.W.(1973)1β-D-阿拉伯呋喃基胞嘧啶激酶和脫氨基酶在人或小鼠組織中的分布。癌癥研究(Cancer Res).33，2816-2820；Holy，A.(1993)等極性亞磷修飾的核苷類似物。InDe Clerq(編)，抗病毒藥物設(shè)計(jì)進(jìn)展(Advances in Antiviral Drug Design)，第1卷，JAI出版社，179-231頁(yè)；Hong，C.I.Nechaev，A.，和West，C.R.(1979a)，可的松和氫化可的松的1β-3-阿拉伯呋喃基胞嘧啶結(jié)合物的合成和抗腫瘤活性.，生物化學(xué)和生物物理學(xué)研究通訊(Biochem.Biophys.Rs.Commun.)88，1223-1229；Hong，C.I.，Nechaev，A.，Kirisits，A.J.Buchheit，D.J.和West，C.R.(1980)強(qiáng)效抗腫瘤試劑的核苷結(jié)合物。3.皮質(zhì)類固醇和精選的親脂性醇類的1-(β-D-阿拉伯呋喃)胞嘧啶結(jié)合物的合成和抗腫瘤活性，藥物化學(xué)雜志(J.Med.Chem).28，171-177；Hostetler，K.Y.，Stuhmiller，L.M.，Lenting，H.B.M.van den Bosch，H.和Richman，D.D.(1990)疊氮基胞嘧啶和其它抗病毒核苷的磷脂類似物的合成和抗反轉(zhuǎn)錄病毒活性，生物化學(xué)雜志(J.Biol.Chem.)266，11714-11717；Hostetler，K.Y.，Korba，B.，Sridhar，C.，Gerdener，M.(1994a)乙肝感染的細(xì)胞和小鼠增強(qiáng)型肝攝取中的磷脂?；?二脫氧胞嘧啶的抗病毒活性，抗病毒研究。(Antiviral Res.)24，59-67；Hostertler，K.Y.，Richman，D.D.，Sridhar，C.N.Felgner，P.L.，F(xiàn)elgner，J.，Ricci，J.，Gerdener，M.F.Selleseth，D.W.和Ellis，M.N.(1994b)磷脂酰疊氮胸腺嘧啶和磷脂酰-ddc鼠淋巴組織攝取和在人免疫缺陷病毒感染細(xì)胞和rauscher白血病病毒感染小鼠中抗病毒活性的評(píng)價(jià)，抗微生物試劑化療(Antimicrobial Agents Chemother.)38，2792-2797；Hunston，R.N.，Jones，A.A.McGuigan，C.，Walker，R.T.，Balzarini，J.，和De Clercq，E.(1984)一些衍生自2’-脫氧-5-氟尿嘧啶的環(huán)磷酸三酯的合成和生物特性，藥物化學(xué)雜志(J.Med Chem.)27，440-444；Ji，Y.H.，Moog，C.，Schmitt，G.，Bischoff，P.和Luu，B.(1990)；用作強(qiáng)效抗腫瘤劑的7β-羥基膽甾醇和嘧啶核苷的單磷酸雙酯合成和抗腫瘤活性的初步評(píng)價(jià)，藥物化學(xué)雜志(J.Med.Chem)33.2264-2270；Jones，A.S.，McGuigan，C.，Walter，R.T.，Balzarini，J.和DeClercq，E.(1984)一些核苷環(huán)氨基磷酸酯的合成、性質(zhì)和生物活性。J.Chem.Soc，Perkin Trans，I，1471-1474；Juodka，B.A.和Smart，J.(1974)一種(P→N)氨基酸ditribonucleoside的合成，Coll.Czech.Chem.Comm.39，363-968；Kataoka，S.，Imai，J.，Yamaji，N.，Kato，M.，Saito，M.，Kawada，T.和Imai，S.(1989)AlkylactedcMP衍生物；選擇性合成和生物活性。Nucleic Acids Res.Sym.Ser.，21，1-2；Kataoka，S.，Uchida，R.和Yamaji，N.(1991)3′，5′-環(huán)磷酸腺苷(cAMP)的芐基和甲基三酯的簡(jiǎn)易合成，雜環(huán)(Heterocycles)32，1351-1356；Kinchington，D.，Harvey，J.J.，O’connor，T.J..Jones.B.C.N.M.，Devine，K.G.，Taylor-Robinson，D.，Jeffries，D.J.和McGuigan，C.(1992)抗HIV和ULV的齊多呋定氨基磷酸酯和二氨基磷酸酯衍生物的體外抗病毒活性比較?？共《净瘜W(xué)?；?Antiviral Chem.Chemother.)，3，107-112；Kodama，K.，Morozumi，M.，Saitoh，K.I.，Kuninaka，H.，Yoshino，H.和Saneyoshi，M.(1989)1-β-D-阿拉伯呋喃基胞嘧啶-5 ′-十八烷基磷酸酯的抗腫瘤活性和藥理學(xué)；1-β-D-阿拉伯呋喃基胞嘧啶的口服活性衍生物。日本癌癥研究雜志(Jpn.J.Cancer Res.)80，679-685；Korty，M.和Engels，J.(1979)腺嘌呤和鳥(niǎo)嘌呤3′，5′-磷酸和芐基酯對(duì)豚鼠心室心肌層的作用，Naunyn-Schmiedeberg′s Arch.Pharmacol.310，103-111；Kumar，A.，Goe，P.L.，Jones，A.S.Walker，R.T.Balzarini，J.和DeClercq，E.(1990)一些環(huán)氨基磷酸核苷衍生物的合成和生物學(xué)評(píng)價(jià)，藥物化學(xué)雜志(J.Med.Chem.)33，2368-2375；LeBec，C.，和Huynh-dinh，T.(1991)作為抗腫瘤前藥的5-氟尿嘧啶和阿拉伯胞嘧啶的親脂性磷酸三酯衍生物的合成，四面體通訊(Tetrahedron Lett)32，6553-6556；Lichtenstein，J.，Barner，H.D.和Cohen S.S.(1960)大腸桿菌的外源性核苷的代謝，生物化學(xué)雜志(J.Biol.Chem.)235，457-465；Lucthy，J.，.Von Daeniken，A.，F(xiàn)riederich，J.Manthey，B.，Zweifel，J.，Schlatter，C.和Benn，M.H.(1981)三種天然氰基表硫代烷烴(cyanoepithioalkanes)的合成和毒理學(xué)特性。Mitt.Geg.Lebensmittelunters.Hyg.72，131-133(美國(guó)化學(xué)文摘，95，127093)；McGuigan，C.TOllerfield.S.M.和Riley.P.A.(1989)抗病毒藥物Ara的一些磷酸三酯衍生物的合成和生物學(xué)評(píng)價(jià)，核酸研究(Nucleic Acids Res.)17，6065-6075；McGuigan，C.，Devine，K.G.，O′Connor，T.J.，Galpin，S.A.，Jeffries，D.J.和Kinchington，D.(1990a)一些作為抗HIV化合物的3′-疊氮-3′-脫氧胸腺嘧啶(AZT)的新氨基磷酸酯衍生物的合成和評(píng)價(jià)，抗病毒化學(xué)化療，1，107-113；McGuigan，C.，O′Connor，T.J.，Nicholls，S.R.Nickson，C.和Kinchington，D(1990b)一些新的AZT和ddCyd取代二烷基磷酸酯衍生物的合成及抗HIV活性，抗病毒化學(xué)化療(AntiviralChem.Chemother.)，1，355-360；McGuigan，C.，Nicholls，S.R.，O′Connor，T.J.，和Kinchington(1990c)一些用作強(qiáng)效抗AIDS藥物的3′-位修飾核苷的新二烷基磷酸酯衍生物的合成，抗病毒化學(xué)化療(Antiviral Chem.Chemother)1，25-33；McGuigan，C.，Devine，K.G.，O′Connor，T.J.，和Kinchington，D.(1991)3′-疊氮-3′-脫氧胸腺嘧啶(AZT)的鹵烷基氨基磷酸酯衍生物的合成和抗HIV活性；三氯乙基甲氧丙氨酸基化合物的強(qiáng)活性，抗病毒研究(Antiviral Res).15，255-263；McGuigan，C.，Pathirana，R.N.，Mahmood，N.，Devine，K.G.和Hay，A.J.(1992)對(duì)抗AZT作用細(xì)胞系具有抗HIV1活性的AZT的芳基磷酸酯衍生物，抗病毒研究(Antiviral Res.)17，311-321；McGuigan，C.，Pathirana，R.N.，Choi，S.M.，Kinchington，D.和O′Connor，T.；J.(1993a)用作HIV抑制劑的AZT的氨基磷酸酯衍生物；對(duì)羧基末端的研究?？共《净瘜W(xué)化療(Antiviral Chem.Chemother.)4，97-101；McGuigan，C.，Pathirana，R.N.，Balzarini，J.和De Clercq，E.；(1993b)AZT的芳基磷酸酯衍生物對(duì)生物活性AZT核苷的細(xì)胞內(nèi)傳遞，藥物化學(xué)雜志(J.Med.Chem.)36，1048-1052。
