專利名稱：抑制法呢基轉(zhuǎn)移酶的2－喹諾酮衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的2-喹諾酮衍生物，其制備方法，包含所述新化合物的藥用組合物和這些化合物作為藥物的用途以及所述化合物用藥的治療方法。
致癌基因常常編碼信息傳導(dǎo)通道的蛋白質(zhì)組分，導(dǎo)致刺激細(xì)胞生長(zhǎng)和有絲分裂發(fā)生。致癌基因在培養(yǎng)的細(xì)胞中的表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞轉(zhuǎn)化，其特征為細(xì)胞在軟瓊脂中的生長(zhǎng)能力和細(xì)胞缺乏由非轉(zhuǎn)化細(xì)胞所顯示的接觸抑制的濃的集中點(diǎn)的生長(zhǎng)。某些致癌基因的突變和/或過(guò)度表達(dá)常同人類癌癥有關(guān)。致癌基因的特殊型稱為ras，已在哺乳動(dòng)物，鳥類、昆蟲類、軟體動(dòng)物類、植物類、真菌類和酵母類中得到鑒定。哺乳動(dòng)物ras致癌基因家族由三種主要成員(“同源形式”)組成H-ras、K-ras和N-ras致癌基因。這些ras致癌基因給密切相關(guān)的蛋白(常稱為p21ras)編碼。一旦附著于血漿膜上，P21ras的突變型或致癌基因型將為惡性腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)化和不受控制生長(zhǎng)提供信號(hào)。為獲得此轉(zhuǎn)化潛力，P21ras腫瘤蛋白的前體必須經(jīng)歷位于羧基末端四肽中的半胱氨酸殘基的酶催化的法呢基化作用。因此，催化此修飾過(guò)程的酶的抑制劑，即法泥基蛋白轉(zhuǎn)移酶，將阻止P21ras的膜附著并阻斷ras-轉(zhuǎn)化腫瘤的異常生長(zhǎng)。因此，在本領(lǐng)域內(nèi)一般認(rèn)為法呢基轉(zhuǎn)移酶抑制劑在ras引起轉(zhuǎn)化的腫瘤中作為抗癌劑是非常有用的。
由于突變，經(jīng)常在人類許多癌中，最顯著的在50％以上的結(jié)腸癌和胰腺癌中發(fā)現(xiàn)ras的致癌基因型(Kohl等人，Science，第260卷，1834-1837，1993)，因此，已認(rèn)為法呢基轉(zhuǎn)移酶抑制劑在對(duì)抗這些種類癌癥是非常有用的。
在EP-0371564中描述了(1H-吡咯-1-基甲基)取代的喹啉和喹啉酮衍生物，它們可以抑制視黃酸類的漿清除。某些此類化合物也具有抑制由孕激素形成雄激素和/或抑制芳香酶的酶復(fù)合物作用的能力。
出乎意料，已發(fā)現(xiàn)本發(fā)明新的均具有在2-喹諾酮部分的4位上苯基取代的化合物顯示法呢基轉(zhuǎn)移酶抑制活性。
本發(fā)明包括式(I)的化合物及其藥學(xué)上可接受的酸或堿加成鹽以及立體異構(gòu)體，
其中點(diǎn)線代表任意鍵；X代表氧或硫；R1為氫、C1-12烷基、Ar1、Ar2C1-6烷基、喹啉基C1-6烷基、吡啶基C1-6烷基、羥基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、一或二(C1 -6烷基)、氨基C1-6烷基或式-Alk1-C(＝O)-R9、-Alk1-S(O)-R9或-Alk1-S(O)2-R9的基團(tuán)，其中，Alk1為C1-6烷二基，R9為羥基，C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、C1-8烷氨基或被C1-6烷氧羰基取代的C1-8烷氨基；R2和R3分別獨(dú)立地為氫、羥基、鹵素、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羥基C1-6烷氧基、C1-6烷氧基C1-6烷氧基、氨基C1-6烷氧基、一或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基、Ar1、Ar2C1-6烷基、Ar2氧基、Ar2C1-6烷氧基、羥羰基、C1-6烷氧羰基、三鹵代甲基、三鹵代甲氧基、C2-6鏈烯基；或當(dāng)鄰位R2和R3結(jié)合時(shí)可形成下式的二價(jià)基團(tuán)
-O-CH2-O- (a-1)，-O-CH2-CH2-O- (a-2)，-O-CH＝CH- (a-3)，-O-CH2-CH2-(a-4)，-O-CH2-CH2-CH2- (a-5)，或-CH＝CH-CH＝CH- (a-6)；R4和R5各獨(dú)立為氫、Ar1、C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、氨基、羥羰基、C1-6烷氧羰基、C1-6烷基S(O)C1-6烷基或C1-6烷基S(O)2C1-6烷基；R6和R7各獨(dú)立為氫、鹵素、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基或Ar2氧基；R8為氫、C1-6烷基、氰基、羥羰基、C1-6烷氧羰基、C1-6烷羰基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、C1-6烷氧羰基C1-6烷基、羥羰基C1-6烷基、羥C1-6烷基、氨基C1-6烷基、一或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、鹵代C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、氨羰基C1-6烷基、Ar1、Ar2C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷硫基C1-6烷基；R10為氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基或鹵素；R11為氫或C1-6烷基；Ar1為苯基或被C1-6烷基、羥基、氨基、C1-6烷氧基或鹵素取代的苯基；Ar2為苯基或被C1-6烷基、羥基、氨基、C1-6烷氧基或鹵素取代的苯基。
如前述定義及此后，鹵素指氟、氯、溴、和碘；C1-6烷基指具有1-6個(gè)碳原子的直鏈和支鏈飽和烴基，如，像甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基等；C1-8烷基指與C1-6烷基定義相同的直鏈和支鏈的烴基和含有7或8個(gè)碳原子的其更高的同系物，如，像庚基或辛基；C1-12烷基也包括C1-8烷基和含有9-12個(gè)碳原子的其更高的同系物；如，像壬基、癸基、十一基、十二基；C2-6鏈烯基定義為含有一個(gè)雙鍵和具有2-6個(gè)碳原子的直鏈和支鏈烴基，如，像乙烯基、2-丙烯基、3-丁烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、3-甲基-2-丁烯基等；C1-6烷二基定義為具有1-6個(gè)碳原子的二價(jià)的直鏈和支鏈的飽和烴基，如，像亞甲基、1，2-乙二基、1，3-丙二基、1，4-丁二基、1，5-戊二基、1，6-己二基及其支鏈異構(gòu)體。術(shù)語(yǔ)“C(＝O)”指羰基。術(shù)語(yǔ)“S(O)”指亞砜而術(shù)語(yǔ)“S(O)2”指砜。
上述藥學(xué)上可接受的酸或堿加成鹽指包括式(I)化合物可形成的具有治療活性的無(wú)毒性酸和無(wú)毒性堿的加成鹽形式。通過(guò)用適當(dāng)?shù)乃崽幚硭鰤A可將具有堿性的式(I)的化合物轉(zhuǎn)化為其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽。適當(dāng)?shù)乃岚?，例如無(wú)機(jī)酸像如氫氯酸或氫溴酸的氫鹵酸；硫酸；硝酸；磷酸等；或有機(jī)酸如像乙酸、丙酸、羥基乙酸、乳酸、丙酮酸、草酸、丙二酸、琥珀酸(即丁二酸)、馬來(lái)酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、對(duì)-甲苯磺酸、環(huán)己烷氨基磺酸、水楊酸、對(duì)-氨基水楊酸、pamoic酸等。
通過(guò)用適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)或無(wú)機(jī)堿處理所述酸，可將具有酸性的式(I)化合物轉(zhuǎn)變?yōu)槠渌帉W(xué)上可接受的堿加成鹽。適當(dāng)堿的鹽包括如銨鹽、堿金屬和堿土金屬鹽，如鋰、鈉、鉀、鎂、鈣鹽等，與有機(jī)堿所成的鹽如benzathine、N-甲基-D-葡萄糖胺、hydrabamine鹽、及與氨基酸如像精氨酸、賴氨酸等形成的鹽。
術(shù)語(yǔ)酸或堿加成鹽也包括由式(I)化合物能夠形成的水合物和溶劑加成形式。其實(shí)例有水合物、醇化物等。
前述所使用的術(shù)語(yǔ)式(I)化合物的立體異構(gòu)體定義為由相同的原子通過(guò)相同的鍵的順序組成的，但具有不同的三維結(jié)構(gòu)，且不能相互轉(zhuǎn)換的，式(I)化合物可以具有的所有可能的化合物。除另外提及或指明，化合物的化學(xué)命名包括所述化合物可以具有的所有可能的立體異構(gòu)體的混合物。所述混合物可含有所述化合物基本分子結(jié)構(gòu)的所有非對(duì)映異構(gòu)體和/或?qū)τ钞悩?gòu)體。式(I)化合物以純的或以相互混合物形式存在的所有的立體異構(gòu)體均包含于本發(fā)明范圍內(nèi)。
部分式(I)化合物也可以以其互變異構(gòu)體形式存在。此形式雖未在上式中明確指出，但也包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
下文無(wú)論何時(shí)使用，術(shù)語(yǔ)“式(I)化合物”，均意指也包括藥學(xué)上可接受的酸或堿加成鹽和所有的立體異構(gòu)體。X優(yōu)選為氧。R1宜為氫；C1-6烷基，優(yōu)選甲基、乙基、丙基；Ar1，優(yōu)選苯基；Ar2C1-6烷基，優(yōu)選芐基、甲氧苯乙基；式-Alk-C(＝O)-R9的基團(tuán)，其中Alk優(yōu)選為亞甲基，及R9優(yōu)選為羥基；C1-6烷氧基如乙氧基；用C1-6烷氧羰基取代的C1-8烷氨基。R2和R3各獨(dú)立地為氫、鹵素、優(yōu)選氟、氯、溴；C1-6烷基，優(yōu)選甲基、三鹵代甲基，優(yōu)選三氟甲基；C1-6烷氧基，優(yōu)選甲氧基或乙氧基；Ar2氧基，優(yōu)選苯氧基；Ar2C1-6烷氧基，優(yōu)選芐氧基；三鹵代甲氧基，優(yōu)選三氟甲氧基。R4和R5各獨(dú)立宜為氫；Ar1，優(yōu)選為苯基；C1-6烷基，優(yōu)選為甲基；C1-6烷硫基，優(yōu)選為甲硫基；氨基；C1-6烷氧羰基，優(yōu)選為甲氧羰基。R6和R7各獨(dú)立宜為氫；鹵素，優(yōu)選氯、氟；C1-6烷基，優(yōu)選甲基；C1-6烷氧基，優(yōu)選甲氧基。R8宜為氫；C1-6烷基，優(yōu)選甲基、乙基或丙基；Ar1優(yōu)選氯苯基；用羥基取代的C1-6烷基(優(yōu)選羥基亞甲基)，C1-6烷氧基(優(yōu)選甲氧亞甲基)、氨基，一或二-C1-6烷氧基(優(yōu)選N，N-二甲氨基亞甲基)，Ar2C1-6烷氧基(優(yōu)選氯芐氧甲基)或C1-6烷硫基(甲硫基亞甲基)。R10和R11為氫。
