專利名稱：植物蘋果青霉素啟動子序列的制作方法
引言技本領(lǐng)域本發(fā)明涉及編碼棉花蘋果青霉素(expansin)啟動子的序列，及其用于在修飾棉花纖維表型中有用的構(gòu)建體。
本發(fā)明特別涉及使用能在棉花中指導(dǎo)感興趣的DNA序列進(jìn)行纖維組織轉(zhuǎn)錄的體外構(gòu)建的DNA轉(zhuǎn)錄或表達(dá)盒以產(chǎn)生表型改變的纖維細(xì)胞的方法，和提供或改良棉花纖維的各種特征的方法以及以該方法生產(chǎn)的改良的棉花纖維。背景一般來說，遺傳工程技術(shù)涉及改良單獨(dú)的原核和真核細(xì)胞，特別是在培養(yǎng)物中的表型。已證明植物細(xì)胞比其它真核細(xì)胞更不易改變，這不僅是因為缺乏合適的載體系統(tǒng)，而且也由于所涉及的不同目的所致。對于許多應(yīng)用，需要能在植物生長的特定階段或在特定的植物部分控制基因表達(dá)。為達(dá)到該目的，需要調(diào)控序列在合適的細(xì)胞類型和/或在植物發(fā)育的合適的時間負(fù)責(zé)所需的轉(zhuǎn)錄啟動而不對植物的發(fā)育和產(chǎn)量產(chǎn)生嚴(yán)重的有害影響。
因此，感興趣的是能分離可用于在宿主植物生長循環(huán)期間的植物細(xì)胞中提供所需轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)的序列。
本發(fā)明的一個方面是改變特定細(xì)胞類型，如在纖維組織，即棉花纖維細(xì)胞中產(chǎn)生的分化的表皮細(xì)胞的表型以提供改變或改進(jìn)特性的成熟細(xì)胞類型的能力。棉花是一種具有重要商業(yè)意義的植物。除了在紡織品生產(chǎn)中使用棉花纖維外，棉花的其它用途包括含有棉籽油的食品和來自棉籽殼的動物飼料。
盡管作為莊稼的棉花具有重要性，但對棉花纖維表型的培育和遺傳改造進(jìn)展相當(dāng)緩慢，因為缺乏用于選擇性實(shí)現(xiàn)纖維表型改變的可靠啟動子。為了實(shí)現(xiàn)所需的表型改變，需要能啟動發(fā)育期間纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)錄的轉(zhuǎn)錄起始區(qū)。因此，棉花生物工程研究的一個重要目的是獲得可靠的啟動子，它能允許在棉花纖維中選擇性地表達(dá)蛋白質(zhì)以影響諸如纖維強(qiáng)度，長度，顏色和可染性的品質(zhì)。相關(guān)文獻(xiàn)。
棉花纖維特異性啟動子在PCT公開WO94/12014和WO95/08914，以及John和Crow，美國科學(xué)院學(xué)報，895769-5773，1992中討論。已分離出了優(yōu)選在棉花纖維中表達(dá)的cDNA克隆。其中一個分離的克隆相應(yīng)于在晚期初生細(xì)胞壁和早期次生細(xì)胞壁合成階段期間最高的mRNA和蛋白質(zhì)。John和Crow，出處同上。
土壤桿菌介導(dǎo)的棉花轉(zhuǎn)化在Umbeck，美國專利號5,004,863和5,159,135中描述，經(jīng)粒子轟擊轉(zhuǎn)化棉花在1992年9月17日公開的WO92/15675中報道。Radke等，理論和應(yīng)用遺傳學(xué)(1988)75；685-694；植物細(xì)胞報道(1992)11499-505已描述了蕓苔屬(Brassica)的轉(zhuǎn)化。
發(fā)明簡述本發(fā)明提供了一種棉花(陸地棉Gossypium hirsutum)啟動子區(qū)，它來自在纖維形成中表達(dá)的蘋果青霉素基因。提供了新的DNA啟動子序列，且描述了使用來自在棉花纖維中表達(dá)的蘋果青霉素基因的啟動子區(qū)指導(dǎo)棉花纖維中目的基因轉(zhuǎn)錄的使用方法。