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II活性化合物的制備迄今為止，由于合成1，3-氧硒戊環(huán)的環(huán)結(jié)構(gòu)有難度，1，3-氧硒戊環(huán)核苷因而沒(méi)有生產(chǎn)。本文在此提供一種生產(chǎn)該環(huán)的方法。圖1顯示該方法的一個(gè)實(shí)施方案。本文還提供生產(chǎn)分離的β-D(即2S，5R)和β-L 1，3-氧硒戊環(huán)(即2R，5S)核苷的方法。圖2表示該方法的一個(gè)實(shí)施例。圖1還提供下列實(shí)施例中所用化合物的編號(hào)方式。
實(shí)施例1 1，3-氧硒戊環(huán)的制備應(yīng)用Kirby的方法制備硒代氰酸酯得到非常高的產(chǎn)率。第一步，在乙醇中，溴代乙酸乙酯(BrCH2CO2Et)與硒代氰酸鉀反應(yīng)生成硒代氰酸酯2。
為了合成內(nèi)酯5，開(kāi)始曾經(jīng)試圖用NaBH4還原硒代氰酸酯2，然后用NaOH水解得到的酯生成硒醇乙酸，該物質(zhì)可用于氧硒戊環(huán)系統(tǒng)5的結(jié)構(gòu)。然而，在用HCl酸化至pH2期間，硒醇乙酸發(fā)生降解。據(jù)報(bào)道，硒醇在空氣中容易被氧氣氧化成穩(wěn)定的二聚體，該二聚體能用H3PO2又還原成硒醇。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，把雙(硒代乙酸)還原成硒醇以及環(huán)化反應(yīng)可以在一個(gè)反應(yīng)罐中進(jìn)行，無(wú)需分離中間產(chǎn)物。因此，1和KSeCN在乙醇中回流1小時(shí)，然后在0℃下用NaBH4還原20-30分鐘可得到二聚體3。與最近報(bào)道的聯(lián)硒化物制備方法相比，本方法反應(yīng)條件溫和、產(chǎn)率高并且容易后處理。通過(guò)3與乙酸水溶液(50％)回流24小時(shí)，然后用H3PO2還原成硒醇乙酸，進(jìn)而再在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，并在H3PO2存在下就地與2-芐氧基乙醛縮合，得到33％產(chǎn)率的內(nèi)酯5。還原內(nèi)酯5時(shí)，發(fā)現(xiàn)較之酯，DIBAL-H在THF中能夠選擇性地還原內(nèi)酯，而它在甲苯中沒(méi)有觀測(cè)到選擇性。因此，在THF中用DIBAL-H還原5，然后就地用乙酸酐乙?；玫揭宜崽酋?，無(wú)需純化，在SnCl4或TMSOTf存在下，縮合乙酸酯7與甲硅烷基化的堿得到?jīng)]有分離的8a和8b的α-和β-異構(gòu)體混合物。在甲醇中用甲胺或氨除去8a和8b中的保護(hù)性基團(tuán)苯甲?；玫溅?β-混合物核苷形式的終產(chǎn)物核苷。依次在甲醇/乙醚和甲醇中重復(fù)重結(jié)晶該α/β-混合物得到α-胞嘧啶核苷，而母液應(yīng)用HPLC分離(C18柱，20％的甲醇水溶液)得到β-胞嘧啶核苷(9a)。該α/β-混合物用硅膠色譜分離得到β和α-5-氟胞嘧啶核苷。應(yīng)用元素分析、1H和13CNMR確證了合成的硒雜戊環(huán)核苷的結(jié)構(gòu)。在2D-NOESY實(shí)驗(yàn)中，觀察到β-異構(gòu)體9b的2′-H和5′-H之間存在相關(guān)性，而在α-異構(gòu)體10b中發(fā)現(xiàn)沒(méi)有這種相關(guān)性，根據(jù)這個(gè)實(shí)驗(yàn)確定了其立體化學(xué)歸屬。同時(shí)，由于雜環(huán)堿基的去屏蔽作用，與10a和10b相比，9a和9b中的2H化學(xué)位移在高場(chǎng)，這也可以支持所述立體化學(xué)歸屬。
立體化學(xué)由于該核苷中1，3-氧硒戊環(huán)的1′和4′碳原子是手性碳原子，它們的非氫取代基(分別為吡啶或嘌呤堿基和CHOR基團(tuán))相對(duì)于糖環(huán)系統(tǒng)可以是順式(同面)或反式(異面)。因此這四種光學(xué)異構(gòu)體代表下列四種構(gòu)型(糖基定位在水平面，并且氧原子在后面)順式(兩個(gè)基團(tuán)都“向上”，相當(dāng)于天然核苷的構(gòu)型)、順式(兩個(gè)基團(tuán)都“向下”，非天然構(gòu)型)、反式(C2′取代基“向上”，C4′取代基“向下”)和反式(C2′取代基“向下”，C4′取代基“向上”)。“D-核苷”是天然構(gòu)型的順式核苷，“L-核苷”是非天然構(gòu)型的順式核苷。
通過(guò)兩種方式可得到1，3-氧硒戊環(huán)核苷的對(duì)映異構(gòu)體如實(shí)施例2中所述手性層析核苷；和分級(jí)結(jié)晶1，3-氧硒戊環(huán)的L-薄荷醇非對(duì)映體，繼之在路易絲酸存在下將已拆分的1，3-氧硒戊環(huán)核苷與所需的堿基進(jìn)行縮合。
實(shí)施例2 通過(guò)手性色譜拆分2-羥甲基-4-(n-5′-胞嘧啶-1′-基)-1，3-氧硒戊環(huán)和2-羥甲基-4-(n-5′-氟胞嘧啶-1′-基)-1，3-氧硒戊環(huán)的β-D和β-L對(duì)映異構(gòu)體通過(guò)手性色譜拆分2-羥甲基-4-(N-5′-胞嘧啶-1′-基)-1，3-氧硒戊環(huán)和2-羥甲基-4-(N-5′-氟胞嘧啶-1′-基)-1，3-氧硒戊環(huán)。把化合物(外消旋，約2mg)溶于最少量(約400μl)的甲醇(HPLC級(jí))中。拆分所用條件如下Waters HPLC系統(tǒng)；柱Chiralpak AS 4.6×250mm；流動(dòng)相2-丙醇，流速0.80毫升/分鐘；檢測(cè)器UV-260nm；噴射氣體氦氣；噴射速度25毫升/分鐘/溶劑罐；注射量每次20μl溶液；保留時(shí)間(-)-(2S，5R)-β-L-2′，3′-二脫氧-3′-硒雜-胞嘧啶核苷，5.50分鐘；(+)-(2R，5S)-β-D-2′，3′-二脫氧-3′-硒雜-胞嘧啶核苷，6.92分鐘；(-)-(2S，5R)-β-L-2′，3′-二脫氧-5-氟-3′-硒雜-胞嘧啶核苷，5.97分鐘；(+)-(2R，5S)-β-D-2′，3′-二脫氧-5-氟-3′-硒雜-胞嘧啶核苷，9.62分鐘。拆分后化合物的光學(xué)純度大于95％ee。
實(shí)施例3 通過(guò)轉(zhuǎn)變成非對(duì)映異構(gòu)體再通過(guò)分級(jí)結(jié)晶法分離非對(duì)映異構(gòu)體來(lái)拆分1，3-氧硒戊環(huán)中間的β-D和β-L對(duì)映異構(gòu)體(-)-L-薄荷醇羧基醛((-)-L-Mentholcarboxyal.)。把p-TsOH(5g)加入到(-)-L-薄荷醇(30g，0.2mol)和gluoxylic acid(36.8g，0.4mol)的甲苯(1000ml)混合物中，該反應(yīng)混合物在100℃下攪拌3小時(shí)。反應(yīng)完成后，用Et3N中和p-TsOH(5g)并蒸發(fā)至干。殘余物用氯仿(500ml)溶解，水洗滌(3×500ml)，收集有機(jī)層，干燥(Na2SO4)，蒸發(fā)。得到的油狀物用石油醚重結(jié)晶得到白色晶體(-)-L-薄荷醇羧基醛20g(50％)mp82℃；1HNMR(CHCl3)δ9.40(s，1H，CHO)，4.78(dt，J＝4.45，11Hz，1H，1-H)，0.75-2.03(m，19H)；13CNMR(CHCl3)δ184.41，170.22，87.13，46.79，40.40，34.00，31.42，26.11，23.28，21.94，20.68，16.15。分析計(jì)算C12H20O3C，67.89；H，9.50；實(shí)測(cè)值C，67.65；H，9.67。M/S m/e 212.3(M+)。[2-(1′R，2′S，5′R)-基-(5-酮-1，3-氧硒戊環(huán))]-L-羧酸酯(11)和[2-(1′R，2′S，5′R)-基-(5-酮-1，3-氧硒戊環(huán))]-D-羧酸酯。