優(yōu)選取代基R10位于喹啉酮部分的5位或7位上和當(dāng)R10位于7位時(shí)，取代基R11位于8位上。
令人感興趣的一組化合物為其中R1為氫、C1-12烷基或C1-6烷氧基C1-6烷基的式(I)化合物。
令人感興趣的另一組化合物為這樣一些化合物，其中R3為氫和R2為鹵素，優(yōu)選氯基，特別是3-氯基。
令人感興趣的又一組化合物為這樣一些化合物，其中R2和R3為鄰位并形成式(a-1)的二價(jià)基。
令人感興趣的再一組化合物為這樣一些化合物，其中R5和R4為氫、C1-6烷基或Ar1，優(yōu)選苯基。
令人感興趣的又再一組化合物為式(I)的這樣一些化合物，其中R7為氫和R6為鹵素，優(yōu)選氯，特別是4-氯基。
特別的化合物為式(I)的這樣一些化合物，其中R8為氫、C1-6烷基或羥基C1-6烷基。
更令人感興趣的化合物為式(I)的這樣一些令人感興趣的化合物，其中R1為甲基，R2為3-氯基，R4為氫或5-甲基，R5為氫，R6為4-氯基，和R8為氫，C1-6烷基或羥基C1-6烷基。
優(yōu)選的化合物為4-(3-氯苯基)-6-[(4-氯苯基)-1H-咪唑-1-基甲基]-1-甲基-2(1H)-喹啉酮；4-(3-氯苯基)-6-[(4-氯苯基)-1H-咪唑-1-基甲基]-2(1H)-喹啉酮；6-[1-(4-氯苯基)-2-羥基-1-(1H-咪唑-1-基)乙基]-1-甲基-4-苯基-2(1H)-喹啉酮；4-(3-氯苯基)-6-[1-(4-氯苯基)-1-(1H-咪唑-1-基)乙基]-1-甲基-2(1H)-喹啉酮；4-(3-氯苯基)-6-[1-(4-氯苯基)-1-(5-甲基-1H-咪唑-1-基)乙基]-1-甲基-2(1H)-喹啉酮；4-(3-氯苯基)-6-[1-(4-氯苯基)-2-羥基-1-(1H-咪唑-1-基)乙基]-1-甲基-2(1H)-喹啉酮；4-(3-氯苯基)-6-[1-(4-氯苯基)(1H-咪唑-1-基)甲基]-1-(2-甲氧乙基)-2(1H)-喹啉酮乙二酸鹽(2∶3)一水化合物；6-[(4-氯苯基)(1H-咪唑-1-基)甲基]-4-(1，3-苯并間二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮乙二酸鹽(1∶1)；及立體異構(gòu)體和藥學(xué)上可接受的酸或堿加成鹽。
式(I)的化合物可以通過(guò)式(II)的咪唑或其堿金屬鹽與式(III)衍生物的N-烷基化制得。
在式(III)中，W代表適當(dāng)活性的離去基團(tuán)，如鹵素，像氟、氯、溴、碘或磺酰氧基如4-甲基苯磺酰氧基、苯磺酰氧基、2-萘磺酰氧基、甲磺酰氧基、三氟甲磺酰氧基和類似的活性離去基團(tuán)。
上述的N-烷基化過(guò)程可通過(guò)在適宜的溶劑例如，像極性質(zhì)子惰性溶劑，例如N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、二甲基亞砜、乙腈中攪拌反應(yīng)物方便地進(jìn)行；優(yōu)選有適當(dāng)?shù)膲A如碳酸鉀或有機(jī)堿例如像N，N-二甲基-4-吡啶胺、吡啶、N，N-二乙基乙胺存在下進(jìn)行。在某些情況下，使用過(guò)量的咪唑(II)或者首先將咪唑轉(zhuǎn)變?yōu)槠溥m宜的鹽形式，例如像堿金屬或堿土金屬鹽可能更有利，通過(guò)使式(II)化合物與上述定義的適當(dāng)?shù)膲A反應(yīng)并隨后在與式(III)烷基化試劑的反應(yīng)中使用所述鹽形式。
式(I)的化合物也可以通過(guò)使式(II)的中間體與式(V)試劑反應(yīng)制得，其中Y為碳或硫，例如像1，1’-羰基-雙[1H-咪唑]。
所述反應(yīng)可在適當(dāng)?shù)娜軇?，例如像醚，如四氫呋喃中方便地進(jìn)行；任意地在堿如氫化鈉存在下進(jìn)行。
在所有前述和下述制備中，可以從所述反應(yīng)混合物中分離所述反應(yīng)產(chǎn)物并且若需要，可按照本領(lǐng)域所周知的方法，如提取、蒸餾、結(jié)晶、研磨和層析進(jìn)一步純化。
其中點(diǎn)線代表鍵的式(I)化合物，該化合物被定義為式(I-a)的化合物可以通過(guò)環(huán)化式(VI)的中間體獲得。
(VI)的環(huán)化反應(yīng)可以按照本領(lǐng)域所知的如Synthesis，739(1975)中所述環(huán)化步驟進(jìn)行。優(yōu)選所述反應(yīng)在適當(dāng)?shù)腖ewis酸如三氯化鋁存在下，單純地或在適當(dāng)?shù)娜軇┤绶枷銦N，像氯苯中進(jìn)行。稍微升高溫度可以提高反應(yīng)速率。而且，根據(jù)取代基R2/R3的性質(zhì)，在一個(gè)苯基部分上的這些取代基可不同于在另一苯基部分上的R2/R3取代基，如Natarajan M等人在Indian Joumal of Chemistry，23B720-727(1984)中所述。
式(I-a-1)的化合物，其中R1為氫，X為氧并且點(diǎn)線代表鍵，可以通過(guò)根據(jù)本領(lǐng)域所知的方法，在酸性水溶液中攪拌中間體(XXVI)，水解式(XXVI)中間體而制得。適宜的酸例如為鹽酸。隨后，可將式(I-a-1)的化合物用本領(lǐng)域所知的N-烷基化法轉(zhuǎn)化為式(I-a)的化合物。
如式(I)化合物所定義的式(I-b)的化合物，其中R8為羥基亞甲基，可通過(guò)用式(II)的咪唑使式(VII)的環(huán)氧化物開環(huán)而制得。
式(I)的化合物，其中R1為氫并且X為氧，所述化合物被定義為式(I-f-1)化合物，可通過(guò)使式(XV)的硝酮與羧酸的酸酐，例如像乙酸酐反應(yīng)，因而在喹啉部分的2位上形成相應(yīng)的酯而制得。所述喹啉酯可以用堿，如碳酸鉀在位水解為相應(yīng)的喹啉酮。
(I-f-1)化合物可以選擇性地通過(guò)使式(XV)的硝酮與含有磺?；挠H電子試劑，例如，像對(duì)-甲苯磺酰氯在堿例如，像碳酸鉀水溶液存在下反應(yīng)制得。所述反應(yīng)最初涉及2-羥基喹啉衍生物的形成，隨后互變異構(gòu)化為所需要的喹啉酮衍生物。本領(lǐng)域所知的相轉(zhuǎn)移催化條件的應(yīng)用可以提高反應(yīng)速率。
式(I-f-1)的化合物也可以通過(guò)式(XV)化合物的分子內(nèi)光化學(xué)重排作用制備。所述重排可以通過(guò)將所述試劑溶于反應(yīng)惰性溶劑中并在波長(zhǎng)366nm照射下進(jìn)行。使用脫氣的溶液并使反應(yīng)在惰性氣體環(huán)境，例如像無(wú)氧的氬氣或氮?dú)庵羞M(jìn)行更有利，以使非所需副反應(yīng)或量子產(chǎn)量的降低減至最小。
式(I)的結(jié)構(gòu)式的化合物，其中R1為氫，被定義為式(I-c-1)化合物的所述化合物，可以被轉(zhuǎn)化為式(I-c-2)的化合物，其中R1b被定義為R1，除氫外。例如，式(I-c-1)的化合物可以在堿例如像氫化鈉的存在下，用R1b-W1-N-烷基化，其中W1為活性的離去基團(tuán)，例如，像鹵素或磺酰氧基。
所述反應(yīng)可以通過(guò)在反應(yīng)惰性溶劑如像N，N-二甲基甲酰胺中混合所述反應(yīng)物方便地進(jìn)行。建議在略微降低的溫度下進(jìn)行該反應(yīng)。此外，在惰性氣體環(huán)境下，例如像氬氣或氮?dú)庵羞M(jìn)行所述的N-烷基化更有利。所述反應(yīng)也可以用本領(lǐng)域熟知的相轉(zhuǎn)移催化(PTC)條件進(jìn)行，如在濃氫氧化鈉水溶液和有機(jī)溶劑，如四氫呋喃的混合液中，在相轉(zhuǎn)移催化劑，如氯化芐基三乙基銨(BTEAC)存在下攪拌所述反應(yīng)物。
在R1b為芳基的情況下，可通過(guò)在氯化亞銅(CuCl)存在下，在適當(dāng)?shù)娜軇?，如甲醇中，在堿如甲醇鈉存在下使式(I-C-1)的化合物同反應(yīng)劑如氯化二苯碘反應(yīng)進(jìn)行N-烷基化。
式(I)的結(jié)構(gòu)式的化合物，其中R1為R1b并且R8為氫，被定義為式(I-d-1)的化合物的所述化合物可被轉(zhuǎn)化為結(jié)構(gòu)式(I-d-2)的化合物，其中R8a為羥基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、一或二-C1-6烷氨基C1-6烷基。例如，式(I-d-1)的化合物可以用式R8a-W1的試劑，其中W1為活性離去基團(tuán)，如像鹵素或磺酰氧基，并在堿如像氫化鈉存在下烷基化。
所述烷基化可以通過(guò)在反應(yīng)惰性溶劑，如，像四氫呋喃或N，N-二甲基甲酰胺中，在堿如叔丁醇鉀存在下混合所述試劑方便地進(jìn)行。此外，在惰性氣體環(huán)境，如氬或氮?dú)庵羞M(jìn)行所述烷基化更有利。
式(I-e)的化合物，被定義為式(I)的化合物，其中X為硫，可以通過(guò)使式(I-f)的相應(yīng)化合物，定義為式(I)的化合物，其中X為氧，與試劑如五硫化二磷或Lawesson’s試劑(C14H14O2P2S4)反應(yīng)制得。
所述反應(yīng)可通過(guò)在五硫化二磷(P4O10)或Lawesson’s試劑存在下，在適當(dāng)?shù)娜軇┤邕拎ぶ袛嚢韬腿我獾丶訜崾?I-f)的化合物進(jìn)行。
式(I)的化合物也可以通過(guò)組成咪唑環(huán)作為最后步驟制得。此環(huán)化反應(yīng)在實(shí)施例19和21中舉例說(shuō)明。
式(I)的化合物也可以通過(guò)本領(lǐng)域所知的反應(yīng)或功能基的轉(zhuǎn)化互相轉(zhuǎn)化而得。前文已對(duì)此數(shù)種轉(zhuǎn)化作了描述。其它實(shí)例為羧酸酯水解為相應(yīng)的羧酸或醇；酰胺為水解為相應(yīng)的羧酸或胺；咪唑或苯基上的氨基可以通過(guò)本領(lǐng)域所知的重氮化作用和隨后用氫取代重氮基而被氫取代；醇可轉(zhuǎn)變?yōu)轷ズ兔眩灰患?jí)胺可以轉(zhuǎn)變?yōu)槎?jí)或三級(jí)胺；雙鍵可氫化為相應(yīng)的單鍵。
可根據(jù)本領(lǐng)域所知的方法制備上述中間體。其部分方法如下所述。