在鑒定對纖維發(fā)育至關(guān)重要的基因的努力中，我們啟動了隨機(jī)測序選定的cDNA克隆的程序，該克隆來自在次生細(xì)胞壁合成達(dá)到其最大速率(大約21dpa)的階段從纖維收獲的mRNA制備的文庫。
我們已鑒定了一個陸地棉cDNA克隆，它是蘋果青霉素基因的同源物。該cDNA克隆的序列與編碼其它蘋果青霉素的序列同源。已對該基因的5’基因組啟動子區(qū)的大約2200個堿基對進(jìn)行了測序。
因此，本申請?zhí)峁┝松婕笆褂妹藁ㄌO果青霉素基因啟動子修飾棉花纖維表型的序列及其使用方法。
附圖描述

圖1，棉花蘋果青霉素基因編碼序列啟動子區(qū)域5’的大約2200個堿基的核酸序列。
發(fā)明詳述根據(jù)本發(fā)明，描述了新的構(gòu)建體和方法，它可用于在植物宿主細(xì)胞，優(yōu)選在棉花纖維細(xì)胞中提供感興趣的核苷酸序列的轉(zhuǎn)錄以產(chǎn)生表型改變的棉花纖維。
棉花纖維是胚珠外珠被的一種分化的單個表皮細(xì)胞。它具有四個不同的生長時期；起動，伸長(初生細(xì)胞壁合成)，次生細(xì)胞壁合成，和成熟。纖維形成的起動似乎由激素觸發(fā)。初生細(xì)胞壁在伸長期產(chǎn)生，并持續(xù)到開花后(DPA)25天。次生細(xì)胞壁的合成在伸長期停止前開始并持續(xù)到大約40DPA，形成的細(xì)胞壁幾乎是純的纖維素。
用于該細(xì)胞中的構(gòu)建體可以包括一些形式，這取決于構(gòu)建體的所需用途。因此，構(gòu)建體包括載體，轉(zhuǎn)錄盒，表達(dá)盒和質(zhì)粒。轉(zhuǎn)錄和翻譯起動區(qū)(有時也稱為“啟動子”)含有轉(zhuǎn)錄和翻譯功能元件及可從蘋果青霉素基因產(chǎn)生或獲得的起動控制區(qū)(圖1)。
在一些實(shí)施方案中，啟動子可經(jīng)過添加諸如增強(qiáng)子的序列或刪除非必需和/或不需要的序列進(jìn)行修飾?！翱色@得”是指具有啟動子的DNA序列與天然啟動子足夠相似以提供對目的DNA序列轉(zhuǎn)錄所需的特異性。它包括天然和合成序列以及可結(jié)合合成和天然序列的序列。
用于轉(zhuǎn)錄棉花纖維中感興趣的核苷酸序列的轉(zhuǎn)錄盒按轉(zhuǎn)錄方向包括來自蘋果青霉素的棉花纖維轉(zhuǎn)錄起動區(qū)，感興趣的DNA序列和在植物細(xì)胞中具有功能的轉(zhuǎn)錄終止區(qū)。當(dāng)轉(zhuǎn)錄盒提供對感興趣的DNA序列的轉(zhuǎn)錄和翻譯時，認(rèn)為它是表達(dá)盒。也可存在一個或多個內(nèi)含子。
同時可存在其它序列，包括編碼所需轉(zhuǎn)運(yùn)肽和分泌性先導(dǎo)序列的那些序列。
蘋果青霉素轉(zhuǎn)錄/翻譯起動控制區(qū)的下游并在其調(diào)控下的序列優(yōu)選是提供對纖維表型進(jìn)行修飾的感興趣的核苷酸序列。核苷酸序列優(yōu)選可以是編碼感興趣的多肽，例如，一種酶的任意開放閱讀框或者是互補(bǔ)于基因組序列的序列，其中基因組序列可以是開放閱讀框，內(nèi)含子，非編碼先導(dǎo)序列或任意其它序列，其中的互補(bǔ)序列抑制轉(zhuǎn)錄，信使RNA加工，例如，剪接或翻譯。本發(fā)明的核苷酸序列可以是合成的，天然產(chǎn)生的或其結(jié)合。取決于感興趣的DNA序列的特性，可按需要合成具有植物優(yōu)選密碼的序列。植物優(yōu)選的密碼可從在感興趣的特定植物種類中大量表達(dá)的蛋白質(zhì)的最高頻率的密碼子測定。表型修飾的實(shí)現(xiàn)可經(jīng)過調(diào)節(jié)內(nèi)源性轉(zhuǎn)錄或翻譯產(chǎn)物的生產(chǎn)，例如，對其量，相對分布等，或調(diào)節(jié)外源性轉(zhuǎn)錄或翻譯產(chǎn)物，例如以便在轉(zhuǎn)基因宿主細(xì)胞或組織中提供新的功能或產(chǎn)品。