把(SeCH2COOH)2(4.15g，15mmol)加入到(-)-L-薄荷醇羧基醛(6.4g，30mmol)的甲苯(100ml)溶液中，在氬氣保護(hù)和攪拌狀態(tài)下，反應(yīng)混合物緩緩加熱到100℃。以1小時(shí)的時(shí)間滴加次磷酸(50％水溶液，2.7ml)。在氬氣保護(hù)和劇烈攪拌下將反應(yīng)混合物再回流1小時(shí)。然后，反應(yīng)混合物蒸發(fā)至20ml，用EtOAc(250ml)稀釋，水洗滌(3×500ml)。收集有機(jī)層，干燥(Na2SO4)，蒸發(fā)。殘余物用硅膠柱色譜純化，用EtOAc-Hex(1∶10，V/V)作為洗脫劑，得到固體11共3.9g(77.6％)?；旌衔镌谑覝叵掠眉和橹亟Y(jié)晶得到無(wú)色細(xì)針狀晶體11mp106.5℃；[α]25D＝59.86°(c0.5，CHCl3)；1HNMR(CHCl3)δ5.83(s，1H，2′-H)，4.77(dt，J＝4.45，12Hz，1H，1-H)，3.97(d，J＝15.34Hz，1H，4′-Hb)，3.67(dt，J＝15.35Hz，4J＝21.17Hz，1H，4′-Ha)，0.75-2.03(m，19H)；13CNMR(CHCl3)δ173.97，168.67，76.88，63.84，47.07，40.46，34.02，31.38，26.07，23.23，22.65，21.93，20.71，16.11。元素分析C14H22O4Se計(jì)算值C，50.45；H，6.65；實(shí)測(cè)值C，50.65；H，6.62 MS m/e 333(M+)。母液在-5℃下結(jié)晶；[α]25D＝-111.71°(c 0.5，CHCl3)；1HNMR(CHCl3)δ5.83(s，1H，2′-H)，4.78(dt，J＝4.45，12Hz，1H，1-H)，3.95(d，J＝15.41Hz，1H，4′-Ha)，3.68(dt，J＝15.45Hz，4J＝19.35Hz，1H，4′-Ha)，0.75-2.03(m，19H)；13CNMR(CHCl3)δ173.98，168.63，76.15，63.76，46.95，39.88，34.01，31.32，26.22，23.24，22.98，21.94，20.74，16.14。元素分析C14H22O4Se計(jì)算值C，50.45；H，6.65；實(shí)測(cè)值C，50.47；H，6.63 MS m/e 333(M+)。1-β-L-(2′-羥甲基-1，3′-氧硒戊環(huán)-5′-基)-5-氟胞嘧啶(15)和1-α-L-(2′-羥甲基-1’，3′-氧硒戊環(huán)-5′-基)-5-氟胞嘧啶(16)在氬氣保護(hù)、攪拌狀態(tài)和10℃的溫度下，以1小時(shí)的時(shí)間把內(nèi)酯11(1g，3.33mmol)的5mlTHF溶液加入到三叔丁基氫化鋁鋰溶液(6mmol，6ml 1M的THF溶液)。然后在-5-0℃下緩緩加入乙酸酐(2g，20mmol)。反應(yīng)混合物再攪拌1小時(shí)，用乙酸乙酯(100ml)稀釋，水洗(3×100ml)，干燥(Na2SO4)，濃縮至干，得到粗品5′-乙酸酯13。乙酸糖酯13溶于CH2Cl2(5ml)，緩緩加入到甲硅烷基化的5-氟胞嘧啶中(其中5-氟胞嘧啶制備方法如下在氬氣保護(hù)下，攪拌5-氟胞嘧啶(0.34g，2.63mmol)、2，4，6-三甲基吡啶(0.8ml，6.61mmol)和三氟甲磺酸叔丁基二甲基甲硅烷基酯(1.32g，5.08mmol)的混合物1小時(shí)即得)。把碘化三甲基甲硅烷(0.35g，1.75mmol)加入到上面得到的反應(yīng)混合物中，室溫?cái)嚢?8小時(shí)，用CHCl3(100ml)稀釋，倒入到Na2S2O3水溶液(100ml)中，用水洗滌，干燥(Na2SO4)，濃縮至干。殘余物用硅膠閃柱色譜純化，CHCl3作洗脫劑，得到固體粗品13(0.15g，11.2％)。1HNMR(CDCl3)δ8.35(d，J＝6.3Hz，1H，6-H)，7.55，7.53(2×brs，2H，NH2)，6.45(m，1-h，5′-H)，6.14(m，1H，2′-H)，4.79(m，1H，1-H)，3.66(m，2H，6′-Hab)。化合物14(0.15g，0.33mmol)的THF(10ml)溶液在室溫和氬氣保護(hù)下1小時(shí)，反應(yīng)混合物再攪拌1小時(shí)，加入甲醇(5ml)終止反應(yīng)，得到的混合物用硅膠短柱色譜純化，洗脫劑為乙酸乙酯-己烷-甲醇(1∶1∶1，V/V，100ml)。洗脫液濃縮至干，得到的固體用硅膠柱純化，用氯仿-乙醇(20∶1，V/V)作洗脫劑，得到類白色固體β-L-(15)和α-L-核苷(16)的混合物0.033g(34％)。該混合物用硅膠柱再分離，洗脫劑為四種溶劑的混合物乙酸乙酯-己烷-氯仿-乙醇(5∶5∶2∶1，V/V)。
1-β-L-(2′-羥甲基-1，3′-氧硒戊環(huán)-5′-基)-5-氟胞嘧啶(15)白色固體(0.01g，10.2％)；mp186-189℃(MeOH)；[α]25D＝-55.69(c0.35，MeOH)；UV(H2O))λmax280.0nm(ε10646，pH2)，280.0nm(ε7764，pH11)；1HNMR(DMSO-d6)δ8.07(d，J＝7.1Hz，1H，6-H)，7.92，7.67(2×brs，2H，NH2，D2O可交換)，6.06(t，J＝2.96Hz，1-H，5′-H)，5.42(t，J＝4.82Hz，1H，2′-H)，5.34(t，J＝5.68Hz，1H，OH，D2O可交換)，3.81(m，1H，6′-Ha)，3.68(m，1H，6′-Hb)，3.39(dd，J＝4.84Hz，1H，4′-Hb)，3.08(dd，J＝8.11Hz，1H，4′-Ha)；13CNMR(DMSO-d6)δ157.7(C＝O)，153.3(4-C)，137.6(6-C)，135.2(5-C)，88.3(5′-C)，78.2(2′-C)，64.0(6′-C)，28.9(4′-C)；元素分析C8H10O3N3FSe計(jì)算值C，32.67，H3.43，N，14.29；實(shí)測(cè)值C，32.62；H，3.51，N，14.41；M/S m/e 295(M+)。
1-α-L-(2′-羥甲基)-1′，3′-氧硒戊環(huán)-5′-基)-5-氟胞嘧啶(16)
白色固體(0.013g，13.2％)；mp193-195℃(MeOH)；[α]25D＝+84.20°(c0.26，MeOH)；UV(H2O)λmax279.5nm(ε7638，pH7)，287.5nm(ε9015，pH2)；281.0nm(ε6929，PH11)；1HNMR(DMSO-d6)δ7.91(d，J＝7.1Hz，1H，6-H)，7.88，7.63(2×brs，2H，NH2，D2O可交換)，6.35(t，J＝4.95Hz，1H，5′-H)，5.63(dd，J＝4.83Hz，1H，2′-H)，5.28(t，J＝5.67Hz，1H，OH，D2O可交換)，3.70(m，1H，6′-Ha)，3.53(m，1H，6′-Hb)，3.47(dd，J＝4.82Hz，1H，4′-Ha)，3.24(dd，J＝7.88Hz，1H，4′-Hb)，13CNMR(DMSO-d6)δ157.8(C＝O)，153.2(4-C)，137.3(6-C)，134.9(5-C)，88.6(5′-C)，80.9(2′-C)，65.5(6′-C)，29.4(4′-C)；元素分析C8H10O3N3FSe計(jì)算值C，32.67，H，3.43，N，14.29；實(shí)測(cè)值C，32.59；H，3.49，N，14.20；M/S m/e 295(M+)。核苷8和9的合成以同樣的方式從內(nèi)酯3(1g，3，33mmol)完成，得到1-β-D-(2′-羥甲基)-1’，3′-氧硒戊環(huán)-5′-基)-5-氟胞嘧啶8。白色固體(0.007g，8.5％)；mp 186-189℃(MeOH)；[α]25D＝+56.21°(c0.33，MeOH)；UV(H2O)λmax280.0nm(ε8576，pH7)，289.0nm(ε10456，pH2)，280.0nm(ε7795，pH11)1HNMR(DMSO-d6)δ8.07(d，J＝7.1Hz，1H，6-H)，7.92，7.67(2×brs，2H，NH2，D2O可交換)，6.06(5，J＝2.96Hz，1-H，5′-H)，5.42(5，J＝4.82Hz，1-H，2′-H)，5.34(5，J＝5.68Hz，1H，OH，D2O可交換)，3.81(m，1H，6′-Ha)，3.68(m，1H，6′-Hb)，3.39(dd，J＝4.84Hz，1H，4′-Hb)，3.08(dd，J＝8.11，1H，4′-Ha)；13CNMR(DMSO-d6)δ157.7(C＝O)，153.3(4-C)，137.6(6-C)，135.2(5-C)，88.3(5′-C)，78.2(2′-C)，64.0(6′-C)，28.9(4′-C)；元素分析C8H10O3N3FSe計(jì)算值C，32.67；H，3.43，N14.29；實(shí)測(cè)值C，32.57；H，3.39；N14.35；M/S m/e295(M+)。