式(IV)的中間體可以通過(guò)使式(VIII)取代的4-苯基-2-喹諾酮的衍生物與式(IX)的羧酸或其官能衍生物，如酰氯反應(yīng)，生成式(X)的酮而制得。所述反應(yīng)可通過(guò)在適當(dāng)?shù)娜軇┲?，在酸，如多磷酸存在下攪拌反?yīng)物而進(jìn)行。隨后將此酮還原產(chǎn)生中間體，其中R8為氫，或使其與適當(dāng)?shù)募映稍噭┓磻?yīng)。
式(III)的中間體可以由式(IV)的中間體開始，通過(guò)使式(IV)的中間體與適當(dāng)?shù)脑噭┓磻?yīng)，將羥基轉(zhuǎn)化為活性的離去基團(tuán)而制備。適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)化試劑如，亞硫酰氯，以獲得式(III)的中間體，其中W為氯或氯代亞硫酸鹽；或?qū)?甲苯磺酰氯，以獲得式(HI)的中間體，其中W為對(duì)-甲苯磺?；?br> 式(VII)的中間體可以通過(guò)使式(X)的酮在適當(dāng)條件下與內(nèi)鎓硫鹽如二甲氧基硫甲鎓(dimethyloxosulfonium methylide)反應(yīng)制得。
流程I
式(VI)的中間體可如下流程II所述制備。使式(XI)的硝基苯衍生物在本領(lǐng)域所知的條件下與式(II)的咪唑反應(yīng)，產(chǎn)生式(XII)的中間體。將所述硝基苯衍生物隨后還原成式(XIII)的苯胺衍生物，然后與式(XIV)的酸衍生物反應(yīng)產(chǎn)生式(VI)的中間體。
流程II
通過(guò)使式(XVI)的N-氧化喹啉衍生物與適當(dāng)?shù)难趸瘎?，如間-氯-過(guò)氧苯甲酸在適當(dāng)溶劑如二氯甲烷中反應(yīng)制得式(XV)的中間體硝酮。式(XVI)的喹啉可通過(guò)與式(X)的中間體轉(zhuǎn)化為式(III)的中間體類似的過(guò)程制備，并隨后用式(II)的中間體進(jìn)行N-烷基化，如J.Kenner等[J.Chem.Soc.299(1935)]所述方法，按照本領(lǐng)域所知的步驟，由喹啉衍生物開始制備。也可以在式(XVI)的喹啉的前體上進(jìn)行所述N-氧化反應(yīng)。
假定式(XVI)的中間體代謝為式(I)的化合物。因此，式(XVI)的中間體可作為式(I)的化合物的前體藥物。
根據(jù)流程III可以制備(x-a)的中間體，為式(X)的中間體，其中，點(diǎn)線代表鍵。
流程III
在流程III中，使式(XVII)的中間體與式(XVIII)的中間體反應(yīng)，其中Z為適當(dāng)保護(hù)的氧代基團(tuán)，如1，3-二氧戊環(huán)，產(chǎn)生式(XIX)的中間體，隨后用催化氫化條件，如在反應(yīng)惰性溶劑如四氫呋喃中用氫氣和鈀炭使其轉(zhuǎn)化為式(XX)的中間體。式(XX)的中間體可通過(guò)使中間體(XX)進(jìn)行乙?；磻?yīng)轉(zhuǎn)化為式(XXI)的中間體，如用羧酸的酸酐，如乙酸酐，在反應(yīng)惰性溶劑如甲苯中處理，隨意在堿存在下以中和反應(yīng)中釋放的酸，并且隨后用堿如叔丁醇鉀在反應(yīng)惰性溶劑如1，2-二甲氧基乙烷中處理。式(X-a-1)的中間體，為式(X-a)的中間體，其中R1為氫，可以通過(guò)用本領(lǐng)域所知的反應(yīng)條件，如酸性條件下從式(XXI)的中間體中除去保護(hù)基團(tuán)而獲得。用本領(lǐng)域所知的N-烷基化反應(yīng)，將式(X-a-1)的中間體轉(zhuǎn)化為式(X-a)的中間體。
而且，通過(guò)在水存在下，在反應(yīng)惰性溶劑，如四氫呋喃中用TiCl3處理式(XIX)的中間體也可以獲得式(X-a-1)的中間體，或者通過(guò)催化氫化，產(chǎn)生式(XXII)的中間體，隨后用前述用于由中間體(XX)轉(zhuǎn)化為中間體(XXI)的相同反應(yīng)轉(zhuǎn)化為中間體(X-1)。
流程IV描述式(XXVI-a)的中間體合成，其中R8b為一適當(dāng)選自R8的取代基，以適于中間體(XXIII)的有機(jī)鋰衍生物對(duì)中間體(XXIV)的氧代基團(tuán)的加成反應(yīng)。R8b為如氫、C1-6烷基、C1-6烷氧羧基等。
流程IV
在流程IV中，式(XXIII)的中間體，其中W2為鹵素，在反應(yīng)惰性溶劑，如四氫呋喃中用有機(jī)鋰試劑如正-丁基鋰處理，隨后與式(XXIV)的中間體反應(yīng)產(chǎn)生式(XXV)的中間體，隨后通過(guò)用式(V)的中間體處理轉(zhuǎn)化為式(XXVI)的中間體。
式(I)的化合物和部分中間體在其結(jié)構(gòu)中具有至少一個(gè)立體中心(stererogenic center)。該立體中心可以以R或S構(gòu)象存在。
前述步驟制得的式(I)的化合物一般為對(duì)映異構(gòu)體的外消旋混合物，可以按照本領(lǐng)域所知的分離方法將其彼此分離。通過(guò)與適當(dāng)?shù)氖中运岱磻?yīng)可將式(I)的外消旋化合物轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)的非對(duì)映異構(gòu)鹽的形式。隨后如通過(guò)選擇性或分步結(jié)晶分離所述非對(duì)映異構(gòu)鹽并且通過(guò)堿使對(duì)映異構(gòu)體釋放出來(lái)。分離式(I)化合物的對(duì)映異構(gòu)體的另一方法包括用手性固定相進(jìn)行的液相層析。所述純立體異構(gòu)體也可以由適當(dāng)?shù)钠鹗荚系南鄳?yīng)的純的立體異構(gòu)體衍生而得，只要發(fā)生立體特異性反應(yīng)即可。優(yōu)選若需要特定的立體異構(gòu)體，所述化合物通過(guò)立體選擇性制備方法合成。上述方法用純的對(duì)映異構(gòu)物起始原料更有利。
本發(fā)明通過(guò)給與有效量的本發(fā)明的化合物提供抑制細(xì)胞包括轉(zhuǎn)化細(xì)胞異常生長(zhǎng)的方法。細(xì)胞的異常生長(zhǎng)指細(xì)胞生長(zhǎng)不依賴正常的調(diào)節(jié)機(jī)制(如失去接觸抑制)。它包括如下異常生長(zhǎng)(1)表達(dá)活性ras致癌基因的癌細(xì)胞(腫瘤)；(2)由于另一基團(tuán)的致癌基因突變結(jié)果而活化ras蛋白的腫瘤細(xì)胞；(3)在異常的ras活化發(fā)生中的其它增殖性疾病的良性和惡性細(xì)胞。再者，文獻(xiàn)認(rèn)為ras致癌基因不僅可以在體內(nèi)通過(guò)直接作用于腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)而有助于腫瘤生長(zhǎng)而且間接地即通過(guò)促進(jìn)誘導(dǎo)腫瘤的血管生成而有助于腫瘤的生長(zhǎng)(Rak.J.等人，Cancer Research，55，4575-4580，1995)。因此，藥理學(xué)上的靶向突變株ras致癌基因可部分通過(guò)抑制誘導(dǎo)腫瘤的血管生成而設(shè)想在體內(nèi)抑制實(shí)體腫瘤生成。
本發(fā)明亦提供通過(guò)給與需要此治療的受治療者，如哺乳動(dòng)物(和更準(zhǔn)確地說(shuō)人類)有效量的本發(fā)明的化合物抑制腫瘤生長(zhǎng)的方法。特別是本發(fā)明通過(guò)給與有效量的本發(fā)明化合物提供抑制表達(dá)活化的ras致癌基因的腫瘤生長(zhǎng)的方法?？杀灰种频哪[瘤的實(shí)例(但不局限于此)為肺癌(如腺癌)、胰腺癌(如胰腺癌，如外分泌胰腺癌)、結(jié)腸癌(如結(jié)腸直腸癌，如結(jié)腸腺癌和結(jié)腸腺瘤)、淋巴瘤譜系的造血性腫瘤(如急性淋巴細(xì)胞性白血病、B-細(xì)胞淋巴瘤、Burkitt’s淋巴瘤)、骨髓性白血病[例如，急性骨髓性發(fā)生白血病(AML)]、甲狀腺濾泡癌、骨髓發(fā)育不良綜合癥(MDS)、間質(zhì)起源的腫瘤(如纖維肉瘤和橫紋肌肉瘤)、黑瘤、畸形癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、皮膚的良性腫瘤(如角化棘化皮瘤)乳腺癌、腎癌、卵巢癌、膀胱癌和表皮癌。
本發(fā)明也提供抑制增殖性疾病的方法，包括良性的和惡性的，其中ras蛋白由于基因的致癌性的突變的結(jié)果被非正常活化，即ras基因本身不被突變?yōu)橹掳┬曰虻耐蛔兓罨癁橹掳┗蛐?，所述抑制可通過(guò)給與需要此治療的受治療者在此所述化合物的有效劑量而完成。例如，良性的增殖性疾病多發(fā)性神經(jīng)纖維瘤或腫瘤，其中ras由于酪氨酸激酶致癌基因的變異或過(guò)度表達(dá)而被活化，可被本發(fā)明化合物所抑制。
本發(fā)明也涉及前述定義的作為藥物應(yīng)用的式(I)的化合物。
鑒于其有用的藥理性質(zhì)，可將所述目標(biāo)化合物配制成各種可供給藥的劑型。為制備本發(fā)明的藥用組合物，將有效量的特定化合物，以堿或酸加成鹽的形式，作為活性組分與藥學(xué)上可接受的載體結(jié)合成充分的混合物，根據(jù)給藥所需的制劑的形式可應(yīng)用多種載體形式。這些藥用組合物，優(yōu)選可用于口服、直腸、皮下，或腸外注射的單劑量形式。例如，制備口服劑型的所述組合物，可使用通用的任何藥用介質(zhì)，如，在制備口服液體制劑如混懸劑、糖漿、酏劑和溶液劑時(shí)用水、乙二醇、油、醇類等；制備粉劑、丸劑、膠囊劑和片劑時(shí)用固體載體如淀粉、糖、高嶺土、潤(rùn)滑劑、粘合劑、崩解劑等。由于易于給藥，片劑和膠囊劑在口服型中占優(yōu)勢(shì)，因此顯著使用固體藥用載體。對(duì)于腸道外的組合物，載體通常包括無(wú)菌水，至少占大部分，盡管可以包括其它組分以幫助溶解。如，可在載體包括鹽水溶液、葡萄糖溶液或鹽水和葡萄糖溶液的混合液中制備注射液。也可以在使用適當(dāng)?shù)囊后w載體、懸浮劑等情況下制備注射懸浮液。在適于皮下給藥的組合物中，載體任意包括透過(guò)增強(qiáng)劑和/或適當(dāng)?shù)臐?rùn)濕劑，任意與以小比例的任何性質(zhì)的適當(dāng)?shù)奶砑觿┙Y(jié)合，添加劑不會(huì)對(duì)皮膚造成顯著的傷害作用。所述添加劑可有助于皮膚給藥和/或有助于制備所需組合物。這些組合物可以各種方式給藥。如作為透皮貼劑、點(diǎn)涂、或藥膏形式給藥。為方便給藥且劑量均一以劑量單位形式制得上述藥物組合物是尤其有利的。在說(shuō)明書和權(quán)利要求書中用的劑量單位形式指物理適于單位劑量的可區(qū)分單位，每一單位含有計(jì)算的活性成分的預(yù)先確定的量，同所需的藥用載體一起產(chǎn)生所需的治療作用。此劑量單位形式的實(shí)例為片劑(包括劃痕片或包衣片)、膠囊劑、丸劑、粉末包、糯米紙囊劑、注射液或懸浮劑、茶匙劑、湯匙劑等，及其分開的混合物。