特別感興趣的是編碼與植物纖維形成相關(guān)的表達(dá)產(chǎn)物的DNA序列，包括涉及細(xì)胞分裂素，生長素，乙烯，脫落酸等代謝的基因。用于調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂素表達(dá)的方法和組合物在美國專利號5,177,307中描述，本文引用該說明書以供參考。作為選擇，可使用從包括其它真核或原核細(xì)胞(包括細(xì)菌)來源的各種基因，例如來自根癌土壤桿菌T-DNA生長素和細(xì)胞分裂素生物合成基因產(chǎn)物，和來自例如，哺乳動物，例如干擾素的那些基因。
表達(dá)盒中采用的終止區(qū)首先是一種方便的終止區(qū)，因為終止區(qū)似乎是可變性相當(dāng)大的。終止區(qū)可以是轉(zhuǎn)錄起始區(qū)本身的序列，可以是感興趣的DNA序列本身的序列，也可來自其它來源。終止區(qū)可以是天然存在的，或是全部或部分合成的。方便的終止區(qū)可從根癌土壤桿菌Ti-質(zhì)粒獲得，如章魚氨酸合成酶和胭脂氨酸合成酶終止區(qū)。在一些實(shí)施方案中，需要使用在特定構(gòu)建體中所用的棉花纖維轉(zhuǎn)錄起始區(qū)本身的3’終止區(qū)。
如本文所述，在一些例子中，構(gòu)建體中會存在其它的核苷酸序列以提供靶向特定細(xì)胞位置的特定基因產(chǎn)物。
對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言，將構(gòu)建體導(dǎo)入植物細(xì)胞宿主的各種技術(shù)是可獲得的且是已知的。這些技術(shù)包括采用根癌土壤桿菌或發(fā)根病土壤桿菌作為轉(zhuǎn)染劑用DNA轉(zhuǎn)染，原生質(zhì)融合，注射，電穿孔，粒子加速等。為了用土壤桿菌轉(zhuǎn)化，可在大腸桿菌中制備質(zhì)粒，它含有與Ti-質(zhì)粒同源的DNA，特別是T-DNA。該質(zhì)粒能夠或不能在土壤桿菌中復(fù)制，即它可以具有或不具有諸如pRK290的廣譜原核復(fù)制系統(tǒng)，這部分取決于轉(zhuǎn)錄盒是否能整合進(jìn)Ti-質(zhì)?；虮Ａ粼讵?dú)立的質(zhì)粒中。土壤桿菌宿主含有一種質(zhì)粒，它具有對T-DNA轉(zhuǎn)移進(jìn)植物細(xì)胞所必需的vir基因且可以含有或不含完整的T-DNA。Ti-或Ri-質(zhì)粒T-DNA的至少右側(cè)邊界且通常是左側(cè)及右側(cè)邊界作為側(cè)翼區(qū)域與轉(zhuǎn)錄構(gòu)建體連接。對T-DNA用于轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞進(jìn)行了廣泛的研究并在下列文獻(xiàn)中進(jìn)行了充分的描述EPA系列號120,516，Hoekema，在雙重植物載體系統(tǒng)，Offset-drukkerij Kanters B.V.，Alblasserdam，1985，第V章，Knauf，等，用土壤桿菌表達(dá)的宿主范圍的遺傳分析，在細(xì)菌—植物相互作用的分子遺傳學(xué)，Puhler，A.編輯，Springer-Verlag，NY，1983，p.245和An，等，EMBO J.(1985)4277-284。