1-α-D-(2′-羥甲基-1′，3′-氧硒戊環(huán)-5′-基)-5-氟胞嘧啶9。
白色固體(0.01g，10％)；mp 193-195℃(MeOH)；[α]25D＝-85.49°(c0.31，MeOH)；UV(H2O)λmax279.5nm(ε7644，pH7)，287.5nm(ε9067，pH2)，281.0nm(ε6983，pH11)1HNMR(DMSO-d6)δ7.91(d，J＝7.1Hz，1H，6-H)，7.88，7.63(2×brs，SH，NH2，D2O可交換)，6.35(5，J＝4.95Hz，1-H，5′-H)，5.63(dd，J＝4.83Hz，1H，2′-H)，5.28(5，J＝5.67Hz，1H，OH，D2O可交換)，3.70(m，1H，6′-Ha)，13CNMR(DMSO-d6)δ157.8(C＝O)，153.2(4-C)，137.3(6-C)，134.9(5-C)，88.6(5′-C)，80.9(2′-C)，65.5(6′-C)，29.4(4′-C)；元素分析C8H10O3N3FSe計(jì)算值C，32.67；H，3.43，N14.29；實(shí)測(cè)值C，32.67；H，3.48；N14.47；M/S m/e295(M+)。
表1提供了(+)-β-Se-FddC，(-)-β-Se-FddC，(+)-α-Se-FddC，(-)-α-Se-FddC和(-)-β-Se-ddC的分離結(jié)果圖，并將它們的保留時(shí)間和吸收波長(zhǎng)與(-)-β-FTC和(+)-β-FTC進(jìn)行了比較。
表1分離結(jié)果
表2提供了在ChiralPak AS上分離的化合物的拆分和分離因子。分離因子定義為第二個(gè)洗脫出的異構(gòu)體保留時(shí)間和死時(shí)間之差與首先洗脫出來(lái)的異構(gòu)體的保留時(shí)間和死時(shí)間之差的比值。拆分因子定義為(+)和(-)異構(gòu)體保留時(shí)間之差與兩個(gè)吸收峰之間譜帶寬度的比值的兩倍。表2 在ChiralPak AS.上的分離對(duì)比。色譜條件流動(dòng)相為2-丙醇；注射100μg樣品的10μl甲醇溶液；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，流速單位是ml/min。
化合物 分離因子αa拆分因子Rsb外消旋α-Se-FddC2.34 1.91外消旋β-Se-FddC3.14 3.28外消旋β-FTC2.84 2.87a分離因子＝(第二個(gè)洗脫出的異構(gòu)體的保留時(shí)間-死時(shí)間)/(第一個(gè)洗脫異構(gòu)體的保留時(shí)間-死時(shí)間)b拆分因子＝2×[(+)和(-)異構(gòu)體的保留時(shí)間之差]/(兩峰的譜帶寬度)。表3給出不同溶劑比例和流速對(duì)外消旋β-Se-ddC的手性拆分的影響。表3 不同溶劑比例和流速對(duì)外消旋β-Se-ddC的手性拆分的影響
活性核苷的單、二和三磷酸酯衍生物可以按照已公開(kāi)的方法制備。單磷酸酯可以按照Imai等.，有機(jī)化學(xué)雜志(J.Org.Chem)34(6)，1547-1550(1969年6月)所描述的方法制備。二磷酸酯可按照Davisson等，有機(jī)化學(xué)雜志(J.Org.Chem)52(9)，1794-1801(1987)中描述的方法制備。三磷酸酯可按照Hoard等，美國(guó)化學(xué)會(huì)志(J.Am.Chem.Soc)87(8)，1785-1788(1965)中記載的方法制備。
III.聯(lián)合給藥和交替給藥治療已經(jīng)認(rèn)識(shí)到用抗病毒劑長(zhǎng)期治療后，會(huì)出現(xiàn)抗藥性變型HIV和HBV。產(chǎn)生抗藥性的典型原因是用于病毒生命周期的酶編碼基因突變所造成的，對(duì)于HIV，最典型的這些酶是反轉(zhuǎn)錄酶、蛋白酶或DNA多聚酶；對(duì)于HBV是DNA多聚酶。近來(lái)，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)抗HIV感染藥物和能引起與該主要藥物不同類型突變的另一種甚至可能包括第三種抗病毒化合物聯(lián)合用藥或交替用藥，可以延長(zhǎng)、增強(qiáng)或恢復(fù)該抗HIV感染藥物的作用?；蛘?，通過(guò)這種聯(lián)合用藥或交替用藥治療，可以改變藥物的藥代動(dòng)力學(xué)、生物分布或藥物的其它參數(shù)。通常地，聯(lián)合用藥治療比交替用藥治療典型地更優(yōu)選些，因?yàn)榍罢邔?duì)病毒同時(shí)產(chǎn)生多重作用。
在一個(gè)實(shí)施方案中，第二種治療HIV的抗病毒劑可以是反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(“RTI”)，它可以是合成核苷(“NRTI”)或非核苷化合物(“NNRTI”)。在一個(gè)可選擇的方案中，對(duì)于HIV的情況，第二種(或第三種)抗病毒劑可以是蛋白酶抑制劑。在另一個(gè)方案中，第二種(或第三種)化合物可以是焦磷酸酯類似物或融合蛋白結(jié)合抑制劑(fusing bindinginhibitor)。Schinazi等“與抗藥性有關(guān)的反轉(zhuǎn)錄病毒基因突變”國(guó)際抗病毒報(bào)道(International Antiviral News)，1(14)卷，國(guó)際醫(yī)學(xué)出版社(International Medical Press)編撰了許多抗病毒化合物的體內(nèi)和體外抗藥性數(shù)據(jù)表。
對(duì)于治療HBV，聯(lián)合或交替用藥治療優(yōu)選的化合物包括FTC((-)對(duì)映異構(gòu)體或消旋體)、L-FMAU、干擾素、β-D-二氧戊環(huán)-鳥(niǎo)嘌呤(DXG)、β-D-二氧戊環(huán)-2，6-二氨基嘌呤(DAPD)、和β-d-二氧戊環(huán)-6-氯嘌呤(ACP)、泛西洛維、噴西洛維、BMS-200475、bisbornPMEA(adefovir、dipivoxil)、lobucavir、甘西洛維和利巴韋林。
對(duì)于治療HIV，在此公開(kāi)的可用來(lái)與這些化合物聯(lián)合或交替給藥治療的抗病毒劑的優(yōu)選實(shí)例包括2-羥甲基-5-(5-氟尿嘧啶-1-基)-1，3-氧硫戊環(huán)(FTC)；2-羥甲基-5-(胞嘧啶-1-基)-1，3-氧硒戊環(huán)(3TC)的(-)對(duì)映異構(gòu)體、長(zhǎng)波佛、無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷、干擾素、AZT、DDI、DDC、D4T、CS-92(3′-疊氮-2′，3-二脫氧-5-甲基-胞嘧啶核苷)、和β-D-二氧戊環(huán)核苷如β-D-二氧戊環(huán)鳥(niǎo)嘌呤(DXG)、β-D-二氧戊環(huán)-6-氯嘌呤(ACP)、和MKC-442(6-芐基-1-(乙氧甲基)-5-異丙基尿嘧啶)。
優(yōu)選的蛋白酶抑制劑包括crixova(Merck)、nelfinavir(Agouron)、ritonavir(Abbot)、saquinavir(Roche)和DMP-450(Dupont Merck)。