本領(lǐng)域的技術(shù)人員可從下述所示試驗(yàn)結(jié)果中容易地確定有效量。通常認(rèn)為有效量為0.01毫克/公斤至100毫克/公斤體重，尤其為0.05毫克/公斤至10毫克/公斤體重。適于在全天內(nèi)，以適當(dāng)?shù)拈g隔分二次、三次、四或更多小劑量(sub-doses)給與所需劑量。所述小劑量可以以單位劑量形式配制，如每單位劑量形式含有活性成分0.5至500毫克，尤其1毫克至200毫克。
實(shí)驗(yàn)部分此后“THF”指四氫呋喃，“DIPE”指二異丙基醚，“DCM”指二氯甲烷，“DMF”指N，N-二甲基甲酰胺及“ACN”指乙腈。部分式(I)化合物的絕對(duì)立體化學(xué)構(gòu)型未經(jīng)實(shí)驗(yàn)測(cè)定。在此情況下首先被分離的立體異構(gòu)體指定為“A”，而其次的指定為“B”，沒(méi)有進(jìn)一步參考實(shí)際的立體化學(xué)構(gòu)型。
A.所述中間體的制備實(shí)施例1a)將咪唑(121.8克)加至1-(氯苯基甲基)-4-硝基苯(88.7克)的ACN(1000毫升)混合物中，并將反應(yīng)混合物攪拌并回流24小時(shí)。蒸發(fā)溶劑。將殘?jiān)苡诩妆?，?0％ K2CO3溶液洗滌，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并蒸發(fā)。將殘留物在硅膠柱層析上純化(洗脫劑CH2Cl2/CH3OH98/2)。收集純組分并蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生53克(53％)的1-[(4-硝基苯基)苯甲基]-1H-咪唑(中間體1-a)。
b)將中間體(1-a)(39克)在乙醇(300毫升)中的混合物用Raney鎳(20克)作催化劑氫化(3.9105Pa H2)。當(dāng)氫(3當(dāng)量)被吸取后，將催化劑濾除，蒸發(fā)濾液，產(chǎn)生34.6克(±)-4[(1H-咪唑-1-基)苯基甲基]苯胺(中間體1-b)。
c)將中間體(1-b)(8.92克)和1-氯-3，3-二苯基-2-丙烯-1-酮(10.42克)在DCM(100毫升)中的混合物，在室溫下攪拌過(guò)夜。將上述混合物倒入10％ NaHCO3溶液中。將上述混合物用DCM萃取并分離。將有機(jī)層干燥(MgSO4)，過(guò)濾并蒸發(fā)，得到22.85克(100％)的(±)-N-[4-(1H-咪唑-1-基)苯基甲基]苯基]-3，3-二苯基-2-丙烯酰胺(中間體1-c)不經(jīng)進(jìn)一步純化可使用所得產(chǎn)物。實(shí)施例2a)將4-氯苯甲酸(21.23克)和3，4-二氫-4-苯基-2(1H)-喹啉酮(15克)在多磷酸(150克)中于140℃加熱24小時(shí)。將上述混合物倒入冰水中并過(guò)濾。將沉淀吸收在DCM。用NaHCO3(10％)和水洗滌有機(jī)層，干燥(MgSO4)并蒸發(fā)。殘留物經(jīng)2-丙酮結(jié)晶，產(chǎn)生12.34克(50％)的(±)-6-(4-氯苯甲酰基)-3，4-二氫-4-苯基-2(1H)-喹啉酮；熔點(diǎn)204℃(中間體2-a)。
b)將硼氫化鈉(12.5克)于0℃逐份加至中間體(2-a)(20克)的甲醇(200毫升)和THF(5毫升)的溶液中并將混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。所述混合物用水驟冷并蒸發(fā)。將殘?jiān)赵贒CM中并用K2CO3(10％)洗滌。將有機(jī)層干燥(MgSO4)，過(guò)濾并蒸發(fā)。將殘留物用硅膠柱層析純化(洗脫劑CH2Cl2/CH3OH 96/4)。收集純的組分并蒸發(fā)，產(chǎn)生2.8克(14％)的(±)-64(4-氯-苯基)羥甲基]-3，4-二氫-4-苯基-2(1H)-喹啉酮(中間體2-b)。實(shí)施例3將(±)-6-[羥基(3-氟苯基)甲基]-4-苯基-2(1H)-喹啉酮(11克)在亞硫酰氯(11毫升)和DCM(120毫升)中的混合物在室溫下攪拌12小時(shí)。將上述溶劑蒸發(fā)至干并不經(jīng)進(jìn)一步純化可供使用，產(chǎn)生11.6克(±)-6-[氯(3-氟苯基)甲基]-4-苯基-2(1H)-喹啉酮(100％)(中間體3)。實(shí)施例4將氫化鈉(1.75克)在THF(30毫升)中的混合物攪拌5分鐘。蒸發(fā)除去四氫呋喃。加入二甲基亞砜(120毫升)，然后加入三甲基碘化硫氧鎓(trimethylsulfoxonium iodide)(12.1克)并在N2氣流下，將所得混合物在室溫下攪拌30分鐘。逐份加入6-(4-氯苯甲?；?-1-甲基-4-苯基-2(1H)-喹啉酮(17克)并將上述反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。加入醋酸乙酯和水。分離有機(jī)層，用水洗兩次，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并蒸發(fā)溶劑。將粗產(chǎn)品不經(jīng)進(jìn)一步純化用于下一步反應(yīng)，產(chǎn)生17.6克(100％)的(±)-6-[2-(4-氯苯基)-2-環(huán)氧乙烷基]-1-甲基-4-苯基-2(1H)-喹啉酮(中間體4)。實(shí)施例5a)將6-(4-氯苯甲?；?-1-甲基-4-苯基-2(1H)-喹啉酮(24克)在甲酰胺(130毫升)和甲酸(100毫升)中的混合物在160℃攪拌加熱12小時(shí)。將上述混合物傾入冰水中并用DCM萃取。干燥有機(jī)層(MgSO4)，過(guò)濾并蒸發(fā)至干。產(chǎn)物不經(jīng)進(jìn)一步純化可供使用，產(chǎn)生24.2克(93％)的(±)-N-[(4-氯苯基)-(1，2-二氫-1-甲基-2-氧代-4-苯基-6-喹啉基)甲基]甲酰胺(中間體5-a)。
b)將中間體(5-a)(21.2克)在鹽酸(3N)(150毫升)和2-丙醇(150毫升)中的混合物攪拌回流過(guò)夜。將上述混合物傾入冰中，用NH4OH堿化并用DCM萃取。干燥有機(jī)層(MgSO4)，過(guò)濾并蒸發(fā)至干。將上述殘留物用硅膠柱層析純化(洗脫劑CH2Cl2/CH3OH/NH4OH98/2/0.1)。收集純的組分并蒸發(fā)，產(chǎn)生11.6克(59％)的(±)-6[氨基-(4-氯苯基)甲基]-1-甲基-4-苯基-2(1H)-喹啉酮(中間體5-b)。
c)將乙基N-氰基-methanimidate(3.6克)在室溫下滴加至中間體(5-b)(10.6克)的乙醇(90毫升)溶液中并將上述混合物在室溫下攪拌48小時(shí)。加入水和乙酸乙酯，傾出有機(jī)層，用水洗滌，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并蒸發(fā)至干。將所得殘留物用硅膠柱層析純化(洗脫劑CH2Cl2/CH3OH/NH4OH 97/3/0.1)。收集純的組分并蒸發(fā)，產(chǎn)生10.5克(88％)的(±)-N-[[[4-氯苯基)(1，2-二氫-1-甲基-2-氧代-4-苯基-6喹啉基)甲基]氨基]亞甲基]氨氰(中間體5-c)。
d)將2-溴代乙酸乙酯(2.45毫升)在5℃下滴加至中間體(5-c)(9克)和2-甲基-2-丙醇鉀鹽(2.37克)的二甲基亞砜(100毫升)的溶液中并且將上述混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。加入水和乙酸乙酯，傾出有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并蒸發(fā)至干。不經(jīng)進(jìn)一步純化可使用其產(chǎn)物，產(chǎn)生(±)-N-[(4-氯苯基)(2，3-二氫基-1-甲基-2-氧代-4-苯基-6-喹啉基)-甲基]-N-[(氰亞胺基)甲基]甘氨酸乙酯(中間體(5-d))。實(shí)施例6a)將2-異硫氰基-1，1-二甲氧基-乙烷(5.3克)緩慢加至(±)-6-[氨基(4-氯苯基)甲基]-4-苯基-2(1H)-喹啉酮(11克)的甲醇(100毫升)溶液中并在80℃攪拌加熱所述混合物5小時(shí)。將上述混合物蒸發(fā)至干及該產(chǎn)物不經(jīng)進(jìn)一步純化可供使用，產(chǎn)生15.4克(100％)的(±)-N-[(4-氯苯基)(1，2-二氫-2-氧代-4-苯基-6-喹啉基)-甲基]-N’-(2，2-二甲氧基乙基)硫脲(中間體(6-a))。
b)將中間體(6-a)(15.3克)、碘基甲烷(2.27毫升)和碳酸鉀(5克)在2-丙酮(50毫升)中的混合物于室溫?cái)嚢枰灰埂⑸鲜龌旌衔锇l(fā)蒸發(fā)，將殘留物吸收于DCM中并用K2CO310％洗滌。干燥(MgSO4)有機(jī)層，過(guò)濾并蒸發(fā)，產(chǎn)生17.8克(100％)的(±)-N-[(4-氯苯基)(1，2-二氫-2-氧代-4-苯基-6-喹啉基)-甲基]-N’-(2，2-二甲氧基-乙基)carbamimidothioate甲酯(中間體6-b)，不經(jīng)進(jìn)一步純化使用。實(shí)施例7a)用水分離器將甲苯(1900毫升)在圓底燒瓶(5升)中攪拌。逐份加入(4-氯苯基)(4-硝基苯基)甲酮(250克)。逐份加入對(duì)-甲苯磺酸(54.5克)。將乙二醇(237.5克)倒至上述混合物中。將所述混合物攪拌并回流48小時(shí)。蒸發(fā)溶劑。將殘留物溶于乙酸乙酯(5升中)并用K2CO310％溶液洗滌兩次。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并蒸發(fā)溶劑。將認(rèn)物在DIPE中攪拌，過(guò)濾并干燥(真空，40℃，24小時(shí))，產(chǎn)生265克(91％)的2-(4-氯苯基)-2-(4-硝基苯基)-1，3-二氧戊環(huán)(中間體7-a)。
b)將氫氧化鈉(16.4克)和(3-甲氧苯基)乙腈(20.6毫升)于室溫下加至中間體(7-a)(25克)的甲醇(100毫升)溶液中并將所述混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。加入水，濾出沉淀，用冷甲醇洗滌并干燥。產(chǎn)物不經(jīng)進(jìn)一步純化可使用，產(chǎn)生30克(90％)的5-[2-(4-氯苯基)-1，3-二氧戊-2-基]-3-[3-甲氧苯基)-2，1-苯并異惡唑(中間體7-b)。
c)將中間體(7-b)(30克)在THF(250毫升)中于Parr裝置中，在2.6105Pa壓力下用鈀炭(3克)作催化劑在室溫下氫化12小時(shí)。在H2被吸收(1當(dāng)量)后，將催化劑通過(guò)硅藻土濾除并將濾液蒸發(fā)至干。產(chǎn)物不經(jīng)進(jìn)一步純化可使用，產(chǎn)生31.2克(100％)的(3-甲氧苯基)(2-氨基-5-[2-(4-氯苯基)-1，3-二氧戊-2-基]苯基]甲酮(中間體7-c)。