對于感染，粒子加速和電穿孔，可將缺乏在T-DNA區(qū)域發(fā)現(xiàn)的特定的腫瘤基因的無臂的Ti-質(zhì)粒導(dǎo)入植物細(xì)胞。借助于輔助質(zhì)粒，可將構(gòu)建體轉(zhuǎn)移進(jìn)根癌土壤桿菌，所得的轉(zhuǎn)染生物用于轉(zhuǎn)染植物細(xì)胞；可用轉(zhuǎn)化的根癌土壤桿菌或發(fā)根病土壤桿菌培養(yǎng)外植體以便將轉(zhuǎn)錄盒轉(zhuǎn)移進(jìn)植物細(xì)胞。作為選擇，為了促進(jìn)整合進(jìn)植物基因組，轉(zhuǎn)座子的末端重復(fù)可用作與轉(zhuǎn)座酶結(jié)合的邊界。在這種情況下，轉(zhuǎn)座酶的表達(dá)應(yīng)是可誘導(dǎo)的，以便轉(zhuǎn)錄構(gòu)建體一旦整合進(jìn)基因組，應(yīng)相當(dāng)穩(wěn)定地整合。然后，將轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞放入合適的選擇培養(yǎng)基中用于選擇轉(zhuǎn)基因細(xì)胞，隨后該轉(zhuǎn)基因細(xì)胞生長成愈傷組織，經(jīng)過在生根培養(yǎng)基中生長長成幼苗并從幼苗產(chǎn)生小植株。
為了證實(shí)在轉(zhuǎn)基因細(xì)胞和植物中存在轉(zhuǎn)基因，可使用本領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的方法進(jìn)行Southern印跡分析。根據(jù)產(chǎn)物的特性可使用任意一種方法檢測轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物的表達(dá)，該方法包括免疫測定，酶測定或肉眼觀察，例如在合適的植物部分或細(xì)胞中檢測色素形成。一旦獲得轉(zhuǎn)基因植物，可培育它們以產(chǎn)生具有所需表型的纖維。可收獲纖維，和/或收集種子。種子可用作培育更多具有所需特征的植物的來源。術(shù)語轉(zhuǎn)基因植物和轉(zhuǎn)基因細(xì)胞包括轉(zhuǎn)基因植物或者轉(zhuǎn)基因細(xì)胞產(chǎn)生的植物和細(xì)胞。
本文提供的各種序列可用作分子探針用于分離在本發(fā)明中有用的其它序列，例如，從相同或不同植物來源獲得相關(guān)轉(zhuǎn)錄起動區(qū)?？蓮谋景l(fā)明提供的序列獲得的相關(guān)轉(zhuǎn)錄起動區(qū)顯示出至少大約60％的同源性，更優(yōu)選的區(qū)域與該探針顯示出更高的同源性百分?jǐn)?shù)。
特別重要的是獲得具有定時和本文所述的組織參數(shù)的相關(guān)轉(zhuǎn)錄起動控制區(qū)的能力。因此，經(jīng)過采用本申請所述的技術(shù)和本領(lǐng)域已知的其它技術(shù)(如，Maniatis等，分子克隆，實(shí)驗室手冊(冷泉港，紐約)1982)，可測定本發(fā)明所述的其它編碼區(qū)或蘋果青霉素的轉(zhuǎn)錄起始區(qū)。該構(gòu)建體也可用于與植物再生系統(tǒng)結(jié)合以獲得植物細(xì)胞和植物；因此，該構(gòu)建體可用于修飾纖維細(xì)胞的表型，以提供著色的棉花纖維，作為遺傳工程的結(jié)果修飾成在此以前不能獲得的顏色和/或強(qiáng)度。
使用所述方法可發(fā)現(xiàn)棉花的各種變種和品系。培育的棉花種類包括Gossypium hirsutum和G.babadense(超長穩(wěn)定，或Pima棉花)，它從西半球，和東半球莊稼G.herbaceum和G.arboreum進(jìn)化而來。
實(shí)施例下面的實(shí)施例以說明的方式而不是限制的方式提供。
實(shí)施例1cDNA文庫使用從陸地棉Acala SJ-2纖維制備的polyA+mRNA所產(chǎn)生的cDNA將未擴(kuò)增的cDNA文庫用于制備λUni-Zap載體(Stratagene，LaJolla，CA)，其中所述纖維在次生細(xì)胞壁蘋果青霉素達(dá)到最大比率(13)時的21DPA收獲。從cDNA文庫隨機(jī)選擇大約250個噬斑，純化噬菌體，從噬菌體載體切下質(zhì)粒并轉(zhuǎn)化。