可以與上面任何一種1，3-氧硒戊環(huán)核苷聯(lián)合或交替給藥的化合物的非限制性實(shí)施例包括(1S，4R)-4-[2-氨基-6-環(huán)丙基-氨基]-9H-嘌呤-9-基]-2-環(huán)戊烯-1-甲醇琥珀酸酯(“1592”，一種長(zhǎng)波佛類似物；GlaxoWellcome)；3TC(-)-β-L-2′，3′-二脫氧-3′-硫代胞啶(GlaxoWellcome)；a-APAR18893a-硝基-苯氨基-苯乙酰胺；A-77003；C2對(duì)稱堿基化蛋白酶抑制劑(Abbott)；A-75925C2-對(duì)稱堿基化蛋白酶抑制劑(Abott)；AAP-BHAP雙雜芳基哌嗪類似物(Upjohn)；ABT-538C2對(duì)稱堿基化蛋白酶抑制劑(Abbott)；Azddu3′-疊氮-2′，3′-二脫氧尿嘧啶核苷；AZT3′-疊氮-3′-脫氧胸腺嘧啶核苷(Glaxo Wellcome)；AZT-p-ddI3′-疊氮-3′-脫氧胸腺嘧啶-(5，5′)-2′，3′-二脫氧次黃嘌呤核甙酸(Ivax)；BHAP雙雜芳基哌嗪；BILA1906N-{1S-{{{3-[2S-{(1，1-二甲基乙基)氨基}羰基}-4R-]3-吡啶甲基)硫基]-1-哌啶基]-2R-羥基-1S-(苯甲基)-丙基]氨基]羰基]-2-甲基丙基}2-喹啉甲酰胺(BioMega/Boehringer-Ingelheim)；BILA 2185N-(1，1-二甲基乙基)-1-[2S-[[2-2，6-二甲基苯氧基)-1-氧代乙基]氨基]2-R-羥基-4-苯基丁基]4R-吡啶硫基-2-哌啶甲酰胺(Bio Mega/Boehringer-Ingelheim)；BM+51.0836噻噻并異二氫酮吲哚衍生物；BMS186，318氨基二醇衍生物HIV-1蛋白酶抑制劑(Bristo-Myers-Squibb)；d4API9-[2，5-二氫-5-(膦酰基甲氧基)-2-呋喃]腺嘌呤(Gilead)；d4C2′，3′-二脫氫-2′，3′-二脫氧胞啶；d4T2′，3′-二脫氫-3′-脫氧胸腺啶(Bristol-Myers-Squibb)；ddC2′，3′-二脫氧胞啶(Roche)；ddI2′，3′-二脫氧肌苷(Bristol-Myers-Squibb)；DMP-2661 1，4-二氫-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮；DMP-450{[4R-(4-a，5-a，6-b，7-b)]-六氫-5，6-雙(羥基)-1，3-雙(3-氨基)苯基]甲基)-4，7-雙(苯甲基)-2H-1，3-二氮雜卓-2-酮}-雙甲磺酸酯(Avid)；DXG(-)-β-D二氧六環(huán)-鳥(niǎo)嘌呤核苷(Triangle)；EBU-dM5-乙基-1-乙氧甲基-6-(3，5-二甲基芐基)尿嘧啶；E-EBU5-乙基-1-乙氧甲基-6-芐基尿嘧啶；DS硫酸葡聚糖酯；E-EPSeU1-(乙氧基甲基)-(6-苯硒基)-5-乙基尿嘧啶；E-EPU1-(乙氧甲基)-(6-苯硫基)-5-乙基尿嘧啶FTCβ-2′，3′-二脫氧基-5-氟-3′-硫代胞啶(Triangle)；HBY097S-4-異丙氧羰基-6-甲氧基-3-(甲硫基-甲基)-3，4-二氫喹喔啉-2(1H)-硫酮；HEPT1-[2-羥乙氧基)甲基]6-(苯硫基)胸腺嘧啶；HIV-11型人免疫缺陷病毒；JM27631，1′-(1，3-丙烷二基)-雙-1，4，8，11-四氮雜環(huán)十四烷(Johnson Matthey)；JM31001，1′-[1，4-亞苯基雙-(亞甲基)-雙-1，4，8，11-四氮雜環(huán)十四烷(JohnsonMatthey)；KNI-272含有(2S，3S)-3-氨基-2-羥基-4-苯基丁酸的三肽；L-697，593；5-乙基-6-甲基-3-(2-苯二酰亞氨基-乙基)吡啶-2(1H)-酮；L-735，524羥基-氨基戊烷酰胺HIV-1蛋白酶抑制劑(Merk)；L-697，6613-{[(-4，7-二氯-1，3-苯并噁唑-2-基)-甲基]氨基}5-乙基-6-甲基吡啶-2(1H)-酮；L-FDDC(O)-β-L-5-氟-2′，3′-二脫氧胞啶；L-FDOC(-)-β-L-5-氟-二氧戊環(huán)胞嘧啶；MKC-4426-芐基-1-乙氧甲基-5-異丙基尿嘧啶(I-EBUTriangle/Mitsubishi)；Nevirapine11-環(huán)丙基-5，11-二氫-4-甲基-6H-聯(lián)吡啶并[3，2-b2′，3′-e]-二氮雜卓-6-酮(Boehringer-Ingelheim)；NSC6484001-芐氧甲基-5-乙基-6-(α-吡啶硫基)尿嘧啶(E-BPTU)；P9941[2-吡啶乙?；?IlePheAla-y(CHOH)2](Dupont Merck)；PFA膦?；姿狨?foscarnet；Astra)；PMEA9-(2-膦酰甲氧乙基)腺嘌呤(Gilead)；PMPA(R)-9-(2-膦酰甲氧丙基)腺嘌呤(Gilead)；Ro 31-8959羥乙基胺衍生物HIV-1蛋白酶抑制劑(Roche)；RPI-312肽類蛋白酶抑制劑，1-[(3s)-3-(n-α-芐氧羰基)-1-天門東酰胺基)-氨基-2-羥基-4-苯基丁酰基]-n-叔丁基-1-脯氨酸酰胺；27606-氯-3，3-二甲基-4-(異丙氧羰基)-3，4-二氫-喹喔啉-2(1H)硫酮；SC-52151羥乙基脲電子等排物蛋白酶抑制劑(Searle)；SC-55389A羥乙基-脲電子等排物蛋白酶抑制劑(Searle)；TIBOR82150(+)-(5S)-4，5，6，7-四氫-5-甲基-6-(3-甲基-2-丁烯基)咪唑并[4，5，1-jk][1，4]-苯并二氮雜-2(1H)-硫酮(Janssen)；TIBO 82913(+)-(5S)-4，5，6，7-四氫-9-氯-5-甲基-6-(3-甲基-2-丁烯基)咪唑-[4，5，1jk]-[1，4]苯并二氮雜單-2(1H)-硫酮(Janssen)；TSAO-m3T[2′，5′-雙-O-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-3′-螺-5′-(4′-氨基-1′，2-氧硫雜環(huán)戊烯-2′，2′-二氧化物)]-b-D-呋喃戊糖基-N3-甲基胸腺嘧啶；U901521-[3-[1-甲基乙基)-氨基]-2-吡啶基]-4-[[5-[(甲磺?；?-氨基]-1H-吲哚-2-基]羰基]哌嗪；UC硫代羧?；桨费苌?Uniroyal)；UC-781＝N-[4-氯-3-(3-甲基-2-丁烯氧基)苯基]-2-甲基-3-呋喃硫代甲酰胺；UC-82＝N-[4-氯-3-(3-甲基-2-丁烯氧基)苯基]-2-甲基-3-噻吩硫代甲酰胺；VB11，328羥乙基磺酰胺蛋白酶抑制劑(Vertex)；VS-478羥乙基磺酰胺蛋白酶抑制劑(Vertex)；XM323環(huán)脲蛋白酶抑制劑(Dupont Merck)。
IV 1，3-氧硒戊環(huán)核苷抑制HIV和HBV復(fù)制的能力通過(guò)多種實(shí)驗(yàn)技術(shù)可以測(cè)定核苷抑制HIV的能力。此處所用的技術(shù)(下面將作詳細(xì)描述)測(cè)定在植物血球凝集素(PHA)刺激的、感染HIV-1(LAV系)的人外周血單核(PBM)細(xì)胞中抑制病毒復(fù)制的能力。通過(guò)測(cè)定病毒編碼的反轉(zhuǎn)錄酶來(lái)確定所產(chǎn)生的病毒量。產(chǎn)生酶的量與產(chǎn)生病毒的量成正比。
實(shí)施例4 1，3-氧硒戊環(huán)核苷的抗HIV-活性。
本實(shí)施例測(cè)試2-羥甲基-4-(N-5′-胞嘧啶-1′-基)-1，3-氧硒戊環(huán)和2-羥甲基-4-(N-5′-氟胞嘧啶-1′-基)-1，3-氧硒戊環(huán)的抗HIV活性。
來(lái)自乙肝和HIV-1血清反應(yīng)陰性的健康供體的、植物血球凝集素刺激的三天齡PBM細(xì)胞(106細(xì)胞/ml)以每毫升50％組織培養(yǎng)感染劑量(TICD50)的約100倍濃度感染HIV-1(LAV株)，再把該感染后的細(xì)胞在有或沒(méi)有各種濃度抗病毒化合物的存在下培養(yǎng)。
感染約1小時(shí)后。把該含有被測(cè)試化合物(兩倍于培養(yǎng)基中的最終濃度)或不含有該化合物的培養(yǎng)基加入到燒瓶(5ml；最終體積10ml)中。用AZT作陽(yáng)性對(duì)照。
這些細(xì)胞與病毒接觸(經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶檢測(cè)濃度約2×105dpm/ml)，然后置于CO2培養(yǎng)箱中。HIV-1(LAV株)來(lái)自喬治亞州亞特蘭大疾病控制中心(the Center for Disease Control)。PBM細(xì)胞的培養(yǎng)方法、病毒的收集方法和反轉(zhuǎn)錄酶活性的測(cè)定方法按照McDougal等，(免疫方法學(xué)雜志(J.Immun.Meth.)76.171-183，1985)和Spira等(J.Clin.Meth.25.97-99，1987)描述的方法進(jìn)行，但培養(yǎng)基中不含有兩性霉素B(參見(jiàn)Schinazi等.，抗微生物劑化療(Antimicrob.AgentsChemother.)32.1784-1787(1988)；同前述雜志，341061-1067(1990))。