d)將乙酸酐(13.9毫升)加至中間體(7-c)(31.2克)的甲苯(300毫升)溶液中并將上述混合物攪拌并回流2小時(shí)。將所述混合物蒸發(fā)至干，產(chǎn)物不經(jīng)進(jìn)一步純化可使用，產(chǎn)生36.4克(100％)的N-[2-(3-甲氧苯甲?；?-4-[2-(4-氯苯基)-1，3-二氧戊-2-基]苯基]乙酰胺(中間體7-d)。
e)將叔丁醇鉀(33克)于室溫下逐份加至中間體(7-d)(36.4克)的1，2-二甲氧乙烷(350毫升)溶液中并將上述混合物于室溫下攪拌過(guò)夜。將所述混合物水解并用DCM萃取。干燥(MgSO4)有機(jī)層，過(guò)濾并蒸發(fā)至干。產(chǎn)物不經(jīng)進(jìn)一步純化可使用，產(chǎn)生43克(100％)的6-[2-(4-氯苯基)-1，3-二氧戊-2-基]-4-(3-甲氧苯基)-2(1H)-喹啉酮(中間體7-e)。
f)將中間體(7-e)(43克)在HCl(3N，400毫升)和甲醇(150毫升)中的混合物攪拌并回流過(guò)夜。將所述混合物冷卻并過(guò)濾。將沉淀用水和乙醚洗滌并干燥。產(chǎn)物不經(jīng)進(jìn)一步純化可使用，產(chǎn)生27克(94％)的6-(4-氯苯甲酰基)-4-(3-甲氧苯基)-2(1H)-喹啉酮(中間體7-f)。
g)將碘甲烷(1.58毫升)加至中間體(7-f)(7.6克)和氯化芐基三乙基銨(BTEAC)(2.23克)的THF(80毫升)和氫氧化鈉(40％，80毫升)的溶液中。將上述混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。加入水并用乙酸乙酯萃取所述混合物。干燥(MgSO4)有機(jī)層，過(guò)濾，并蒸發(fā)溶劑。將殘留物用硅膠快速柱層析純化(洗脫劑DCM 100％)。收集所需組分并蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生7.1克(90％)的6-(4-氯苯甲酰基)-4-(3-甲氧苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮(中間體7-g)。
h)將中間體(7-g)(6.8克)加至DCM(210毫升)中，0℃攪拌。逐滴加入三溴硼烷(67.3毫升)并將上述反應(yīng)混合物在0℃攪拌15分鐘。將所述混合物置于室溫，在室溫下攪拌30分鐘并加入K2CO310％。將有機(jī)層分離，干燥(MgSO4)，過(guò)濾，并蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生6.6克6-(4-氯苯甲?；?-4-(3-羥基苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮(中間體7-h)(定量回收，用于下一反應(yīng)步驟，不經(jīng)進(jìn)一步純化)。
i)將中間體(7-h)(9.5克)、丙基碘(5.9毫升)和K2CO3(10.1克)的混合物攪拌并回流4小時(shí)。加入水并將上述混合物用DCM萃取。將有機(jī)層分離，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并將溶劑蒸發(fā)，產(chǎn)生10.4克(100％)的6-(4-氯苯甲?；?-1-甲基-4-(3-丙氧基苯基)-2(1H)-喹啉酮(中間體7-I)。j)將中間體(7-i)(3.55克)在甲醇(20毫升)和THF(20毫升)中的溶液冷卻。逐份加入硼氫化鈉(0.37克)。將上述混合物在室溫下攪拌30分鐘，水解并用DCM萃取。將有機(jī)層分離，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并將溶劑蒸發(fā)至干，產(chǎn)生3.5克(100％)的(±)-6-[(4-氯苯基)羥甲基]-1-甲基-4-(3-丙氧基苯基)-2(1H)喹啉酮(中間體7-j)。
k)將中間體(8-a)(3.5克)在亞硫酰氯(30毫升)中攪拌并回流過(guò)夜。將上述溶劑蒸發(fā)至干并將產(chǎn)物不經(jīng)進(jìn)一步純化可應(yīng)用，產(chǎn)生3.7克(100％)的(±)-6-[氯(4-氯苯基)甲基]-1-甲基-4-(3-丙氧基苯基)-2(1H)喹啉酮(中間體7-k)。實(shí)施例8a)在室溫下將HCl/乙醚(30.8毫升)加至4-氨基-4’-氯代二苯甲酮(35克)的乙醇(250毫升)溶液中并將上述混合物攪拌15分鐘。分批加入FeCl3·6H2O(69.4克)，然后ZnCl2(2.05克)并將上述混合物于65℃攪拌30分鐘。加入3-氯-1-苯基-1-丙酮(25.46克)并將上述混合物攪拌回流一夜。將所述混合物傾入冰中并用DCM萃取。將有機(jī)層用10％ K2CO3洗滌。干燥(MgSO4)，過(guò)濾并蒸發(fā)。殘留物由ACN中結(jié)晶。將母液層用硅膠柱層析純化(洗脫劑CH2Cl2/CH3OH 99/1)。收集純的組分并蒸發(fā)，產(chǎn)生19.4克(37％)的(4-氯苯基)(4-苯基-6-喹啉基)甲酮(中間體8-a)。
b)用同實(shí)施例7j所述的相同反應(yīng)步驟，將中間體(8-a)轉(zhuǎn)化為(±)-α-(4-氯苯基)-4-苯基-6-喹啉甲醇(中間體8-b)。
c)用同實(shí)施例7K中所述相同反應(yīng)步驟，將中間體(8-b)轉(zhuǎn)化為(±)-6[氯(4-氯苯基)甲基]-4-苯基喹啉鹽酸鹽(中間體8-c)。
d)將中間體(8-c)(12.6克)和1H-咪唑(11.8克)在ACN(300毫升)中的混合物攪拌回流16小時(shí)。將上述混合物蒸發(fā)至干并將殘留物吸收于DCM中。將有機(jī)層用10％ K2CO3洗滌，干燥(MgSO4)，過(guò)濾，蒸發(fā)。將殘留物用硅膠柱層析純化(洗脫劑CH2Cl2/CH3OH/NH4OH97.5/2.5/0.1)。收集純的組分并蒸發(fā)。將殘留物轉(zhuǎn)化成硝酸鹽(1∶2)并從CH3OH/2-丙醇/乙醚中結(jié)晶，產(chǎn)生4.28克(28％)的(±)-6-[(4-氯苯基)-1H-咪唑-1-基甲基]-4-苯基喹啉二硝酸鹽一水化合物(中間體8-d，熔點(diǎn)152℃)。實(shí)施例9a)將中間體(7-a)(50克)隨后為(3-氯苯基)乙腈(34.8毫升)加至氫氧化鈉(32.8克)的甲醇(100毫升)的混合液中。將上述混合物攪拌并回流至完全溶解。以相同的量將反應(yīng)進(jìn)行兩次。將混合物合并。加入冰，其后加乙醇。使混合物析出結(jié)晶。將沉淀濾出，用乙醇洗滌并干燥，產(chǎn)生58克(86％)的3-(3-氯苯基)-5-[2-(4-氯苯基)-1，3-二氧戊-2-基]-2，1-苯并異噁唑(中間體9-a)。
b)在室溫下將TiCl3/15％H2O(308毫升)加至中間體(9-a)(51克)的THF(308毫升)的混合物中。將上述混合物在室溫下攪拌2天。加入水并用DCM萃取混合物。分離有機(jī)層，用10％ K2CO3洗滌，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并蒸發(fā)溶劑。將部分此組分(5.9克)由2-丙醇/CH3OH/乙醚中重結(jié)晶。將沉淀濾出并干燥，產(chǎn)生1.92克(41％)的1-氨基-2，4-亞苯基-(3-氯苯基)(4-氯苯基)二甲酮(中間體9-b)。
c)用與實(shí)施例7d所述的相同反應(yīng)步驟，將中間體(9-b)轉(zhuǎn)化為N-[2-(3-氯苯甲?；?-4-(4-氯苯甲酰基)苯基]乙酰胺(中間體9-c)。
d)用與實(shí)施例7e中所述的相同的反應(yīng)步驟，將中間體(9-c)轉(zhuǎn)化為6-(4-氯苯甲?；?-4-(3-氯苯基)-2(1H)-喹啉酮(中間體9-d)。
e)將氫化鈉(601克)在N2氣流下逐份加至中間體(9-d)(15克)的二甲基亞砜(200毫升)溶液中。將上述混合物在室溫下攪拌30分鐘。加入2-氯乙基甲醚(25.2毫升)。將混合物在50℃下攪拌72小時(shí)，傾入冰中并用乙酸乙酯萃取。分離有機(jī)層，用水洗滌，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并將溶劑蒸發(fā)。將殘留物用硅膠柱層析純化(洗脫劑環(huán)己烷/乙酸乙酯/70/30)。收集純的組分并蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生6.2克(36％)的6-(4-氯苯甲?；?-4-(3-氯苯基)-1-(2-甲氧乙基)-2(1H)-喹啉酮(中間體9-e)。
f)用與實(shí)施例7j所述的相同反應(yīng)步驟，將中間體(9-e)轉(zhuǎn)化為(±)-4-(3-氯苯基)-6-[(4-氯苯基)(羥甲基)]-1-(2-甲氧乙基)-2(1H)-喹啉酮(中間體9-f)。
g)用與實(shí)施例7k所述相同的反應(yīng)步驟，將中間體(9-f)轉(zhuǎn)化為(±)-6-[氯(4-氯苯基)甲基]-4-(3-氯苯基)-1-(2-甲氧乙基)-2(1H)-喹啉酮(中間體9-g)。實(shí)施例10a)將正-丁基鋰在N2氣流下，于-20℃緩慢加至6-溴-4-(3-氯苯基)-2-甲氧基喹啉(20克)的THF(150毫升)混合物中。將上述混合物在-20℃攪拌30分鐘并隨后在N2氣流下，于-20℃緩慢加至4-氯-α-氧代苯乙酸乙酯(12.2克)在THF(80毫升)的混合物中。將該混合物加溫至室溫并在室溫下攪拌1小時(shí)。加入水并將混合用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)層分離，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并將溶劑蒸發(fā)。將殘留物(26.3克)用硅膠柱層析純化(洗脫劑CH2Cl2/環(huán)己烷90/10)。收集純的組分并將溶劑蒸發(fā)，產(chǎn)生9.3克(33.5％)的(±)-4-(3-氯苯基)-α-(4-氯苯基)-α-羥基-2-甲氧基-6-喹啉乙酸乙酯(中間體10-a)。