將所得的克隆/插入片斷在0.8％瓊脂糖凝膠上進(jìn)行大小篩選(排除低于600bp的DNA插入片斷)。
實(shí)施例2分離并測序cDNA克隆使用應(yīng)用生物系統(tǒng)(Foster City，CA)373A型DNA測序儀隨機(jī)測序質(zhì)粒DNA插入片斷。
實(shí)施例3Northern和Southern分析棉花植物(G.hirsutum cv.Coker 130)在溫室中生長且在所示的合適時間收獲組織并在液氮中冷凍。制備總棉花RNA和棉花基因組DNA并按以前所述(14)進(jìn)行Northern和Southern分析。
實(shí)施例4棉花蘋果青霉素基因的鑒定，差別表達(dá)和基因組分析在從棉花纖維特異性cDNA文庫中篩選并測序隨機(jī)cDNA克隆的過程中，發(fā)現(xiàn)有一個cDNA克隆在初生細(xì)胞壁形成期間非?；钴S且與蘋果青霉素基因編碼的蛋白質(zhì)具有同源性。
然后將該克隆用作Northern印跡分析的探針以測定在棉花組織和形成的棉花纖維中的差別表達(dá)。蘋果青霉素基因編碼在開花后大約第一天開始到大約第20天初生細(xì)胞壁形成期間在纖維形成中高水平表達(dá)的mRNA。
實(shí)施例5基因組DNA蘋果青霉素克隆的cDNA用于探測基因組克隆。從使用來自StratageneTM的λ短條2載體制備的文庫獲得全長基因組DNA，其中使用從發(fā)芽幼苗獲得的DNA將該載體用于構(gòu)建棉花變體Coker 130(Gossypium hirsutum cv.coker 130)的基因組DNA文庫。
用蘋果青霉素探針探測棉花基因組文庫，鑒定并純化基因組噬菌體候選物。圖1提供了蘋果青霉素啟動子區(qū)大約2200堿基對的序列。蘋果青霉素酶編碼區(qū)的起始處在堿基號2297的ATG，且基因組克隆在圖1堿基號122處開始。
實(shí)施例6棉花轉(zhuǎn)化構(gòu)建體制備含有與感興趣的基因和感興趣的其它遺傳元件相連的蘋果青霉素啟動子序列的啟動子構(gòu)建體以本領(lǐng)域已知的任意方式制備，例如經(jīng)過連接來制備。外植體制備Coker315種子經(jīng)過放入50％Clorox(2.5％次氯酸溶液)中20分鐘并在無菌蒸餾水中漂洗3次進(jìn)行表面消毒。表面滅菌后，種子在含有25ml 1/2×MS鹽；1/2×B5維生素；1.5％葡萄糖；0.3％脫乙酰吉蘭糖膠的25×150無菌管中發(fā)芽。籽苗在28℃黑暗中萌發(fā)7天。在第7天將籽苗放入28±2℃的光線中。共同培養(yǎng)和植物再生含有二元質(zhì)粒pCGN2917和pCGN2926的根癌土壤桿菌菌株2760的單個菌落轉(zhuǎn)移進(jìn)5ml MG/L培養(yǎng)基并在30℃生長過夜。細(xì)菌培養(yǎng)物剛好在共同培養(yǎng)前用MG/L稀釋至1×108細(xì)胞/ml。從8日齡籽苗切下下胚軸，切成0.5-0.7cm切片并放在煙草飼養(yǎng)平板上(Horsch等，1985)。使用前一天經(jīng)過將1.0ml煙草懸浮培養(yǎng)物涂布到含有無抗生素的愈傷組織起動培養(yǎng)基(MS鹽B5維生素3％葡萄糖0.1mg/L2，4-D0.1mg/L細(xì)胞分裂素0.3％脫乙酰吉蘭糖膠，高壓滅菌前將pH調(diào)到5.8)的培養(yǎng)平板上制備飼養(yǎng)平板。使用前將無菌濾紙園片(Whatman#1)放在飼養(yǎng)細(xì)胞上面。制備所有的切片后，將各切片浸入根癌土壤桿菌培養(yǎng)基中，印跡到無菌濾紙巾上并轉(zhuǎn)移到煙草飼養(yǎng)平板上。