在第6天時(shí)，該細(xì)胞及上清液轉(zhuǎn)移到15ml試管中，以900g離心約10分鐘。移走5毫升上清液，以40,000rpm的速度離心30分鐘(Beckman 70.1Ti轉(zhuǎn)軸)使病毒濃縮。加工該溶解的病毒團(tuán)用于反轉(zhuǎn)錄酶含量測(cè)定。結(jié)果以dpm/ml樣品上清液表示。少量上清液(1ml)的病毒也可在溶解和測(cè)定反轉(zhuǎn)錄病毒含量之前離心濃縮。
半數(shù)有效(EC50)濃度通過(guò)半數(shù)有效方法測(cè)定(抗微生物試劑化療(Antimicrob.Agents Chemother.)30，491-498(1986))。簡(jiǎn)單地說(shuō)，從反轉(zhuǎn)錄酶測(cè)定確定的病毒抑制百分比對(duì)化合物微摩爾濃度作圖。EC50就是病毒生長(zhǎng)抑制為50％時(shí)的化合物濃度。
在有和沒(méi)有藥物的存在下，促細(xì)胞分裂劑刺激的未感染人PBM細(xì)胞(3.8×105細(xì)胞/毫升)在與上面抗病毒檢測(cè)所用的相似條件下培養(yǎng)。6天后用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器和臺(tái)盼藍(lán)排除法(參見(jiàn)Schinazi等，抗微生物試劑和化療(Antimicrobial Agents and Chemotherapy)，22(3)，499(1982)對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)，IC50為抑制50％正常細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)的化合物濃度。
表4提供了2-羥甲基-4-(N-5′-胞嘧啶-1′-基)-1，3-氧硒戊環(huán)和2-羥甲基-4-(N-5′-氟胞嘧啶-1′-基)-1，3-氧硒戊環(huán)的EC50值(在PBM細(xì)胞中抑制50％病毒復(fù)制的核苷濃度，估計(jì)有10％誤差系數(shù))和IC50值(促細(xì)胞分裂劑刺激的未感染PBM細(xì)胞、CEM細(xì)胞和Vero細(xì)胞被抑制50％時(shí)核苷的濃度)。
表4氧硒戊環(huán)核苷的抗HIV活性
<p>表5提供了外消旋β-Se-ddC、其(+)和(-)異構(gòu)體以及外消旋β-Se-FddC、其(+)和(-)異構(gòu)體的純度百分比、EC50值(μM)、EC90值(μM)和IC50值表5 氧硒戊環(huán)胞嘧啶核苷的外消旋物和對(duì)映異構(gòu)體的抗HIV活性以及細(xì)胞毒性
在反轉(zhuǎn)錄基因密碼子184處顯示突變的HIV感染的PBM細(xì)胞中，也測(cè)定了外消旋β-Se-ddC、其(+)和(-)異構(gòu)體以及外消旋β-Se-FddC、其(+)和(-)異構(gòu)體的抗HIV活性。表6提供了實(shí)驗(yàn)結(jié)果，表中顯示，外消旋和(-)-β-Se-FddC對(duì)突變病毒顯示顯著的活性。
表6 氧硒戊環(huán)核苷的抗克隆M184HIV-1作用
注FI(倍數(shù)增加)EC50＝克隆病毒的EC50數(shù)據(jù)/xxBRU的EC50數(shù)據(jù)實(shí)施例5 1，3-氧硒戊環(huán)核苷的抗HBV活性活性化合物在2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)物(用肝炎病毒轉(zhuǎn)化的HepG2細(xì)胞)中抑制病毒生長(zhǎng)的能力可通過(guò)下面描述的方法進(jìn)行評(píng)價(jià)。
已經(jīng)記載了該培養(yǎng)基系統(tǒng)中抗病毒作用的測(cè)定和HBV DNA分析的概述和描述(Korba和Milman，1991，抗病毒研究(AntiviralRes.，)15217)。在兩個(gè)獨(dú)立的傳代細(xì)胞中進(jìn)行抗病毒評(píng)價(jià)，在所有培養(yǎng)盤的所有孔中以相同的濃度和在相同的時(shí)間內(nèi)接種。
由于細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外HBV DNA濃度的固有變化，對(duì)于未處理細(xì)胞中的HBV DNA形式，只有大于其平均濃度3.5倍(對(duì)于HBV毒粒DNA)或3.0倍(對(duì)于HBV-DNA復(fù)制中間體)的降低才認(rèn)為在統(tǒng)計(jì)學(xué)上是顯著的(P＜0.05)。每個(gè)細(xì)胞內(nèi)DNA標(biāo)本(在這些實(shí)驗(yàn)中每個(gè)細(xì)胞保持恒定)的整合HBV DNA含量可以用來(lái)計(jì)算細(xì)胞內(nèi)HBV DNA形式的濃度，因此確保同樣含量的細(xì)胞內(nèi)DNA在獨(dú)立的樣品中進(jìn)行比較。
在未處理細(xì)胞中，細(xì)胞外HBV毒粒DNA值的典型范圍是50-150pg/ml培養(yǎng)基(平均約76pg/ml)。未處理細(xì)胞中，細(xì)胞內(nèi)HBV DNA復(fù)制中間體范圍是50-100μg/pg細(xì)胞DNA(平均約74pg/μg細(xì)胞DNA)。通常地，由于經(jīng)過(guò)抗病毒化合物處理，細(xì)胞內(nèi)HBV DNA含量的降低比HBV毒粒DNA含量的降低較不明顯些，并且發(fā)生得更慢些(Korba和milman，1991，抗病毒研究，15217)。
對(duì)這些實(shí)驗(yàn)的雜交分析方式導(dǎo)致約10pg細(xì)胞內(nèi)HBV DNA至2-3基因組復(fù)制物/細(xì)胞和1.0pg/ml細(xì)胞外HBV DNA至3×105病毒顆粒/ml當(dāng)量值。
由于細(xì)胞生存的一般作用，可以進(jìn)行毒性分析來(lái)測(cè)試是否有任何觀測(cè)到的抗病毒作用。一種可行的方法是測(cè)定中性紅染料的攝取量，這是在許多病毒宿主系統(tǒng)包括HSV和HIV系統(tǒng)中細(xì)胞生存力的一種標(biāo)準(zhǔn)的和廣泛應(yīng)用的檢測(cè)方法。在96孔平底組織培養(yǎng)盤中進(jìn)行毒性分析。通過(guò)與下面記載的抗病毒檢測(cè)相同的方案，應(yīng)用測(cè)試化合物培養(yǎng)并處理用于毒性分析的細(xì)胞。每個(gè)化合物測(cè)試4種濃度。每種濃度在三種相同的培養(yǎng)基中測(cè)試(“A”、“B”和“C”孔)。通過(guò)中性紅色染料的攝取來(lái)確定毒性的相對(duì)程度。內(nèi)部染料在510nm的吸收峰(Asin)用于定量分析。得到的值以9個(gè)獨(dú)立的未處理細(xì)胞培養(yǎng)基(維持在與測(cè)試化合物同一個(gè)96孔培養(yǎng)盤)的平均Asin百分比形式提供。
實(shí)施例6應(yīng)用1，3-氧硒戊環(huán)核苷治療異常細(xì)胞增生此處記載的一些1，3-氧硒戊環(huán)核苷可用來(lái)治療包括腫瘤和癌的異常細(xì)胞增生。根據(jù)下面的方法，通過(guò)在CEM細(xì)胞或其它腫瘤或增生細(xì)胞系中測(cè)定化合物可以容易地檢測(cè)抗增生活性的程度。CEM細(xì)胞是人淋巴瘤細(xì)胞(可以從ATCC、Rockville、MD得到的T-成淋巴細(xì)胞增多癥細(xì)胞系)?；衔飳?duì)CEM的毒性提供了關(guān)于化合物抗腫瘤活性有用的信息。毒性以IC50(微摩爾)方式測(cè)量。IC50是指在培養(yǎng)基中抑制腫瘤細(xì)胞50％增長(zhǎng)時(shí)的測(cè)試化合物濃度。IC50越低，化合物的抗腫瘤活性越強(qiáng)。通常地，如果1，3-氧硒核苷在CEM或其它非滅活腫瘤細(xì)胞系中的毒性小于10微摩爾、更優(yōu)選地小于5微摩爾和最優(yōu)選地小于1微摩爾，則它顯示抗腫瘤活性并可以用于治療異常細(xì)胞增生。