b)將中間體(10-a)(9.3克)和1，1’-羧基雙-1H-咪唑(22克)在120℃加熱1小時(shí)。冷卻上述混合物。緩慢加入冰并將混合物用DCM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并蒸發(fā)溶劑。將殘留物(10.6克)用硅膠柱層析純化(洗脫劑CH2Cl2/2-丙醇/NH4OH 95/5/0.5)，產(chǎn)生7.15克(±)-4-(3-氯苯基)-α-(4-氯苯基)-α-(1H-咪唑-1-基)-2-甲氧基-6-喹啉乙酸乙酯(中間體10-b)。B.最終化合物的制備實(shí)施例11將中間體(1-)(22.85克)和三氯化鋁(48克)在氯苯(200毫升)中的混合物在95℃加熱過(guò)夜。冷卻上述混合物，傾入冰水中，用NH4OH堿化并蒸發(fā)至干。將殘留物用DCM和乙醇吸收。過(guò)濾殘留物并蒸發(fā)。將殘留物用DCM吸收并用3N HCl攪拌過(guò)夜。萃取上述混合物，將水相用乙酸乙酯洗滌，用NH4OAc堿化然后用乙酸乙酯萃取并將有機(jī)層干燥(MgSO4)并蒸發(fā)。將殘留物用硅膠(35-70微米)柱層析純化(洗脫劑CH2Cl2/CH3OH/NH4OH 95/5/0.05)。收集純的組分并蒸發(fā)，產(chǎn)生2.13克(16％)的(±)-6-[(1H-咪唑-1-基)苯甲基]-4-苯基-2(1H)-喹啉酮；熔點(diǎn)253.0℃(化合物1)。實(shí)施例12將氫化鈉(0.002克)，隨后為1，1’-羰基雙-1H-咪唑(2.5克)在室溫下逐份加至溶于THF(30毫升)中的中間體(2-b)(2.8克)中，并將上述混合物在60℃攪拌并加熱1小時(shí)。將所述混合物用水水解并蒸發(fā)。將殘留物吸收于DCM中并用水洗滌。將有機(jī)層干燥(MgSO4)，過(guò)濾并蒸發(fā)。用硅膠柱層析純化殘留物(洗脫劑甲苯/2-丙醇/NH4OH 90/10/0.5)。收集純的組分并蒸發(fā)。將殘留物(2.1克)從2-丙酮中結(jié)晶，產(chǎn)生1.55克(48％)的(±)-6-[(4-氯苯基)-1H-咪唑-1-基甲基]-3，4-二氫-4-苯基-2(1H)喹啉酮；熔點(diǎn)225.0℃(化合物57)。實(shí)施例13將中間體(3)(11.6)克，咪唑(6.5克)和碳酸鉀(13.8克)在ACN(150毫升)中的混合物回流12小時(shí)。將上述混合物蒸發(fā)至干，將殘留物吸收至水中并用二氯甲烷萃取。將有機(jī)層干燥(MgSO4)并將殘留物用硅膠(70-200微米)柱層析純化(洗脫劑CH2Cl2/CH3OH 95/5)收集純的組分并蒸發(fā)，產(chǎn)生9克(71％)的(±)-6-[(3-氟苯基)(1H-咪唑-1-基)甲基]-4-苯基-2(1H)-喹啉酮(化合物5)。實(shí)施例14將氫化鈉(1.15克)在N2氣流下，于10℃逐份加至化合物(2)(10克)的DMF(100毫升)混合液中，并將混合物在室溫下攪拌30分鐘。在15℃滴加碘甲烷(1.5毫升)并將該混合物在室溫下攪拌1小時(shí)。將上述混合物傾入冰水中并濾出。將沉淀用DCM和甲醇的混合物吸收。干燥(MgSO4)有機(jī)層，過(guò)濾并蒸發(fā)。將殘留物用硅膠柱層析純化(洗脫劑乙酸乙酯/CH3OH 95/5)。收集純的組分并蒸發(fā)。將殘留物(3.3克)從CH3CN/DIPE中重結(jié)晶，產(chǎn)生1.9克(19％)的(±)-6-[(4-氯苯基)-1H-咪唑-1-基-甲基]-1-甲基-4-苯基-2(1H)-喹啉酮；熔點(diǎn)154.7℃(化合物8)。實(shí)施例15將甲醇鈉的甲醇(2.8毫升)溶液滴加至化合物(2)(6克)和氯化二苯基碘鎓(6.9克)的甲醇(400毫升)的混合物中。加入氯化亞銅(I)(1.72克)并將該混合物在60℃攪拌并加熱12小時(shí)。將上述混合物通過(guò)高嶺土過(guò)濾并將濾液蒸發(fā)。將殘留物用DCM和10％ NH4OH吸收。將水相用DCM萃取。將合并的有機(jī)相用水洗滌，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并于真空蒸發(fā)至干。用硅膠柱層析純化殘留物(洗脫劑CH2Cl2/CH3OH/NH4OH 98/2/0.1)。收集純的組分并蒸發(fā)。將殘留物(1.1克)溶于CH3OH中并轉(zhuǎn)化為在CH3OH中的硝酸鹽(1∶1)，產(chǎn)生0.9克(11.2％)的(±)-6-[(4-氯苯基)-1H-咪唑-1-基甲基]-1，4-二苯基-2(1H)-喹啉酮單硝酸鹽；熔點(diǎn)212.4℃(化合物19)。實(shí)施例16將2-甲基-2-丙醇、鉀鹽(1.35克)在0℃于N2氣流下加至化合物(15)(2.8克)和碘甲烷(1.9毫升)的四氫呋喃(85毫升)的混合物中，并將上述混合物在室溫下攪拌5分鐘。將所述混合物傾入冰水中并用乙酸乙酯萃取。干燥(MgSO4)有機(jī)層，過(guò)濾并蒸發(fā)。將殘留物用硅膠柱層析純化(洗脫劑CH2Cl2/CH3OH/NH4OH 97.5/2.5/0.1)。收集純的部分并蒸發(fā)。將殘留物(2.3克)從CH3OH和乙醚中重結(jié)晶，產(chǎn)生1.7克(60％)的(±)-4-(3-氯苯基)-6-[1-(4-氯苯基)-1-(1H-咪唑-1-基)乙基]-1-甲基-2(1H)-喹啉酮；熔點(diǎn)120.2℃(化合物62)。實(shí)施例17將中間體(4)(17.6克)和咪唑(9.3克)在ACN(250毫升)中的混合物攪拌并回流過(guò)夜，然后冷至室溫。將沉淀濾出，用10％ K2CO3溶液和乙醚洗滌，然后空氣中干燥，產(chǎn)生11.2克(55％)的產(chǎn)物。取樣品(3克)從THF、甲醇、乙醚中重結(jié)晶。將沉淀濾出并干燥，產(chǎn)生2克(37％)的(±)-6-[1-(4-氯苯基)-2-羥基-1-(1H-咪唑-1-基)乙基]-1-甲基-4-苯基-2(1H)-喹啉酮一水合物，熔點(diǎn)180℃(化合物59)。實(shí)施例18將1-氯-4-氯甲基苯(3.2克)加至化合物(59)(7克)和氯化芐基三乙基銨(1.75克)的氫氧化鈉(40％)(100毫升)和THF(100毫升)的溶液中并將該混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。加入水和乙酸乙酯。傾出有機(jī)相，用水洗滌，干燥(MgSO4)，濾出并蒸發(fā)至干。將殘留物用硅膠柱層析純化(洗脫劑CH2Cl2/CH3OH/NH4OH 98.5/1.5/0.1)。收集純的組分并蒸發(fā)。將殘留物(3.7克)從2-丙酮/(C2H5)2O中重結(jié)晶，產(chǎn)生2.1克(24％)的(±)-6-[1-(4-氯苯基)-2-[(4-氯苯基)甲氧基]-1-(1H-咪唑-1-基)乙基]-1-甲基-4-苯基-2(1H)喹啉酮；熔點(diǎn)176.8℃(化合物61)。實(shí)施例19在室溫下將甲醇鈉(0.8毫升)加至中間體(5-d)的甲醇(100毫升)溶液中，將上述混合物在室溫下攪拌過(guò)夜，然后攪拌并回流2小時(shí)。加入水并用DCM萃取混合物。干燥有機(jī)層(MgSO4)，過(guò)濾并蒸發(fā)至干。將殘留物用硅膠柱層析純化(洗脫劑CH2Cl2/CH3OH/NH4OH98/2/0.1)。收集純的組分并蒸發(fā)，產(chǎn)生8.3克(79％)的產(chǎn)物。將樣品(2.3克)轉(zhuǎn)化成乙二酸鹽(2∶3)并從2-丙酮中重結(jié)晶，產(chǎn)生2.35克(63％)的(±)-4-氨基-1-[(4-氯苯基)(1，2-二氫-1-甲基-2-氧代-4-苯基-6-喹啉基)-甲基]-1H-咪唑-5-羧酸甲酯乙二酸鹽(2∶3)；熔點(diǎn)168.7℃(化合物70)。實(shí)施例20在0℃將硝酸(30毫升)，其后將亞硝酸鈉(0.64克)加至化合物(70)(4.6克)的磷酸(45毫升)溶液中并將該混合物在0℃下攪拌45分鐘。將次磷酸(30毫升)逐份仔細(xì)地加入并將上述混合物在室溫下攪拌1小時(shí)。將所述混合物傾入冰中，用NH4OH堿化并用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)層干燥(MgSO4)，過(guò)濾并蒸發(fā)至干。將殘留物用硅膠柱層析純化(洗脫液CH2Cl2/CH3OH/NH4OH 98.5/1.5/0.1)。收集純的組分并蒸發(fā)。將殘留物(1.5克)轉(zhuǎn)化為乙二酸鹽(2∶3)并從2-丙酮和DIPE中重結(jié)晶，產(chǎn)生1.14克(20％)的(±)-1-[(4-氯苯基)(1，2-二氫-1-甲基-2-氧代-4-苯基-6-喹啉基)甲基]-1H-咪唑-5-羧酸甲酯乙二酸鹽(2∶3)；熔點(diǎn)140.8℃(化合物54)。實(shí)施例21將中間體(60-b)(15.66克)加至冷至0℃的硫酸(120毫升)中并將該混合物在室溫下攪拌一夜。將上述混合物仔細(xì)加至冰和濃NH4OH的0℃的冷溶液中。用DCM萃取堿水層。將有機(jī)層干燥(MgSO4)，過(guò)濾并蒸發(fā)至干。用硅膠柱層析純化殘留物(洗脫液CH2Cl2/CH3OH/NH4OH 97.5/2.5/0.2)。收集純的組分并蒸發(fā)，產(chǎn)生7.4克(52％)的產(chǎn)物。將樣品從2-丙酮中結(jié)晶，產(chǎn)生2克(±)-6-[(4-氯苯基)[2-(甲硫基)-1H-咪唑-1-基]甲基]-4-苯基-2(1H)-喹啉酮一水合物；熔點(diǎn)205.6℃(化合物51)。實(shí)施例22將化合物(17)(12.7克)的氫氧化鈉(3N)(130毫升)中的溶液在120℃攪拌過(guò)夜。將上述混合物冷至室溫并加NH4OH至pH＝5.2。將沉淀濾出，用水洗滌并在空氣中干燥，產(chǎn)生12克(±)-6-[(4-氯苯基)-1H-咪唑-1-基甲基]-2-氧代-4-苯基-1(2H)-喹啉-1-乙酸(化合物38)。實(shí)施例23將DCM中的N，N’-四氫萘基-雙環(huán)己胺(5.3克)于室溫下逐滴加至化合物(38)(12.4克)和2-氨基-4-甲基-戊酸甲酯(6克)的THF(120毫升)和1-羥基苯并三唑水合物的混合物中并將上述混合物于室溫下攪拌過(guò)夜。將所述混合物傾入水中并用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)層干燥(MgSO4)，過(guò)濾并蒸發(fā)。將殘留物用硅膠柱層析純化(洗脫液CH2Cl2/CH3OH/NH4OH 97/3/0.1)。收集純的組分并蒸發(fā)，產(chǎn)生6.8克(43％)的產(chǎn)物。將樣品從DIPE中結(jié)晶，產(chǎn)生1克(±)-2-[[2-[6-[(4-氯苯基)-1H-咪唑-1-基甲基]-1，2-二氫-2-氧代-4-苯基-1-喹啉基]-2-氧代乙基]氨基]-4-甲基戊酸甲酯；熔點(diǎn)117.9℃(化合物39)。實(shí)施例24將化合物(2)(1克)溶于正-己烷(81毫升)和乙醇(54毫升)中。用Chiralcel AD柱[250克，20微米，Daicel；洗脫劑正-己烷/乙醇60/40％(體積)]層析分離純化該溶液。收集兩個(gè)所需的組分組。將對(duì)應(yīng)于第一個(gè)色譜峰的組分蒸發(fā)。將殘留物溶于少量的DCM中。加入乙醚至產(chǎn)生沉淀。將沉淀用Millipore濾器(10μm)濾出，然后干燥(真空；40℃；2小時(shí))，產(chǎn)生0.430克(43％)。