在飼養(yǎng)平板上共同培養(yǎng)2天后，將下胚軸切片放在含有75mg/L卡那霉素和500mg/L羧芐青霉素的新鮮愈傷組織起動培養(yǎng)基上。在28±2℃，30uE16∶8光照黑暗周期下培養(yǎng)組織4周。在四周時將完整的外植體轉(zhuǎn)移進(jìn)含有抗生素的新鮮愈傷組織起動培養(yǎng)基中。在第二步兩周后，從外植體取出愈傷組織并分配進(jìn)愈傷組織起動培養(yǎng)基和再生培養(yǎng)基(MS鹽40mM KNO310mM NH4ClB5維生素3％葡萄糖0.3％脫乙酰吉蘭糖膠400mg/L羧芐青霉素75mg/L卡那霉素)中。
起動2-6個月后鑒定胚發(fā)生愈傷組織并傳代到新鮮再生培養(yǎng)基中。選擇用于發(fā)芽的胚，放入靜態(tài)液體胚脈沖培養(yǎng)基(Stewart和Hsu培養(yǎng)基0.01mg/l NAA0.01mg/L細(xì)胞分裂素0.2mg/L GA3)中并在30℃培養(yǎng)過夜。將胚吸印到紙巾上并放入含有40ml用脫乙酰吉蘭糖膠固化的Stewart和Hsu培養(yǎng)基的品紅盒中。發(fā)芽的胚在28±2℃ 50uEm-2s-116∶8光周期下維持。將生根的小植株轉(zhuǎn)移進(jìn)土壤并在溫室中生長。
生長室的棉花生長條件如下16小時光周期，大約80-85°的溫度，大約500μ愛因斯坦的光強(qiáng)度。溫室中的棉花生長條件如下14-16小時光周期，光強(qiáng)度至少為400μ愛因斯坦，白天溫度為90-95°F，夜晚溫度為70-75°F，相對濕度達(dá)到大約80％。植物分析溫室生長的T1植物的花在溫室中開花時被標(biāo)記。在發(fā)育的各階段從這些植物收獲棉蕾(棉花花芽)，花，棉桃等并測定觀察到的表型或試驗酶活性。
上述結(jié)果證實(shí)了蘋果青霉素cDNA如何用于改變轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞的表型，及該啟動子如何用于修飾轉(zhuǎn)基因棉花纖維細(xì)胞。
本說明書引用的所有文獻(xiàn)和專利申請作為參考文獻(xiàn)引入本文，與各文獻(xiàn)或?qū)＠暾埦唧w和單獨(dú)指明作為參考文獻(xiàn)引入一樣。
盡管為了清楚和了解的目的以說明和實(shí)施例的方式在一定程度上詳細(xì)描述了上述發(fā)明，但對本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言顯而易見的是可對其作出某些改變和修飾而不偏離所附權(quán)利要求的實(shí)質(zhì)或范圍。
權(quán)利要求
1.一種分離的棉花植物蘋果青霉素啟動子區(qū)的DNA序列。
2.編碼權(quán)利要求1的序列的啟動子，其中所述的棉花蘋果青霉素啟動子區(qū)取自圖1的序列。
3.一種重組DNA構(gòu)建體，含有編碼權(quán)利要求1-2的序列的任意DNA。
4.一種植物細(xì)胞，含有權(quán)利要求3的DNA構(gòu)建體。
5.一種含有權(quán)利要求4的細(xì)胞的植物。
6.一種修飾棉花植物中纖維表型的方法，所述的方法包括用包含構(gòu)建體的DNA轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞，所述的構(gòu)建體具有與感興趣的基因連接的權(quán)利要求3的啟動子，其中所述的感興趣的基因在纖維細(xì)胞中表達(dá)時能修飾纖維特性。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種陸地棉啟動子區(qū)域,它來自在形成纖維中表達(dá)的蘋果青霉素基因。
文檔編號C07K14/415GK1243545SQ98801714
公開日2000年2月2日 申請日期1998年1月7日 優(yōu)先權(quán)日1997年1月7日
發(fā)明者戴維·M·斯托克, 朱莉·R·皮爾 申請人:卡爾金有限責(zé)任公司