藥物溶液，包括作為陽(yáng)性對(duì)照的放線菌酮，以最終濃度的2倍一式三份置于50μl的培養(yǎng)基中，在37℃溫度下使之在5％CO2培養(yǎng)箱中平衡。在50μl培養(yǎng)基中加入Log相細(xì)胞使最終濃度達(dá)到2.5×103(CEM和SK-MEL-28)、5×103(MNAN，MDA-MB-435s，SKMES-1，DU-145，Lncap)，或1×104(PC-3，MCF-7)細(xì)胞/孔，然后在5％CO2的空氣和37℃的溫度下培養(yǎng)3天(DU-145，PC-3，MNAN)、4天(MCF-7、SK-MEL-28、CEM)或5天(SK-MES-1、MDA-MB-435s、LNCaP)。對(duì)照孔包括單獨(dú)的培養(yǎng)基(空白)和加上不含藥物的培養(yǎng)基的細(xì)胞。在生長(zhǎng)期之后，在每個(gè)孔中加入15μl細(xì)胞滴度的96套檢測(cè)染料溶液(Promega，Madison，WI)，該培養(yǎng)盤在5％CO2培養(yǎng)箱中37℃溫度下培養(yǎng)8小時(shí)。在每個(gè)孔中加入Promega細(xì)胞滴度96套終止檢測(cè)的溶液，并在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4-8小時(shí)。應(yīng)用Biotek Biokinetics盤記錄器(plate read，Biotek，Winooski，VT)讀取只含培養(yǎng)基的孔在570nm的吸收值使其作為空白。計(jì)算出相對(duì)于未處理對(duì)照組的平均抑制生長(zhǎng)百分比。計(jì)算出IC50、IC90、斜率和r值，計(jì)算方法參見(jiàn)Chou和Talaly.Chou T-C，Talalay P.量效關(guān)系的定量分析多重藥物或酶抑制劑的聯(lián)合作用，Adv Enzyme Regul.19842227-55。
IV藥物組合物的制備對(duì)于患有此處記載的任何一種疾病包括HIV感染、HBV感染或異常細(xì)胞增生的病人，可以通過(guò)對(duì)該病人施用在任選可藥用載體或稀釋劑中的有效量的1，3-氧硒核苷來(lái)進(jìn)行治療。該活性物質(zhì)可以以液體或固體形式通過(guò)任何給藥途徑如口服、腸胃外給藥、靜脈注射、真皮內(nèi)給藥、皮下給藥或局部給藥。
可藥用載體或稀釋劑中含有足夠量的活性化合物，從而對(duì)病人施用治療有效量的化合物以抑制體內(nèi)病毒復(fù)制特別是HIV和HBV復(fù)制，并且對(duì)治療病人沒(méi)有引起嚴(yán)重的毒性作用?！耙种屏俊笔侵富钚猿煞值牧孔阋援a(chǎn)生例如通過(guò)此處記載的抑制檢測(cè)方法可以檢測(cè)出的抑制作用。
對(duì)于上面所提到的條件，化合物的優(yōu)選劑量范圍約1-50mg/kg體重/天，優(yōu)選1-20mg/kg體重/天，更通常地為0.1-約100mg/kg受藥者體重/天。根據(jù)要給用的母體核苷的重量，可以算出可藥用衍生物的有效劑量范圍。如果衍生物本身顯示活性，通過(guò)上面應(yīng)用衍生物的重量或本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員已知的其它方式可以估計(jì)出有效量。
該化合物可合適地通過(guò)單位形式或任何其它合適劑型給藥，包括但不限于每單位劑型中含有7-3000mg、優(yōu)選70-1400mg活性成分。50-1000mg的口服劑量通常是合適的。
理想地，給藥活性成分使活性化合物的血漿濃度峰值達(dá)到約0.2-70pM，優(yōu)選約1.0-10μM。該目的是可以達(dá)到的，例如通過(guò)靜脈注射0.1至5％活性成分溶液，任選生理鹽水溶液或者以活性成分的藥團(tuán)形式給藥。
藥物組合物中，活性化合物的濃度依據(jù)藥物的吸收、失活和排泄速率以及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它因素而定。應(yīng)該注意由于所需治療疾病的嚴(yán)重程度不同，劑量值也可以相應(yīng)變化。還應(yīng)該明白對(duì)于任何具體的受治療者，根據(jù)個(gè)體需要以及給藥人員或監(jiān)督給藥人員的職業(yè)判斷，應(yīng)該隨時(shí)調(diào)整給藥方案；此處提出的濃度范圍僅僅是舉例性的，它并不能限制所要求保護(hù)的組合物的范圍和實(shí)行。活性成分可以一次給藥或者分成許多更小劑量以不同的間隔時(shí)間給藥。
該活性化合物的優(yōu)選給藥方式是口服?？诜M合物通常包括惰性稀釋劑或可食用載體。它們可包覆在明膠膠囊中或者壓制成片劑。為了口服治療給藥的目的，活性化合物應(yīng)該加入到賦形劑中然后用于制片劑、錠劑或膠囊。還可含有可藥用的粘合劑和/或輔料物質(zhì)作為組合物的一部分。
所述片劑、丸劑、膠囊和錠劑等可含有任何一種下列成分或類似性質(zhì)的化合物粘合劑如微晶纖維素、黃芪膠或明膠；賦形劑如淀粉或乳糖；崩解劑如海藻酸、Primogel或玉米淀粉；潤(rùn)滑劑如硬脂酸鎂或Sterotes；助流劑如膠體二氧化硅；甜味劑如蔗糖和糖精；或矯味劑如薄荷、水楊酸甲酯或柑橘調(diào)味料(orange flavoring)。當(dāng)單位劑型是膠囊時(shí)，除了上述類型物質(zhì)外，它還可包括液體載體如脂肪油。另外，單位劑型還可含有能改變劑量單位物理形態(tài)的其它各種物質(zhì)，例如糖、蟲(chóng)膠或其它可腸溶劑的包衣物。
該化合物可以作為酏劑、懸浮劑、糖漿劑、糯米紙囊劑或口香糖等的組份給藥。除活性成分外，糖漿劑還可以含有用作甜味劑的蔗糖和某些防腐劑、染料和著色劑和調(diào)味品。
該化合物或者其可藥用衍生物或鹽還可與不削弱其預(yù)期作用的其它活性成分混合，或者與能增補(bǔ)其預(yù)期作用的物質(zhì)混合，例如抗生素、抗真菌劑、抗炎癥試劑、蛋白酶抑制劑或其它如上所詳述的核苷或非核苷抗病毒劑。用于非腸道、真皮內(nèi)、皮下或局部給藥的溶液或懸浮液可以包括下列成分無(wú)菌稀釋劑如注射用水、生理鹽水、不揮發(fā)油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶劑，抗菌劑如芐醇或?qū)αu基苯甲酯；抗氧化劑例如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；絡(luò)合劑如乙二胺四乙酸；緩沖劑如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；還有用來(lái)調(diào)節(jié)緊張性的物質(zhì)如氯化鈉或葡萄糖。非腸道給藥制劑可裝入安瓿、一次性注射器或者玻璃或塑料制的多劑量小瓶中。
如果靜脈注射給藥，優(yōu)選的載體是生理鹽水或磷酸緩沖的鹽水(PBS)。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，活性化合物結(jié)合載體一起制備，所述載體可保護(hù)化合物免受體內(nèi)迅速消除，如控釋制劑包括植入劑和微膠囊給藥系統(tǒng)?？梢詰?yīng)用能生物降解的和生物相容的聚合物如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐類、聚羥基乙酸、膠原、聚原酸酯和聚乳酸。這些制劑的制備方法對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是明顯的。這些物質(zhì)還可購(gòu)自Alza公司。
脂質(zhì)體懸浮液(包括以病毒抗原單克隆抗體感染的細(xì)胞為靶向物的脂質(zhì)體)作為可藥用載體也是優(yōu)選的。這可按照本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法制備，例如美國(guó)4,522,811號(hào)專利(該文件全文在此引入作為參考)所記載的方法。例如，脂質(zhì)體制劑制備方法如下把合適的脂類(如硬脂酰磷脂酰乙醇胺、硬脂酰磷脂酰膽鹼、二十烷?；字Ｄ憠A和膽甾醇)溶解在無(wú)機(jī)溶劑中，然后蒸發(fā)，在容器表面留下干燥的脂類薄層膜；然后把活性化合物或者其單磷酸酯、二磷酸酯和/或三磷酸酯衍生物的水溶液加入到該容器中；然后，用手旋轉(zhuǎn)容器使脂類物質(zhì)離開(kāi)容器側(cè)邊并分散脂類聚合體，因此形成脂質(zhì)體懸浮液。
根據(jù)優(yōu)選實(shí)施方案描述了本發(fā)明。根據(jù)本發(fā)明前面的詳細(xì)描述可以對(duì)本發(fā)明作出各種改進(jìn)和修飾，這對(duì)本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的。也就是說(shuō)，所有這些改進(jìn)和修飾包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.下述通式的1，3-氧硒戊環(huán)核苷類或其可藥用鹽
其中B為嘌呤或嘧啶堿基，R為氫、?；?、單-，二-或三磷酸酯、穩(wěn)定的磷酸酯或醚脂，并且其中的核苷在HIV感染的PBM細(xì)胞中顯示小于10微摩爾的EC50。
2.如權(quán)利要求1所述的1，3-氧硒戊環(huán)核苷，其中B是嘧啶堿基。