將該組分溶于2-丙酮中并用DIPE沉淀。將沉淀濾出并干燥，產(chǎn)生0.25克(25％)的(±)-(A)-6-[(4-氯苯基)-1H-咪唑-1-基甲基]-4-苯基-2-(1H)-喹啉酮；熔點(diǎn)190.0℃；[α]D20＝+13.100(C＝0.1％甲醇溶液)(化合物6)。將對(duì)應(yīng)于第二個(gè)色譜峰的組分蒸發(fā)。將殘留物溶于少量的DCM中。加入乙醚至產(chǎn)生沉淀。將沉淀用Millipore 10微米濾器濾出，然后干燥(真空40℃；2小時(shí))，產(chǎn)生0.410克(41％)。將該組分溶于2-丙酮中并用DIPE沉淀。將沉淀濾出并干燥，產(chǎn)生0.20克(20％)的(-)-(B)-6-[(4-氯苯基)-1H-咪唑-1-基甲基]-4-苯基-2(1H)-喹啉酮；熔點(diǎn)155.8℃，[α]D20＝6.20(C＝0.1％甲醇溶液)(化合物7)。實(shí)施例25將五硫化二磷(4.45克)于室溫下逐份加至(±)-4-(3-氯苯基)-6-[(4-氯苯基)-1H-咪唑-1-基甲基]-2(1H)-喹啉酮(4.5克)在吡啶(54毫升)的溶液中并將該混合物攪拌并回流4小時(shí)。將上述混合物蒸發(fā)至干并將殘留物吸收至乙酸乙酯中。將有機(jī)層用HCl和水洗滌，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并蒸發(fā)至干。將殘留物用硅膠柱層析純化(洗脫劑CH2Cl2/CH3OH97/3)。收集純的組分并蒸發(fā)。將殘留物(2.7克)從DMF中結(jié)晶，產(chǎn)生1.6克(33％)的(±)-4-(3-氯苯基)-6-[(4-氯苯基)-1H-咪唑-1-基-甲基]-2(1H)-喹啉硫酮一水合物；熔點(diǎn)263.5℃(化合物72)。實(shí)施例26將咪唑(3.34克)加至中間體(8-b)(3.7克)的ACN(50毫升)溶液中。將該混合物攪拌并回流4小時(shí)。加入水并用DCM萃取上述混合物。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并將溶劑蒸發(fā)至干。將殘留物(3.8克)用硅膠柱層析純化(洗脫劑CH2Cl2/CH3OH 98/2)。收集純的組分并蒸發(fā)。將殘留物從2-丙酮/DIPE中結(jié)晶，濾出并干燥，產(chǎn)生1.8克(45％)的(±)-6-[(4-氯苯基)-1H-咪唑-1-基甲基]-1-甲基-4-(3-丙氧苯基)-2(1H)-喹啉酮乙-二-酸鹽(2∶3)一倍半水合物(化合物74)。實(shí)施例27將中間體(10-b)(7.1克)在THF(25毫升)和3N HCl(190毫升)中的混合物在120℃攪拌2小時(shí)。將上述混合物傾至冰中，用K2CO3堿化并用DCM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并將溶劑蒸發(fā)，產(chǎn)生6.2克(90％)的(±)-4-(3-氯苯基)-α-(4-氯苯基)-1，2-二氫-α-(1H-咪唑-1-基)-2-氧代-6-喹啉乙酸乙酯(化合物87)。
表1
表2
*R2和R3結(jié)合形成二價(jià)基團(tuán)表3
表4
表5
表6
C.藥理學(xué)實(shí)施例實(shí)施例28體外測(cè)定法呢基蛋白轉(zhuǎn)移酶的抑制作用基本上如文獻(xiàn)所述(Y.Reiss等人；MethodsA Companion toMethod in Enzymology Vol 1，241-245，1990)制備人法呢基蛋白轉(zhuǎn)移酶。用裸鼠中生長(zhǎng)為實(shí)體腫瘤或生長(zhǎng)為單層細(xì)胞培養(yǎng)物的Kirsten病毒轉(zhuǎn)化的人骨肉瘤(KHOS)細(xì)胞(American Type Culture Collection，Rockville，MD，USA)作為人類酶的來(lái)源。簡(jiǎn)言之，將細(xì)胞或腫瘤在含有50mM Tris，1mM EDTA，1mM EGTA和0.2mm苯甲磺酰氟的緩沖液(pH7.5)中均漿化。將上述勻漿物以28000xg離心60分鐘收集上清液。制備30-50％硫酸銨組分并將產(chǎn)生的沉淀重新懸浮于含有20mMTris，1mM二硫蘇糖醇和20μM ZnCl2的少量(10-20毫升)體積的透析緩沖液中。將硫酸銨組分對(duì)相同緩沖液透析過(guò)夜，更換兩次緩沖液。將上述透析的物質(zhì)加至10×1厘米Q Fast Flow Sepharose(Pharmacia LKB Biotechnology Inc.，Piscataway，NJ，USA)中，柱子預(yù)先用補(bǔ)充0.05M NaCl的100毫升的透析緩沖液平衡。將層析柱用另50毫升加了0.05M NaCl的透析緩沖液洗滌，隨后用透析緩沖液制備的0.05M至0.25M NaCl作梯度洗滌。將酶活性用透析緩沖液制備的0.25-1.0M NaCl作線性梯度洗脫。收集含柱洗脫液4至5毫升體積組分并分析法呢基蛋白轉(zhuǎn)移酶活性。合并具有酶活性的組分并用100μmZnCl2補(bǔ)充。將酶樣品于-70℃冷凍貯存。在由生產(chǎn)商限定的條件下使用法呢基轉(zhuǎn)移酶[3H]Scintillation Proximity Assay(AmershamInternational plc，England)測(cè)定法呢基蛋白轉(zhuǎn)移酶的活性。為測(cè)定該酶的抑制劑，將0.2μCi的[3H]-法呢基焦磷酸鹽底物和生物素化的LaminB多肽底物(biotin-YRASNRSCAIM)在含有50mM HEPES，30mMMgCl2，20mM KCl，5mM二硫蘇糖醇，0.01％ Triton X-100的反應(yīng)緩沖液中同受試化合物混合。將受試化合物用10μl體積的二甲基亞砜(DMSO)輸送，使最終100μl體積中濃度為1和10μg/ml。將上述反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?7℃。加入20μl稀釋的人法呢基蛋白轉(zhuǎn)移酶開始酶反應(yīng)。加入足夠量的酶制劑以使在37℃ 60分鐘反應(yīng)孵育中產(chǎn)生4000-15000cpm的反應(yīng)產(chǎn)物。通過(guò)加入STOP/閃爍近似珠試劑(scintillation proximity bead reagent)(Amersham)終止反應(yīng)。將反應(yīng)產(chǎn)物[3H]-法呢基-(半胱氨酸)-生物素Lamin B肽被捕捉于連接閃爍近似珠的抗生蛋白鏈霉素上。通過(guò)Wallac Model 1480 Microbeta LiquidScintillation Counter計(jì)數(shù)cpm而對(duì)在受試化合物存在或不存在時(shí)合成的[3H]-法呢基-(半胱氨酸)-生物素Lamin B肽的量以cpm進(jìn)行定量。將產(chǎn)物的cpm定為法泥基蛋白轉(zhuǎn)移酶活性。對(duì)在受試化合物存在時(shí)觀察到的蛋白法呢基轉(zhuǎn)移酶活性標(biāo)準(zhǔn)化于在10％ DMSO存在時(shí)法呢基轉(zhuǎn)移酶活性并以抑制百分比表示。在獨(dú)立研究中，評(píng)價(jià)部分顯示50％或以上抑制法呢基轉(zhuǎn)移酶活性的化合物具有的濃度依賴抑制的酶活性。在VAX計(jì)算機(jī)上用the Science Information Division of R.W.Johnson Pharmaceutical Research Institute(Spring House，PA，USA)設(shè)計(jì)的LGIC50計(jì)算機(jī)程序以IC50(產(chǎn)生50％酶活性抑制的受試化合物濃度)計(jì)算在這些研究中受試化合物的作用。
表7
實(shí)施例29“Ras轉(zhuǎn)化細(xì)胞表型逆轉(zhuǎn)測(cè)定”向大鼠NIH 3T3細(xì)胞中插入激活的致癌基因如變異ras基因使細(xì)胞轉(zhuǎn)化為轉(zhuǎn)化表型。該細(xì)胞變?yōu)橹履[瘤性的，在半固體培養(yǎng)基中顯示固定的非依賴性生長(zhǎng)并失去接觸抑制。失去接觸抑制產(chǎn)生細(xì)胞培養(yǎng)物不再形成均勻的單層。而是細(xì)胞堆集成多細(xì)胞節(jié)并且在塑料組織培養(yǎng)皿上生長(zhǎng)為很高的飽和密度。逆轉(zhuǎn)ras轉(zhuǎn)化表型的試劑如蛋白法呢基轉(zhuǎn)移酶抑制劑使均勻的單層生長(zhǎng)型恢復(fù)為培養(yǎng)中的細(xì)胞。這種逆轉(zhuǎn)作用可容易地通過(guò)計(jì)數(shù)組織培養(yǎng)皿中的細(xì)胞數(shù)目監(jiān)測(cè)。轉(zhuǎn)化的細(xì)胞同恢復(fù)為未轉(zhuǎn)化的表現(xiàn)型的細(xì)胞相比具有較多的細(xì)胞數(shù)目。恢復(fù)轉(zhuǎn)化表現(xiàn)型的化合物能夠在具有ras基因突變的腫瘤中產(chǎn)生抗腫瘤作用。方法在被T24激活人H-ras基因轉(zhuǎn)化的NIH 3T3細(xì)胞的組織培養(yǎng)物中監(jiān)測(cè)化合物。在六孔組織培養(yǎng)板上以每孔(9.6cm2面積)200000細(xì)胞的起始濃度接種細(xì)胞。將受試化合物立即加至含有DMSO 3.0微升的3.0毫升細(xì)胞生長(zhǎng)介質(zhì)中。DMSO在細(xì)胞生長(zhǎng)介質(zhì)中的終濃度為0.1％。上述受試化合物的濃度分雖為5，10，50，100和500nM并有DMSO作處理載體對(duì)照。(若5nM觀察到高活性，則將受試物在更低濃度實(shí)驗(yàn))。使上述細(xì)胞增殖72小時(shí)。然后將細(xì)胞在1.0毫升胰蛋白酶-EDTA細(xì)胞溶解介質(zhì)中分離并在Coulter顆粒計(jì)數(shù)器上計(jì)數(shù)。測(cè)定每孔細(xì)胞表達(dá)的細(xì)胞數(shù)目用Coulter微粒計(jì)數(shù)器測(cè)定。
所有細(xì)胞計(jì)數(shù)用減去最初細(xì)胞輸入量200000矯正。
對(duì)照細(xì)胞數(shù)＝[用DMSO載體培養(yǎng)的細(xì)胞計(jì)數(shù)-200000]。
受試化合物細(xì)胞數(shù)＝[用受試化合物培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)-200000]。
受試化合物％抑制作用＝[1-受試化合物細(xì)胞數(shù)/對(duì)照細(xì)胞數(shù)]×100％若數(shù)據(jù)充分計(jì)數(shù)IC50(即抑制50％酶活性所需的受試化合物的濃度)，總結(jié)于表8。表8
D.組合物實(shí)施例下列配方列舉了根據(jù)本發(fā)明以適合全身或局部給予溫血?jiǎng)游锏膭┝繂挝恍问降乃幱媒M合物。
所有這些實(shí)施例中的“活性成分”(A.I.)是指式(I)的化合物，藥學(xué)上可接受的酸或堿加成鹽或其立體化學(xué)異構(gòu)體。實(shí)施例30口服液將9克4-羥基苯甲酸甲酯和1克4-羥基苯甲酸丙酯溶于4升沸騰純水中。首先將10克2，3-二羥基丁二酸溶于3升此溶液中隨后為20克A.I。將后面溶液與前面所余溶液合并并向其中加入12升1，2，3-丙三醇和3升70％的山梨糖醇溶液。將40克糖精鈉溶于0.5升水中并加入2毫升覆盆子和2毫升鵝莓香精。將后一溶液與前溶液合并，加水適量至20升體積，得到含有5毫克/茶匙(5毫升)A.I.的口服液。將所得溶液裝至適當(dāng)容器。實(shí)施例31膠囊將20克A.I.，6克十二烷基硫酸鈉，56克淀粉，56克乳糖，0.8克膠體二氧化硅，和1.2克硬脂酸鎂劇烈攪拌在一起。將所得混合物裝入1000個(gè)適當(dāng)?shù)挠裁髂z膠囊中，每膠囊含20毫克A.I.。實(shí)施例32膜包衣片片芯的制備將100克A.I.，570克乳糖和200克淀粉的混合物混勻并隨后用5克十二烷基硫酸鈉和10克聚乙烯吡咯烷酮的約200毫升水溶液濕潤(rùn)。將濕粉混合物過(guò)篩，干燥并再過(guò)篩。然后加入100克微晶纖維素和15克氫化植物油。將整體混勻并壓制成片，得到10000片芯，每片含活性成分10毫克。包衣向10克甲基纖維素75毫升變性乙醇溶液中加5克乙基纖維素的150毫升二氯甲烷溶液。然后加入75毫升二氯甲烷和2.5毫升1，2，3-丙三醇。將10克聚乙二醇熔化并溶于75毫升二氯甲烷中。將后者溶液加至前溶液中并隨后加入2.5克十八烷酸鎂，5克聚乙烯吡咯酮和30毫升濃縮顏色混懸液并將整體均化。在包衣裝置中用如此所得混合物對(duì)片芯進(jìn)行包衣。實(shí)施例33注射液將1.8克4-羥基苯甲酸甲酯和0.2克4-羥基苯甲酸丙酯溶于約0.5升沸騰注射用水中。冷至約50℃后在攪拌下加入4克乳酸，0.05克丙二醇和4克A.I.。將上述溶液冷至室溫并用注射用水適量補(bǔ)至1升體積，得到4毫克/毫升A.I.的溶液。將溶液過(guò)濾除菌并裝至無(wú)菌容器。實(shí)施例34栓劑將3克A.I.溶于3克2，3-二羥基丁二酸的25毫升的聚乙二醇400的溶液中。將12克表面活性劑和300克甘油三酯一起熔化。將后者混合物同前者溶液混勻。將如此所得混合物在37-38℃下倒至模中形成100個(gè)各含30毫克/毫升A.I.的栓劑。
權(quán)利要求
1.式(I)的化合物，
其立體異構(gòu)體，藥學(xué)上可接受的酸或堿加成鹽；其中點(diǎn)線代表任意鍵；X代表氧或硫；R1為氫、C1-12烷基、Ar1、Ar2C1-6烷基、喹啉基C1-6烷基、吡啶基C1-6烷基、羥基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、一或二(C1 -6烷基、)氨基C1-6烷基、氨基C1-6烷基或式-Alk1-C(＝O)-R9、-Alk1-S(O)-R9或-Alk1-S(O)2-R9的基團(tuán)，其中Alk1為C1-6鏈烷二基，R9為羥基，C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、C1-8烷氨基或C1-6烷氧羰基取代的C1-8烷氨基；R2和R3分別獨(dú)立地為氫、羥基、鹵素、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羥基C1-6烷氧基、C1-6烷氧基C1-6烷氧基、氨基C1-6烷氧基、一或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基、Ar1、Ar2C1-6烷基、Ar2氧基、Ar2C1-6烷氧基、羥基羰基、C1-6烷氧羰基、三鹵代甲基、三鹵代甲氧基、C2-6鏈烯基；或當(dāng)鄰位R2和R3結(jié)合時(shí)可形成下式的二價(jià)基團(tuán)-O-CH2-O- (a-1)，-O-CH2-CH2-O-(a-2)，-O-CH＝CH- (a-3)，-O-CH2-CH2- (a-4)，-O-CH2-CH2-CH2- (a-5)，或-CH＝CH-CH＝CH- (a-6)；R4和R5各自獨(dú)立為氫、Ar1、C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、氨基、羥基羰基、C1-6烷氧羰基、C1-6烷基S(O)C1-6烷基或C1-6烷基S(O)2C1-6烷基；R6和R7各自獨(dú)立為氫、鹵素、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基或Ar2氧基；R8為氫、C1-6烷基、氰基、羥基羰基、C1-6烷氧羰基、C1-6烷基羰基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、C1-6烷基羰基C1-6烷基、羥基羰基C1-6烷基、羥基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、一或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、鹵代C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、氨基羰基C1-6烷基、Ar1、Ar2C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷硫基C1-6烷基；R10為氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基或鹵素；R11為氫或C1-6烷基；Ar1為苯基或被C1-6烷基、羥基、氨基、C1-6烷氧基或鹵素取代的苯基；并且Ar2為苯基或被C1-6烷基、羥基、氨基、C1-6烷氧基或鹵素取代的苯基。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中X為氧。
3.權(quán)利要求1的化合物，其中R1為氫、C1-6烷基或C1-6烷氧基C1-6烷基。
4.權(quán)利要求1的化合物，其中R6為氫且R7為鹵素。
5.權(quán)利要求1的化合物，其中R8為氫，C1-6烷基或羥基C1-6烷基。
6.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物為4-(3-氯苯基)-6-[(4-氯苯基)-1H-咪唑-1-基甲基]-1-甲基-2(1H)-喹啉酮；4-(3-氯苯基)-6-[(4-氯苯基)-1H-咪唑-1-基甲基]-2(1H)-喹啉酮；6-{1-(4-氯苯基)-2-羥基-1-(1H-咪唑-1-基)乙基-1-甲基-4-苯基-2(1H)-喹啉酮；4-(3-氯苯基)-6-[1-(4-氯苯基)-1-(1H-咪唑-1-基)乙基]-1-甲基-2(1H)-喹啉酮；4-(3-氯苯基)-6-[1-(4-氯苯基)-1-(5-甲基-1H-咪唑-1-基)乙基]-1-甲基-2(1H)-喹啉酮；4-(3-氯苯基)-6-[1-(4-氯苯基)-2-羥基-1-(1H-咪唑-1-基)乙基]-1-甲基-2(1H)-喹啉酮；4-(3-氯苯基)-6-[(4-氯苯基)(1H-咪唑-1-基)甲基]-1-(2-甲氧乙基)-2(1H)-喹啉酮乙二酸鹽(2∶3)一水合物；6-[(4-氯苯基)(1H-咪唑-1-基)甲基]-4-(1，3-苯并二間二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-1-甲基-2(1H)喹啉酮乙二酸鹽(1∶1)；其立體異體體或其藥學(xué)上可接受的酸或堿加成鹽。
7.藥用組合物，含有藥學(xué)上可接受的載體和治療有效劑量的權(quán)利要求1-6的化合物作為活性成分。
8.制備權(quán)利要求7的藥用組合物的方法，其中將藥學(xué)上可接受的載體和權(quán)利要求1-6的化合物均勻混合。
9.式(XVI)的化合物或其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽，其中R2，R3，R4，R5，R6，R8，R8，R10和R11基為如權(quán)利要求1所定義。
10.式(XV)的化合物或其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽，其中R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，R10和R11基為如權(quán)利要求1所定義。
11.權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的化合物用作藥物。
12.制備權(quán)利要求1化合物的方法，其特征為a)使式(II)的咪唑或其堿金屬鹽與式(III)的衍生物發(fā)生N-烷基化反應(yīng)；
b)使式(IV)的中間體與式(V)的試劑反應(yīng)，其中Y為碳或硫，如，1，1’-羰基-雙[1H-咪唑]；
c)通過(guò)使式(VI)中間體環(huán)化，從而得到式(I-a)的化合物，也可獲得定義為式(I)的化合物，其中點(diǎn)線代表鍵；
d)在酸性水溶液中水解式(XXVI)的中間體，其中R為C1-6烷基，產(chǎn)生定義為式(I-a)的化合物的式(I-a-1)的化合物，其中R1為氫；
e)通過(guò)使用式(II)的咪唑使式(VII)的環(huán)氧化物開環(huán)得到式(I-b)的化合物，定義為式(I)的化合物，其中R8為羥基亞甲基；
f)將通過(guò)式(XVI)的喹啉衍生物的N-氧化制備的式(XV)的中間體硝酮，通過(guò)成酯及隨后的水解或通過(guò)分子內(nèi)光化學(xué)重排轉(zhuǎn)化，得到式(I-f-1)的化合物；
或者，若需要，將式(I)的化合物轉(zhuǎn)化為藥學(xué)上可接受的酸加成鹽，或相反，將酸加成鹽用堿轉(zhuǎn)化為游離堿形式；和/或制備其立體化學(xué)異構(gòu)體。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(Ⅰ)的化合物,其立體異構(gòu)體和其藥學(xué)上可接受的酸或堿加成鹽,它們具有法呢基轉(zhuǎn)移酶的抑制活性;涉及它們的制備、含有它們的組合物及其作為藥物的用途,其中點(diǎn)線代表任意鍵;X代表氧或硫;R
文檔編號(hào)C07D521/00GK1200732SQ96197917
公開日1998年12月2日 申請(qǐng)日期1996年10月25日 優(yōu)先權(quán)日1995年10月31日
發(fā)明者D·W·恩德, M·G·維納特, P·R·安吉鮑德, G·C·桑茲 申請(qǐng)人:詹森藥業(yè)有限公司