3.如權(quán)利要求1所述的1，3-氧硒戊環(huán)核苷，其中B是嘌呤堿基。
4.如權(quán)利要求2或3所述的1，3-氧硒戊環(huán)核苷，其中R是氫。
5.如權(quán)利要求2或3所述的1，3-氧硒戊環(huán)核苷，其中R是酰基。
6.如權(quán)利要求2或3所述的1，3-氧硒戊環(huán)核苷，其中R是單磷酸酯。
7.如權(quán)利要求2或3所述的1，3-氧硒戊環(huán)核苷，其中R是二磷酸酯。
8.如權(quán)利要求2或3所述的1，3-氧硒戊環(huán)核苷，其中R是三磷酸酯。
9.如權(quán)利要求2或3所述的1，3-氧硒戊環(huán)核苷，其中R是穩(wěn)定的磷酸酯。
10.如權(quán)利要求3所述的1，3-氧硒戊環(huán)核苷，其中R是脂醚。
11.如權(quán)利要求1所述的1，3-氧硒戊環(huán)核苷，其中B是胞嘧啶。
12.如權(quán)利要求1所述的1，3-氧硒戊環(huán)核苷，其中B是5-氟胞嘧啶。
13.如權(quán)利要求1所述的1，3-氧硒戊環(huán)核苷，其中B是鳥(niǎo)嘌呤。
14.權(quán)利要求1所述的1，3-氧硒戊環(huán)核苷，所述核苷為2-羥甲基-4-(N-5′-胞嘧啶-1′-基)-1，3-氧硒戊環(huán)或其可藥用鹽。
15.權(quán)利要求1所述的1，3-氧硒戊環(huán)核苷，所述核苷為2-羥甲基-4-(N-5′-氟胞嘧啶-1′-基)-1，3-氧硒戊環(huán)或其可藥用鹽。
16.權(quán)利要求1所述的1，3-氧硒戊環(huán)核苷，所述核苷為分離的對(duì)映異構(gòu)體(-)-β-L-2-羥甲基-4-(N-5′-胞嘧啶-1′-基)-1，3-氧硒戊環(huán)或其可藥用鹽。
17.權(quán)利要求1所述的1，3-氧硒戊環(huán)核苷，所述核苷為分離的對(duì)映異構(gòu)體(-)-β-L-2-羥甲基-4-(N-5′-氟胞嘧啶-1′-基)-1，3-氧硒戊環(huán)或其可藥用鹽。
18.治療人或其它宿主動(dòng)物的HIV或HBV感染的藥物組合物，該組合物含有有效量的權(quán)利要求1所述的1，3-氧硒戊環(huán)核苷和可藥用載體。
19.治療人或其它宿主動(dòng)物的HIV或HBV感染的藥物組合物，該組合物含有有效量的權(quán)利要求2所述的1，3-氧硒戊環(huán)核苷和可藥用載體。
20.治療人或其它宿主動(dòng)物的HIV或HBV感染的藥物組合物，該組合物含有有效量的權(quán)利要求3所述的1，3-氧硒戊環(huán)核苷和可藥用載體。
21.治療人或其它宿主動(dòng)物的HIV或HBV感染的藥物組合物，該組合物含有有效量的權(quán)利要求4-17中任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的1，3-氧硒戊環(huán)核苷和可藥用載體。
22.治療人體HIV的方法，該方法包括施用有效量的下述通式的1，3-氧硒戊環(huán)核苷或其可藥用鹽
其中B為嘌呤或嘧啶堿基，R為氫、?；⒒蛄姿狨?，并且其中的核苷在HIV感染的PBM細(xì)胞中顯示小于10微摩爾的EC50。
23.如權(quán)利要求22所述的治療HIV的方法，其中B是嘧啶堿基。
24.如權(quán)利要求22所述的治療HIV的方法，其中B是嘌呤堿基。
25.如權(quán)利要求22所述的治療HIV的方法，其中R是氫。
26.如權(quán)利要求22所述的治療HIV的方法，其中R是?；?。
27.如權(quán)利要求22所述的治療HIV的方法，其中R是單磷酸酯。
28.如權(quán)利要求22所述的治療HIV的方法，其中R是二磷酸酯。
29.如權(quán)利要求22所述的治療HIV的方法，其中R是三磷酸酯。
30.一種如權(quán)利要求22所述的治療HIV的方法，其中R是氫。
31.一種如權(quán)利要求22所述的治療HIV的方法，其中R是?；?。
32.一種如權(quán)利要求22所述的治療HIV的方法，其中R是單磷酸酯。
33.一種如權(quán)利要求23所述的治療HIV的方法，其中R是二磷酸酯(ditriphosphate)。
34.一種如權(quán)利要求24所述的治療HIV的方法，其中R是三磷酸酯。
35.一種如權(quán)利要求25所述的治療HIV的方法，其中所述的1，3-氧硒戊環(huán)核苷為2-羥甲基-4-(N-5′-胞嘧啶-1′-基)-1，3-氧硒戊環(huán)或其可藥用鹽。
36.一種如權(quán)利要求26所述的治療HIV的方法，其中所述的1，3-氧硒戊環(huán)核苷為2-羥甲基-4-(N-5′-氟胞嘧啶-1′-基)-1，3-氧硒戊環(huán)或其可藥用鹽。
37.一種如權(quán)利要求27所述的治療HIV的方法，其中所述的1，3-氧硒戊環(huán)核苷為分離的對(duì)映異構(gòu)體(-)-β-L-2-羥甲基-4-(N-5′-胞嘧啶-1′-基)-1，3-氧硒戊環(huán)或其可藥用鹽。
38.一種如權(quán)利要求28所述的治療HIV的方法，其中所述的1，3-氧硒戊環(huán)核苷為分離的對(duì)映異構(gòu)體(-)-β-L-2-羥甲基-4-(N-5′-氟胞嘧啶-1′-基)-1，3-氧硒戊環(huán)或其可藥用鹽。
39.一種治療人體或其它宿主動(dòng)物HBV的方法，該方法包括施用HIV-有效量外消旋或分離的對(duì)映異構(gòu)體形式的下式1，3-氧硒戊環(huán)核苷或其可藥用鹽
其中其中B為嘌呤或嘧啶堿基，R為氫、?；?、或磷酸酯。
40.一種如權(quán)利要求39所述的治療HBV的方法，其中B是嘧啶堿基。
41.一種如權(quán)利要求39所述的治療HBV的方法，其中B是嘌呤堿基。
42.一種如權(quán)利要求39所述的治療HBV的方法，其中R是氫。
43.一種如權(quán)利要求39所述的治療HBV的方法，其中R是酰基。
44.一種如權(quán)利要求39所述的治療HBV的方法，其中R是單磷酸酯。
58.一種如權(quán)利要求39所述的治療HBV的方法，其中R是二磷酸酯(ditriphosphate)。
45.一種如權(quán)利要求39所述的治療HBV的方法，其中R是三磷酸酯。
46.一種如權(quán)利要求39所述的治療HBV的方法，其中R是氫。
47.一種如權(quán)利要求39所述的治療HBV的方法，其中R是?；?。
48.一種如權(quán)利要求39所述的治療HBV的方法，其中R是單磷酸酯。
49.一種如權(quán)利要求39所述的治療HBV的方法，其中R是二磷酸酯。
50.一種如權(quán)利要求39所述的治療HBV的方法，其中R是三磷酸酯。
51.一種如權(quán)利要求39所述的治療HBV的方法，其中所述的1，3-氧硒戊環(huán)核苷為2-羥甲基-4-(N-5′-胞嘧啶-1′-基)-1，3-氧硒戊環(huán)或其可藥用鹽。
52.一種如權(quán)利要求39所述的治療HBV的方法，其中所述的1，3-氧硒戊環(huán)核苷為2-羥甲基-4-(N-5′-氟胞嘧啶-1′-基)-1，3-氧硒戊環(huán)或其可藥用鹽。
53.一種如權(quán)利要求39所述的治療HBV的方法，其中所述的1，3-氧硒戊環(huán)核苷為分離的對(duì)映異構(gòu)體(-)-β-L-2-羥甲基-4-(N-5′-胞嘧啶-1′-基)-1，3-氧硒戊環(huán)或其可藥用鹽。
54.一種如權(quán)利要求39所述的治療HBV的方法，其中所述的1，3-氧硒戊環(huán)核苷為分離的對(duì)映異構(gòu)體(-)-β-L-2-羥甲基-4-(N-5′-氟胞嘧啶-1′-基)-1，3-氧硒戊環(huán)或其可藥用鹽。
55.權(quán)利要求1所述的1，3-氧硒戊環(huán)核苷及其可藥用的衍生物和鹽在制備治療HIV或HBV感染的藥物中的應(yīng)用。
56.權(quán)利要求1所述的1，3-氧硒戊環(huán)核苷及其可藥用的衍生物和鹽與其它抗病毒劑聯(lián)合或交替給藥用于治療病毒感染。
全文摘要
公開(kāi)了一種治療人或其它宿主動(dòng)物中HIV感染、HBV感染或異常細(xì)胞增生的方法和組合物,包括:給藥有效量在任選可藥用載體中的1,3－氧硒戊環(huán)(oxaselenolane)核苷或其可藥用鹽。
文檔編號(hào)C07F9/6561GK1255132SQ98804934
公開(kāi)日2000年5月31日 申請(qǐng)日期1998年3月19日 優(yōu)先權(quán)日1997年3月19日
發(fā)明者R·F·施納茲, C·K·楚, J·F·杜 申請(qǐng)人:埃莫里大學(xué)